INFORMACION PARA COORDINADORES DE SERVICIOS DE SALUD Y

MEDICOS
En los hallazgos de auditoria externa se encontr Falta de concordancia entre los
examenes registrados en el manual y la tcnica utilizada en el laboratorio
Como plan de mejoramiento del Sistema de gestin de Calidad, se determino realizar la
divulgacin de los factores que diferencian las tcnicas y que se registran en los
manuales de tarifas como (CUPS) clasificacin nica de procedimientos en salud,
para que desde la solicitud del anlisis se especifique ya sea como cdigo numrico
o haciendo la descripcin de la tcnica y en la revisin de cuentas se manejen los
homlogos.
Para que la informacin sea ms didctica la enfocamos en la modalidad de preguntas.
1. Que tcnicas se utilizan en los anlisis bioqumicos?
Como respuesta al avance tecnolgico que cada da garantiza resultados mas confiables
por permitir mayor objetividad en su medida, las tcnicas van depurndose
prevaleciendo aquellas que cumplan con caractersticas de precisin, exactitud,
sensibilidad y especificidad, criterios que se deben utilizar en la adquisicin de equipos
y reactivos ofertados. Bajo estos parmetros las tcnicas mas utilizadas en el
laboratorio clnico son: Espectrofotometra, luminiscencia, fluorescencia,
fosforescencia, turbidimetra y nefelometra.
MTODOS ESPECTROSCPICOS: Son aquellos en los que existe intercambio de
energa entre la radiacin electromagntica y la materia. En estos mtodos se miden
espectros, debidos a transiciones entre distintos niveles energticos.
Tcnicas basadas en la absorcin de radiacin:
-niveles moleculares: UV-visible, microondas
-niveles atmicos: absorcin atmica, rayos x
Tcnicas basadas en la emisin de radiacin:
-niveles moleculares: luminiscencia, fluorescencia y fosforescencia.
-niveles atmicos: espectrometra de emisin, fluorescencia de rayos x,
fluorescencia atmica
MTODOS NO ESPECTROSCPICOS: Son aquellos en los que no hay intercambio
de energa sino cambios en la direccin o en las propiedades fsicas de la radiacin
electromagntica
Tcnicas basadas en la dispersin de radiacin: turbidimetra, nefelometra
Tcnicas basadas en la refraccin de radiacin: refractometra, interferometra
Tcnicas basadas en la difraccin de radiacin: rayos x o electrones
Tcnicas basadas en la rotacin ptica: polarimetra, dicrosmo circular.
2. Que diferencia hay en tcnicas qumicas e inmunoqumicas?
Mediante las tcnicas qumicas se analizan componentes de bajo peso molecular o de
alta concentracin en la muestra, los analitos presentes en sangre, orina y otros lquidos
biolgicos son analizados principalmente por tcnicas espectrofotometrcas, que
garanticen exactitud y precisin, bajo la estandarizacin de variables como temperatura,
agitacin, tiempo, volumen, estabilidad de reactivos y correcta calibracin de equipos.

Gran parte del progreso alcanzado por la biologa moderna se debe al perfeccionamiento
de los mtodos analticos de medida. La introduccin de los procedimientos basados en
las reacciones inmunolgicas ha representado un importante avance en el anlisis de
sustancias de inters en el laboratorio clnico.
Dentro de los procedimientos inmunolgicos, los ms tiles y prcticos son aquellos
que se basan en la especificidad de la unin Ag-Ac. La propiedad que tienen las
Inmunoglobulinas de unirse a un Ag, la especificidad de esta unin y el hecho de que
pueda ser visualizable por los fenmenos de precipitacin, aglutinacin, marcaje con
fluorescena, radioistopos o enzimas, hacen que estos mtodos se empleen
ampliamente y que cada da sean mas confiables.
Estas tcnicas son utilizadas para medir molculas de estructura compleja o de
concentraciones muy bajas, siendo importante garantizar la especificidad y sensibilidad
del analito que se analiza. Para asegurar el resultado exacto se hacen ligaciones con
otros cofactores que aseguran mayor estabilidad en la reaccin o la utilizacin de
mltiples lugares de enlace, esto determina la generacin del reactivo contando
actualmente con reactivos hasta de quinta generacin.

PRINCIPALES TECNICAS BASADAS EN LA UNION Ag-Ac

1. Tcnicas de aglutinacin. Cuando el antgenos se encuentra unido o formando parte
de clulas, bacterias o partculas, la reaccin Ag-Ac se puede detectar y cuantificar por
el aglutinado celular o bacteriano formado.
2. Tcnicas de fluorescencia y citometra de flujo. Para la realizacin de estas
tcnicas el anticuerpo se marca con un fluoro cromo detectndose la formacin del
complejo Ag-Ac por la fluorescencia emitida.
3. Tcnicas de radioinmunoensayo. En estas tcnicas al anticuerpo se une a un istopo
Radiactivo siendo posible la cuantificacin del complejo Ag-Ac a travs de la
radiactividad emitida.
4. Cromatografa de afinidad. La especificidad de la unin Ag-Ac puede utilizarse
para obtener Anticuerpos y Anfgenos puros.
5. Inmunoprecipitacin e inmunoblotting. Permite detectar la presencia y cantidad
de antgenos y anticuerpos especficos que difunden en geles
6. Enzimoinmunoensayo. Estas tcnicas son conocidas tambin como
Enzimoinmunoanalisis (EIA). La identificacin de los complejos Ag-Ac, se hace
mediante el empleo de enzimas, bien unidas al antgeno o al anticuerpo. Esta tcnica,
tambin se conoce como test de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
7. Inmunonefelomtricas o Inmunoturbidimtricas. Estas tcnicas se basan en la
deteccin de los complejos Ag-Ac, por la dispersin que dichos complejos producen
sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el complejo inmune
correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos lser y se establece una relacin entre
la cantidad de luz que llega y la cantidad de complejos formados.
Este procedimiento es rpido y sensible y se est utilizando en la actualidad, sobre todo,
para la cuantificacin de protenas en suero y en otros lquidos biolgicos.
Las graficas siguientes permiten visualizar mejor este tipo de reacciones.

Grafica 1.
Corresponde a reacciones de aglutinacin o precipitacin. Es muy importante el
equilibrio entre el Ag y el Ac, para que no se presenten fenmenos zonales, que son los
responsables de fasos positivos o falsos negativos. Corresponden a tcnicas cualitativas
y muy sujetivas mientras no se cuente con un sistema de medida calibrado.
Los resultados se reportan como positivos, negativos o en diluciones, en precipitacin
sobre geles se puede hacer curvas con controles, obteniendo resultados
semicuantitativos.
Pertenecen a este grupo entre otras: Ltex, Inmunodifucin radial (IDR),
Inmunoelectroforesis, cromatografas de afinidad.

Grafica 2. Se representa una placa donde se ha realizado la tcnica de inmunodifusin

radial. Se siembran controles de diferentes se miden los halos correspondientes que
determinan los puntos de una curva sobre la cual se ubican las muestras de los
pacientes. Como es tan manual no cuenta con la exactitud y precisin que ofrecen las
automatizadas.

Figura 3. El fundamento de todas las tcnicas denominadas Emzimo Inmuno Anlisis

EIA. Si el sustrato se acopla a una reaccin coloreada se denomina ELISA, si la
reaccin emite luz LIA, si emite fluorescencia FIA, si emite radiacin RIA. Cada una de
ellas presenta diferente sensibilidad y especificidad dependiendo de la automatizacin y
generacin del reactivo utilizado.

Figura 4. Las tcnicas nefelomtrica y turbidimtrica estn basadas en la dispersin de

la luz de las partculas formadas por el complejo inmune el cual se encuentra en

suspensin en el seno de una disolucin. La diferencia entre estas dos tcnicas est en la
forma de medir la luz dispersa.

3. Que diferencia hay entre un examen realizado correctamente y un resultado

confiable?
El Bacteriologo sigue las indicaciones del desarrollo de una tcnica, por tanto el anlisis
cumple con el procedimiento, se espera un resultado correcto, pero si no se compara con
segundas opiniones no conoceremos su confiabilidad.
La confiabilidad esta sujeta a la verificacin de la exactitud y precisin del ensayo,
mediante el uso de controles. Si la comparacin se realiza con un grupo de otros
laboratorios a travs de una muestra ciega, se mide la exactitud de su reporte. Si cuenta
con equipos susceptibles a prevenir la descalibracion y reactivos con manejo ptimo de
condiciones ambientales puede asegurar la precisin utilizando muestras de
concentracin conocida. Las medidas de biomleculas en el orden de micro, nano o
fentogramos, requieren un estricto control de variables como volumen, lavados y
agitacin que se logran a travs de la automatizacin.
Factores que afectan la sensibilidad y especificidad de los inmunoanlisis:
- La potencia del anticuerpo y la relacin de los pKa.
- La concentracin molar del anticuerpo, del analito, del trazador y del conjugado.
- La pureza de anfgenos o anticuerpos de los reactivos.
- La temperatura a la que se realizan los ensayos (Temperatura ambiental, del bao
o estufas de incubacin en tcnicas manuales).
- El pH y la fuerza inica del medio donde transcurre la inmunorreaccin.
- El tiempo en que transcurre la inmunorreaccin y si la reaccin llega o no, al
equilibrio. Exceso o defecto del tiempo de reaccin o incubacin establecida por el
fabricante de los reactivos.

- Conservacin de la cadena de fro de los reactivos estipulada por el fabricante y la

estabilidad de los reactivos durante el tiempo que el fabricante estima, previo al
vencimiento.
- Adicionar un paso de lavado en una etapa intermedia fuera del protocolo del
fabricante.
- La deshidratacin de los geles con los ensayos de difusin como en las tcnicas de
inmunodifusin radial IDR.
- Ensayos inmunoanalticos basados en un punto de corte o cut-off.
- Precisin de dispensado de reactivos o muestras en los equipos automticos o la
precisin de las micro pipetas automticas en tcnicas manuales.
- Calidad del agua de dilucin de reactivos en equipos automticos.
- Deterioro del agua de dilucin de reactivos en equipos automticos.
- Contaminacin bacteriana o fngica en el conjunto de tubos y mangueras de los
equipos automticos.
- Contaminacin bacteriana o fngica de los reactivos o controles de calidad.
- Almacenamiento de los reactivos o muestras.
- Estado de funcionamiento (temperatura y su estabilidad) de las heladeras, freezers
o congeladoras, lugar y posicin de almacenamiento de los reactivos y muestras
dentro de las mismas. (Especial atencin en la posicin y el tiempo de
almacenamiento de las placas de IDR).
- Estructura y estabilidad de la molcula que se va a determinar. Protena globular,
anticuerpo, hormona asteroidea o tiroidea.
- Sistema de separacin (eficiencia de la separacin de la fraccin libre de la unida
en el caso de los sistemas inmunoanalticos heterogneos), ej., aspirado o volcado,
centrifugacin, lavado, separacin magntica, etctera.
- Tipo de seal que se va a medir (radiactividad, fluorescencia, color, turbidez,
banda de precipitacin, quimioluminiscencia, electroquimioluminiscencia, etctera).
- Estado de la lmpara de los microscopios de fluorescencia, lmpara y filtros del
espectrofotmetro, cristal de centelleo y foto multiplicador (PMT), en el caso del
contador de pozo (Gamma Counter) para la medicin de radioistopos y el PMT de
los instrumentos de quimioluminiscencia y electroquimioluminiscencia.

- Prdida de eficiencia de la capacidad de separacin a causa de la platina

magntica en los ensayos de separacin magntica.
- Iluminacin ambiental en el lugar de trabajo con tcnicas de EIA, ELISA e IF.
- Entrenamiento y experiencia del operario.
4. Como se evidencia que el Laboratorio entrega resultados confiables?
Las consecuencias de un resultado equivocado repercuten no solo en el tratamiento
del paciente sino tambin en los costos de malos procedimientos que asumen los
proveedor de salud, actualmente se encuentra personal capacitado en los procesos de
verificacin de la calidad y la competencia tcnica en los laboratorios clnicos, que
pueden realizar auditorias.
Mediante la existencia de certificados de entidades como el Organismo Nacional de
Acreditacin de Colombia (ONAC), que cuentan con auditores expertos que
garantizan el cumplimiento de la normatividad relacionada con requisitos
especficos para laboratorio clnico como la ISO 15189. La acreditacin de pruebas
mediante esta norma, conlleva a evidenciar indicadores internacionales de ndice
de confiabilidad de cada una de las pruebas que se acreditan.
5. Que informacin ofrece la descripcin del cdigo CUPS referente a los
examenes de Laboratorio?
El nombre del examen que se requiere, pero principalmente la tcnica con la
cual quiere que se le realice la prueba, ejemplos
902207

HEMOGRAMA I [HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO Y LEUCOGRAMA] METODO MANUAL +

902208

HEMOGRAMA II [HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, RECUENTO DE ERITROCITOS, NDICES ERITROCITARIOS,

LEUCOGRAMA, RECUENTO DE PLAQUETAS E INDICES PLAQUETARIOS] METODO MANUAL Y
SEMIAUTOMATICO +

902209

HEMOGRAMA III [HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, RECUENTO DE ERITROCITOS, NDICES ERITROCITARIOS,

LEUCOGRAMA, RECUENTO DE PLAQUETAS, INDICES PLAQUETARIOS Y MORFOLOGA ELECTRONICA]
METODO AUTOMATICO +

902210

HEMOGRAMA IV [HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, RECUENTO DE ERITROCITOS, NDICES ERITROCITARIOS,

LEUCOGRAMA, RECUENTO DE PLAQUETAS, INDICES PLAQUETARIOS Y MORFOLOGA ELECTRONICA E
HISTOGRAMA] METODO AUTOMATICO+

En estudios de comparacin de tcnicas se ha encontrado una variacin entre el mtodo

manual y el automatizado en el contaje de clulas:
ARAMETRO

%CV MANUAL

Recuento de Leucocitos

11.8 25.2

Recuento de Plaquetas

22.0 60.0

%CV AUTOMATIZADO

< 2.0
< 4.0

En el mtodo manual no se cuenta con controles de calidad Confiables para

verificar los resultados. En equipos automatizados se puede verificar el resultado
mediante controles confiables que permiten acreditar la prueba

901001

ANTIBIOGRAMA (DISCO)

901002

ANTIBIOGRAMA (MIC) MTODO AUTOMTICO

901003

ANTIBIOGRAMA (MIC) MTODO MANUAL

Los discos son muestras de antibiticos, la lectura del halo no es confiable, son
almacenados por largo tiempo incidiendo en la sensibilidad de la concentracin,
no hay disponibilidad de un buen nmero de antibiticos ni ofrece diferentes
concentraciones para el mismo antibitico, no se pueden aplicar ms de 8
sensidiscos en la placa. Puede presentar reaccin cruzada por acercamiento de
los halos de reaccin. (MIC) Mnima Concentracin Inhibitoria, se utilizan
galeras de antibiticos de concentraciones garantizadas, especficos tanto a cada
cultivo como al grupo de microorganismos de metabolismo similar, se presentan
diferentes diluciones para el mismo antibitico, con una buena variedad de
opciones por familia de antibiticos que permiten ofrecer desde primera hasta
ltima generacin. Cada antibitico corre separadamente y la reaccin es de
turbidez.
903026

MICROALBUMINURIA POR EIA +

903027

MICROALBUMINURIA POR NEFELOMETRA +

903028

MICROALBUMINURIA POR RIA +

903029

MICROALBUMINURIA POR TURBIDIMETRIA +

906913

PROTENA C REACTIVA, CUANTITATIVO DE ALTA PRECISION

906914

PROTENA C REACTIVA, PRUEBA SEMICUANTITATIVA

Las protenas son molculas complejas y varias de ellas de baja concentracin,

se requieren tcnicas que permitan la formacin de complejos inmunes, las que
utilizan enzimas para revelar el sustrato pertenecen al grupo de las EIA. La
tcnica Nefelomtrica o Turbidimtrica requiere conformar partculas de
complejo inmune y son iguales. Cualquiera de las tcnicas anteriores garantizan
un resultado confiable por ser Cuantitativas. Tcnicas como cromatografa de
afinidad, ltex, inmunoprecipitacin, inmunodifusin radial IDR, son
cualitativas y no garantizan medidas exactas.
Si en la orden de solicitud solo se nombra el examen este se asimila al cdigo
menor o sea a la tcnica menos confiable, si se agrega la palabra Cuantitativo
se asimila a los cdigos de EIA.
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GRACIAS
Alix Bolivar Grimaldos
Gerente Laboratorio Clnico de Especialidades Bolivar.

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