ADN

ESTRUCTURA
CROMOSOMAS Y GENOMAS

 Los cromosomas son los

portadores de los elementos
hereditarios
Los cromosomas estn
compuestos de ADN y
protenas
Cada cromosoma est
formado por una molcula de
ADN

El ADN como principio transformante

Cepa R inocua
Frederick Griffith,
1928
Streptococcus pneumoniae

S: cubierta de
polisacridos
PRESENTE
R: cubierta de
polisacridos
AUSENTE

Cepa S letal

Oswald Avery, Colin MacLeod, and Maclyn McCarty, 1943.

P32

S35

DNA:

P32

protenas:

S35

Alfred Hershey & Martha

Chase, 1952.

El ADN molcula de la herencia

La naturaleza hereditaria de cada organismo est
definida por su genoma, el cul consiste de largas
secuencias de cidos nucleicos que proporcionan la
informacin necesaria para construir al organismo.

Estructura, organizacin y propiedades

Las bases nitrogenadas

DESOXIRIBONUCLETIDOS

Nuclesido

Nucletido

Reglas de Chargaff
La cantidad de adenina es la misma que la de timina: A=T
La cantidad de guanina equivale a la de citosina: G=C
La cantidad de bases pricas es la misma que las bases pirimdicas:
A+G=T+C
Pero la cantidad de A+T G+C

Rosalind Franklin y Maurice Wilkins

Estructura del ADN

James Watson y Francis Crick, 1953.

Modelo de la doble hlice del ADN

Surco
menor
Surco
menor

Surco
mayor

Surco
mayor

5 GATC... 3
5 fosfato

Enlace fosfodiester

ADN

3 hidroxilo

Complementariedad:

Cadenas anti-paralelas

Extremo 5: PO4
Extremo 3: OH

Bases nitrogenadas: interior

Fosfatos: exterior

La estructura del ADN permite responder dos preguntas claves en la

Gentica:
1. Cmo se puede determinar la informacin de una funcin
biolgica en una forma qumica?

2. Cmo se puede copiar la informacin a generaciones sucesivas?

ADN lineal y circular

Doble hlice (procariontes y eucariontes)
Cadena sencilla (algunos virus)

Secuencias unicas
(genes); secuencias
repetidas (no codificantes)

Circular

Superenrollado

Bacteria
Virus (algunos)
Plsmidos
Mitocondria
Cloroplastos

Lineal
Nuclear de Eucariontes
Virus (algunos)

Superenrollado

ADN de bacteria
(4.2 x 106 pb)

1 cromosoma
DNA circular doble cadena
sin envoltura de membrana

Superenrollamiento del ADN

Bacteria

Organizacin del cromosoma bacteriano

DNA superenrollado

Protenas que
unen al DNA

Bacteria
en divisin

Bacteria

Topoisomerasas
Enzimas que regulan la tensin en la molcula de ADN

Tipo I:
Tipo II:
Girasa

Cortan una de las cadenas de DNA

No requieren ATP
Introducen incrementos de 1 en Lk
Cortan ambas cadenas de DNA
Requieren ATP
Introducen incrementos de 2 en Lk
(superenrollamiento negativo en procariontes)

Formas topolgicas del DNA circular

cerrado (topoismeros)

Propiedades del ADN

Desnaturalizacin y
Re-naturalizacin

El contenido de GC influye en las

propiedades del ADN, especialmente
sobre la temperatura de
desnaturalizacin y alineamiento

% GC

Tm

Purificacin de ADN
2. Romper clulas

1. Concentrar clulas
Source

Lysis Methods
Lysozyme - degrades
polysaccharide cell walls
SDS - detergent for cell
Bacteria
membranes
Freeze/Thaw several times
French Press
Osmotic
Organelles Sonication
Detergent
Osmotic
Animal Cells Sonication
Detergent
Plant Cells

Several enzymes to break

down cell walls
Mechanical grinding

4. Precipitar ADN

Etanol
Isopropanol
Butanol

3. Eliminar protenas

Concentracin y calidad del ADN

A260 / A280
Ratio < 1.8
1.8 < Ratio < 1.9
Ratio > 2
Absorbance peak or
shoulder at 270 nm

Nucleic Acid Form

Double -stranded DNA
Single-stranded DNA
RNA

Quality
Contains protein
contamination
no contamination
DNA may contain RNA
Phenol contamination

NA Concentration at
1 A260
50 g/ml
37 g/ml
40 g/ml

Separacin y visualizacin de fragmentos de ADN

Gel de Agarosa 0.8% - 2.5%

Bromuro de etidio:
Agente intercalante entre las bases nitrogenadas que fluoresce a la luz UV

Bibliografa:
Alberts Molecular Biology of the Cell 4 o 5 Ed. (2002, 2008)
Lehninger Principles of Biochemistry 3, 4 o 5 Ed. (2000, 2004, 2008)
Lodish Molecular Cell Biology 4, 5 o 6 Ed. (1999, 2003, 2007)