FACULDADE ESTCIO DE S

MICROBIOLOGIA BSICA
Meios de Cultivo e Tcnicas de Semeadura
Guilhermina Brites1, Inz de Lima Gonalves2, Paulo Ricardo de Souza
Moraes3
1,2,
Acadmicas do Curso de Farmcia da Faculdade de Estcio de S.
3.
Professor da Disciplina de Microbiologia da Faculdade Estcio de S.
Palavras-Chave: Microorganimos, Cultivo, Crescimento, Semeadura.
1.
Introduo
Microbiologia o ramo da biologia que estuda os microrganismos, incluindo
eucariontes unicelulares e procariontes, como as bactrias, fungos e vrus.
2.
Meios de cultivo:
O crescimento dos microrganismos nos diferentes meios de cultura utilizados
fornece as primeiras informaes para a sua identificao. importante
conhecer o potencial de crescimento de cada meio de cultura e adequar ao
perfil bacteriano esperado para cada material.
2.1
- Agar sangue (AS) meio rico e no seletivo, diferencial para a
hemlise, nele crescem a maioria dos Gram negativo e Gram positivo, alm
de fungos filamentosos (bolores) e leveduras, exceto algumas espcies de
hemfilos e outros fastidiosos.

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

2.2

- gar Thayer Martin Modificado (TMM) meio seletivo

pela adio de colistina, vancomicina e nistatina. Inibe
crescimento de enterobactrias, Gram positivos, fungos e
algumas espcies de Neisserias saprfitas. Enriquecido com a
adio de complementos para a recuperao de N. meningitidis
e N. gonorrhoeae.

2.3
- Agar chocolate (AC) meio rico e no seletivo, permite o
crescimento da grande maioria das bactrias aerbias e facultativas. Quando
incubado em CO2 d suporte tambm ao crescimento dos microaerfilos.
Pode-se observar halos esverdeados com colnias alfa- hemolticas. base
do meio, adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura
alta, o que faz com que as hemcias lisem, liberando hemina e hematina,
compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos.

2.4 - gar CLED CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE DEFICIENT: usado

para isolamento e quantificao de microrganismos presentes em amostras
urina. A deficincia de eletrlitos inibe o vu de cepas de Proteus.

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

Empregado para isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram

negativos e leveduras.
INTERPRETAO
Cor original do meio: azul claro.
Colnias lactose positiva: cor amarela.
Colnias lactose negativa: cor azul.

2.5 - Agar MacConkey (MC) meio seletivo para Gram negativo e

diferencial para a utilizao de lactose. O cristal violeta inibe o crescimento
de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e
estafilococos.
Lactose positiva colorao avermelhada
Lactose negativa colorao inalterada
Como exceo, eventualmente, podem crescer Enterococcus, Candida e
Bacillus.

2.6 - gar Salmonela-Shigella (SS) meio seletivo para Salmonela e

Shigella e diferencial para a utilizao de lactose (colorao rsea) e
produo de H2S (colorao negra); possue componentes (sais de bile,
verde brilhante e citrato de sdio) que inibem microrganismos Gram
positivos.

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

2.7 - Meio de Rugai - Este meio utilizado para identificao presuntiva

das principais espcies de Enterobactrias. Sua finalidade principal a
triagem bioqumica de colnias isoladas nos meios seletivos para bacilos
gram-negativos oxidasenegativa. Em um nico tubo a leitura possvel
verificar 9 reaes: motilidade da bactria indicado pela turvao da lisina
na base, lisina descarboxilase, fermentao da glicose em profundidade e da
sacarose na superfcie do meio, produo de gs sulfdrico (H2S), gs em
glicose, utilizao do aminocido L-triptofano (desaminao), hidrlise da
uria e no tampo do tubo, um desenvolvimento de colorao avermelhada
que indica a formao de indol.

2.8 - LWENSTEIN JENSEN

A base do meio constituda por ovos integrais, o que permite amplo
crescimento das micobactrias e o crescimento satisfatrio para o teste de
niacina (que positivo para Mycobacterium tuberculosis)
INTERPRETAO :

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

Cor original do meio: verde claro

Positivo: Crescimento de colnias amarelas
Negativo: ausncia de crescimento.

Tcnicas de Semeadura e isolamento de Microorganismos

Isolamento de um microrganismo: O isolamento consiste na obteno de
uma cultura pura (colnias isoladas de um nico microrganismo, separandoo de outros que se encontram no mesmo material).
Finalidades do isolamento: Identificao de um microrganismo. A simples
observao de caracteres morfolgicos no suficiente para a identificao e
classificao dos microrganismos. Para isto, lanamos mo da anlise de
uma srie de caractersticas destes, como: caractersticas bioqumicas,
sorolgicas, de patogenicidade, etc. O estudo destas caractersticas est na
dependncia do microrganismo que se pretende identificar.
Semeadura: Consiste no plantio de um microrganismo em um meio de
cultura, a partir de um material contaminado qualquer.
Repique: Consiste na transferncia de um microrganismo de um meio de
cultura para outro.
3.

4.Mtodos de Isolamento e Identificao

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

A identificao da maioria dos microrganismos depende de uma completa

descrio de suas caractersticas morfolgicas, fisiolgicas, bioqumicas e
antignicas. Desde que, na maioria dos casos, o organismo a ser isolado faz
parte de uma populao mista, indispensvel o seu isolamento, no sentido
de obteno de cultura pura.

5.Mtodos de Inoculao
5.1 - Semeadura em Meio Slidos:

5.2 - Semeadura em Tubos de Ensaio (em meios inclinados)

Esgotamento de ala

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

5.3 - Tcnica utilizada para obteno de crescimento bacteriano e/ou para a

observao de propriedades bioqumicas da bactria. A semeadura ,
geralmente, feita da base do meio para a extremidade do mesmo (pode
tambm ser chamada de estriamento.
5.4 - A semeadura tambm pode ser realizada da base para a extremidade
do meio, de forma uniforme. Esta tcnica realizada para que haja
crescimento bacteriano, bem como poderemos utiliz-la para observar
funes metablicas de algumas bactrias.
5.5 - Em Picada: Esta tcnica de semeadura utilizada para que se possa
observar funes metablicas de alguns microrganismos (bactrias) que so
submetidas a anlise microbiolgica.

5.6 - Semeadura em Placas de Petri (em superfcie): O material a ser

semeado dever conter poucos microrganismos porque o inculo para o
isolamento deve ser leve. Lembrar que cada colnia formada na superfcie
de um meio slido originada de um ou alguns microrganismos. Quanto
maior o nmero, menor possibilidade de isolamento e maior probabilidade
de crescimento confluente. Quando o inculo for obtido a partir de meio

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

slido (inculo pesado), este poder ser diludo em salina estril ou ser
utilizada a tcnica de esgotamento adequada.

5.7 - Estrias Mltiplas para Isolamento: Consiste em espalhar o material

com o auxlio de uma ala bacteriolgica, fazendo estrias sucessivas at o
esgotamento do material, de modo a obter-se um perfeito isolamento das
bactrias existentes na amostra. Quando o material muito denso, a ala
dever ser flambada.

5.8 - Alternativamente, para se obter um tapete uniforme de crescimento

microbiano, ou colnias isoladas (aps diluio) utiliza-se o mtodo de
espalhamento em placa. Consiste em espalhar o material (suspenso
bacteriana na maioria das vezes) com o auxlio de um swab (para obteno
de tapete uniforme) ou ala de Drigalski (para obteno de colnias isoladas
aps diluio), fazendo a semeadura por toda a superfcie da placa de Petri a
ser utilizada nesta tcnica. Deve-se ter o cuidado para que toda a superfcie
da placa seja semeada, evitando regies sem semeadura. Recomenda-se
que faa o procedimento de semeadura com o swab em trs direes
distintas, com a ala em toda a superfcie rodando a placa.

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

6.Tcnica para semeadura em superfcie (meios slidos):

6.1 - O inculo obtido a partir de uma cultura em caldo ou de uma diluio
da cultura em meio slido feito da seguinte maneira:
Retiramos o inculo do tubo com a ala j flambada e fria.
Abrimos a placa, de modo que a tampa forme um chapu com a placa.
Colocamos o inculo junto a parte superior da placa, espalhando-o a seguir
atravs de nestriamento (que poder ser contnuo ou descontnuo). O
estriamento poder se feito de maneiras variadas, tomando-se sempre o
cuidado de nunca passar a ala duas vezes no mesmo local. O estriamento
permite o esgotamento dos microrganismos que se encontram na ala.
Quando passamos a mesma 2 vezes no mesmo local, promovemos o
recarregamento do local, deixando ali mais bactrias, o que dificultar o seu
perfeito isolamento. Durante o estriamento, aps termos semeado metade
da placa, deveremos cessar o mesmo. A seguir flambamos a ala,
esperamos esfriar e continuamos o estriamento novamente, carregando a
ala na ltima estria que realizamos. Depois de terminado o estriamento,
fechar a placa e identificar, levandoa a seguir para incubao na estufa, com
a tampa voltada para baixo.
Flambar a ala utilizada, esperar esfriar e guardar no suporte apropriado.

7. Tcnica para semeadura em meios lquidos:

Segurar a ala com a mo direita, flambar primeiro na chama azul, depois
na amarela. Esperar esfriar (a ala flambada na posio vertical e dever
ficar atrs da chama para proteo do operador).
Retirar a rolha de algodo do tubo que contem o microrganismo a ser
semeado ou repicado (que dever estar na mo esquerda) utilizando-se o
dedo mnimo da mo direita. A ROLHA DEVER PERMANECER SENDO
SEGURA COM O DEDO MNIMO, AT O FINAL DA OPERAO.

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

Flambar a boca do tubo, e retirar o inculo com a ala fria.

Flambar novamente a boca do tubo e fechar.
Pegar o tubo onde se ir realizar a semeadura, retirar a rolha e flambar.
Semear o material, flambar a boca do tubo e fechar.
Esterilizar a ala, identificar o tubo semeado e levar para incubao em
estufa.
8.Tcnica para semeadura em meios semi-slidos:
Retirar o microrganismo do meio slido ou lquido com o auxlio de uma ala
em agulha j flambada e fria.
Abrir o tubo que contm o meio semi-slido e semear o microrganismo
atravs de picada at mais ou menos 1/3 ou do tubo.
Fechar o tubo, identificar e levar para incubao.
Flambar a agulha, deixar esfriar e colocar no suporte adequado.
8 - Colorao de GRAM:
8.1 - Tecnica de GRAM
Cobrir lamina com cristal violeta e deixar por 1 min.
Escorrer excesso do corante e lavar.
Cobrir lamina com Lugol e deixar por 1 min.
Escorrer excesso do corante e lavar.
Cobrir lamina com Eter-acetona e deixar por 30s.
Escorrer excesso do corante e lavar.
Cobrir lamina com Fucsina e deixar por 30s.
Escorrer excesso do corante, lavar e deixar secar.

8.2.Materiais:
Laminas
Cristal violeta
Lugol
ter acetona
Fucsina
Bico de pulsen.
9. Colorao de Ziehl-Neelsen

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

9.1 - Tcnica:
Cobrir os esfregao com fucsina de Ziehl.
Aquecer at a emisso de vapores (No deixar o corante secar). Esperar 5
minutos;
Lavar com gua corrente;
Descorar com lcool (97%), cido clordrico (1%);
Lavar em gua corrente;
Corar com azul de metileno por 1 minuto;
Lavar e secar;
Observar ao microscpio as lminas coradas;
Como se apresentam os BAAR.
9.2 - Materiais :
a)meio de cultura para microbactria
b)colnias de microbactrias
c)capela de fluxo laminar
d)bico de pulsen
e)Fucsina de Ziehl
f)lcool(97%)Acido Cloridrico(1%)
g)Azul de Metileno
h)microscpio.
9.3 - Materiais
Agar Sangue(AS)
Agar Thyer Martin Modificado(TMM)
Agar Chocolate(AC)
Agar Cled-Cystine Lactose Electrolyte Deficient
Agar MecConkey(MC)
Agar Salmonela-Shigella(SS)

Estufa
Tubos

XIII Encontro de Qumica da Regio Sul (13-SBQSul)

Agradecimentos
Primeiramente a Deus, em segundo a Faculdade Estcio de S e em
terceiro lugar, ao Professor Paulo Ricardo de Souza Moraes.
Referncias
Preparo de Materiais em microbiologia,Meios de cultura usados no
laboratrio, tcnicas de semeadura e Coloraes. Prof(a) DrLuciana
Debortolide Carvalho