Anlisis cuantitativo de enzimas: Parte 2

Objetivos

Evaluar la reaccin enzimtica a partir de pH y temperatura determinada, observar en cul

de estos se tiene una mayor velocidad de reaccin.
Observar la actividad cataltica de catalasa, amilasa y peroxidasa sometida a diferentes
medios.

Resultados
Accin de la catalasa
Tubo
Calor
1
Si
2
No

H2O2
1ml
1 ml

Resultado
Menor burbujeo
Mayor burbujeo

Resultados parte 2

Fig 1. Accin de la
casa con presencia y
ausencia de calor.

Valoracin de pH
Tubo
Buffer

Hidroquinona

Coloracin

1
2
3

1 ml
1ml
1ml

Naranja/roja
Rojo intenso
Rojo

4
7
10

Velocidad de
reaccin
Lenta
Media
Rpido

Fig 2.La imagen muestra la coloracin de

los tubos despus de adicionar perxido
de hidrgeno.

Actividad de la amilasa
Tubo
1
Almidn
1
H2O
0
Saliva
0
(concentracin
)
Resultado
amarillo

2
1
0
1:5

3
1
0
1:10

4
1
0
1:20

5
0
1
1:5

6
0
1
1:10

7
0
1
1:20

Azul ms azul
claro

azul

amarillo

amarillo

amarillo

Fig 3. El lugol reacciona con los

tubos que contienen amilasa
tindolos de azul.

Discusin
En el primer experimento se puede ver que la actividad de la disminuye con el calor aplicado, se
dej calentar el agua durante 3 minutos por lo que se rebas la temperatura crtica de la enzima,
es decir,55C esto produce que la enzima no reaccione puesto que pierde su funcin como
protena al desnaturalizarse, en el caso de el tubo al que no se aplic energa la catalasa
reacciona con mucha velocidad lo que nos indica que la papa es un tubrculo rico en catalasa.
En el segundo experimento se mide la actividad de la peroxidasa dependiendo del pH en el que
se encuentra, sin embargo es importante remarcar que la peroxidasa es una enzima que se
encuentra en la papa y tiene como funcin oxidar a la hidroquinona , por lo que pertenece a las
enzimas oxidoreductasas al igual que la catalasa, el cambio de coloracin que se puede apreciar
en la Fig. 2 se debe a la accin de la peroxisada que utiliza como cosustrato o como coenzima al
perxido de hidrgeno para poder llevar a cabo su reaccin, de acuerdo con los resultados
podemos ver que la peroxidasa es una enzima que funciona con mayor eficacia en el pH 10, lo
cual indica que su pH ptimo es el medio alcalino.
En el tercer experimento podemos apreciar la accin de la amilasa en los polisacridos, la
amilasa es una enzima que est presente mayormente en la saliva, producida por las glndulas
salivales de la boca, y su funcin principal es la degradacin de carbohidratos, el almidn es un

carbohidrato que pertenece a los polisacridos de acuerdo a su clasificacin por lo tanto

reacciona con el lugol presentando una coloracin azul, en el experimento se puede ver que la
saliva en mayor que se encuentra en mayor concentracin es decir, 1:5 es la que presenta una
disminucin de color debido a la accin que est presentando la amilasa al degradar los
carbohidratos, pierde la coloracin debido a que el lugol no reacciona con monosacridos,
adems se incuba a temperatura de 37Cdebido a que es la temperatura corporal por lo tanto es
la temperatura ptima para que la catalasa pueda llevar a cabo su funcin, la concentracin de
sales no afecta la actividad enzimtica puesto que se necesita una concentracin mayor.

Cuestionario (Parte 2)
1.- Haz los clculos para determinar las unidades de amilasa.
Se mide la absorbancia que hubo en el complejo iodo-amilosa a 640nm.
Para obtener las unidades de actividad amilasica, la fraccin de almidn digerido se multiplica por
1000.
AmilasaUA / dl

Absorbancia(Tubos 1 2) Absorbancia(Tubos 3 4)
1000
Absorbancia(Tubos 1 2)

2.- Explique cmo demostraste que el almidn fue totalmente transformado en sus subproductos
al reaccionar con la amilasa?
Se observ un cambio de color de amarillo a azul.
3.- Que son las Unidades (enzimticas). Todas son iguales o varan con el tipo de sustrato que
usa?
Una unidad de actividad enzimtica (U) es la cantidad de enzima que en una reaccin enzimtica
cataliza la conversin de 1 mol de sustrato por minuto. Es especfica para cada enzima, y
tambin depende de la concentracin de esta.
4.- Como afecta el NaCl en la actividad de la amilasa?
Inhibe o modifica su actividad enzimtica.
5.- En el ser humano, donde podemos encontrar amilasa?
En la saliva (amilasa salival) y en el intestino (amilasa pancretica).
6.- Cul es el pH en el cual la actividad de la amilasa es ptima?
Aproximadamente a los 36C.
7.- Haga un esquema de la estructura de amilosa y de amilopectina:

8.- Describa un mtodo para determinar azcares reductores.

-El mtodo analtico se basa en la eliminacin de todas las materias reductoras que no sean
azcares mediante defecacin con los reactivos Carrez I y II, previa dilucin de los azcares en
medio hidroetanlico y valoracin de los azcares reductores segn el mtodo de Luff.
- En qumica, la reaccin o prueba de Benedict identifica azcares reductores (aquellos que
tienen su OH anomrico libre), como el lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En soluciones
alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solucin alcalina
como Cu2O de color rojo-naranja. El reactivo de Benedict consta de: Sulfato cprico; Citrato de
sodio; Carbonato anhidro de sodio. Adems se emplea NaOH para alcalinizar el medio.

Conclusin
Se logr cumplir con los objetivos pues se observ y analiz la actividad de la catalasa en
presencia de calor, se concluye que la enzima pierde funcionalidad al someterla a altas
temperaturas. En el caso de la peroxidasa en un pH bsico se observ una mejor actividad. Y
finalmente la accin de la amilasa se lleva acabo de manera eficaz a temperatura corporal. Por lo
cual, las pruebas indican que cada enzima necesita estar en determinado pH y temperatura para
llevar acabo la actividad cataltica de forma ptima.

Bibliografa
Bohinski,(1987).Bioqumica,Mxico. Fondo educativo Interamericano.
Ordanza(R).(2006).Biologa Moderna. Mxico.Trillas.