TRABAJO COLABORATIVO 2

Presentado Por:
Wilson Ernesto Oviedo
Diana Mara Hernndez
Mari Stella Martnez
Carolina Villa

Presentado A:
Carlos German Pastrana

Biotecnologa Alimentaria-211619-10

Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD

Escuela de Ciencias Bsicas Tecnologa e Ingeniera ECBTE
Septiembre - 2015

DESARROLLO DEL CUESTIONARIO

ARTICULO 3

3.1 Qu tipos de tecnologas son mostrados en el artculo?

TECNOLOGA DE ENZIMAS O ENZIMTICA

La tecnologa enzimtica tiene como objetivo la superacin de todos aquellos
inconvenientes que parecen retrasar la aplicacin de las enzimas en estos procesos a escala
industrial, las enzimas son protenas cuya funcin biolgica es catalizar las reacciones que
suceden en las clulas. Esta rea tiene aplicaciones desde tiempos remotos como la
fermentacin, actualmente en diferentes industrias a diferentes niveles, ya que implica la
utilizacin de sistemas enzimticos diversos que optimizan el procesamiento en la
obtencin de detergente, aditivos alimenticios, productos qumicos y farmacuticos. La
tecnologa enzimtica se presenta como alternativa biotecnolgica basada en que las
industrias desarrollen productos de calidad homognea, aprovechen ptimamente sus
materias primas, aceleres sus procesos de produccin, minimicen desperdicios y
disminuyan el deterioro del medio ambiente.
Dextransucrase (CE 2.4.1.5), la enzima extra celular perteneciente a la familia glucsido
hidrolasa 70, es de inmensa importancia industrial debido a su dextrano y prebiticas
propiedades de oligosacridos de sntesis
Dextransucrase es una glucosiltransferasa (EC 2.4.1.5) que cataliza la transferencia de
residuos de glucosilo a partir de sacarosa (S) a polmero de dextrano y libera fructosa (F) de
acuerdo con la siguiente ecuacin (8): n S n F + dextrano (glucosa) n.
Los dextranos se puede utilizar como aumentador de la viscosidad, estabilizantes,
emulsionantes, edulcorante, gelificante o agentes fijadores de agua en los alimentos
produccin, as como en las industrias no alimentarias.
El dextrano es un de alto peso molecular en masa (10 7 a 10 8 Da) glucano (26). Se
compone de una cadena lineal de residuos de glucosilo todos ellos vinculados a travs de

(1 6) enlaces glucosdicos y varios (1 2), (1 3), o (1 4) ramificado

vnculos (27).
El dextrano tiene numerosas aplicaciones industriales y mdicas. Purifica mtodos tales
como sal o precipitacin con alcohol, el fraccionamiento por poli-etilenglicol,
ultrafiltracin, cromatografa y la particin de fase han empleado con xito para la
purificacin de dextransucrase de diferentes cepas de bacterias de cido lctico.
El cultivo de Pediococcus pentosaceus P. pentosaceus (GenBank nmero de acceso
EU569832) se asla a partir de la muestra de suelo recogida de una caa campo en Assam
(Cerca de Guwahati, India) se proyecta para la actividad de dextransucrase. El aislado se
mantiene como una cultura pualada en medio de agar MRS modificado (que contiene 2 %
de sacarosa en masa por volumen) a 4 C y se subcultivan cada 2 semanas. Para el
desarrollo de inculo, un asa de siembra de cultivo a partir modificado Stab agar MRS se
transfiri a 5 ml de la produccin de enzimas medio como se describe por Tsuchiya et al
M.R.S Agar: Fue desarrollado por Man, Rogosa y Sharpe, y por su formulacin permite el
adecuado desarrollo de lactobacilos y otras bacterias cidos lcticos.
La actividad enzimtica es analizada por la estimacin del azcar reductor a travs del
Mtodo Nelson-Somogyi.
La absorbancia se determina por El Cary 100: El cary 100 es un espectrofotmetro UVvisible y rentable con un conjunto verstil de accesorios para el trabajo rutinario de
laboratorio. Est controlado por el software Cary WinUV, un software basado en Windows
que ofrece un diseo modular y fcil de usar. El instrumento se suministra con soportes de
muestra de lquido y se puede equipar con una amplia gama de accesorios para
proporcionar capacidades adicionales. El instrumento es muy popular en laboratorios
docentes universitarios.
Poliacrilamida SDS electroforesis en gel se realiza con una unidad de mini placa de gel
vertical en el laboratorio (Bio-Rad Laboratories, Hrcules, CA, EE.UU.)
SDS-PAGE se lleva a cabo por el mtodo de Laemmli.

El dextransucrase obtenido despus de la purificacin PEG se ejecutar en dos geles de

SDS-PAGE idnticos no desnaturalizantes en deteccin de la actividad in situ.
Efecto disolvente en la actividad y la estabilidad de dextransucrase: El efecto de
dimethysulphoxide (DMSO), etanol, acetona y acetonitrilo en dextransucrase purificada a
partir de Su estudi Pediococcus pentosaceus.
Efecto de disolventes orgnicos de la actividad de dextransucrase: El Comportamiento
de dextransucrase de Leuconostoc mesenteroides NRRL B- 512F en diversos disolventes
orgnicos era estudiado por Girard y LeGoy. Este estudio se realiz para hacerse una idea
de la solubilidad, la actividad y estabilidad de los aceptantes en disolventes orgnicos, lo
que puede mejorar Las interacciones entre los aceptores y enzimas, facilitando las
reacciones aceptores. El contenido de protena del sobrenadante libre de clulas se estiman
por otras muestras de protenas purificadas por el mtodo de Lowry et al.

3.2 Segn su criterio las polticas o tecnologas descritas en los artculos. Cmo pueden ser
aplicadas o implementadas, en el contexto nacional colombiano?

Tecnologa descrita en el artculo:

Dextransucrase (CE 2.4.1.5), la enzima extra celular perteneciente a la familia glucsido
hidrolasa 70, es de inmensa importancia industrial debido a su dextrano y prebiticas
propiedades de oligosacridos de sntesis
Dextransucrase es una glucosiltransferasa (EC 2.4.1.5) que cataliza la transferencia de
residuos de glucosilo a partir de sacarosa (S) a polmero de dextrano y libera fructosa (F) de
acuerdo con la siguiente ecuacin (8): n S n F + dextrano (glucosa) n.
Aplicacin en el contexto nacional Colombiano
La Dextransacarasa Microbiano Se puede aplicar en las industrias lcteas, frutas y
vegetales Produccin de biopolmeros tipo dextrano que actan como estabilizantes,
viscosantes y produccin de pelculas comestibles. Se utiliza para la produccin de

dextranos a partir de sacarosa (por su fermentacin). Se utiliza como aditivo alimentario de

grado tcnico como espesante en la industria de alimentos y en el rea de tratamiento de
aguas residuales como floculante.

Su aplicacin abarca la obtencin de productos para todas las necesidades materiales

humanas (ejemplo, alimentos, alimentos para animales, productos farmacuticos, productos
qumicos, fibras, la higiene, y la tecnologa del medio ambiente), as como en una amplia
gama de productos analticos, aplicados al diagnstico.
A partir de los desechos industriales las frutas son fuente de materia prima para obtener la
enzima dextransacarasa, adems se producen dextranos y fructosa a partir de estos
desechos. De sta manera se ofrece una alternativa biotecnolgica para disminuir el
impacto ambiental causado por los desechos.
Es usado en diferentes mbitos, como el mdico (es usado como antiplaqueta o para reducir
la viscosidad de la sangre), el farmacutico o en la industria agricultora. Tambin se puede
encontrar en abundancia en la placa dental. Tiene un rea de aplicacin muy amplia que
abarca desde estabilizadores de componentes biolgicos hasta aplicaciones en el mbito de
la oftalmologa (ingrediente activo para elaborar lgrimas artificiales) por su propiedad
lubricante.
Acta estimulando la formacin de eritrocitos o incrementando el contenido de
hemoglobina en sangre especialmente en el hgado y el bazo, tambin es empleado en
veterinaria con el mismo fin teraputico.
Trasplante de rganos: Uno de los principales requisitos de las soluciones para perfusin y
preservacin de rganos durante operaciones quirrgicas es que deben ser iso-osmticas
con los fluidos intracelulares de los tejidos que contienen, garantizando la preservacin de
rganos como el hgado, rin y crnea, pero su uso es cada vez ms generalizado en otros
tejidos. Tiene actividad anticoagulante y antiinflamatoria
La Dextransacarasa puede producirse tambin industrialmente mediante dos tcnicas
biotecnolgicas: Fermentacin y Sntesis enzimtica. Tienen diversas aplicaciones en
diferentes mbitos industriales: Tienen una alta solubilidad en agua, aunque son insolubles

en alcoholes mono hdricos, como el metanol o el etanol. Son biocompatibles, es decir, son
tolerados por el organismo Son biodegradables, ya que se ha observado que hay enzimas
naturales, llamadas dextranasas, como las del hongo Penicillium o las de algunas bacterias
como la Cellvibrio, que pueden degradarlos. Pueden ser estables durante muchos aos.

3.3 Especifique la relacin directa existente entre los temas tratados y la biotecnologa
Alimentaria.
La biotecnologa ofrece un nmero importante de recursos a la industria alimentaria, que
comprenden desde la produccin de materias primas y su transformacin, hasta el control
de la seguridad alimentaria. La biotecnologa alimentaria se vale de los conocimientos
existentes sobre la ciencia vegetal y la gentica para mejorar los alimentos y su forma de
produccin. Los genes son los que determinan rasgos como el color de los ojos de una
persona o el sabor de una verdura. Gracias a la biotecnologa moderna, los cientficos
pueden mover genes de una planta o animal a otro. De esta forma, los agricultores pueden
cultivar plantas y criar animales que estn protegidos de ciertas enfermedades y producir
una mayor cantidad de alimentos. Asimismo, los alimentos pueden mejorar en sabor o ser
ms nutritivos.
En industrias directamente de produccin, la biotecnologa est totalmente implicada en la
produccin de biomasa microbiana para alimentacin animal (y en el futuro en alimentos
para humanos), de algunos productos qumicos como cido ctrico, cido glutmico y otros
aminocidos y de algunos productos qumicos especiales, fundamentalmente antibiticos y
ciertas vitaminas. En competicin con la tecnologa petroqumica puede producir productos
a gran escala, como etanol, acetona/butanol, cido actico, etc., y en competicin con la
explotacin de organismos enteros, puede ser usada para fabricar sustancias especiales de
plantas y productos de clulas microbianas transformadas para que produzcan antgenos,
anticuerpos o distintos agentes teraputicos o de diagnstico.
La biotecnologa puede proporcionar a la agricultura una variedad de agentes tiles, desde
inoculantes para suelos hasta productos veterinarios, con extensin en el futuro a cultivos
acuticos y marinos. Estn empezando a ampliarse los mtodos genticos tradicionales para

el desarrollo de cepas nuevas o mejoradas de plantas o animales para uso convencional en

agricultura. Proporciona a las industrias de alimentacin agentes clave como cultivos
iniciadores o enzimas, proporciona cada vez ms, conocimientos y tcnicas al
procesamiento de los alimentos. En las industrias de servicios la biotecnologa tiene un
papel fundamental en el tratamiento de los residuos tanto acuosos como slidos, en la
valoracin de las basuras y en la purificacin del agua.

Lnea de investigacin: Tecnologa de alimentos y Biocatlisis. En el campo de las

fermentaciones en procesamiento de alimentos, as como la Mejora gentica de
microorganismos de aplicacin en tecnologa de alimentos y la Produccin de

protenas y enzimas de uso alimentario.

Mejora gentica de microorganismos: Obtencin de cepas recombinantes de
microorganismos de utilidad en tecnologa de alimentos, mediante tcnicas de
ingeniera gentica. Se obtienen microorganismos como bacterias capaces de

producir determinadas enzimas de utilidad en procesamiento de alimentos.

Produccin de protenas y enzimas de uso alimentario: Produccin de enzimas con
una actividad enzimtica dada, a partir de clulas microbianas. Esta actividad se
vale de varias disciplinas, como la microbiologa, la ingeniera gentica, ingeniera
de protenas e ingeniera bioqumica.

Resumiendo, se puede decir que la Biotecnologa tiene un amplsimo rango de aplicacin

en la industria de alimentos, ofreciendo los medios para producir alimentos de mejor
calidad en forma ms eficiente y segura para la salud y el medio ambiente.
Una de las promesas de la Biotecnologa es generar innovaciones y mejoras en los
alimentos conduciendo a prcticas agrcolas ms ecolgicas, contribuyendo a una
agricultura sustentable que utiliza con respeto los recursos del medioambiente.

3.4 Como se realiza la determinacin de la actividad enzimtica de la enzima del artculo

elegido.
La actividad enzimtica es analizada por la estimacin del azcar reductor a travs del
Mtodo de Nelson-Somogyi.

El ensayo de Actividad Enzimtica se realiz de la siguiente forma:

1. Se separa 1 ml de la muestra
2. Contiene: 5% de Sacarosa, 20ml de solucin buffer, acetato de Sodio pH 5.4, 20
microlitros sobrenadante libre de clulas.
3. Se incuba a 30C por 15 horas.
4. Luego se analiza la actividad enzimtica a travs del mtodo de Nelson-Somogyi.
5. La absorbancia se registr a 500 nm en un espectrofotmetro UV-VIS (Varian UV-VIS,
ABSORBANCIA 50NM.
6. Se determina la actividad enzimtica y concentracin de protena.

3.5 Explique la metodologa para la determinacin de la actividad enzimtica de las

siguientes protenas:
a. Glucosa Isomerasa: Proveniente de Streptomyces lividens al que se le ha inserto el gen
de Actinoplanes. Permite obtener, a partir de glucosa, jarabes ricos en fructosa, con mayor
poder endulzante.
b. Peptinasa: Pectinasas producidas por Aspergillus oryzae transformada con el gen de A.
aculeatus. Permiten la clarificacin de jugos concentrados al degradar las pectinas
provenientes de restos de semillas.
c. Proteasa: Son enzimas proteolticas, es decir, actan rompiendo los enlaces que unen los
aminocidos de las protenas facilitando su digestin. Las proteasas son consideradas un
aditivo alimentario y se nombra como E-1101i. Se considera un potenciador del sabor,
estabilizador y se utiliza en el tratamiento de harinas. Estas enzimas hidrolizan la unin
entre el carboxilo de un aminocido y el grupo -amino del siguiente aminocido dentro de
la protena.
Aunque en ocasiones se emplean indiferentemente, el trmino peptidasas se suele emplear
para definir a las enzimas que cortan pptidos pequeos, mientras que proteasas o

proteinasas se aplica ms frecuentemente para las enzimas capaces de hidrolizar pptidos

mayores y protenas.
Las proteasas pueden encargarse de romper enlaces peptdicos especficos, denominndose
en ste caso protelisis limitada o pueden encargarse de romper un pptido completo de
aminocidos, denominndose en ste caso, protelisis ilimitada.
En el cuerpo humano las principales proteasas son las pancreticas (tripsina, quimiotripsina
y la carboxi-peptidasa) son secretadas en forma inactiva (tripsingeno, quimiotripsingeno
y procarboxipeptidasa) y son activadas al llegar al intestino gracias a la enteroquinasa,
proteasa secretada por la mucosa gstrica. Este es un mecanismo para proteger los tejidos
corporales de la accin de estas enzimas. Las proteasas se inactivan mediante la fijacin de
protenas inhibidoras fuertemente al sitio activo de la enzima.
Las proteasas pueden obtenerse de diferentes fuentes como animales (quimosina, tripsina y
peptina), vegetales (bromelana, papana) bacterias u hongos. En general son enzimas
estables incluso a temperaturas elevadas (85C).
Las proteasas tambin se clasifican segn el mecanismo proteoltico que realicen: serin
proteasas, treonin proteasas, cistein proteasas, aspartil proteasas, metaloproteasas, glutamil
proteasas y pptidas Mixtas (serina, cistena, treonina). Otras formas de clasificarlas son
segn la zona por la que rompen la cadena proteica y el pH ptimo en el que actan por
ejemplo:
-Proteasa 3.0: pH ptimo 3, rango de 2-7.
-Proteasa 4.5: pH ptimo 4.5, rango 2-6.
-Proteasa 6.0: pH ptimo 6, rango 4-11.
Las proteasas tienen muchas aplicaciones en la industria como por ejemplo en la
fabricacin de medicamentos, fermentaciones, produccin de condroitina, aditivos
alimentarios o suplementos digestivos. La adicin de proteasas a productos proteicos
mejora su digestibilidad, su solubilidad y su sabor.
Existen alimentos que de manera natural contienen proteasas como es el caso de la papaya,
la pia y el kiwi, entre otros.

Algunas enzimas proteolticas cuando son consumidas en forma de complemento

alimenticio, pueden ser degradadas en el estmago, por esta razn suelen estar incluidas en
cpsulas o tabletas resistentes que liberan su contenido en el intestino. Aunque hay algunos
tipos de enzimas fngicas o vegetales que son estables al pH gstrico.
Beneficios de su aporte
-Mejora de la digestibilidad de las protenas.
-El consumo de proteasas contribuye a la digestin de las protenas presentes en la dieta.
Son especialmente interesantes para personas con problemas para digerir las protenas.
-La adicin de proteasas en los complementos alimenticios proteicos mejora su solubilidad
y en consecuencia su digestibilidad. En protenas de buena calidad como la protena de
suero incrementa la tasa de absorcin y en protenas de baja digestibilidad la administracin
adicional de proteasas mejora su calidad.
Inflamacin y funcin muscular.
Existen estudios que han relacionado el consumo de enzimas proteolticas (proteasas
fngicas, bromelana y papana) con una mejor funcin muscular despus del
entrenamiento excntrico gracias a la regulacin de la inflamacin. La bromelana de forma
aislada tambin se ha mostrado efectiva para prevenir la ruptura de las clulas y favorecer
la recuperacin muscular del trabajo excntrico.
Otras combinaciones de enzimas proteolticas junto con amilasa y lipasa tambin han
demostrado mejorar la recuperacin muscular y reducir el dolor muscular tardo, tambin
conocido como agujetas, despus del entrenamiento intenso.
Estudios realizados muestran como el consumo de proteasas controla la inflamacin sin
disminuir sus efectos positivos sobre la recuperacin o acciones de proteccin.
Dosis
En el caso de las enzimas digestivas, ms que la cantidad en gramos es importante la
actividad de las enzimas, por esta razn lo mejor es seguir las indicaciones del fabricante.

Precauciones
No existe una dosis mxima para su utilizacin en alimentacin y la dosis queda sujeta a la
cantidad adecuada para conseguir sus efectos dentro de un marco de buenas prcticas de
fabricacin.
d. Amilasa: Es una enzima hidrolasa que tiene la funcin de catalizar la reaccin de
hidrlisis de los enlaces 1-4 del componente -amilasa al digerir el glucgeno y el almidn
para formar azcares simples. Se produce principalmente en las glndulas salivales (sobre
todo en las glndulas partidas) y en el pncreas. Tiene actividad enzimtica a un pH de 7.
Cuando una de estas glndulas se inflama, como en la pancreatitis, aumenta la produccin
de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre (amilasemia).
Clasificacin
Las amilasas son enzimas dependientes de calcio, completamente funcionales en ausencia
de iones de calcio. Actan a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos,
descomponindolos en dextrina desde la amilopectina. Dado que puede actuar en cualquier
punto de la cadena es ms rpida que la -amilasa. En los animales es una enzima digestiva
mayor y su pH ptimo est entre 6,7 y 7,2.
Usos
La amilasa sirve en el diagnstico de enfermedades al determinar sus niveles en plasma
para saber si se puede producir una pancreatitis. Sus niveles pueden estar elevados por un
dao a las clulas productoras de la enzima en el pncreas, o bien, por una deficiencia renal
(excrecin reducida) o tambin por paperas.
Las enzimas amilasas son empleadas en la fabricacin de pan para romper azcares
complejos como el almidn (presente en la harina) en azcares simples. La levadura puede
entonces alimentarse de esos azcares simples y convertirlos en productos de fermentacin
alcohlica. Este proceso da sabor al pan y hace elevar la masa. Las clulas de la levadura
contienen amilasas pero necesitan tiempo para fabricar la suficiente cantidad para romper el
almidn. Este es el motivo de la necesidad de largos tiempos de fermentacin

(especialmente para determinadas masas). Las tcnicas modernas de elaboracin de masas

incluyen la presencia de amilasas para facilitar y acelerar estos procesos.
Algunas amilasas bacterianas se emplean como detergentes para disolver almidones en
determinados procesos industriales. Aportan en la eliminacin del polvo y tierra de la ropa
que quedan atrapados en el tejido de las telas.
En la maduracin de frutas la amilasa es sintetizada, degradando el almidn de las frutas en
azcar, y volvindolas ms dulces.
La amilasa obtenida a partir de Bacillus subtilis recombinante. Esta enzima licua el almidn
y lo convierte en dextrina en la produccin de jarabes. En la industria cervecera, favorece la
retencin de la humedad del producto y baja el contenido calrico del producto.
1. Toma de muestras: 0. % kg de suelos de cultivos de caa de azcar
2. Aislamiento de bacterias productoras de amilasa:

3.6. Una de los mtodos ms utilizados para el rompimiento celular es la sonicacin,

describa y explique el fundamento fsico de esta tcnica.
La sonicacin es el proceso de convertir una seal elctrica en una vibracin fsica que
puede ser dirigida hacia una sustancia. Los sonicadores son equipos vitales de laboratorio y
se utilizan para muchos propsitos. La sonicacin se realiza generalmente para separar
compuestos o clulas para su examen ms detallado. La vibracin tiene un efecto muy
poderoso en las soluciones, haciendo que sus molculas se separen y las clulas se rompan.
Un primer ejemplo est en las pruebas de ADN, donde las clulas que pueden contener
informacin del ADN son sometidas a la sonicacin para poderlas romper para que as
liberen las protenas del ADN para poder ser probadas.
La parte principal de un dispositivo de sonicacin es el generador elctrico ultrasnico. Este
crea una seal (generalmente alrededor de 20 KHz) que alimenta un transductor. Este
transductor convierte la seal elctrica utilizando cristales piezoelctricos, o cristales que
responden directamente a la electricidad creando una vibracin mecnica. Esta vibracin,

molecular en origen, es conservada cuidadosamente y amplificada por el aparato de

ultrasonidos, hasta que pasa a travs de la sonda.

Como funciona:
La sonda de sonicacin transmite la vibracin a la solucin sometida a ultrasonidos. Esta
sonda es una punta cuidadosamente construida que se mueve a ritmo con la vibracin,
transfirindola a la solucin. La sonda se mueve hacia arriba y abajo a una velocidad muy
alta, aunque la amplitud puede ser controlada por el operador y es elegida segn las
cualidades de la solucin que ha sido sometida a ultrasonidos. El rpido movimiento de la
sonda crea un efecto llamado cavitacin. La cavitacin se produce cuando las vibraciones
crean una serie de burbujas microscpicas en la solucin, bolsillos de espacio situados entre
las molculas que se forman y que luego vuelven a colapsar bajo el peso de la solucin,
enviando minsculas ondas de choque a la sustancia circundante. Miles de estas burbujas
que se forman y colapsan constantemente crean poderosas ondas de vibracin que ocurren
en ciclos en la solucin y separan las clulas.
La Ultrasonificacin genera intensas ondas snicas en medio lquido. Se transmite una
corriente elctrica a un sistema mecnico, que la convierte en vibraciones de alta densidad
generando ondas ultrasnicas que forman millones de micro burbujas que se expanden y
colapsan contra las clulas: Cavitacin: El choque de ondas rompe membranas y aun
enlaces covalentes. Mayor accin por adicin de esferas de vidrio. El sonicador tiene dos
formas de operar, por Pulsos: Las vibraciones de ultrasonido pueden transmitirse en un
rango de 0.1 a 0.9 pulsos por segundo, permitiendo una adecuada sonicacin sin generacin
importante de calor continuo: Puede ser usado de orma continua hasta por 15 minutos.
Con este sistema se puede lograr la ruptura de levaduras entre 3 y 10 minutos o de E.Coli
con 40 segundos. Presenta los siguientes inconvenientes: Alta generacin de calor de las
muestras que se mantienen en congelamiento, los tejidos duros (piel o tendn) se deben
macerar previamente; se pueden generar radicales libres, el dao por oxidacin de radicales
libres puede minimizarse adicionando cistena, ditiotreitol o algn otro componente-SH en
el medio. Por Radicales Libres: Lesin en membrana celular, aberraciones, cromosmicas
menores y cambio de tipo fisiolgicas. Uso en transferencia de DNA plasmdico en

protoplasmos y clulas intactas; con expresin temporal de un gen testigo. Flexible:

Protoplasmos, Clulas en suspensin y en fragmentos de tejido con la misma sencillez.

3.7. Determine la sensibilidad de dos mtodos de determinacin de protenas, junto con las
tinciones de comassie y nitrato de plata.

TINCIN DE GELES CON AZUL DE COOMASSIE.

El colorante Azul de Coomassie R-250 es generalmente el ms aceptado para la tincin de
los geles. El Coomassie R-250 se une a las protenas, y la intensidad de la coloracin

es

relativamente y hasta cierto punto independiente de la concentracin y de la naturaleza

qumica de las protenas; de esta forma, cuando se tiene que cuantificar una protena es el
colorante ms recomendado. La solucin de tincin del gel tiene entre sus constituyentes
metanol y cido actico, lo cual permite que las protenas se fijen en el gel y no eluyan
durante el proceso de tincin y desteido del gel; adems, el metanol es el solvente
adecuado para disolver el Coomassie Blue.
El tiempo de tincin del gel depende de varios factores; entre ellos, el espesor y tamao del
gel, vejez del colorante, coloracin en agitacin, etc. La tincin se efecta entre 30 minutos
a toda la noche (overnight). Seguidamente a la tincin, el gel debe ser desteido por
difusin del Coomassie que no se ha unido a protena, a fin de contrastar las bandas de
protenas del fondo del gel.
Materiales:
Solucin de tincin. Azul brillante de Coomassie R-250 (0.25%) contenidos para 1L de
solucin: 2.50 g azul brillante de Coomassie R-250, 100 ml de cido actico concentrado,
400 ml de metanol, enrasar a 1L con agua destilada o desionizada. Se recomienda disolver
el colorante en un poco de metanol. Filtrar la solucin antes de utilizar por primera vez.
Solucin desteidora. 400 ml de metanol, 100 ml de cido actico concentrado, enrasar
hasta 1L con agua destilada o desionizada.
Protocolo:

1)

Terminada la electroforesis. Remover el gel y marcar un punto de referencia para

identificar los carriles.

2)

Sumergir el gel en un recipiente que contenga la solucin de tincin. El colorante

debe ser suficiente para cubrir el gel.

3)

Dejar el recipiente en agitacin suave durante 20-30 minutos. Los geles con espesor

< 1mm son muy delicados, la agitacin debe ser muy suave o dejarlos sin agitar.
4)

Retirar la solucin de tincin (vertir o aspirar).

5)

Aadir la solucin desteidora. Dejar el recipiente a temperatura ambiente y en

agitacin suave. Cambiar la solucin desteidora. Este proceso puede durar desde varias
horas hasta toda la noche. El desteido es satisfactorio cuando el color de fondo es claro y
las bandas de las protenas contrastan adecuadamente del fondo del gel.
Comentarios:
La solucin de tincin puede ser filtrada en papel Whatman #1. Frecuentemente, el
colorante es reusado y si la tincin no es satisfactoria, el gel puede ser teido nuevamente
con solucin fresca. Rutinariamente, 30 minutos son suficientes para teir el gel, pero
tiempos mayores pueden ser necesarios dependiendo del tamao y espesor del gel, etc.
La solucin desteidora puede ser reusada varias veces, luego de ser reciclada por filtracin
a travs de carbn activo en un filtro Whatman #1. Un criterio para considerar envejecidas
la solucin de tincin y/o desteido es el hinchamiento del gel a consecuencia de la
hidratacin de las soluciones (en realidad, se debe a la evaporacin del metanol). La
sensibilidad de la tincin con Coomassie R-250 puede variar desde 0.5-5.0 g/banda en un
mini gel de 10 pozos. Desteido el gel puede ser fotografiado en blanco y negro, se puede
mejorar el contraste del gel usando un filtro amarillo.
TINCIN CON NITRATO DE PLATA
Cantidades de protena menores a 0.3 y 1g (dependiendo de la naturaleza de la protena)
no pueden ser detectadas por tincin con azul de Coomassie. Sin embargo, la tincin de los
geles con plata permite detectar concentraciones muy pequeas de protenas, del orden de

los nanogramos (g). Existen diversos protocolos para teir geles con plata, y la deteccin
del mtodo

puede variar entre 2 a 5 g. La tincin con plata se basa en su unin a distintos grupos
qumicos de las protenas, como los grupos sulfidrilo o carboxilo. La deteccin con plata es
exclusivamente cualitativa. No puede ser utilizada para cuantificar protenas por diversas
razones, entre ellas: dependiendo de la naturaleza de la protena, sta puede adquirir un
color particular (entre marrones y amarillos), o incluso puede teirse negativamente
contrastando del fondo del gel.
La tincin con plata se realiz de acuerdo al mtodo de Blum et al. (1987). ste mtodo
utiliza dos propiedades del tiosulfato: mejora la imagen por el pretratamiento del gel fijado,
y evita el color de fondo (background) no especfico durante el desarrollo de la tcnica.
Cuando se quiere producir imgenes reproducibles se debe trabajar con mucho cuidado y
exactitud en los tiempos. La tcnica puede ser desarrollada en agitacin a temperatura
ambiente (20-250C). Se puede usar algn sistema de succin para retirar las soluciones
rpidamente del gel.
Protocolo:
1)

Mantener el gel al menos 1 hora en solucin de fijacin (50% metanol, 12% cido

actico). Los geles pueden ser mantenidos en esta solucin varios das, sin perder la calidad
de la tincin. Geles teidos con azul de Coomassie pueden ser teidos con plata, el
prerrequisito de esto es desteir completamente el gel, luego se inicia todo el procedimiento
desde la fijacin.
2)

Lavar el gel en 50% etanol, 3 veces durante 20 minutos cada vez. Los geles de

espesor < 1mm, pueden ser lavados los ltimos 20 minutos con etanol 30%, para evitar la
deformacin.

3)

Sumergir el gel en la solucin de tiosulfato de sodio (0.2 g/L Na2S2O3.5H2O),

exactamente, durante 1 minuto. Si se sobrepasa ste perodo de tiempo se puede tener una
tincin con gran color de fondo.
4)

Lavar el gel con agua, tres veces durante 20 segundos cada lavado.

5)

Sumergir el gel durante 20 minutos en solucin de nitrato de plata (2 g/L AgNO3 ,

0.75 ml/L de solucin stock de formaldehdo al 37%). Despus de este paso, el gel puede
tomar un color amarillento, esto no tiene ningn efecto sobre la sensibilidad o color de
fondo de la tincin.
6)

Lavar el gel dos veces con agua durante 20 segundos cada vez. Este paso remueve el

exceso de plata.
7)

Sumergir el gel en la solucin de revelado (60 g/L Na2CO3, 0.5 ml/L de

formaldehdo al 37%, 4 mg/L Na2S2O3.5H2O),en agitacin suave durante 10 minutos. Si

la solucin de revelado en contacto con el gel se toma el marrn, cambiarla inmediatamente
por otra fresca (esto ocurre a consecuencia que el tiosulfato libre se ha consumido). Como
referencia, una banda que contiene 500 g de protena puede ser detectada en aprox. 30
segundos de revelado, y una banda con 50 g puede tardar cerca de 2 minutos. Si se
consigue la deteccin y contraste adecuado antes de los 10 minutos de revelado, este paso
puede pararse. Si el revelado se prolonga sobre los 10 minutos puede aparecer un color de
fondo amarillento. La temperatura de revelado puede ser de 180 - 250C.
8)

Lavar el gel dos veces con agua durante 2 minutos cada vez. Esto remueve el exceso

de tiosulfato que puede descomponerse en la solucin de fijacin y producir color de fondo.

9)

Mantener el gel durante 10 minutos en solucin de fijacin del gel (paso 1).

10)

Lavar el gel en metanol al 50% al menos durante 20 minutos. Despus puede ser

conservado a 40C en metanol al 50%. Si se quiere secar el gel, mantener en agitacin a 40C
durante 30 minutos en metanol al 30%, y luego otros 30 minutos en glicerol al 3%.

3.8 Si se tiene 65 ml de extracto enzimtico para realizar una purificacin de protenas,

cunto sulfato de amonio hay que adicionarle a dicha solucin para llevarla a una
saturacin del 30%, y cuanto hay que adicionarle de ms para llevarla al 50%?

Vsal=

V(S 2S 1)
1S 2

Vsal=Volumen que hay que aadir a ladisolucion saturada de sal a la muestra

V =Volumen de la muestra que se tiene

S 2=Concentracion de salque se quiere llevar a lamuestra

S 1=Concentracioninicial de lamuestra
Cantidad de sulfato de amonio que hay que adicionar a la solucin para una saturacin del
30 %.
Vsal=

60(0,30)
=25,714 ml
10,3

G = valor estimado de la tabla 1.17 (Sulfato de amonio en gramos (g) requerido para
adicional a 1 litro de solucin)
X=

G(S 2S 1)
GV
1
S 2
1000

X Es lacantidad de sal solida que se aade por litro de solucion ( g)

V =Volumen especifico aparente de sal en una solucion saturada .
S 2=Concentracion de salque se quiere llevar a lamuestra

S 1=Concentracioninicial de sal(Fraccion de saturacin)

Valor estimado G = 18,55 g
X=

18,55(0,30)
=6,494 gramos
18,5525,714
1
0,3
1000

La cantidad en gramos de esta sal a agregar es 6,494 gramos

Cantidad que hay que adicionarle de ms para llevarla al 50%

Vsal=

V(S 2S 1)
1S 2

Vsal=

60(0,50,3)
=24 ml
10,5

X=

21,32(0,50,3)
=5,73 gramos
21,3224
1
0,5
1000

La cantidad de sulfato de amonio a agregar es de 5,73 gramos.

3.9 Defina y explique y el fundamento de las siguientes cromatografas:

a. Cromatografa preparativa: Se usa para purificar suficiente cantidad de sustancia para

un uso posterior, ms que para anlisis. La cromatografa preparativa forma parte de los
mtodos estndar habituales de un laboratorio. La cromatografa es un componente de gran

calidad y una manipulacin sencilla son una de las condiciones principales para la
obtencin de resultados rpidos y seguros. La cromatografa preparativa comprende un
amplio campo de aplicaciones, desde el aislamiento de 1 g. de muestra para identificacin
espectroscpica hasta el aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de 100 g. La
cromatografa preparativa se diferencia de la tcnica bsica en muchos aspectos, desde la
preparacin de la papilla. sta debe hacerse con menos agua que de ordinario. Una papilla
ms espesa ayuda a estabilizar el grosor de las placas que se precisa para una carga de
mayor magnitud. El espesor ptimo oscila desde un mnimo de 1 mm. Hasta un mximo de
2 mm.
La siembra de la muestra se realiza mediante la ayuda de una jeringuilla o tubo capilar. La
siembra se realiza a lo largo de una lnea recta (existen en el mercado diverso utensilios
para evitar torcerse). Si al terminar la primera siembra todava queda muestra, se seca la
primera siembra y se aplica la segunda, intentando que sta quede sobre la anterior, para as
conseguir que el frente sea lo ms estrecho posible. La siembra debe realizarse a lo ancho
de la placa.
Una vez sembrada la muestra se desarrolla la cromatografa. Se utiliza un adsorbente con
indicador fluorescente para ver en la lmpara ultravioleta donde han quedado las manchas
de los diferentes compuestos, dichas manchas se marcan.
Una vez localizados los compuestos, stos se extraen de la fase estacionaria, uno a uno, con
la ayuda de una esptula, sobre un papel de filtro u otro soporte. Posteriormente se coloca
cada componente en un erlenmeyer, y se mezcla con un disolvente (metanol). Una vez
disuelto el compuesto se filtra varias veces para separar el compuesto y la fase estacionaria.

b. La cromatografa de exclusin por tamaos La cromatografa de exclusin molecular

(a menudo tambin llamada filtracin en gel o de tamiz molecular) es una de las tcnicas
ms sencillas de las empleadas en la separacin de protenas y cidos nucleicos. Este tipo
de cromatografa se realiza en columnas cilndricas rellenas con algunos de los geles que se
fabrican con este fin y que pueden ser de varios tipos: dextranos con enlaces cruzados
(sephadex), agarosa (sepharose, Bio-gel A), poliacrilamida (Bio-gel B), etc. Todos estos

geles (fase estacionaria) se hallan constituidos por grnulos (partculas) de un material

esponjoso hidratado, que contiene poros con un tamao de dimetro determinado.
La cromatografa de exclusin por tamao es una tcnica eficiente para preparar grupos de
solutos la cual se basa en su tamao efectivo en solucin. Las fases estacionarias utilizadas
para lograr estas separaciones son polmeros que han sido entrecruzados de modo que
formen una red abierta con numerosos poros de tamao uniforme. El grado de
entrecruzamiento se controla de manera cuidadosa para obtener una serie de geles con
diferentes tamaos de poro y rangos de fraccionamiento.
c. Cromatografa de intercambio inico: Es un proceso que permite la separacin de
iones y molculas polares basadas en las propiedades de carga de las molculas. Puede ser
usada en casi cualquier tipo de molcula cargada, incluyendo grandes protenas, pequeos
nucletidos y aminocidos. La solucin que debe inyectarse es usualmente llamada
"muestra" y los componentes separados individualmente son llamados analitos. Es usada a
menudo en purificacin de protenas, anlisis de agua o control de calidad.
La cartografa de intercambio inico Se compone de dos fases: la fase estacionaria o
intercambiador inico, y la fase mvil. La fase estacionaria insoluble lleva en la superficie
cargas electrostticas fijas, que retienen contra iones mviles que pueden intercambiarse
por iones de la fase mvil, la cual suele ser una disolucin acuosa con cantidades
moderadas de metanol u otro disolvente orgnico miscible con agua que contiene especies
inicas generalmente en forma de buffer. Los iones de sta compiten con los analitos por
los sitios activos de la fase estacionaria.
FUNDAMENTO: El principio bsico de la cromatografa de intercambio inico es que las
molculas cargadas se adhieren a los intercambiadores de forma reversible de modo que
dichas molculas pueden ser asociadas o disociadas cambiando el ambiente inico. La
separacin mediante intercambiadores inicos se realiza por lo general, en dos fases: en la
primera las sustancias a separar se unen al intercambiador utilizando condiciones que
originan una unin fuerte y estable; a continuacin, se elude de la columna con buffers de
diferentes pH o diferente fuerza inica, compitiendo los componentes del buffer con el
material por los sitios de unin.

d. Cromatografa de intercambio catinico: Resinas de intercambio catinico:

Estas resinas estn disponibles en 3 tamaos diferentes de cuentas. El medio (<150m) y
grandes (<300m) los granos son ms tiles para el flujo por gravedad y por esferas (sin
flujo) las solicitudes. El mayor tamao de los granos hace fcil la separacin de un lquido
a granel. En el medio (<150m) y pequeas (<75m) los granos son ms tiles para
aplicaciones de bombeo. El menor tamao de los granos reduce la altura de plato de
cromatografa (proporciona ms rpido equilibrio con velocidades de flujo ms alto).
Estas resinas estn disponibles con tres diferentes cantidades de entrecruzamiento en la
columna vertebral de poliestireno. Cuanto mayor sea el enlace y cruce mayor ser la
capacidad de la resina. Para el intercambio de iones inorgnicos el tamao del poro suele
ser de poco inters. Para las protenas globulares la exclusin de los lmites aproximados
son 3000 daltons en el 2%, 1500 daltons el 4% y 1000 daltons en un 8% entrecruzamiento.
Resinas catinicas de cido fuerte: Intercambian iones positivos (cationes). Funcionan a
cualquier pH. Es la destinada a aplicaciones de suavizado de agua, como primera columna
de desionizacin en los desmineralizadores o para lechos mixtos. Elimina los cationes del
agua y necesitan una gran cantidad de regenerante, normalmente cido clorhdrico (HCl).
En la industria alimentaria se utiliza en la purificacin del agua (por ejemplo: industria de
la cerveza), desmineralizar lquidos azucarados y jarabes, controlar la acidez, el olor, el
sabor y contenido en sal del alimento. Tambin se emplean para aislar o purificar aditivos o
componentes de alimentos.
e. Cromatografa de fase reversa: La cromatografa en fase reversa (RPC) permite separar
molculas en base a su polaridad. El principio de la cromatografa en fase reversa es
semejante al de la cromatografa en capa fina. Sin embargo, aqu la fase estacionaria es de
partculas de slica qumicamente modificadas con hidrocarburos saturados, insaturados o
aromticos de diferentes tipos. Esto convierte a la fase estacionaria en una matriz apolar.
Por lo tanto, para este tipo de cromatografas se emplean mezclas de solventes polares, tales
como agua, acetonitrilo, acetato de etilo, acetona y alcoholes alifticos.
En virtud de lo anterior, este tipo de cromatografa ha sido tambin llamada como
cromatografa de interaccin hidrofbica (HIC). En general, este ltimo trmino se ha

empleado para referirse a las aplicaciones en las que se emplean sustituyentes y matrices
compatibles con fluidos biolgicos. Por tanto, el termino HIC es comn cuando se habla de
purificacin de protenas y carbohidratos, en tanto que RPC es ms empleado para referirse
a la separacin de molculas en sistemas que son inadecuados para la separacin de
macromolculas biolgicas.
Las molculas se retienen en la columna en virtud de las interacciones hidrofbicas que
establecen con la slica modificada. Aunque, las interacciones hidrofbicas son en general
bastante dbiles, son tambin a menudo muy numerosas y para eludir las molculas es casi
siempre necesario disminuir la polaridad del disolvente; para ello se puede substituir el
agua de la fase mvil con un solvente orgnico cuya concentracin se va aumentando
gradualmente.
Debido a diversas limitaciones prcticas de la cromatografa de capa fina en fase reversa,
entre las que destaca el costo de usar placas no reutilizables de una matriz difcil de
sintetizar, la cromatografa en fase reversa ha sido adaptada para el uso de columnas. La
versatilidad y eficiencia de este tipo de cromatografa se ha visto incrementada con el uso
de sistemas de alto desempeo (HPLC, del ingls "High Performance Liquid
Chromatography") que utilizan alta presin para mejorar la resolucin y reducir los tiempos
de separacin.
Los sistemas de alto desempeo pueden tambin emplearse en otros tipos de
cromatografas, de manera que para referirse a la cromatografa en fase reversa en sistemas
de alto desempeo se emplea la abreviatura HPLC-RPC. Tambin

3.10. Como se calcula el factor de purificacin de una enzima y el rendimiento de esta, cul
es su significado prctico.
El factor de purificacin: es la relacin entre la actividad especfica del paso n de
purificacin y la actividad especfica del extracto inicial.
El factor de purificacin se calcula de la siguiente forma:
Factor de purificacin= (U/mg)n

(U/mg)extracto inicial
El porcentaje de rendimiento: es la relacin entre la actividad enzimtica total del paso
n de purificacin y el extracto inicial.
% Rendimiento= (U)n X 100%
(U)extracto
3.11. Cules son los mtodos de concentracin de protenas escala laboratorio ms
utilizados y cul es su fundamento fsico.
Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de protenas. Muchos de estos mtodos se
basan en: a) la propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz en el UV, b) para la
formacin de derivados qumicos, o c) la capacidad que tienen las protenas de formar
complejos.
Entre los mtodos que se basan en la formacin de complejos colorimtricos entre las
protenas y reactivos especficos se encuentran:
Tabla de los Principales mtodos para la cuantificacin de protenas y sus rangos de
sensibilidad.

Mtodo de Bradford
Est basado en el cambio de color del colorante azul brillante de Coomassie en respuesta a
diferentes concentraciones de protenas. Este compuesto interacciona con aminocidos
bsicos (especialmente arginina) y aromticos. Esta unin del colorante con las protenas
provoca un cambio en el mximo de absorcin del colorante desde 465 a 595 nm. Por lo
tanto, este mtodo se basa en la propiedad del Azul Brillante de Coomasie G-250 de
presentarse en dos formas con colores diferentes, rojo y azul. La forma roja se convierte en

azul cuando el colorante se une a la protena. Experimentalmente se mide la diferencia de

Absorbancias entre 595 y 465 nm (595-465nm).

Mtodo de Lowry
Es un mtodo colorimtrico de valoracin cuantitativa de las protenas. A la muestra se
aade un reactivo que forma un complejo coloreado con las protenas, siendo la intensidad
de color proporcional a la concentracin de protenas, segn la ley de Lambert-Beer Este
mtodo consta de dos etapas:
1) Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las protenas formando complejos con
los tomos de nitrgeno de los enlaces peptdicos. Estos complejos Cu2+- protena
tienen un color azul claro. Adems, provocan el desdoblamiento de la estructura
tridimensional de la protena, exponindose los residuos fenlicos de tirosina que
van a participar en la segunda etapa de la reaccin. El Cu2+ se mantiene en solucin
alcalina en forma de su complejo con tartrato.
2) La reduccin, tambin en medio bsico, del reactivo de Folin-Ciocalteau, por los
grupos fenlicos de los residuos de tirosina, presentes en la mayora de las
protenas, actuando el cobre como catalizador. El principal constituyente del
reactivo de FolinCiocalteau es el cido fosfomolibdotngstico, de color amarillo,
que al ser reducido por los grupos fenlicos da lugar a un complejo de color azul
intenso.
Mtodo de Biuret
La reaccin de Biuret es una reaccin coloreada (violeta) debida a la formacin de un
complejo de Cu en un medio alcalino en compuestos que poseen ms de un enlace
peptdico, como las protenas:

La curva de patrn es un mtodo de qumica analtica empleado para medir la

concentracin de una sustancia en una muestra por comparacin con una serie de elementos
de concentracin conocida. Se basa en la existencia de una relacin en principio lineal entre
un carcter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometra) y la
variable a determinar (la concentracin). Para ello, se efectan diluciones de unas muestras
de contenido conocido y se produce su lectura y el consiguiente establecimiento de una
funcin matemtica que relacione ambas; despus, se lee el mismo carcter en la muestra
problema y, mediante la sustitucin de la variable independiente de esa funcin, se obtiene
la concentracin de esta. Se dice pues que la respuesta de la muestra puede cuantificarse y,
empleando la curva patrn, se puede interpolar el dato de la muestra problema hasta
encontrar la concentracin.

3.12. Describa una metodologa para determinar el nmero de subunidades de un enzima

alostrica purificada.
Mecanismos de actividad reguladora de las enzimas alostricas
Estudia los mecanismos moleculares mediante los cuales la unin del modulador al centro
regulador puede, alterar la actividad del centro cataltico. Esta explicacin se ha obtenido
de los estudios con la hemoglobina, a travs de dos modelos: Secuencial y el de Simetra.
Modelo de simetra.
Modelo propuesto por J. Monod et al. Establece que la unin de la primera molcula de
sustrato incrementa la tendencia de las restantes subunidades a experimentar transicin a la
forma de elevada afinidad, a travs de un efecto de todo o nada. Hallndose todas las
subunidades en estado de baja o elevada afinidad.
Modelo secuencial.
Modelo propuesto por D.E. Koshland. Aplicable a las enzimas alostricas que poseen
mltiples subunidades y que se suponen que existen en dos conformaciones diferentes,
donde cada una puede experimentar cambios secuenciales individuales en su conformacin
entre los extremos de todo o nada. Pueden existir diversos estados de conformacin

intermedios, cada uno con su propia actividad cataltica intrnseca. Este modelo propone
una sintonizacin ms fina de la actividad de la enzima alostrica.
3.13 Explique el dogma central de la biologa molecular y como este se relaciona con la
enzima del artculo.
El dogma central de la biologa molecular es un concepto que ilustra los mecanismos de
transmisin y expresin de la herencia gentica tras el descubrimiento de la codificacin de
sta en la doble hlice del ADN. Esto nos propone que existe una unidireccionalidad en la
expresin de la informacin contenida en los genes de una clula, es decir, que el ADN
es transcrito a ARN mensajero y que ste es traducido a protena, elemento que finalmente
realiza la accin celular. El dogma tambin postula que slo el ADN puede duplicarse y,
por tanto, reproducirse y transmitir la informacin gentica a la descendencia. Fue
articulado por Francis Crick en 1958 por primera vez, y se restableci en un artculo
de Nature publicado en 1970.
Crick sintetiz esta idea a lo que llam el Dogma Central de la Biologa, que especifica que
el ADN se traduce en ARN y este, a su vez, dirige la produccin de protenas.

La informacin fluye de manera unidireccional: no puede moverse de las protenas al ADN.

Es decir, una vez que la informacin llega a las protenas, estas no pueden ser cambiadas o,
lo que es lo mismo, las protenas no pueden influir en los genes. Si bien Crick us el
trmino dogma en un sentido figurado y quiz con humor, ya que las ideas cientficas slo
son aceptadas hasta que aparezca evidencia experimental que las desmienta, durante algn
tiempo esta idea adquiri cierta dimensin de verdad absoluta en la mayora de los libros de
texto.

3.14 Explique porque al realizar una mutacin en el gen del enzima, esto puede conllevar a
un aumento en la actividad.

Una mutacin es una alteracin en la secuencia de ADN. Puede implicar desde un pequeo
evento como la alteracin de un solo par de bases nucleotdicas hasta la ganancia o prdida
de cromosomas enteros. Puede ser causada por daos producidos por qumicos, por
radiacin o por errores durante la replicacin y la reparacin del ADN. Una consecuencia
de las mutaciones puede ser una enfermedad gentica, sin embargo, aunque en el corto
plazo puede aparecer como una algo perjudicial, a largo plazo las mutaciones son
esenciales para nuestra existencia. Sin mutacin no habra cambio y sin cambio la vida no
podra evolucionar.
La mayor parte de los genes codifica para enzimas. Si un gen es inactivado la reduccin en
el nivel de actividad de la enzima puede no ser superior al 50% ya que el nivel de
transcripcin del gen remanente puede aumentarse por regulacin en respuesta a cualquier
aumento en concentracin del sustrato. Asimismo, la protena en si misma puede estar
sujeta a regulacin (por fosforilacin, por ejemplo) de tal forma que su actividad pueda ser
aumentada para compensar cualquier falta en el nmero de molculas. En cualquier caso, a
menos que la enzima controle la velocidad del paso limitante en la ruta bioqumica, una
reduccin en la cantidad de producto puede no importar.

REFERENCIAS
http://html.rincondelvago.com/purificacion-de-inmunoglobulinas.html. (s.f.).
http://ufq.unq.edu.ar/Docencia-. (s.f.).
http://ufq.unq.edu.ar/DocenciaVirtual/BQblog/Cromatografia%20de%20intercambio
%20ionico.pdf. (s.f.).
http://www.ehowenespanol.com/funciona-sonicacion-como_124830/. (s.f.).
http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/6441/06Ljvm06de12.pdf?sequence=6. (s.f.).
https://bioquibi.webs.ull.es/practicas/6.pdf. (s.f.).
https://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa. (s.f.).
R., B. A. (s.f.). Remington Farmacia, Volume 1.