INSTITUTO POLITCNICO
NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS
BIOLGICAS.
EQUIPO NO. 2
SECCIN NO. 2
PRCTICA NO. 13
AISLAMIENTO DEL DNA PLASMDICO.
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INTRODUCCIN:
Los plsmidos son molculas de ADN extracromosmico circular o lineal que se replican y
transcriben independientes del ADN cromosmico. Estn presentes normalmente
en bacterias, y en algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras. Su
tamao vara desde 1 a 250 kb. El nmero de plsmidos puede variar, dependiendo de su
tipo, desde una sola copia hasta algunos cientos por clula.
Las molculas de ADN plasmdico, adoptan una conformacin tipo doble hlice al igual que
el ADN de loscromosomas, aunque, por definicin, se encuentran fuera de los mismos. Se
han encontrado plsmidos en casi todas las bacterias. A diferencia del ADN cromosomal,
los plsmidos no tienen protenas asociadas.
En general, no contienen informacin esencial, sino que confieren ventajas al hospedador
en condiciones de crecimiento determinadas. El ejemplo ms comn es el de los
plsmidos que contienen genes de resistencia a un determinado antibitico, de manera
que el plsmido nicamente supondr una ventaja en presencia de ese antibitico.
Hay algunos plsmidos integrativos, es decir, que tienen la capacidad de insertarse en el
cromosoma bacteriano. Estos rompen momentneamente el cromosoma y se sitan en su
interior, con lo cual, automticamente la maquinaria celular tambin reproduce el
plsmido. Cuando ese plsmido se ha insertado se les da el nombre de episoma.
Los plsmidos se utilizan como vectores de clonacin en ingeniera gentica por su
capacidad de reproducirse de manera independiente del ADN cromosomal as como
tambin porque es relativamente fcil manipularlos e insertar nuevas secuencias
genticas.
Los plsmidos usados en Ingeniera Gentica suelen contener uno o dos genes que les
confieren resistencia a antibiticos y permiten seleccionar clones recombinantes. Hay
otros mtodos de seleccin adems de la resistencia a antibiticos, como los basados en
fluorescencia o en protenas que destruyen las clulas sin uso de antibiticos. Estos
nuevos mtodos de seleccin de plsmidos son de uso frecuente en agrobiotecnologa,
debido a la fuerte crtica de grupos ecologistas contra la posibilidad de presencia de
antibiticos en los organismos modificados genticamente.
Los plsmidos sirven como una importante herramienta en laboratorios de gentica e
ingeniera bioqumica, donde son comnmente usados para multiplicar (hacer muchas
copias de) o como genes particulares expresos. Muchos plsmidos estn disponibles
comercialmente para dichos usos.
El gen a ser replicado se inserta en copias de un plsmido el cual contiene genes que
hacen clulas resistentes a un antibitico en particular. En el paso siguiente el plsmido es
insertado en la bacteria por medio de un proceso llamado transformacin. Luego, la
bacteria es expuesta a un antibitico particular. Solo la bacteria que toma copias del
plsmido sobrevive al antibitico debido a que el plsmido lo hace resistente. En
particular, los genes protectores son expresados (usados para hacer protena) y la
protena expresada evita la accin del antibitico. De esta forma, los antibiticos actan
como un filtro que seleccionan nicamente la bacteria modificada. Ahora, estas bacterias
pueden ser cultivadas en largas cantidades, cosechadas y el plsmido de inters puede
ser aislado.
Prctica No. 13 Aislamiento de DNA plasmdico.
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OBJETIVO(S):
RESULTADOS:
INTERPRETACIN DE RESULTADOS:
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DISCUSIN(ES):
En sta prctica no se pudieron revelar nuestro plsmido obtenido por nosotros mismos y
para el anlisis de resultados se ocup una imagen del plsmido obtenido en semestres
anteriores.
De lo anterior se puede discutir que se
obtuvo un trabajo medianamente bueno, ya
que en mayor proporcin se obtuvo DNA
relajado y DNA superenrollado en menor
proporcin. Esto quiere decir que slo se
logr romper una de las cadenas de DNA y
es por eso que se obtuvo un corrimiento
intermedio.
CONCLUSIN(ES):
PREGUNTA(S) EXTRA:
REFERENCIA(S) BIBLIOGRFICAS(S):
Pgina web:
http://es.wikipedia.org/wiki/Pl%C3%A1smido
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