Coprocultura

Cultura de fezes

Instrues para coleta de fezes

Coletadas no incio ou fase aguda da doena
Patgenos presentes em maior nmero
Antes da antibioticoterapia.

Coletar as fezes e colocar em um frasco contendo o meio para

transporte em quantidade equivalente a uma colher de
sobremesa.
Preferir sempre as pores mucosas e sanguinolentas.
Fechar bem o frasco e agitar o material.
Se a amostra no for entregue no laboratrio em uma hora,
conservar em geladeira a 4C, no mximo por um perodo de
12 horas.
Marcar o horrio da coleta

Swab retal
Usar swab de algodo, certificando-se de que a
ponta da haste que suporta o algodo est bem
revestida.
Umedecer o swab em salina estril (no usar gel
lubrificante) e inserir no esfncter retal, fazendo
movimentos rotatrios.
Ao retirar, certifique-se que existe colorao
fecal no algodo.
O nmero de swabs depende das investigaes
solicitadas.

Quando solicitado
Em uma cultura de fezes pesquisada a
presena de agentes bacterianos mais comuns:
Salmonella spp., Shigella spp., alguns sorotipos
de Escherichia coli, Campylobacter spp e
Staphylococcus aureus.
Outros agentes podem tambm ser pesquisados,
mas importante que sejam mencionados na
solicitao mdica, como, por exemplo, Yersinia
spp. e Vibrio spp.

Semeadura em:
MacConkey
SS
gar Sangue
Incubadas por 24 horas a 35-37C
Avaliadas e so feitas provas bioqumicas das
colnias suspeitas
Quando necessrio proceder a soroaglutinao
para confirmao do resultado.

MacConkey

SS

Urocultura

Instrues para coleta de urina

A coleta deve ser feita pela manh, preferencialmente da
primeira mico do dia, ou ento aps reteno vesical
de duas a trs horas.
Pacientes com urgncia urinria podem ser dispensados
dessa reteno, anotando-se o fato na requisio.
Coleta de urina de mulheres

Para se obter melhores resultados, a coleta de amostras das

mulheres deve ser supervisionada e realizada por
profissionais treinados
Orientar clara e objetivamente todos os passos do
procedimento e alertar quanto s conseqncias de m
coleta (necessidade de retornar para nova amostra,
dificuldade do mdico interpretar, etc.)

 Coleta de urina para crianas que no tm controle

da mico

No caso das crianas, fazer uso de saco coletor,

masculino ou feminino.
Deve-se fazer higienizao prvia do perneo, coxas e
ndegas com gua e sabo neutro.
Caso no haja mico, o saco coletor deve ser trocado a
cada 30 minutos, repetindo-se a higienizao da rea
perineal e genital.

Coleta de urina para homens

Fazer a higienizao cuidadosa da genitlia externa,

com gua e sabo e enxugar.
Colher o jato mdio, preferencialmente da primeira
mico do dia, ou ento com uma reteno urinria de
2 a 3 horas.

Espalhamento da amostra

Microbiota da Uretra
Cocos Gram-positivos:
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus spp.
Bacilos Gram-positivos:
Corynebacterium spp.
Bacilos Gram-negativos:
Escherichia coli
Proteus mirabilis

Microbiota da Vagina
Cocos Gram-positivos:
Staphylococcus spp.
Streptococcus spp.
Enterococcus spp.

Bacilos Gram-positivos:
Lactobacilos pH cido

Bacilos Gram-negativos:
Escherichia coli, Klebsiella spp., Corynebacterium spp.,
Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa

Microrganismos mais freqentemente

encontrados
Escherichia coli
80-95% de ITU primria
70-80% de episdios de recorrncia

Klebsiella, Enterobacter, Pseudomonas e Proteus

Associada com ITU recorrente, em crianas ou
procedimentos cirrgicos

Enterococcus, Streptococcus grupos D e B

So os Gram positivos mais encontrados

Staphylococcus saprophyticus
Freqncia aumentada em meninas adolescentes e em
idade escolar

 1) A amostra deve ser semeada com ala

calibrada de 0,01ml ou 0,001ml em dois meios:
gar-sangue
Meio no seletivo, visa o isolamento de bactrias em
geral

MacConkey
Meio seletivo e diferencial

2) Incubao dos meios 37C (18-24 hs)

3) Observao da morfologia colonial
Resultado da urocultura:
Crescimento apenas em gar-sangue
Crescimento em gar-sangue e MacConkey

4) Identificao

Resultado
O resultado da urocultura deve ser sempre
quantitativo
Unidades Formadoras de Colnias p/ mililitro
(UFC/ml)
Deve-se liberar o resultado da contagem de
leuccitos
Informar ao mdico o mtodo de coleta da urina
Dvidas na interpretao (repetir a urocultura)
Quantificao:
Crescimento com ala de 0,001ml ou 1l (1:1000)
1 colnia = 1.000 ou 103 UFC/ml

Contagem

Utilizar o fator de correo

volume:
1 L multiplicar por 1000
10L multiplicar por 100
100L multiplicar por 10

diluio:
diluio 1:10 multiplicar por 10
diluio 1:100 multiplicar por 100
diluio 1:1000 multiplicar por 1000

Tcnica para preparo do esfregao

Identificar a lmina de maneira segura, usando
lminas com extremidade fosca.
Rolar toda a superfcie do swab sobre o centro
da lmina procurando fazer um esfregao fino e
uniforme e no destruindo as clulas.
Fixar rapidamente na chama.
Quando material escasso, demarcar a rea do
esfregao.
Proceder o mtodo de colorao mais
apropriado.

Fixao do Esfregao
Calor

Todo o esfregao, antes de ser submetido colorao, dever

estar seco (exposto ao ar), sendo fixado com calor brando (50C).
A fixao excessiva e o superaquecimento iro distorcer a
morfologia celular e a fixao insuficiente permitir a sada do
material durante o processo de colorao.
Deixar a lmina esfriar antes de iniciar a colorao.

Metanol ou Etanol

A fixao pelo metanol ou etanol tambm pode ser utilizada.

Alm de prevenir a lise das hemcias, evita que os esfregaos,
principalmente os de urina, desprendam-se no momento da
colorao.
Deixar o esfregao secar numa superfcie plana; aps, colocar
uma a duas gotas de lcool (1 minuto), drenando o excesso, sem
lavar.
No aquecer a lmina antes da colorao.

AC = gar chocolate;
AS = gar sangue;
MC = gar Mac Conkey;
TIO = caldo tioglicolato;
LJ = gar Lowenstein Jensen;
SAB = gar Sabouraud;
MYC = Mycosel;
SS = gar SalmonellaShigella;
TM = gar Thayer Martin
(opcional);
CLED = gar CLED

Caractersticas macroscpicas das

colnias - Tamanho
O tamanho das colnias dever ser considerado na placa como um todo,
uma mesma cepa pode formar colnias de tamanhos variados em diferentes
pontos da placa.
Puntiforme (<1 mm de dimetro)
colnias muito pequenas, caractersticas de bactrias mais exigentes.

Pequena (at 2 mm de dimetro)

Shigella e Yersinia costumam crescer em gar MaC Conkey e gar SalmonellaShigella como colnias pequenas e lactose negativas.
Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter spp, Enterococcus spp,
pneumococos, Streptococcus spp. Cndida spp e alguns esfafilococos coagulase
negativo tambm costumam formar colnias pequenas.

Mdia (at 3 mm de dimetro)

Enterobactrias e estafilococos.

Grandes (mais de 4 mm de dimetro)

Bacillus spp, algumas enterobactrias como Klebsiella e Enterobacter, ou
Pseudomonas aeruginosa.
Formao de vu, caracterstico do gnero Proteus, Comamonas e algumas cepas
de Pseudomonas.

Cor
A colorao depender do meio de cultura
utilizado.
Meios no diferenciais
pode-se identificar a colorao caracterstica de
alguns microrganismos

S. aureus amarelo
Micrococcus amarelo
Serratia marcescens ou rubidae avermelhado
Roseomonas rseo
Pseudomonas diferentes tons de verde e
castanho
Enterococcus casseliflavus amarelo

Cor
Meios diferenciais
a colorao da colnia sofre interferncia das reaes que
ocorrem com substratos dos meios de cultura:

Utilizao da lactose no MacConkey vermelho

Utilizao da lactose no CLED amarelo
Utilizao do manitol em gar manitol salgado
amarelo
Produo de H2S no TSI, Hecktoen Enteric e
Salmonella-Shigella negro

Hemlise
Baseada na lise de hemcias contidas no gar Sangue
(5%).
Lise total
denominada beta-hemlise, ocorre a formao de halo de
transparncia ao redor e/ou sob a colnia
S. pyogenes, S. agalactiae, Listeria,
S. aureus, S. haemolyticcus,
Enterococcus.

 Lise parcial
alfa-hemlise
Formao de halo com colorao esverdeada:
S. viridans, S. pneumoniae.

 Ausncia de lise
definida como gama-hemlise, meio de cultura
inalterado
Enterococcus, Estafilococos coagulase negativo.

Forma da colnia
Redonda E. coli, Klebsiella, Serratia,
Stenotrophomonas, Acinetobacter, Estafilococos,
Estreptococos
Irregular Pseudomonas, Proteus, Providencia,
Morganella, Bacillus
Produo de vu Proteus, Comamonas,
Pseudomonas
Filamentosas fungos filamentosos
Formando pontas, como estrelas Candida albicans
Com depresso no centro Pneumococo
Cerebriforme Pseudomonas stutzeri
Elevada Klebsiella, Bacillus
Chata Enterobacter, Pseudomonas

Cheiro

Cheiro de cloro: Eikenella corrodens

Perfume ordinrio: Pseudomonas aeruginosa
Cheiro ftido: Anaerbios
Caramelo alguns Streptococcus viridans
Fermento Candida spp
Queijo S. aureus
Terra Nocardia e Streptomyces
Peixe Acinetobacter em gar sangue

Provas Bioqumicas

Prova da Catalase
Permite separar os estreptococos catalase negativa de outros cocos
Gram-positivos produtores de catalase, por exemplo, estafilococos.
Converte o perxido de hidrognio em oxignio e gua
A liberao do oxignio se observa pela formao de bolhas.
Procedimento:

Colocar sobre uma placa de Petri, ou uma lmina, uma poro do isolado
de uma cultura 18 - 24 horas, evitando tocar no meio de cultura
Repetir o procedimento com cepas controle positivo e negativo;
Adicionar uma gota de perxido de hidrognio a 3%;
Observar a formao de bolhas de ar, indicativo de teste positivo para
catalase.

Interpretao:

No havendo formao de bolhas, o teste negativo e indicativo

de Streptococcus.

Oxidase (indofenoloxidase)
Produo de oxidase
Papel filtro com N-Tetrametil-p-fenileno
Procedimento

Colocar uma colnia suspeita no papel

Aguardar 20s
Negativo: sem modificao na cor
Positivo mudana da cor para rosa forte podendo
alterar para preto

Oxidase positiva

Pseudomonas, Neisseria, Plesiomonas

Oxidase negativa

Staphylococcus e Enterobactrias

Aula Prtica
Contagem
Alteraes no meio de cultura

 TSI, Uria, Fenilalanina, Lisina, Citrato, Glicose,

Lactose.

Gnero

Gs em
glicose

Lactose

Manita

Mobilidade

Indol

Citrato

H2O

Urease

Escherichia

+/-

+/-

+/-

Aerobacter

+/-

Klebsiella

+/-

Citrobacter

+/-

Salmonella

+/-

Shigella

+/-

+/-

Providence

+/-

+/-

Proteus

+/-

DA LDC