PROBLEMAS DE BIOQUIMICA I (Trimestre 10-0)

CINETICA ENZIMATICA Y METODOS DE LINEARIZACIN

(Prof. Javier Isidoro Lpez Cruz)
1. Cul es la fraccin de VMAX observada, cuando la concentracin de sustrato
es igual a KM, 2 KM y 4 KM?
2. Qu cantidad de sustrato hay que aumentar para que la velocidad mxima
aumente de 0.1 a 0.9?
3. Una enzima cataliza una reaccin con una velocidad mxima de 5 moles
por minuto, siendo su KM para el sustrato de 0.5 mM. Si la ponemos en
presencia de una concentracin 500 mM de sustrato. Qu cantidad de
sustrato se lograr transformar en 10 min?
4. La KM de una hexoquinasa para la glucosa es 10-4M. Si la concentracin de
glucosa en el medio de reaccin es 1.8 g/mL, cul ser la relacin CE/CES?
(PM glucosa=180 g/mol).
5. La KM para el etanol de la enzima alcohol deshidrogenada de levadura es de
1.3x10-2M. Si la concentracin de alcohol en el medio de reaccin es de
59.8 g/mL, Qu proporcin de enzima estar libre y que proporcin
estar combinada con el sustrato? (PM etanol 46 g/mol)
6. Calcular que velocidad se obtendr en una reaccin enzimtica si la
velocidad mxima es igual a 100 y la concentracin de sustrato es igual a)
10 KM y b) KM/3
7. Calcular que concentracin de sustrato expresada en funcin de KM nos
dar una velocidad de reaccin enzimtica al 60% de la velocidad mxima.
(solucin: Cs= 1.5K KM)
8. Una enzima cuya KM= 2.4x10-4M, se ensaya con las siguientes
concentraciones de sustrato: a) 2x10-7M, b) 6.3x10-5 y c) 1x10-4M. La
velocidad medida en la reaccin con 5x10-2M de sustrato fue de
0.128moles/min. Calcular las velocidades iniciales en los otros casos.
(solucin b) 0.02674moles /min, c) 0.037 moles/min)
9. Una enzima cataliza una reaccin a una velocidad de 35moles/min cuando
la concentracin de sustrato es 0.01M. La KM para el sustrato es 2x10-5M.
Cul ser la velocidad inicial a las concentraciones de sustrato: a) 3.5x103
M, b)4x10-4M, c) 2x10-4M, d) 2x10-6M y e)1.2x10-6 M?.

10.A partir de los siguientes datos obtenidos para una reaccin catalizada
enzimticamente. calcular KM y VMAX obtenida por Lineaweaver & Burk y
por el mtodo de Eadie & Hofstee de los siguientes problemas (a), (b) y (c).
Adems obtenga la grafica en papel milimtrico de cada uno de los
mtodos.
a.
Cs (mM)

0.5 1.0
s (mol/min) 1.00 1.67

1.5 2.0 2.5 3.0

2.40 2.50 2.78 3.0

b. 25 L de una preparacin de Ribonucleasa A se lleva a ensayo a un

volumen de reaccin estndar de 1 mL y a temperatura y pH
ptimos, pero con distintas concentraciones iniciales de sustrato
obtenindose las velocidades iniciales que se indican
Cs x10-3(mM)

303 149 128 100 80

s (nmol/min) 120 98 92.6 83.3 74.6
Determnese la KM y VMAX y exprese tambin la cantidad de enzima en
UI/mL y UI/mg.
c. La descarboxilacin enzimtica de -cetocido procede con las
velocidades iniciales para las concentraciones que se citan
[cetocido] (mM)

2.500 1.000 0.714 0.526 0.250

s (mol CO2/2 min) 0.588 0.500 0.417 0.370 0.252
Determnese la KM y VMAX
d) Un sustrato fue hidrolizado por una enzima y la velocidad inicial de
desaparicin fue medida para distintas concentraciones del mismo.
Calcular la KM y VMAX a partir de los datos que se resumen a
continuacin:
Cs (mM)

2.3 3.0 4.5 12.0 38.0

s (mol/min) 0.95 1.13 1.42 2.14 2.64
11.Qu informacin puede obtenerse a partir de una representacin grfica
del mtodo de Lineaweaver & Burk cuando la recta obtenida,
convenientemente extrapolada, corta el eje de las abscisas en -40
Litros/mol?.
12. Calcular la la KM y VMAX de una enzima sabiendo que la recta obtenida en
una representacin de Lineaweaver & Burk corta el eje de ordenadas en
5x103 (moles/min)-1 y que la pendiente de dicha recta es de 120 min/L.
Adems vare la concentracin de sustrato y represente la curva de
Michaellis & Menten en papel milimtrico, a travs de la ecuacin del mismo
nombre.

PROBLEMAS DE INHIBICIN
13.Una reaccin enzimtica se lleva a cabo a diferentes concentracuines de
sustrato en ausencia y presencia de dos inhibidores diferentes:
(Ia)=(Ib)=1.5 mM. La siguiente tabla muestra los datos obtenidos:

Cs (mM)
0.2
0.4
0.8
1.6
3.2

s
(mol/min)
1.67
2.86
4.44
6.15
7.62

s a
(mol/min)
0.625
1.176
2.110
3.480
5.160

s b
(mol/min)
0.83
1.43
2.22
3.08
3.81

a) determinar todos los parmetros cinticos de la enzima

b) Qu tipo de inhibidor es Ia y Ib?
Una reaccin enzimtica se lleva a cabo con distintas concentraciones de
sustrato en ausencia y presencia de un inhibidor. Los datos obtenidos se
representan en unos ejes de coordenadas segn en mtodos de
Lineaweaver&Burk. Las rectas obtenidas cortan a los ejes en coordenadas en lo
siguientes puntos, en ausencia y presencia del inhibidor, respectivamente,
corte de abscisas (mM-1)= -3.7 y -0.2
corte en ordenadas (moles/min)-1=0.01 y 0.01.
De que tipo de inhibicin se trata? Calcular la KM y VMAX en ausencia y
presencia del Inhibidor?. Determinar la concentracin de inhibidor sabiendo
que KI= 2.6x10-1mM.
14.- Al estudiar la cintica de la inhibicin de cierta enzima., se han obtenido
los resultados de la tabla siguiente:

Cs [mM]
0.02
0.05
0.10
0.20
0.50

[I]=0
2.90
5.00
6.67
8.13
9.09

s (mol/min)
[I]=0.1 mM
[I]=1 mM
2.52
1.18
4.02
1.43
5.02
1.54
5.72
1.60
6.25
1.64

Determinar grficamente
a) El tipo de inhibidor
b) El valor de KM y VMAX de la enzima
c) El valor de KI

OTROS PROBLEMAS DE CINETICA Y DE INHIBICIN

1. Calcular KM y VMAX de una enzima sabiendo que la recta obtenida en una
representacin de Lineaweaver y Burk corta el eje de ordenadas en 5x103
(moles/min)-1, y que la pendiente de dicha recta es 120 min/L
2. A partir de un representacin de Lineaweaver y Burk para una reaccin
enzimtica cuya recta corta al eje de ordenadas en 1/V=25 h/mol y
extrapolando al eje de las abscisas en 1/S= -1.3 x 102 (moles/L)-1, calcular
KM y VMAX.
3. La glutamina sintetasa (GS) cataliza la siguiente reaccin:
L-Glu + NH3 +ATP L-Gln + ADP +Pi
Cuando las concentraciones de NH3 y de ATP son saturantes, la enzima
manifiesta una cintica Michaeliana respecto al cido glutmico. Sin embargo,
cuando a un preparado enzimtico se le aade L-serina de modo que su
concenracin resulte ser 16 mM, se observa que tanto KM y VMAX disminuyen
hasta alcanzar 1/3 del valor primitivo. Indicar a)Qu tipo de inhibicin ejerce
la serina? B)Cul ser su valor de KI?
4. Se ensaya una enzima con su sustrato especfico en presencia de un
inhibidor competitivo. Sila velocidad mxima de la reaccin no inhibida es
de 55 moles/min, Calcular la velocidad inicial de la reaccin inhibida,
sabiendo que Cs= KM=2 x10-4M y que [I]=Ki 2.5 x 10-3 M.
5. Una cierta enzima cataliza la transformacin de 0.4 mmoles de sustrato en
5 minutos, cuando la concentracin de este se encuentra en la saturacin.
Si se ensaya la enzima con una concentracin de sustrato de 60 M, la
velocidad de reaccin es de 40 moles/min y si adems se aade inhibidor
competitivo a concentracin de 30M, el grado de inhibicin resulta ser del
75%. Calcular KM de la enzima y la KI del inhibidor
(Tip Para la Inhibicin competitiva el grado de inhibicin se define como:)

i% =

100[ I ]
, adems i % = (1 a ) * 100 con a =
[S ]

Ki1 +
+ [I ]
KM

inhibida
sin inhibida