FACULTAD DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS

ALIMENTARIAS

PRACTICA 3: ESTERILIZACION

CURSO

: MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS I

DOCENTE

: Blga. M. Sc. ALCEADO ROMERO, Margarita

ALUMNOS

: CALDAS CIERTO, Nelson

: ATAVILLOS DOMINGUEZ, Carmen.
: CALDERON PINO, Joseferik

I.

INTRODUCCION

En el trabajo del laboratorio de Microbiologa tienen importantsima

aplicacin los procedimientos, tcnicas y productos que suprimen o disminuyen la
vitalidad de los microorganismos patgenos. No existe un procedimiento de esterilizacin
y desinfeccin aplicable a todos los casos. El mtodo de esterilizacin a emplearse debe
ser previamente valorado. Actualmente existen valores tabulados de tiempo de
exposicin, temperatura y concentracin de principios activos para los mtodos de
esterilizacin ms usados que nos permiten elegir el ms adecuado para cada caso. En la
eleccin debe tenerse en cuenta tambin el uso posterior que le ser dado (o no) al objeto
a esterilizar.
Se dice que un ambiente es estril cuando se han eliminado todos los
microorganismos del mismo. La esterilidad se puede alcanzar usando procedimientos
fsicos (calor, radiaciones), qumicos o mecnicos (filtracin). Sin embargo, los
procedimientos de esterilizacin son costosos y, en ciertas ocasiones, desaconsejables.
Por ejemplo, la esterilizacin completa de ciertos alimentos no es posible sin destruir sus
caractersticas nutritivas.
Se dice que un ambiente es asptico cuando se han eliminado todos los
microorganismos patgenos. Un ambiente asptico no tiene porqu ser estril. La asepsia
tambin se puede conseguir por procedimientos fsicos y qumicos.
II.

OBJETIVOS

Proporcionar al estudiante conocimientos bsicos sobre los principales mtodos

empleados en la esterilizacin, tanto para eliminacin o destruccin completa de
microorganismos contenidos en objetos, productos, Etc.
Impartir conocimientos de cmo prevenir el ingreso de los microorganismos en un
ambiente determinado estril.

III.

REVISION BIBLIOGRAFICA

3.1. Esterilizacin.
La esterilizacin es un mecanismo por el que se consigue la muerte o
eliminacin de todos los microorganismos vivos de una muestra, medio, superficie o
material de trabajo. Entre los microorganismos vivos se incluyen bacterias, hongos,
protistas, virus y sus formas de resistencia. Un objeto esterilizado est, por lo tanto,
totalmente libre de microorganismos incluyendo sus formas de resistencia.

3.2. El calor.
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin
del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las
membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos. La efectividad
del calor como mtodo de esterilizacin depende de: temperatura y tiempo de exposicin.

El calor se propaga por tres mtodos.

1.

Por conduccin.
Esta forma de propagacin se da en los slidos, cuando se aplica calor a

un objeto slido, la zona donde absorbe calor se calienta y sus partculas adquieren
mayor movilidad que el resto del cuerpo y cada partcula transmite el calor a las partculas
vecinas, con el cual el calor acaba por propagarse por todo el objeto. Por ejemplo.
-

Tenemos un vaso de leche que est muy caliente. En su interior se introduce una
cuchara. Al pasar un rato, si se toca la cuchara que se encuentra en su interior, se
nota que se va calentando cada vez ms. Esta transferencia de calor se ha
producido desde una sustancia, que es la leche, hasta un cuerpo, que es la
cuchara.

2. Por conveccin

La propagacin del calor por conveccin se da en los lquidos y en los

gases. Es decir cuando calentamos un lquido o un gas en un recipiente, las primeras
partculas en calentarse son las del fondo, por la que parte del lquido o del gas del fondo
se dilata y disminuye su densidad y al ocurrir esto esta parte del lquido o gas asciende
por el recipiente y la parte del lquido o gas que estaba encima baja para ocupar el
espacio dejado, originndose las llamadas corrientes de conveccin que van calentando
todas las sustancias del recipiente. Ejemplo:

3. Por radiacin.
La radiacin es la propagacin del calor que tiene lugar sin el apoyo del
ningn medio material en forma de ondas.
Ejemplos:
-

Las aguas del mar reciben la radiacin del sol por eso logran evaporarse.

Los panaderos, cuando van a sacar el pan del horno, estn recibiendo el calor
procedente de este, por radiacin..

3.3. mtodos de esterilizacin.

3.4. Por calor.
3.4.1. Accin directa.
Se lleva al rojo el material de material como asas, agujas de diseminacin,
etc.

3.4.2. Calor seco.

Como su nombre lo indica se transmite a travs de un fluido seco caliente
(aire). La muerte de microorganismos en este caso se produce por deshidratacin y por lo
tanto hay que llegar a temperaturas elevadas (160 C) durante tiempos altos (1 hora o
ms). En el laboratorio se utiliza el calor seco pare esterilizar material de vidrio y no para

medios de cultivo, pues las altas temperaturas usadas, pueden alterar la estructura (y la
disponibilidad) de nutrientes tales como protenas, hidratos de carbono, etc.

3.4.3. Calor hmedo.

Este tipo de calor es ms conveniente porque el vapor de agua difunde por
smosis a travs de la membrana de los microorganismos, produciendo la muerte de los
mismos por coagulacin de su protoplasma y no por deshidratacin, como en el caso del
calor seco. Los diferentes mtodos utilizados son:
3.4.3.1.

Ebullicin.
Se realiza a 100 C, a esta temperatura se destruyen todas las clulas

vegetativas, esporos de hongos y levaduras, y la mayor parte de las esporas bacterianas.

Por lo tanto, cuando solo es necesario conseguir una esterilizacin relativa, puede
recurrirse a este mtodo. En el caso que deban esterilizarse lquidos, estos se llevan
directamente a ebullicin por tiempos variables, que dependen de diversos factores a
considerar. En caso de slidos contenidos en recipientes, el material se sumerge en agua
hirviente por tiempos variables.

3.4.3.2.

Vapor fluente.
Consiste en un tratamiento con vapor de agua a presin atmosfrica (o sea

vapor saturado a 100 C). Esta es una tcnica til para tratar sustancias que no admiten
calentamientos superiores a 100 C sin perder alguna de sus propiedades. Los equipos
usados son sencillos y estn constituidos por recipientes con falso fondo perforado, sobre
el cul se acomoda el material a esterilizar. Este tratamiento se puede realizar tambin en
el autoclave, trabajando con la espita abierta. El tiempo de calentamiento depende del
material a tratar y su grado de contaminacin.

3.4.3.3.

Vapor discontinuo o tindalizacin.

Es cuando acta el calor en forma fraccionada por tres das consecutivos a

100 c durante 30 a cuarenta minutos.

En el primer da se destruirn las formas vegetativas, en el segundo da las
formas ms activas germinadas de las esporas y en el tercer da las formas espatuladas.
Mediante este mtodo se esterilizan: sustancias orgnicas que sufren descomposicin a
altas temperaturas, los aparatos de Arnold y de Coch son muy recomendados.

3.4.3.4.

Vapor de agua saturada a presin.

Normalmente se realiza en el laboratorio la esterilizacin de medios de

cultivo en un equipo denominado autoclave. Las condiciones de tiempo y temperatura

dependen de la naturaleza del medio. Cabe destacar que a menudo la esterilizacin
presenta dos aspectos a veces incompatibles, se quiere por un lado destruir todos los
microorganismos presentes y por el otro evitar la alteracin de los nutrientes. En realidad,
el calor puede provocar la desnaturalizacin de vitaminas y otros factores de desarrollo, la
separacin de azufre coloidal (Cisterna, por ejemplo), caramelizacin de azcares, etc.
Por lo tanto se deben considerar para cada caso en particular las variables de la
esterilizacin (esto es temperatura y tiempo).
El autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios
para esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se
desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una temperatura de 121 C (una
atmsfera de sobrepresin) con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para
destruir organismos formadores de esporas.

3.5. Filtracin.
La esterilizacin por filtracin se logra por el paso de un lquido o un gas a
travs de un material capaz de retener los microorganismos presentes. La esterilizacin
por filtracin se emplea para materiales sensibles al calor, tales como ciertos medios de
cultivo, azcares, soluciones de antibiticos y otros medicamentos, etc.
Tipos de filtros:

1.- Filtros profundos o Filtros de profundidad: Consisten de un material fibroso o granular

prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de
filtros la retencin de las partculas se produce por una combinacin de absorcin y de
retencin mecnica en la matriz.
2.- Membranas filtrantes: Tienen una estructura continua, y la retencin se debe
principalmente al tamao de la partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro
quedan retenidas en la matriza del filtro debido a efectos electrostticos.
3.- Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): Son pelculas muy delgadas de
policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias
qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana
verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao
mayor al del poro.

3.6. Centrifugacin.
La centrifugacin es una tcnica de separacin de slidos o limpieza de
lquidos alternativa a las de clarificacin por encolado, o a las de filtracin descritas en
captulos precedentes; utilizando en este caso una operacin fsica, donde se somete al
lquido a limpiar a la fuerza de la gravedad multiplicada por valores muy elevados, donde
casi instantneamente se produce la sedimentacin y separacin de los slidos
contenidos en la fase lquida. Los primeros estudios proceden del ao 1928, aunque su
gran desarrollo en la enologa viene a partir de los aos cincuenta, donde se consigue que
las mquinas funciones en total ausencia de aire, presentando en la actualidad un campo
de gran inters para la industria alimentaria.

3.7. Radiacin.
3.7.1.

radiacin ultravioleta.
La radiacin ultravioleta produce una disminucin exponencial en el nmero

de clulas vegetativas o de esporas vivas con el tiempo de irradiacin. Por tanto se

pueden calcular los valores D para la irradiacin. Existe una falta de informacin precisa
sobre la susceptibilidad de las diferentes especies microbianas a la radiacin U.V.:
diferentes cepas pueden tener una resistencia distinta. El mayor valor del tratamiento con
radiaciones U.V. Se encuentra en el saneamiento del aire, aunque tambin pueden
aplicarse para esterilizar superficies de alimentos o para el equipo de los manipuladores
de alimentos.

3.7.2.

radiacin ionizante.
La radiacin ionizante es altamente letal, puede ajustarse su dosis para producir

efectos pasteurizantes o esterilizantes y su poder de penetracin es uniforme.

Es letal por destruccin de molculas vitales de los microorganismos, esto lo
consigue sin produccin de calor, por lo que los alimentos se conservan frescos. La
mayora de los daos son a nivel ADN.
La sensibilidad a la radiacin de los microorganismos difiere segn las especies e
incluso segn las cepas, aunque las diferencias de resistencia entre cepas de una
misma especie son generalmente lo suficientemente pequeas para no tenerlas en
cuenta a efectos prcticos. Las bacterias Gram-negativas son generalmente ms
sensibles a la irradiacin que las Gram-positivas y las esporas an ms resistente.
En general la resistencia a la radiacin de los hongos es del mismo orden que la
de las formas vegetativas bacterianas. Los virus son an ms resistentes que las
bacterias a la radiacin.

3.7.3.

Rayos gamma.
Las radiaciones gamma tienen mucha energa y son emitidas por ciertos

istopos radiactivos como es el Co60 pero son difciles de controlar ya que este istopo
emite constantemente los rayos gamma en todas direcciones. Estos rayos gamma

pueden penetrar los materiales por lo que un producto se puede empaquetar primero y
despus esterilizar.
3.7.4.

Rayos catdicos (Radiacin con haz de electrones):

Se usan para esterilizar material quirrgico, medicamentos y otros

materiales. Una ventaja es que el material se puede esterilizar despus de empaquetado

(ya que stas radiaciones penetran las envolturas) y a la temperatura ambiente.

3.8.

Preparacin para la limpieza y esterilizacin.

El material de vidrio nuevo o usado, debe limpiarse en forma tal que elimine toda huella
de suciedad

original, se evita la

as la precipitacin

y depsito de los agentes

limpiadores:
1. Conocer el grado de dureza del agua.
2. Usar detergentes que no tenga lcalis, que sean fcilmente solubles en agua
tibia, que no precipite en agua fra, tibia o caliente.
3. Que limpie con facilidad y no irrite las manos.
4. No usar detergentes o jabn no garantizado.

3.9.

Limpieza del material de vidrio.

1. Hacer la limpieza tan pronto como sea posible

2. Recipientes con cultivos

o materiales contaminados, esterilizar en autoclave

antes de lavar para ello quitarle los tapones, para pipetas, colocar estas en una
solucin bacteriana, por 24 horas.
3. Hacer hervir material en una olla con agua y detergente por lo menos medio da.
4. Frotar el material con escobilla (tanto por dentro como por afuera), en algunos
casos remojar el material en detergente de un da para otro.
5. Enjuagar con agua

de cao a chorro

continuo hasta la eliminacin

detergente, continuar el enjuague con agua tibia

del

y enjuagar 2 o 3 con agua

destilada.
6. Escurrir el material sobre soportes de madera o metal.
7. En casos de portaobjetos y cubreobjetos, pasarlos por alcohol al 70 % para su
desengrase.

3.10.

Preparacin del material despus

de la limpieza

para su

esterilizacin
1. Confeccionar tapones de algodn para tubos y matraces, colocarlos cuando se
va a esterilizar.
2. Proteger el material de vidrio con papel o con recipientes de metal como en el
caso para pipetas y placas de Petri.
IV. MATERIALES Y MTODOS.

4.1.

preparacin previa del material de vidrio para su esterilizacin.

4.2.1.

Materiales.

materiales de vidrio como: pipetas, placas de Petri, tubos de prueba, jeringas

descartables, balones, matraces, Erlenmeyer, kitasato, etc.

Papel kraft en tiras y en trozos rectangulares y cuadrados.

Algodn

Pedazo de papel engomado /pabilo

Lpiz de cera o plumn indeleble.

4.2.2. Procedimientos. (Para la Limpieza)

El material de vidrio lavar con detergente adecuado, con ayuda de escobillas o
esponjas frotar las superficies internas de los frascos y tubos.
Enjuagar con abundante agua hasta eliminar completamente el detergente.
Continuar el enjuague

con agua destilada

y dejarla escurrir

en soportes

especiales. si es necesario hacer secar en el horno para luego ser envuelto para
la esterilizacin.

4.2.

Preparacin del material para la esterilizacin.

4.2.1 Preparacin de tubos de prueba :

Hacer tapones de algodn y colocarlos en los tubos de prueba a esterilizar.
Hacer manojos de tubos taponados (en nmero de 10 a 12 tubos) sujetos con
pabilos, y cubrir por sus bordes con papel envolvente, asegurando el paquete con
pabilo, o papel engomado.

 Ubicar los tubos en las canastillas para facilitar la esterilizacin.

4.2.2. Preparacin de matraces, kitasato, frascos y probetas.

Despus de su taponamientos cubrirlos aisladamente con un capuchn de papel
y amarrarlo con pabilo (para matraces, probetas) para frascos que tienen tapas,
retirar las tapas y colocarlos tapones de algodn.
En caso de kitasato , taponar la tabuladora con un poco de algodn y ponerlo un
capuchn de papel para luego amarrarlo con pabilo.
Rotular datos del material y la fecha de la esterilizacin en el papel.

4.2.3. Preparacin de pipetas serolgicos y volumtricas.

Colocar tapones de algodn a manera de filtros en las boquillas de pipetas.
Envolver las pipetas con papel kraft, deslizndolo en espiral sobre la superficie de
la pipeta, hasta la boquilla.
Rotular datos de la materia de las pipetas y fecha de la envoltura sobre el papel.

4.2.4. Preparacin de las placas de Petri

Se pueden envolver aislamiento o en nmero de 2 o 3 placas de papel kraft
Colocar las placas en posicin invertida, sobre el papel, y doblar las mrgenes
del papel unos sobre otros a manera de cubrirlos.
Luego amarrarlo con pabilo o colocar una cinta engomada.
Poner, nmero de placas y fecha de esterilizacin.

Esterilizacin de material.

4.3.

4.3.1. Materiales

Frascos o Erlenmeyer conteniendo caldo nutritivo

Dos tubos de prueba

Algodn para taponar

Gradillas metlicas

Papel kraft

Plumn indeleble o lpiz de cera

Autoclave/incubadora

4.3.2. Procedimiento
1. Distribuimos el medio de cultivo (caldo nutritivo) en dos Erlenmeyer

2. Se puso uno de los matraces en el autoclave para esterilizar el medio de cultivo.

Por 121 c por 15 min a 15 libras de presin.

3. luego colocamos los 2 matraces en la estufa o incubadora (uno de ellos sin

autoclavar) donde permanecieron hasta el siguiente da .transcurrido ese tiempo
observamos la muestra.

V. RESULTADOS
Muestra(caldo
nutritivo en el
Erlenmeyer )

Observacin
macroscpica
(24 horas)

Observacin microscpica
(24 horas)

A
(autoclavado)

Se observ el caldo bien

trasparente y cristal
amarillo
La muestra se observ
muy turbio y crecimiento
de microorganismos

Cuando se observ al
microscopio no se lleg a ver
nada estaba estril.
Se observ crecimiento
microbiano. De diversas
formas.

B
(sin autoclavar)

VI. CONCLUCIONES.
Se concluy que la esterilizacin mediante el autoclavado es muy eficaz en
donde se determin que el caldo nutritivo, mediante el microscopio no encontramos
seal de microorganismos el medio se denomin estril.
A diferencia del otro que no fue al autoclave presento el color turbio y con
crecimiento microbiano.
Se concluy tambin que en cualquier medio donde nos encontramos hay
presencia de microorganismos. Mediante la muestra que no se llev a autoclavar, donde
se encontr diversos tipos de microorganismos en el microscopio.

VII. BIBLIOGRAFA
[1] Black, J. 1999. Microbiology Principles and Exploration. Fourth edition. John
Wiley& Son, Inc.
[2]

Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de Mtodos

Generales (2da edicin). Facultad de Farmacia. Universidad Central de

Venezuela.
[3] Murray, P. 1999. Manual of Clinical Microbiology. 7th edition. American
Society for Microbiology. Washington, DC.
[4]

Standards of Sterilization. 2001. Monitoring the Sterilization Process. Online

Education.URL: http://education.sterra .com/c3/c3_monitoring.htm

HORNO PARA SECADO Y ESTERILIZADO DEL MATERIAL

1. Temperatura y tiempo para secar material en este equipo.

A una temperatura de 50 c a un tiempo aproximadamente de 1 hora.
2. Materiales que se pueden esterilizar en este equipo.
Los materiales de vidrio en prex, pipetas, vasos, matraces, placas, etc.
3. Temperatura y tiempo para esterilizar material en este equipo.
La temperatura necesaria para esterilizar los materiales en este equipo es de
170c durante 2 horas aproximadamente.