FERRAMENTAS E TCNICAS
BSICAS DE ANLISE DE DNA
E CLONAGEM
21/06/2013
Dolly
21/06/2013
FERRAMENTAS E
TCNICAS DE ANLISE
PCR
(Polimerase
Chain
Reaction)
21/06/2013
Sequenciamento do DNA
Sequenciamento do DNA
ATCGCCAGCTTTACTTTACG
TAGCGGTCGAAA
TG A
FITA DNA
G
T
STOP
T
BIG DYE
A
21/06/2013
Sequenciamento do DNA
eletroferograma
21/06/2013
Enzimas de Restrio
tb conhecidas como Endonucleases de Restrio
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Nomenclatura
EcoRI
E = gnero Escherichia
co = espcie coli
R = cepa RY13
I = primeira endonuclease identificada
GAATTC
CTTAAG
Mapas de restrio
21/06/2013
Eletroforese
Brometo de Etdio
Nitrato de Prata
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O vetor plasmidial
21/06/2013
A clula hospedeira
Transformao
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Transformao
No laboratrio:
Cloreto de Clcio e choque trmico.
Ca++
42 graus
Eletroporao
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No Laboratrio...
Normas de biossegurana
O Conselho Tcnico Nacional de
Biossegurana (CTNBio) o rgo
responsvel
pela
normatizao
e
fiscalizao dos trabalhos que envolvem
transgnicos e engenharia gentica de
forma geral, inclusive os aspectos ticos.
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Prticas microbiolgicas-padro
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Prticas microbiolgicas-padro
Prticas microbiolgicas-padro
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USAR !!! :
Medies e micropipetagem
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SISTEMAS-MODELO
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E. coli
Levedura
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O verme nematide
Eucarioto multicelular;
pequeno e fcil de
manter;
3 dias de ovo a adulto;
Caenorhabditis elegans
Mosca-da-fruta
Estudo de mutantes;
Produzem centenas de descendentes em
poucos dias;
Ovo a adulto em 12 dias;
Drosophila melanosgaster
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Outros
Peixe-zebra (paulistinha)
Anfbios
Galinha
Camundongo
Clulas humanas
Plantas
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