Proyecto semestral laboratorio de gentica: Cruce de parentales con mutaciones white y

dumpy
AnglicaMaraRamrez Sarmiento1a, Jess Hernando Gomez Llano
1

2a

amramirezs@unal.edu.co, jhgomezl@unal.edu.co

Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias, Programa de Biologa

Bogot, Cundinamarca, Colombia
Marzo-2014

OBJETIVOS:

Demostrar si F1 y F2 cumplen con las proporciones mendelianas (Prueba de Chi cuadrado).

Demostrar si las mutaciones son ligadas o no al sexo.
Obtener machos y hembras doble mutantes (White-Dumpy)

DISEO EXPERIMENTAL:
Descripcin Breve de las mutaciones:
White: Se conoce como la primera mutacin encontrada en Drosophila melanogaster. Es una mutacin
recesiva ligada al sexo en la posicin 1,5 del cromosoma X. Fue descubierta en enero de 1910, por
Thomas Hunt Morgan al recoger un macho un solo macho mutante de ojos blancos de una poblacin de
moscas que suelen tener los ojos rojos brillantes en estado silvestre. Al cruzar este macho con una
hembra de tipo salvaje origin hijos que no se ajustaban a las expectativas de la herencia mendeliana,
descubrindose as la herencia ligada al sexo (revisin en Greene, 2010).
El gen white est involucrado en la produccin y distribucin de los pigmentos omocromo (marrn) y
pteridina (rojo) los cuales se encuentran en el ojo de las moscas adultas, as como en la vaina de los
testculos en los adultos y en los tubos de Malpighi en la larva. Este gen tiene picos de expresin en
estadios larvales tardos, y principalmente durante el perodo pupal. Codifica para una protena que
pertenece a la familia de los transportadores ABC (ATP-binding cassette), que es expresada en diversos
tejidos (OHare et al ., 1984; Mount, 1987). Los transportadores ABC usan energa generada por la
hidrlisis de ATP para transportar sustratos especficos a travs de la membrana plasmtica . En el ojo,
White se acopla con las protenas Brown o Scarlet para transportar molculas de pigmento derivadas
deguanina o triptfano respectivamente a los grnulos, dando el color rojo caracterstico en las moscas
silvestres. Los mutantes white son positivamente fototcticos, sin embargo carecen de respuesta
optomotora y presentan un electroretinograma anormal (Borycz et al ., 2008).
Dumpy:
La historia del gen dumpy en Drosophila melanogaster abarca prcticamente toda la historia de la
propia gentica de Drosophila . A principios del siglo pasado, varios mutantes que inicialmente

parecan tener diferentes fenotipos fueron recuperados en el laboratorio de Morgan en la Universidad

de Columbia . El propio Morgan not una mosca en agosto de 1910 con las alas ms cortas que llam
Truncate (Morgan, 1911). En 1918 una mosca fue descubierto con las dos alas ms cortas y con cerdas
espiraladas en el trax. Este mutante se llamo dumpy, la primera vez que se utiliz este trmino
(Bridges & Mohr, 1919).
El gen de Drosophila dumpy consta de setenta y ocho exones y codifica una protena de la matriz
extracelular que contiene un gran nmero de mdulos similares al factor de crecimiento epidrmico
(EGF) y un modulador llamado dumpy (DPY). Los diferentes lelos mutantes recesivos de dumpy tener
tres efectos principales: oblicua (DPO ) que afectan a la forma del ala , vrtice ( DPV ) que alteran los
archivos adjuntos de los msculos indirectos de vuelo, en la cutcula dorsal torcica causando hoyos y
protuberancias, y letal ( DPL ) que acta sobre todo en las mudas larvarias (Wilkin et al, 2000)

PRESENTACIN DE LOS CRUCES A REALIZAR: GENOTIPO Y FENOTIPO DE LA F1 Y F2

Demostracin de que la mutacion white esta ligada al sexo
Cruce 1
P:

Hembra

dp/dp; Xw+/ Xw+

Macho
dp+/dp+; Xw/Y

F1

F2

Gametas
dp+ ;Xw

dp/;Xw+
dp/dp+; Xw+/Xw

dp+;Y

dp/dp+; Xw+/Y

Hembra

dp/dp+; Xw+/ Xw

Gametas
dp ;Xw+

dp ;Xw+
dp/dp; Xw+/Xw+

dp ;Xw
dp/dp; Xw/Xw+

dp;Y

dp/dp; Xw+/Y

dp+ ;Xw+

dp/dp+; Xw+/Xw+

dp+;Y

dp/dp+; Xw+/Y

Fenotipo observado: Todos los

individuos presentan ojos y alas
silvestres

Macho
dp/dp+; Xw+/Y

dp/dp; Xw/Y

dp+ ;Xw+
dp+/dp;
Xw+/Xw+
dp+/dp; Xw+/Y

dp+ ;Xw
dp+/dp;
Xw/Xw+
dp+/dp; Xw/Y

dp/dp+;
Xw/Xw+
dp/dp+; Xw/Y

dp+/dp+;
Xw+/Xw+
dp+/dp+; Xw+/Y

dp/dp+;
Xw/Xw+
dp+/dp+; Xw/Y

Fenotipo esperado: 9/16 individuos presentan ojos y alas silvestres; 3/16 individuos con
ojos silvestres y alas dumpy; 3/16 individuos con ojo white y alas silvestres y 1/16 individuos
con ojos white y alas dumpy

Cruce reciproco
P:

Hembra

dp+/dp+; Xw/Xw

Macho
dp/dp; Xw+/Y

F1
dp+;Xw

Gametas

w+

dp/dp ; X /X

dp;X

Hembra
dp/dp+; Xw/Xw+

Gametas
dp+; Xw
dp+; Y
dp; Xw
dp; Y

w+

dp+/dp; Xw/Y

dp;Y

F2

dp;Xw
dp/dp+; Xw/Xw
dp/dp+; Xw/Y
dp/dp; Xw/Xw
dp/dp; Xw/Y

Fenotipo: 50% de los individuos tienen alas

y ojos silvestres y 50% tiene alas silvestres y
ojos white.

Macho

dp+/dp; Xw/Y

dp; Xw+
dp/dp+; Xw+/Xw
dp/dp+; Xw+/Y
dp/dp; Xw+/Xw
dp/dp; Xw+/Y

dp+; Xw
dp /dp+; Xw/Xw
dp+/dp+; Xw/Y
dp+/dp; Xw/Xw
dp+/dp; Xw/Y
+

dp+; Xw+
dp /dp+; Xw+/Xw
dp+/dp+; Xw+/Y
dp+/dp; Xw+/Xw
dp+/dp; Xw+/Y
+

Fenotipo: 6/16 individuos presentan alas y ojos silvestres; 6/16 individuos tienen alas silvestres y ojos white; 2/16
individuos poseen alas dumpy y ojos silvestres y 2/16 individuos tienen las dumpy y ojos white

Presentacin del doble mutante (White-Dumpy)

Cruce 3
P:

Hembra

dp+/dp+; Xw/Xw

Macho
dp/dp; Xw+/Y

F1
dp+; Xw
dp /dp; Xw/Xw+
dp+/dp; Xw/Y

Gametas
dp/Xw+
dp/Y

F2:

Hembra

dp+/dp; Xw/Xw+
Gametas
dp+; Xw
dp+;Y
dp/Xw
dp/Y

dp+; Xw
dp /dp+;Xw/Xw
dp+/dp+;Xw/Y
dp+/dp;Xw/Xw
dp+/dp; Xw/Y
+

|
dp+;Xw+
dp /dp+;Xw+/Xw
dp+/dp+;Xw+/Y
dp+/dp; Xw+/Xw
dp+/dp; Xw+/Y
+

Fenotipo: Hembras de ojos y alas

silvestres; machos alas silvestres y
ojos white

Macho
dp+/dp; Xw/Y
dp;Xw
dp/dp+;Xw;Xw
dp/dp+;Xw/Y
dp/dp;Xw/Xw
dp/dp; Xw/Y

dp;Xw+
dp/dp+;Xw+;Xw
dp/dp+;Xw+/Y
dp/dp;Xw+/Xw
dp/dp; Xw+/Y

Fenotipo: 6/16 individuos tienen alas y ojos silvestres; 6/16 individuos poseen alas silvestres y ojos
white ; 2/16 individuos presentan alas dumpy y ojos silvestres y finalmente 2/16 individuos poseen alas
dumpy y ojos white.
JUSTIFICACIN DE LOS CRUCES PRESENTADOS:
Demostracin de que la mutacin white esta ligada al sexo:
Por medio del Cruce 1y su Cruce reciproco se puede comprobar que la mutacin white esta ligada al
sexo ya que se observa una diferencia en la frecuencia de el fenotipo esperado en la F1 en los dos
cruces: En el cruce 1, Hembra (dp/dp; Xw+/ Xw+) X Macho (dp+/dp+; Xw/Y), se puede observar que la
totalidad de la F1 presenta el tipo silvestre para la caracterstica, por el contrario en el cruce reciproco,
Hembra (dp+/dp+; Xw/Xw ) X Macho (dp/dp; Xw+/Y), se observa que la mitad de la F1 presenta el tipo
silvestre de la caracterstica mientras que el otro 50% presenta el estado mutado (ojos white). El hecho
de que al cambiar el sexo que presente la mutacin, se produzca una variacin en las proporciones
fenotpicas de la generacin F1, se desva de los caracteres mendelianos en los cuales el sexo que
aporte los gametos no es relevante. Esto finalmente permite probar que la mutacin white est ligada al
sexo (Matta, 2010)

Las proporciones fenotpicas de la F1 y la F2 no cumplen las proporciones mendelianas (por razones

expuestas anteriormente), no obstante las proporciones de los cruces corresponderan a las esperadas.
Para comprobar que el la realidad los cruces cumplen con las proporciones esperadas es necesario
poseer las observadas las cuales solo se generaran en el trascurso del experimento
Demostracin de que la mutacion dumpy no est ligada al sexo:
Para mostrar que la mutacion dumpy no est ligada al sexo se recurre a los cruces anteriormente
presentados (Cruce 1 y Cruce reciproco) ya que en estos la frecuencia fenotpica observada es la
esperada para un carcter mendeliano recesivo (la presencia de alas de tipo silvestre para la totalidad de
la F1). Esto muestra que el sexo que aporte la mutacin no afecta el fenotipo de la generacin filiar que
es concordante, como ya se ha mencionado, con un carcter mendeliano (Matta 2010).
El hecho de que la mutacin dumpy sea autosmica se encuentra tambin referido en la literatura.
Igualmente que en la mutacin anterior los valores de las proporciones presentadas en los cruces son
las esperadas y la comprobacin de su cumplimiento se lograra al obtener las proporciones observadas,
lo que se realizara a lo largo del experimento.
Presentacin del doble mutante (White-Dumpy)
Por medio del cruce numero 3, Hembra (dp+/dp+; Xw/Xw) X Macho ( dp/dp; Xw+/Y), se puede obtener
en la F2 el doble mutante (White-Dumpy) en hembras y en machos, lo que permite cumplir con el
objetivo asignado. Este cruce es el nico que permite obtener tanto hembras y machos dobles mutantes
ya que el cruce reciproco (un cruce donde los parentales son una hembra tendra en genotipo dp/dp;
Xw+/ Xw+ y un macho con el genotipo dp+/dp+; Xw/Y) producir en la F2 solo machos que sean dobles
mutantes.
De la misma manera que para los anteriores cruces las proporciones descritas serian las esperadas y
para realizar la comprobacin del cumplimiento de estas, es necesario tener las proporciones
observadas que solo se podrn conseguir a lo largo del experimento.

DIAGRAMA DE FLUJO DEL EXPERIMENTO

Se aislaran los machos
con las caractersticas:
(dp+/dp+; Xw/Y)

Cruce 1: Aislamiento de las

vrgenes que presentan las
carectristicas (dp/dp; Xw+/ Xw+)

Se realizara el cruce:

(dp/dp; Xw+/Y)

Se realizara el cruce

Se realizaran 3 replicas por

cruce (para cada replica se
tendrn 4 parejas previamente
seleccionadas

Hembra (dp/dp; Xw+/ Xw+) X

Macho (dp+/dp+; Xw/Y)

Hembra (dp+/dp+; Xw/Xw ) X

Macho (dp/dp; Xw+/Y)

Se realizaran los conteos de los

fenotipos de la F1 para cada replica

Obtencin de la filiar F1

Cruce reciproco Aislamiento

de las vrgenes con las
caractersticas (dp+/dp+; Xw/Xw
)

Se aislaran los machos

con las caractersticas:

Obtencin de la filiar F1

Se comprobara si las proporciones

observadas corresponden a lo
esperado (Prueba Chi Cuadrado)

Se aislaran hembras de la
F1 con las caractersticas:
(dp/dp+; Xw/Xw+)

Se aislaran los machos

con las caractersticas:
(dp+/dp; Xw+/Y)

Se aislaran hembras de la
F1 con las caractersticas:
(dp+/dp; Xw/Xw+)

Se aislaran los machos

con las caractersticas:
(dp+/dp; Xw/Y)

Se realizara el cruce

Se realizara el cruce

Hembra (dp/dp+; Xw/Xw+) X

Macho (dp/dp+; Xw+/Y)

Hembra (dp/dp+; Xw/Xw+) X

Macho (dp+/dp; Xw/Y)

Se obtendr la filiar F2

Se realizaran los conteos de los

fenotipos de la F2 para cada replica

Se comprobara si las proporciones

observadas corresponden a lo
esperado (Prueba Chi Cuadrado)

Se obtendr la filiar F2

Bibliografa:

Green, M. M. (2010). 2010: a century of Drosophila genetics through the prism of the white
gene. Genetics, 184(1), 3-7.
O'Hare, K., Murphy, C., Levis, R., & Rubin, G. M. (1984). DNA sequence of the white locus of
Drosophila melanogaster . Journal of molecular biology, 180(3), 437-455.
Mount, S. M. (1987). Sequence similarity. Nature 325: 487.
Borycz, J., Borycz, J. A., Kubow, A., Lloyd, V., & Meinertzhagen, I. A. (2008). Drosophila
ABC transporter mutants white, brown and scarlet have altered contents and distribution of
biogenic amines in the brain. Journal of Experimental Biology, 211(21), 3454-3466.
Morgan, T. H. (1911). The origin of nine wing mutations in Drosophila. Science, 33(848), 496499.
Bridges, C. B., & Mohr, O. L. (1919). The Inheritance of the Mutant Character" Vortex".
Genetics, 4(3), 283.
Wilkin, M. B., Becker, M. N., Mulvey, D., Phan, I., Chao, A., Cooper, K., ... & MacIntyre, R.
(2000). Drosophila Dumpy is a gigantic extracellular protein required to maintain tension at
epidermal-cuticle attachment sites. Current Biology, 10(10), 559-567.
Matta, N.E., (2010). La mosca de la fruta Drosophila melanogastercomo organismo modelo en
gentica.Coleccin de textos de Facultad de Ciencias. Universidad Nacional de Colombia.