TINCION DE GRAM

INTRODUCCIN
De gran importancia en Microbiologa porque permite diferenciar dos
grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), segn se comporten ante
esta tincin. El fundamento radica en la diferente estructura de la pared
celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de
peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una
capa de peptidoglicano ms fina y una capa lipopolisacardica externa. Tras
la tincin con el primer colorante (Cristal violeta) se efecta un lavado
conetanol que arrastrar al colorante slo en las Gram (-), mientras que en
las Gram (+) elcolorante queda retenido y las clulas permanecern azules.
Las clulas Gram (-) se teirn despus con un colorante de contraste
(safranina) para que puedan observarse.
MARCO TEORICO
Cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de
mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia
y la fsica. Es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin
selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una
mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos
componentes.
Pigmentacin es la coloracin de una parte determinada del organismo de
un ser vivo por el depsito en ella de pigmentos. Tales principios son
sustancias con propiedades cromticas e intervienen en numerosos
procesos biolgicos, tanto en los vegetales como en los animales. En los
primeros destacan la clorofila y los carotenoides.
La energa est presente en todos los procesos que garantizan mantener la
vida sobre la tierra. En las plantas ocurren cambios y procedimientos que se
deben a la energa lumnica o la proveniente del sol que ingresa en forma de
luz y es captada por los organismos que realizan la fotosntesis.
En la fotosntesis, la materia inorgnica del ambiente (agua y dixido de
carbono) se transforma en materia orgnica, gracias a la energa lumnica.
Formula de la fotosntesis:
6 CO2 + 6 H2O C6H12O6 + 6 O2
Hablar de energa solar es decir la energa radiante producida por el sol que
hace posible que los seres vivos cambiemos algunas propiedades. Por
ejemplo, el pasto es de color verde y algunas plantas, sin embargo tienen
un tono amarillento, lo mismo ocurre con otras plantas.
Las plantas necesitan agua y minerales para poder vivir .Ellas purifican el
agua y el aire, y adems protegen los suelos.

Para retomar el tema de la cromatografa, las tcnicas cromatogrficas son

muy variadas, pero en todas ellas hay una fase mvil que consiste en un
fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la muestra a travs
de una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un
slido.
La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen
mutuamente:
Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que
puedan ser usados posteriormente
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla. En este caso, las
cantidades de material empleadas son pequeas.
Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices y
combinaciones de colores del espectro, existe un predominio general de los
colores primarios: amarillo, rojo, azul. Estos colores son conferidos a los
vegetales por determinados compuestos qumicos definidos, llamados
pigmentos.
La clorofila a (R = --CHO) absorbe la energa del Sol de las longitudes de
onda. La energa solar junto a la clorofila son los componentes esenciales
para que las plantas presenten la pigmentacin.
La cromatografa se divide en varios tipos segn su fase estacionaria. Los
componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase
estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria
a distintas velocidades y se van separando.
Tipos de cromatografa:
Tipos de cromatografas:
Si es un slido, cabe distinguir entre:
Cromatografa de adsorcin: El slido adsorbe al componente que
inicialmente estaba en fase mvil (liquida o gaseosa)
Cromatografa de cambio inico: el slido es un cambiador de iones
Cromatografa de exclusin (o de geles), el slido es un gel formado por
polmeros no inicos porosos que retienen a las molculas de soluto segn
su tamao.
Cromatografa de afinidad: es un tipo especial de cromatografa de
adsorcin, utilizada especialmente en bioqumica, en la que un slido tiene
enlazado un llamado ligando de afinidad que puede ser por ejemplo, un
indicador enzimtico o un anticuerpo

La tincin es un mtodo utilizado para estudiar microorganismos; en estas

tinciones se observa morfologa, estructura y agrupamientos de
microorganismos.

Tipos de Tincin:
Tincin Simple: utiliza un solo colorante.
Tincin de Gram: Utiliza varios colorantes
EJEMPLO DE EXPERIENCIA SACADA DE INTERNET
Objetivos
Utilizacin de tcnicas sencillas para la observacin de microorganismos
Conocer o manejo del microscopio ptico para la observacin de bacterias
(importancia del objetivo de inmersin)
Conocer y manejar las unidades de medida de las clulas y establecer
comparaciones entre tamaos de procariotas y de eucariotas
Reconocer los distintos modelos de pared bacteriana.

Materiales
Mechero Bunsen o de Alcohol
Asa de Siembra o aguja enmangada
Pinzas
Portaobjetos
Muestras bacterianas de origen natural: Yogur, Sarro Dental, Suelo, etc.
Palillos
Microscopios
Aceite de inmersin
Soporte de Tinciones
Goteros
Pinzas

Agua destilada
Colorantes para Tincin: Solucin de cristal Violeta Lugol Safranina Etanol
95%

Procedimiento
I. prepara las muestras siguiendo estos pasos:
1. En unas gotas de agua colocadas sobre un portaobjetos, disuelve una
pequea cantidad de yogur con ayuda de un palillo higinico. Haz lo mismo
con la muestra de sarro dental extrado de la boca de alguien.2. Prepara una
fina extensin (frotis), en otros portas, dejndolos secar.3. Fija este frotis
dndole varios pases a los portas sobre la llama del mechero, con la
muestra hacia arriba.
II Tie ahora los frotis fijados mediante los siguientes pasos:
1. Cubre ambos frotis con cristal violeta durante 3 min. Se retirar el
colorante mediante un suave lavado con agua, deslizando el agua sobre el
porta, para non desprender la muestra. Se 2. cubrir ahora con Lugol durante
1 min., y despus se realizar otro lavado suave. Todas las clulas se teirn
de violeta.2. Se retirar el colorante con etanol, gotendolo por el
portaobjetos, hasta que las gotas que salen no tengan casi color. Las clulas
Gram- pierden el colorante violeta y quedarn incoloras. Las Gram +
seguiran violeta.3. Aade una gota de agua a la preparacin y cubre las
preparaciones 2 min. con safranina (colorante de contraste).Finalmente,
lava el colorante con agua. Este colorante slo entrar en las bacterias
Gram , que quedarn rojas. Las Gram + seguirn violetas.
Seca las preparaciones sobre papel de filtro y obsrvalas con microscopio
utilizando el objetivo de inmersin. En esta tincin diferencial las bacterias
Gram aparecen rojas y las Gram + violeta. Observar (100). Lugol
Tincin negativa
1. colocar una pequea gota de tinta china en el extremo de un
portaobjeto, colocar una gota de muestra2. realizar frtis, 3. dejar secar.

Resultados

Preguntas de anlisis

1) Cules son las fuentes de errores ms comunes de error en la

Tincin de gram.
Los peores obstculos de la Tincin, que impiden conseguir el resultado
perseguido, son los errores del tcnico. Para evitarlos hay que elegir bien los
reactivos y ser muy cuidadosos al ejecutar la tcnica. A continuacin

describimos algunas de las fuentes de error: Impurezas en los reactivos de

Tincin.
Concentracin inadecuada de los reactivos de tincin.
pH inadecuado.
El colorante se fija a la clula por mecanismos fsico-qumicos, que se
alteran si el Ph no es el apropiado.
Los colorantes pueden ser cidos, bsicos o neutros.
Tiempo de Tincin incorrecto.
Temperatura suficiente.
2) Explique qu reaccin de Gram darn las levaduras. Estos
tendrn la misma importancia que para las bacterias.
El color depende de la composicin de la pared celular de la levadura y no
tiene tanta importancia como las bacterias ya que en ellas existe toda una
clasificacin por medio del gram lo que no sucede con las levaduras.

3) Explique el fundamento de la Tincin negativa realizada en la

prctica. Qu tipo de informacin se obtiene.
La Tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual: las
clulas se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea.
Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas. La Tincin negativa es un
modo satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la microscopia
ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la presencia de cpsulas
alrededor de las clulas bacterianas.

4) Investigue otra tcnica de Tincin selectiva que permita

observar otras estructuras bacterianas.
Las Tinciones Selectivas nos permiten observar estructuras de las clulas
gracias a su mayor afinidad por los colorantes utilizados.

5) A qu se debe el distinto comportamiento de las bacterias

segn sean Gram+ o Gram-?
El distinto comportamiento en la Tincin se piensa que es debido a las
diferentes capas superficiales o paredes de las dos bacterias (Tipos de
Clulas).

6) Para qu se necesita el aceite de inmersin ?

El aceite de inmersin tiene un indice de refraccin similar al del vidrio (1,5
aprox.) y se utiliza para el objetivo de 100X.

Conclusin
Aunque las bacterias no aparecen en diferentes medio que las rodea,
difieren mucho qumicamente esta diferencia qumica es los que permite
distinguir las bacterias por Tincin, pues generalmente, el colorante
reacciona con la clula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior.

Debido a eso la Tincin es importante para la microbiologa debido a que:

Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea,
permitiendo diferenciar varios tipos morfolgicos.
Permite el estudio de las estructuras internas de la clula bacteriana, tales
como paredes celulares, vacuolas o cuerpos celulares.
Permite el empleo de mayores amplificaciones.
BIBLIOGRAFIA

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