Resumen

El experimento de cromatografa en papel se bas en la visualizacin de una

mezcla de colores que caracterizan a un pigmento. Para la prctica usamos
espinaca y, plumones de colores, probetas, gotero, papel filtro, reactivos
(ter y metanol).
Se coloc en un mortero las nervaduras ms gruesas y se tritura se agrega
ter. Se recorta papel filtro y se dibuja una raya de con los plumones de
diferentes colores.
En un vaso se echa agua y se coloca la hoja dibujada con la lnea de tal
manera que el agua solo toque un 1cm en la hoja; en otro vaso colocamos
metanol y colocamos el papel filtro con la lnea de plumn.
Lo que conseguimos en el mortero, con la ayuda de un gotero, lo agregamos
a una tira de papel filtro y esta es colocada en una probeta con metanol.
Observamos la distancia alcanzada por el movimiento del solvente y
obtenemos nuestro Rf:

Rf =

Distancia alcanzada por el movimiento del soluto

D istancia alcanzada por el movimiento del solvente

Introduccin
La cromatografa es una tcnica que se emplea para separar entre si los
componentes de una sustancia. Esta tcnica fue creada por el botnico ruso
Michael Tswett en 1906, el cual llam a su mtodo cromatografa, palabra
griega que significa escritura a color, porque lo utilizo para separar
compuestos coloreados. Tswett llev a cabo una extraccin de una mezcla
de pigmentos de hojas verdes utilizando ter de petrleo, un disolvente
no polar, y descubri que era capaz de separar los pigmentos al hacer pasar
el extracto atraves de una columna, un tubo de vidrio rellenado con
carbonato de calcio (tiza).Tswett utiliz como detector del experimento la
simple observacin, ya que los compuestos que separ tenan color y era
posible detectar bandas o zonas de distintas materias por su color en la
columna, demostrando que la clorofila es solo uno de los muchos pigmentos
que se encuentran en las hojas de las plantas. A pesar de que el mtodo
cromatogrfico prometa simplificar la separacin de sustancias de mezclas
complejas, no fue sino hasta finales de la dcada de los 30 y principio de los
40 cuando se empez a desarrollar la tcnica teniendo este mtodo diversas
aplicaciones. En la actualidad la cromatografa se emplea principalmente
para separar compuestos incoloros pero el nombre permanece para
describir cualquier tcnica que se base en los mismos principios.

HPLC
La cromatografa lquida de alta eficacia o high performance liquid
chromatography (HPLC) es un tipo de cromatografa en columna utilizada
frecuentemente en bioqumica y qumica analtica. Tambin se la denomina
a veces cromatografa lquida de alta presin o cromatografa lquida de alta
resolucin (high pressure liquid chromatography) (HPLC), aunque esta
terminologa se considera antigua y est en desuso. El HPLC es una tcnica
utilizada para separar los componentes de una mezcla basndose en
diferentes tipos de interacciones qumicas entre las sustancias analizadas y
la columna cromatogrfica.

Tipos de HPLC:
Cromatografa de fase normal
La cromatografa de fase normal o normal phase HPLC (NP-HPLC) fue el primer tipo de
sistema HPLC utilizado en el campo de la qumica, y se caracteriza por separar los
compuestos en base a su polaridad. Esta tcnica utiliza una fase estacionaria polar y una
fase mvil apolar, y se utiliza cuando el compuesto de inters es bastante polar

Cromatografa de fase reversa

La HPLC de fase reversa (RP-HPLC) consiste en una fase estacionaria apolar y una fase
mvil de polaridad moderada. Una de las fases estacionarias ms comunes de este tipo de
cromatografa es la silica tratada con RMe2SiCl, donde la R es una cadena alquil tal como
C18H37 o C8H17. El tiempo de retencin es mayor para las molculas de naturaleza apolar,
mientras que las molculas de carcter polar eluyen ms rpidamente.

Cromatografa de exclusin molecular

La cromatografa de exclusin molecular, tambin conocida como cromatografa por
filtracin en gel, separa las partculas de la muestra en funcin de su tamao.
Generalmente se trata de una cromatografa de baja resolucin de forma que se suele
utilizar en los pasos finales del proceso de purificacin. Tambin es muy til para la
determinacin de la estructura terciaria y la estructura cuaternaria de las protenas
purificadas.

Cromatografa de intercambio inico

En la cromatografa de intercambio inico, la retencin se basa en la atraccin
electrosttica entre los iones en solucin y las cargas inmovilizadas a la fase estacionaria.
Los iones de la misma carga son excluidos mientras que los de carga opuesta son
retenidos por la columna.

Cromatografa basada en bioafinidad

Este tipo de cromatografa se basa en la capacidad de las sustancias biolgicamente
activas de formar complejos estables, especficos y reversibles. La formacin de estos
complejos implica la participacin de fuerzas moleculares como las interacciones de Van
der Waals, interacciones electrostticas, interacciones dipolo-dipolo, interacciones
hidrofbicas y puentes de hidrgeno entre las partculas de la muestra y la fase
estacionaria.

Cromatografa lquida de alta eficacia en condiciones

desnaturalizantes (DHPLC)
Se trata de un mtodo que se emplea para el rastreo de mutaciones (ya casi totalmente en
desuso debido al auge de la secuenciacin), que permite detectar la presencia de
variaciones en el ADN aunque no se determinan especficamente cules. En este caso, se
utiliza la tcnica cromatogrfica para la deteccin de heterodplex de ADN, en lugar de
utilizar un gel para correr las molculas de cidos nucleicos.

Bibliografa:
http://www.raco.cat/index.php/AnalesMedicina/article/viewFile/179047/2524
68
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-qumicos/cromatografade-lquidos-hplc
-Qumica orgnica Jhonn McMurry (octava edicin)- cap. 26(pag10581061).