ENDOCRINOLOGA MOLECULAR

La espermatognesis es regulada por la liberacin pulstil de GnRH desde el

ncleo arcuato del hipotlamo que estimula la pituitaria anterior para liberar
FSH y LH.
A nivel testicular, LH estimula las clulas de Leydig para producir testosterona.
La testosterona tiene efecto local sobre el intersticio y en los tbulos
seminferos que resultan en la produccin y maduracin de esperma.
FSH ejecuta su efecto directamente sobre las clulas de Sertoli que a su vez
promueven y sostienen la espermatognesis.
Tanto GnRH como la secrecin de gonadotropinas puede ser modulada por la
testosterona y por estradiol, actuando sobre el hipotlamo o sobre la pituitaria
a travs de mecanismos de regulatorios de retroalimentacin.
En machos, la fuente principal de estrgenos circulantes es a travs de la
aromatizacin de andrgenos como consecuencia de la accin del complejo
enzimtico aromatasa (cyt P450 aro, CYP19A1), que es ampliamente expresado
en tejidos como los testculos y el cerebro. Un posible blanco de las dioxinas
sera esta aromatasa que podra estar inhibida a nivel genmico en clulas de
Sertoli en testculos. Para dilucidar la posible accin de las dioxinas a este
nivel, planteara un experimento en el que se expongan este tipo de clulas
(Sertoli) a concentraciones significativas de dioxinas. Una vez pasado el tiempo
de incubacin, se censara la concentracin de ARNm que codifique para la
enzima, esto para saber si hubo disrupcin a nivel de la transcripcin. Si es
significativa tal concentracin (no hubo dao aparente a este nivel), se
proseguira a censar la existencia de la enzima en s y su funcionalidad
agregando su sustrato (Testosterona). Si existe la enzima pero no es funcional,
podra estar formando un complejo con la dioxina inhibiendo as la interaccin
con testosterona.
En un posible modelo extendido, podra ocurrir que la aromatasa es funcional,
sin embargo su sustrato, la testosterona, podra estar mal sintetizada de tal
forma que no estuviera ejerciendo una actividad normal en la enzima. En este
planteamiento la enzima afectada podra ser la 3--hidroxiesteroide
deshidrogenasa presente en clulas de Leydig en testculos, y no estara
realizando ptimamente la reaccin enzimtica de androstendiol a
testosterona.
La accin de los estrgenos mediada por sus receptores especficos, ER y ER,
localizados en el ncleo y citoplasma, actan como factores de transcripcin
nucleares unindose a elementos de respuesta a estrgenos dentro de genes
especficos para alterar su ritmo de transcripcin (mecanismo genmico); y los

GPER/GPR30 (mecanismo no genmico), receptores de estrgenos en

membrana acoplados a protenas G, en los que al unirse el estradiol, activa
diferentes vas estimulando la adenilato ciclasa, movilizando las reservas de
calcio intracelular (CA2+) y activando las vas de sealizacin de las MAPK
(Proteina cinasa activada por mitgeno) y PI3K (Cinasa-3 fosfoinositol). Estos
receptores tienen diferentes localizaciones y expresiones a travs de todo el
tracto reproductivo masculino en mamferos.
La movilizacin de estradiol haca hipfisis es la principal va inhibicin en la
secrecin de gonadotropinas (FSH) por parte de la glndula pituitaria. La
aromatizacin de testosterona in situ se requiere tanto a nivel hipotlamo
como en pituitaria para asegurar un mecanismo de retroalimentacin completo
de las gonadotropinas. Los estrgenos circulantes llevan a cabo un control
inhibitorio en la retroalimentacin de LH tanto en nivel hipotlamo como en
pituitaria. A este nivel, por tanto, es importante la expresin de los receptores
de estrgenos, as como su unin a EREs en ADN para su transcripcin. Y una
vez ms la presencia de aromatasa es importante para lograr la completa
retroalimentacin. En un experimento en clulas hipofisarias y de hipotlamo
embebidas en concentraciones significativas de dioxinas, se medira la
presencia de ARNm de los ERs, la presencia de los receptores mismos y su
funcionalidad o no, agregando E2, sugiriendo la unin de dioxinas a receptor si
se expresa receptor pero no hay actividad genmica o no ocurre de la manera
esperada.
En machos, ER, es el principal receptor involucrado en la supresin de GnRH
por estradiol.
En machos vertebrados, los niveles en plasma de LH y FSH son ampliamente
regulados por GnRH y activinas como estimuladores y por esteroides e
inhibinas como inhibidores. De ah que esta va pueda ser un blanco de
disrupcin del eje hipotlamo-hipfisis-gnadas.
La glndula pituitaria posee ambos tipos de receptores ER, adems de AR para
la regulacin por retroalimentacin de esteroides. Dihidroxi-testosterona (DHT)
suprime LH en suero va retroalimentacin por AR (en ERKO, modelo de ratones
con ER knockeado). AR puede constituir otro vector de disrupcin a partir
de dioxinas, y su participacin se podra medir en clulas de glndula pituitaria
en un experimento similar al mencionado para los ERs y agregando DHT o
testosterona en lugar de E2.
Los efectos del estradiol en la glndula pituitaria ocurren principalmente a
travs de mecanismos genmicos, por ejemplo aumentando los niveles de
ARNm de LH, debido a la presencia de EREs dentro de la regin promotora del
gen LH. A este nivel, se podra sugerir una participacin de las dioxinas como
factores inhibidores de la transcripcin de LH, posiblemente funcionando

como ligandos inespecficos para ER que eventualmente los llevara a unirse a

complejos inhibitorios. Aqu la intervencin se medira por ARNm de LH.
Aunque existe una variacin muy evidente entre los sistemas de determinacin
del sexo en distintas especies, los anlisis genticos han revelado que procesos
aparentemente diferentes son, en realidad, fundamentalmente similares uno
respecto a otro en el contexto de las vas genticas subyacentes.
Se ha visto que en la tortuga galpago de Florida (o de orejas rojas o
Trachemys scripta), ciertos ligandos exgenos como las hormonas esteroides e
inhibidores enzimticos del metabolismo de esteroides pueden anular el efecto
de la temperatura si se aplican durante el periodo sensitivo a temperatura
(TSP). Esto es, en huevos incubados a la temperatura ptima productora de
machos (MPT), 26C tratados con estradiol (E2) o con inhibidores de la
reductasa, se induce el desarrollo de ovarios, mientras en huevos incubados a
temperatura ptima para producir hembras (FPT) tratados con testosterona (T)
o con inhibidor de la aromatasa (AI) se induce el desarrollo testicular. Es de
resaltarse la interaccin entre la temperatura y la dosis de ligandos exgenos;
mientras ms cerca se encuentra un huevo de la temperatura definitoria de
incubacin de un sexo especfico, menor dosis de ligandos exgenos se van a
requerir para anular el sexo. Por ejemplo, se requiere una dosis baja de
estrgenos para producir cras hembras a la temperatura umbral de 29.2C
(temperatura media entre las ptimas definitorias de cada sexo, y que resulta
en una proporcin 50:50) comparada con la dosis que se necesita a la
temperatura ptima productora de machos (26C).
Se ha asumido as que, la cascada de sealizacin inducida por temperatura se
superpone de alguna forma con la cascada inducida por ligandos exgenos. Se
tiene as, por ejemplo, que los ovarios que se desarrollan en embriones
incubados a 31C (temperatura ptima para producir hembras) son grandes y
gruesos, mientras los ovarios en embriones incubados a 26C (temperatura
ptima para producir machos) tratados con E 2 exgeno son de tamao
pequeo y los oviductos no se despegan completamente de los tejidos
mesonfricos subyacentes. De manera similar, el desarrollo testicular puede
ser inducido por la administracin de inhibidor de aromatasa ms testosterona
(AI+T) en huevos incubados a 31C, pero presentan una formacin ligeramente
alargada, que es una caracterstica tpica del desarrollo de ovarios a esta
temperatura. Adems, ambos testculos muestran vascularizacin acompaada
de la degeneracin de oviductos y la formacin de tbulos testiculares. De esta
manera, a grandes rasgos la morfologa de la gnada parece retener su
estructura caracterstica inducida por la temperatura, mientras la
diferenciacin celular interna es dirigida por el ligando.
Se sabe que en mamferos, el desarrollo de gnadas es determinado por
factores genticos, existen cambios importantes en la expresin de los genes

para que la gnada sea diferenciada en testculo (Sox9, Sry) u ovario (Dax1).
Paralelamente, en reptiles existen ciertos genes que dan lugar a la
diferenciacin gonadal, que asociados a la determinacin del sexo por
temperatura, existen FoxL2 y Dmrt1. La expresin de FoxL2 en el caso de
tortugas de orejas rojas, da lugar a diferenciacin a ovario, mientras que en
ratones adultos, por ejemplo, puede reprogramar a las clulas y volver a un
estadio de diferenciacin de testculo a ovario. Adems juega un papel en el
aumento de la produccin de E2, suprimiendo la transcripcin de Sox9 al unirse
a la regin reguladora de este gen y silenciando a otro gen de desarrollo
testicular; Dmrt1. ste ltimo, es un factor en la determinacin testicular en
cromosomas sexuales, conocido en mamferos y en pollo, muy conservado
entre especies. La baja de Dmrt1 en pollo lleva a gnadas masculinas
genticamente a la feminizacin, apareciendo histologa ovrica y regulacin a
la alta de marcadores de ovario; aromatasa y FoxL2. En mamferos Dmrt1 no se
expresa hasta que no se encuentra Sox9 que se expresa en la determinacin
testicular.
En tortugas se ha propuesto un modelo donde los genes determinantes del
sexo FoxL2 y Dmrt1 son potencialmente los factores genticos ro arriba que
subyacen al mecanismo. FoxL2 activa directamente la expresin de la
aromatasa y suprime la expresin de Dmrt1 y Sox9 a FPT. Por otro lado, a MPT,
Dmrt1 suprime la expresin de FoxL2, llevando a la activacin de Sox9 por
diferenciacin testicular. El nivel de la expresin de aromatasa balancea el
nivel de las hormonas sexuales en la gnada, que a su vez interactan con los
genes de determinacin sexual. Sin embargo, an queda por confirmar este
modelo.
Se han realizado estudios en lneas celulares GC-1 de espermatogonias de
ratones que han mostrado que el estradiol activa rpidamente la va de
EGFR/ERK/fos/ciclinaD1 a travs de un entrecruzamiento funcional entre los
receptores acoplados a protenas G; GPER y el receptor de estrgenos; ER,
responsable de la proliferacin celular. A la inversa, la va de activacin rpida
mediada por estradiol en ER y/o GPER/EGFR/ERK/c-jun en cultivos primarios
de espermatocitos en paquiteno (PS) de rata y en clulas GC-2, lnea celular
derivada de espermatocitos en paquiteno de ratn, induce un mecanismo
apopttico. En particular, en clulas PS la activacin de GPER se relaciona con
la reduccin de la expresin de ciclina A1 y B1 a la vez que un incremento en la
expresin de la protena bax (pro-apopttica), mientras en clulas GC-2, la
sealizacin de GPER se asocia con la fosforilacin de todos los miembros de la
familia de las MAPK iniciando la va intrnseca de apoptosis.
El mecanismo de entrecruzamiento se explicara a partir de la interaccin de
GPER en membrana plasmtica, retculo endoplsmico o vescula endoctica
con estradiol, llevando a la separacin de subunidades y que activaran a cSrc para liberar la Metaloproteinasa de matriz (MMP) de la membrana y pueda

realizar protelisis en pptido de superficie creando molcula bioactiva. De

esta manera se va a liberar HB-EGF que se va a unir al receptor de factor de
crecimiento epidermal (EGFR) activando as una de las vas de cinasas de
tirosinas; SHC/GRB2/SOS va a activar GTPasas pequeas Ras, Raf y va de las
MAPK cinasas mediante MEK1/2, ERK1/2, que en ltimo trmino van a activar
factores de transcripcin y respuestas gnicas dependientes del fenotipo
celular y el ligando. As se tienen tres vas de sealizacin entrecruzadas: la va
de esteroides clsica, va de protenas G y va de RTKs.
Para comprobar la existencia del entrecruzamiento entre vas, se podra
experimentar en alguna de las lneas celulares mencionadas, por ejemplo GC-1,
cuantificando, por Western blot, la cantidad de HB-EGF unido a EGFR en un
contexto donde se agreguen determinadas concentraciones de estradiol para
activar la va GPER, se determina por marcacin del estradiol, la cantidad del
mismo unido a GPER, a la vez que se inhiban con algn antagonista los
receptores de estrgenos para suprimir en la medida de lo posible la va
genmica. As se podra comparar la cantidad de HB-EGF unido a EGFR (unin
resultado de la accin de va GPER) con estradiol marcado unido a GPER
(activacin no genmica de E2, proporcionalmente respecto a la respuesta de
ciclinaD1 hacia proliferacin y determinar si existe una relacin significativa
entre Los resultados. De esta manera se determinara si existe la interaccin
entre las distintas vas.

Fig.1 Entrecruzamiento de vas de estrgenos, receptores asociados a protenas G y RTKs.

REFERENCIAS
Chimento A, Sirianni R, Casaburi I, Pezzi V. (2014) Role of estrogen receptors
and G protein-coupled estrogen receptor in regulation of hypothalamus
pituitarytestis axis and spermatogenesis. Frontiers in endocrinology. 16;5:1.
Matsumoto Y, Crews D. (2012) Molecular mechanisms of temperaturedependent sex determination in the context of ecological developmental
biology. Molecular and cellular endocrinology. 354(1-2):103-10.
http://www.sabiosciences.com/pathway.php?sn=Estrogen_Pathway

http://www.sabiosciences.com/pathway.php?sn=EGF_Pathway