Anda di halaman 1dari 5

MB7 : Bactriologie

B2 - Physiologie bactrienne

PHYSIOLOGIE BACTRIENNE

lesquelles la source dnergie est un lment organique. La plupart des bactries dintrt mdical sont
des bactries chimioorganotrophes.
La source de carbone ncessaire la vie bactrienne
peut tre le dioxyde de carbone qui est la source de
carbone exclusive pour les bactries autotrophes alors
que les bactries dites htrotrophes utilisent le carbone de substances organiques diverses comme un
alcool, lacide actique, lacide lactique, des sucres
divers, ).
Les bactries doivent galement trouver dans leur
environnement une source dazote et une source de
soufre. Les bactries ont des besoins inorganiques
(exemple du phosphore). Les autres lments ncessaires la vie bactrienne sont les ions comme le
sodium, le potassium, le magnsium, le chlore ; divers
oligo-lments comme le manganse, le nickel, le
zinc, le slnium, ; divers facteurs de croissance
comme des acides amins (acide folique, acide nicotinique, ) ou des drivs de lhme et des vitamines
: B6 (pyridoxine), K et drives, ...

Objectifs
Connatre :
les principaux lments de la physiologie bactrienne :
- les conditions de la croissance bactrienne:
* nutritionnelles
* environnementales
- la croissance bactrienne proprement dite :
* division bactrienne
* dynamique de la croissance
leurs implications dans la conduite dun examen
bactriologique et donc le diagnostic dune infection
bactrienne

Plan
Principaux lments de
Implication lors de
la physiologie bactlexamen bactriologirienne
que
Besoins nutritifs
Choix des milieux de
culture
Conditions environneChoix de la temprature
mentales
et de latmosphre
dincubation des milieux
de culture
Division bactrienne
Dlais de croissance et de
rendu des rsultats
Dynamique de la croisDnombrement, identifisance
cation et antibiogramme

2.2. Les milieux de culture


Leur composition doit permettre la croissance
bactrienne et doit donc tenir compte des besoins
nutritifs des bactries. La composition de base de ces
milieux comprend :
des substrats nutritifs : acides amins, peptides,
bases nucliques, sucres, ,
un systme tampon assurant la constance du pH
des sels minraux,
des vitamines,
dautres facteurs de croissance pour certaines bactries dites exigeantes : sang, protines, hmoglobine,
vitamines supplmentaires.

1. Dfinition
La physiologie bactrienne est la science des fonctions et des constantes du fonctionnement normal
des bactries.

On distingue plusieurs types de milieux de


culture selon leur composition :
- les milieux synthtiques de composition dfinie,
- les milieux semi-synthtiques qui sont des milieux
synthtiques additionns d'un extrait dorganismes
comme un extrait de levures contenant des facteurs
de croissance pour les bactries,
- des milieux complexes de ralisation empirique
(extraits de viande, de levure, extraits enzymatiques,
protines ou peptones).

2. Besoins nutritifs des bactries et milieux


de culture
2.1. Les besoins nutritifs des bactries
Les bactries sont des organismes vivants devant
trouver dans lenvironnement lensemble des substances ncessaires leur nergie et leurs synthses
cellulaires.
Leur source dnergie peut tre de nature lumineuse (bactries phototrophes) ou reprsente par des
composs minraux ou organiques divers : on parle
alors de bactries chimiotrophes. Parmi cette dernire
catgorie de bactries, on distingue les bactries chimiolithotrophes tirant leur dnergie dun lment
minral et les bactries chimioorganotrophes pour
Janvier 2007
H. Marchandin

On distingue galement les milieux de culture


selon leur fonction :
- les milieux disolement permettant la croissance
de plusieurs espces bactriennes,
- les milieux denrichissement permettant de favoriser la croissance dune espce en faible quantit dans
un chantillon,

Facult de Mdecine Montpellier - Nmes

MB7 : Bactriologie

B2 - Physiologie bactrienne

- les milieux enrichis permettant la croissance des


bactries exigeantes,
- les milieux slectifs favorisant la croissance dun
type bactrien particulier tout en inhibant celle des
autres types bactriens (exemple des milieux slectifs
pour les bactries Gram positif contenant des antibiotiques inhibiteurs des bactries Gram ngatif).

(NaCl) pour leur croissance ; dautres sont dites halotolrantes.


La pression mcanique ou hydrostatique : les
bactries ont une bonne tolrance gnrale la pression ; certaines espces vivants dans les grands fonds
marins supportent une pression trs importantes et
sont dites barophiles.
La temprature : cinq catgories de bactries sont
diffrencies sur la base de leur fourchette de tempratures de croissance :
- les bactries msophiles dont la croissance est possible de 10 45C mais ayant une temprature optimale de croissance comprise entre 30 et 37C et
parmi lesquelles se trouvent la plupart des bactries
dintrt mdical,
- les bactries psychrophiles poussant de -15 20C
(optimum : 5-10C) (exemple : Listeria monocytogenes,
agent de la listriose, dont la croissance est optimale
la temprature des rfrigrateurs),
- les bactries psychrotropes se dveloppant des
tempratures de -5 35C (optimum : 20-25C),
- les bactries thermophiles poussent de 45 70C,
- les bactries hyperthermophiles peuvant crotre
des tempratures > 80C.
Loxygne molculaire
Les bactries possdent des modes respiratoires varis : certaines ncessitent de loxygne pour leur
croissance alors que, pour dautres, loxygne peut
tre dltre.

Ces milieux peuvent se prsenter sous forme


liquide : bouillons de culture en tubes ou en flacons
(exemple des flacons dhmoculture). La croissance
bactrienne peut alors tre objective par un trouble
du bouillon aprs incubation de 2 15 jours 37 C
le plus souvent. Les milieux solides sont le plus
souvent des milieux gloss en bote de Ptri. Aprs
incubation de 24 72 heures 37 C, la croissance
bactrienne est objective par la mise en vidence de
colonies bactriennes la surface du milieu glos.
Chaque bactrie prsente initialement dans
lchantillon cultiv va donner une colonie.
Colonie
bactrienne

Figure 1. Croissance bactrienne sur milieu glos contenant


du sang de mouton
( gauche : un seul type de colonies, droite : culture polymicrobienne).

On distingue :
1. Les bactries arobies strictes (exemple : Pseudomonas) ncessitant une teneur en oxygne molculaire
suffisante pour pouvoir se multiplier,
2. Les bactries micro-arophiles (exemple : Campylobacter) se dveloppant uniquement lorsque la teneur
en oxygne molculaire est rduite,
3. Les bactries aro-anarobies facultatives
(exemple : Escherichia coli) dont la croissance nest pas
affecte par la concentration en oxygne molculaire,
4. Les bactries anarobies strictes ne se dveloppant quen absence doxygne (exemple : Clostridium).

Afin de permettre la croissance dun maximum de


bactries, un panel de diffrents milieux de culture
variable selon lanalyse effectuer sera utilis : une
combinaison de deux milieux de culture est le plus
souvent utilise pour la mise en culture des urines
dans le cadre dun examen cytobactriologique des
urines (ECBU) alors qu'on peut tre amen ensemencer jusqu' neuf milieux de culture diffrents lors
de la ralisation dune coproculture.

3. Conditions environnementales et conditions danalyse


Croissance
bactrienne

3.1. Conditions environnementales


Plusieurs facteurs environnementaux vont conditionner la croissance bactrienne :
Le pH : certaines bactries se dveloppent pH
compris entre 6 et 8 : elles sont appeles bactries
neutrophiles (exemple : Escherichia coli), dautres se
dvelopperont prfrentiellement pH alcalin (>8) et
sont appeles bactries alcalinophiles (exemple : Pseudomonas). Enfin, la croissance de certaines bactries
dites acidophiles est optimale pH acide (<6) (exemple : Lactobacillus).
La pression osmotique : les bactries ont une
bonne tolrance gnrale au sel. Certaines bactries
dites halophiles ncessitent du chlorure de sodium
Janvier 2007
H. Marchandin

Figure 2. Reprsentation schmatique des diffrents modes


respiratoires dans le monde bactrien.

3.2. Conditions danalyse bactriologique


En pratique, afin de pouvoir runir les conditions
environnementales favorables la croissance dun

Facult de Mdecine Montpellier - Nmes

MB7 : Bactriologie

B2 - Physiologie bactrienne

maximum de bactries diffrentes, les laboratoires de


bactriologie
disposent
dtuves
permettant
lincubation des milieux de culture ensemencs
diverses tempratures (30C, 37C, ) et des systmes permettant la cration des atmosphres microarophiles et anarobies (exemple : jarres avec gnrateurs datmosphre particulire).

Tableau 1. Temps de gnration de quelques espces bactriennes.

Bactrie

(min)

Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Mycobacterium
tuberculosis

4. Division bactrienne, dlai de croissance


et dlai des rsultats
4.1. Division bactrienne
La croissance bactrienne est un accroissement
ordonn et coordonn de tous les composants de la
bactrie. Le nombre de bactries augmente entranant
un appauvrissement du milieu de culture en nutriments et un enrichissement du milieu en sousproduits du mtabolisme.
Les bactries sont des organismes asexus dont la
reproduction a lieu par division cellulaire ou reproduction binaire encore appele scissiparit.
La reproduction se fait selon trois phases :
- Allongement de la bactrie,
- Duplication des constituants,
- Sparation

In vitro

(h)

In vivo

20-40
40
40

5
3-5
4

120-240

24-48

4.3. Dlais dobtention des rsultats de lanalyse


cytobactriologique
Les dlais de croissance bactrienne conditionnent le dlai de lanalyse et donc du rendu des rsultats. Lanalyse cytobactriologique des urines permettant le diagnostic dune infection urinaire entrobactrie (Escherichia coli ou Klebsiella pneumoniae par exemple) durera dans la plupart des cas 48 heures environ
alors que le diagnostic bactriologique dun cas de
tuberculose caus par Mycobacterium tuberculosis peut
ncessiter un dlai de 4 semaines.

5. Dynamique de la croissance bactrienne


et implication dans le diagnostic bactriologique
5.1. Dynamique de la croissance bactrienne
La croissance bactrienne est un phnomne
dynamique qui comporte six phases reprsentes
schmatiquement dans la figure suivante.

Figure 3. Bactrie en cours de division


(la flche reprsente la zone de future sparation des deux
bactries no-formes).

Une bactrie mre va donc engendrer deux bactries filles identiques qui pourront leur tour se diviser
par scissiparit. Lensemble des bactries issues dune
mme cellule mre formera une colonie bactrienne.

Figure 5. Courbe de croissance bactrienne en milieu liquide


adapt non renouvel
(en abscisse figure le temps dincubation et en ordonne la
valeur logarithmique du nombre de bactries).

Etc, 1 colonie bactrienne


Figure 4. Reprsentation schmatique de la division bactrienne par scissiparit.

- Phase 1 : phase de latence : la croissance est nulle,


il y a accoutumance des bactries lenvironnement,
- Phase 2 : phase dacclration avec augmentation
de la vitesse de croissance,
- Phase 3 : phase de croissance exponentielle
durant laquelle le taux de croissance est maximal,

4.2. Dlais de croissance


Le temps de division et les dlais de croissance
dpendent de lespce bactrienne et des conditions
du milieu extrieur (favorables ou dfavorables).

Janvier 2007
H. Marchandin

Facult de Mdecine Montpellier - Nmes

MB7 : Bactriologie

B2 - Physiologie bactrienne

- Phase 4 : phase de ralentissement : la vitesse de


croissance diminue, il y a puisement des nutriments
du milieu de culture et accumulation des dchets,
- Phase 5 : phase stationnaire : il y a un arrt de la
reproduction due un facteur limitant dans
lenvironnement, le taux de croissance est nul et le
taux de division gale le taux dautolyse,
- Phase 6 : phase de dclin : les ressources sont
puises et le nombre de bactries diminue.
5.2. Application au dnombrement bactrien
Le dnombrement des bactries par unit de
volume dchantillon analys se fait aprs culture et
permet dapprcier la quantit de bactries viables.
Lensemencement dun volume dfini dchantillon
sur milieu de culture glos permettra, aprs dnombrement des colonies bactriennes obtenues aprs
incubation, de calculer les bactries prsentes dans
lchantillon analys. Le rsultat est exprim en Units Formant Colonie par millilitre (UFC/ml).
Exemple : la culture de 100 l dun liquide de
lavage broncho-alvolaire (LBA) permet de dnombrer 70 colonies bactriennes aprs 48 heures
dincubation 37C, la numration bactrienne est
donc de 700 UFC/ml de LBA. (le seuil partir duquel la quantit de bactries est considre comme
significative est de 104 UFC/ml de LBA).
De mme, des systmes appels lames immerges ou
Uricult permettent la numration des bactries
prsentes dans un chantillon durine au moment du
prlvement et permettront une estimation fiable de
ce nombre ne tenant pas compte dune multiplication
bactrienne
ventuelle
durant
le
dlai
dacheminement des chantillons au laboratoire.
Le dnombrement est dune importance capitale
dans la plupart des analyses bactriologiques puisque
la quantit de bactries prsente dans lchantillon
conditionne la ralisation ventuelle dun antibiogramme (voir ci-aprs) ainsi que linstauration dune
antibiothrapie chez le patient. Par exemple, un dnombrement bactrien de 103 UFC/ml durine nest
pas considr comme significatif dune infection
bactrienne.

Figure 6 : Etude du mtabolisme glucidique de Escherichia coli


(en haut) et de Klebsiella pneumoniae (en bas). Si la bactrie
peut mtaboliser le glucide prsent, la cupule devient jaune ; si
elle ne peut utiliser le sucre test comme source de carbone, la
cupule reste bleue. (MAN : mannitol, INO : inositol, SOR :
sorbitol, RHA : rhamnose, SAC : saccharose, MEL : melibiose,
AMY : amygdaline, ARA : arabinose). Alors que Klebsiella
pneumoniae est capable de mtaboliser lensemble des huit
glucides tests, Escherichia coli ne peut en utiliser que quatre.

5.4. Application la dtermination de la sensibilit /


rsistance bactrienne aux antibiotiques
Ltude de la croissance bactrienne en prsence
de diffrents antibiotiques permet de dfinir pour
chaque bactrie analyse un profil de sensibilit /
rsistance aux diffrentes molcules antibiotiques.
Disque
dantibiotique
(chaque disque
contient un antibiotique diffrent)

Souche rsistante
lantibiotique test (croissance au contact du disque)

5.3. Application lidentification bactrienne


Lidentification des bactries repose sur ltude de
leur croissance en prsence de divers substrats ou
tude du mtabolisme bactrien, on peut ainsi
tudier le mtabolisme protique ou le mtabolisme
glucidique des bactries par exemple. La combinaison
des diffrents rsultats obtenus permet de dfinir le
profil mtabolique de la bactrie analyse ce qui permet de lidentifier. Nous donnons ci-aprs lexemple
de ltude du mtabolisme glucidique de deux bacilles
Gram ngatif ralise en galeries miniaturises permettant ltude simultane dun panel de plusieurs
substrats.

Janvier 2007
H. Marchandin

Souche sensible
lantibiotique test
(inhibition de la croissance autour du disque)

Figure 7 : Antibiogramme selon la mthode des disques ou de


diffusion en milieu glos.

6. Conduite dun examen cytobactriologique


Le droulement de lexamen cytobactriologique
dun chantillon dpend donc de la physiologie bactrienne chacune de ses tapes.
On peut par exemple schmatiser le droulement
dun examen cytobactriologique des urines comme
dans la figure 8.
La dure totale dun tel examen est donc comprise
entre 48 et 72 heures.

Facult de Mdecine Montpellier - Nmes

MB7 : Bactriologie

J0
J1

B2 - Physiologie bactrienne

Examen direct (GB, GR, bactries, ) et mise en culture


1 type de
colonies
isoles

Plusieurs types
de
colonies isoles

Numration
Identification(s)
Antibiogramme(s) ventuel(s)

J2

Rsultat

Plusieurs types
de
colonies non isoles

Risolement

Identification et
antibiogramme ventuel

- pour isoler, dnombrer et identifier la ou


les bactries en cause,
- pour dterminer leur sensibilit aux antibiotiques,
Lors de la ralisation de contrles de strilit ou de
densit microbienne dans certains locaux (air des
blocs opratoires, surfaces, )
Lors du contrle de la qualit microbiologique des
aliments, des eaux, des mdicaments, des produits
cosmtiques, etc.
Connatre la physiologie bactrienne est donc indispensable pour la conduite raisonne dun examen
cytobactriologique puisquil convient de matriser les
conditions de ralisation de la culture bactrienne
(besoins nutritifs et conditions environnementales
respects).

Pour en savoir plus


J3

Rsultat

* http://www.phem.fr/bio puis Les bactries

Figure 8 : Les tapes et les dlais de ralisation dun examen


cytobactriologique des urines.
(GB, globules blancs ; GR, globules rouges)

* Campus de microbiologie mdicale :


http://www.microbes-edu.org avec
http://www.microbes-edu.org/etudiant/etudiants.html

7. Conclusion

* Prcis de bactriologie clinique. Coordinateurs : J. Freney, F.


Renaud, W. Hansen, C. Bollet. Editions ESKA, 2000.

Lintrt de ltude de la croissance bactrienne


est multiple :
Lors dune maladie infectieuse :

Janvier 2007
H. Marchandin

* Microbiologie gnrale et Sant Coordinateur : C. Bosgiraud. Editions ESKA, 2003.

Facult de Mdecine Montpellier - Nmes