UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MONTES CLAROS

Centro de Cincias Exatas e Tecnolgicas

Departamento de Cincias Agrrias
Curso de Agronomia

Amanda Soares Rocha

EFEITO DO SOBRENADANTE DE CULTURAS BACTERIANAS

ISOLADAS DE Azadirachta indica NA BIOLOGIA DE Spodoptera
frugiperda

Janaba - MG
Junho/2014

Amanda Soares Rocha

EFEITO DO SOBRENADANTE DE CULTURAS BACTERIANAS

ISOLADAS DE Azadirachta indica NA BIOLOGIA DE Spodoptera frugiperda
Monografia apresentada ao Curso de
Agronomia, da Universidade Estadual
de Montes Claros como exigncia para
obteno do grau de Bacharel em
Engenharia Agronmica.
Orientadora: D. Sc. Teresinha Augusta
Giustolin.
Co-orientadora: Adelica Aparecida
Xavier

Janaba MG
Junho/2014

Amanda Soares Rocha

EFEITO DO SOBRENADANTE DE CULTURAS BACTERIANAS

ISOLADAS DE Azadirachta indica NA BIOLOGIA DE Spodoptera frugiperda
Monografia apresentada ao curso de
Agronomia, da Universidade Estadual
de Montes Claros como exigncia para
obteno do grau de Bacharel em
Engenharia Agronmica.

Orientador:

Membros:

_________________________________________________
Professora D. Sc. Teresinha Augusta Giustolin

_________________________________________________
Professora D. Sc. Adelica Aparecida Xavier

_________________________________________________
Professora D. Sc. Clarice Diniz Alvarenga Corsato

Janaba/mg
Junho/2014

AGRADECIMENTOS

Agradeo Deus, por cuidar de mim, me guiar e nos momentos mais difceis me carregar no
colo.
Universidade Estadual de Montes Claros UNIMONTES, por toda a contribuio para
minha formao acadmica.
Fundao de Amparo a Pesquisa de Minas Gerais FAPEMIG, pela concesso de bolsa de
Iniciao Cientfica, durante a graduao.
A Teresinha, por sua orientao, seus ensinamentos, pelo grande exemplo de profissional e
pela oportunidade de desenvolver este trabalho.
Ao meu pai Manoel pelo exemplo maior de honestidade, alegria e garra. Todas as vezes que
eu pensei em desistir o brilho dos seus olhos me fizerem continuar. Muito obrigado por cuidar
de mim com tanto carinho e por ser meu Heri.
A minha mezinha, Sirlene por fazer dos meus sonhos os dela e por ser o reflexo de Deus em
minha vida atravs de seus gestos constantes de amor e misericrdia. Voc um pedao do
cu que eu pude apreciar aqui na terra. Obrigado por ser meu anjo.
A meu irmo, Robson por seu companheirismo e por me inspirar com sua leveza e entusiasmo
de viver. Amo muito voc.
A vov Anita que adoa os meus dias com muito carinho e delicadeza e que sempre me fazer
acreditar em dias melhores.
A v Lero (in memoria) que me fez sorrir tantas vezes e que muito me ensinou sobre o amor.
Sempre sentirei sua falta.
Aos meus tios(as) e primos(as) por fazerem com que cada volta pra casa e reencontro fossem
to esperados e inesquecveis.
Aos meus amigos de sempre, que mesmo distantes, permanecerem em meu corao, em
especial a minha Mariinha, Lorena Carvalho, Gilda, Tayn e Geysa.
Aos colegas de turma por lgrimas e sorrisos, derrotas e vitrias divididas ao longo destes 5
anos. Em especial aos meus queridos Marcelo e Luan por serem um dos meus melhores
presentes que eu ganhei neste curso.
Aos colegas do Laboratrio de Entomologia pelos bons momentos de descontrao e ajuda na
conduo dos experimentos. A Edna e Marianne pelas horas de riso farto. A Ldinha pelos
finais de semana compartilhados na UNIMONTES e por ter sido essencial na execuo deste
trabalho. A Maria, Amanda e Joo pela disponibilidade em ajudar sempre que necessrio.

No; no pares.
graa divina comear bem.
Graa maior persistir na caminhada certa,
Manter o ritmo...
Mas a graa das graas no desistir.
Podendo ou no podendo, caindo, embora aos pedaos,
CHEGAR AO FIM...
Dom Hlder Cmara

RESUMO
O trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar a toxicidade do sobrenadante de
bactrias isoladas de folhas do nim, Azadirachta indica a lagartas de Spodoptera frugiperda.
Foram utilizados o sobrenadante dos isolados bacterianos Epi 01, Epi 09, Nim 10, Epi 12,
Nim 08, Nim 05. Para obteno do sobrenadante, as suspenses bacterianas foram preparadas
a partir da adio de uma soluo de NaCl (0,85 %) estril para a raspagens das colnias.
Estas suspenses foram submetidas a centrifugao por 15 minutos em uma rotao de 10 000
rpm. Aps a retirada da centrfuga, o sobrenadante foi separado da bactria e utilizado para o
tratamento de pedaos de folhas de milho da regio do cartucho. As sees tratadas e secas
foram transferidas para tubos de vidro, esterilizados e tampados com algodo, contendo uma
pequena camada de gar-gua no fundo, para manuteno da umidade da folha. Na folha foi
transferida uma lagarta recm-eclodida de S. frugiperda. As lagartas receberam folha tratada
uma nica vez, com exceo da testemunha, e aps 72 horas foi substituda por uma nova
folha no tratada. Esse procedimento durou at a pupao. O delineamento experimental
utilizado foi inteiramente casualizado, com 50 repeties em cada tratamento, sendo seis
tratamentos ( sobrenadantes bacterianos dos isolados Epi 01, Epi 09, Nim 10, Epi 12, Nim 08,
Nim 05). Foram avaliadas a durao e mortalidade larval e pupal, peso de pupas macho e
fmea e deformao de pupas e adultos. Os parmetros mortalidade larval, mortalidade pupal,
deformao pupal e emergncia do adulto foram submetidos ao teste de Kruskal Wallis pelo
programa estatstico Past. A durao larval e pupal, peso de pupas macho e fmea tiveram
suas mdias comparadas pelo teste Tukey a 5% de significncia pelo Sisvar. A ingesto dos
isolados bacterianos por lagartas de S. frugiperda provocaram aumento na mortalidade larval,
reduo na durao pupal e pesos de pupas machos, aumento na deformao de adultos. Os
isolados Epi 01, Epi 12, Epi 09, Nim 08, e Nim 10 quando ingeridos pelas lagartas de S.
frugiperda, provocam mortalidade da fase larval. Quando as lagartas se alimentam do
sobrenadante do isolado Epi 12 ocorre reduo do peso de pupas. As lagartas que consomem
folhas de milho tratadas com o isolado bacteriano Nim 05 e Nim 10 resultam em adultos com
deformao.
Palavras- chave: controle alternativo, lagarta do cartucho do milho, microrganismos
endofticos.

ABSTRACT
The work was to evaluate the toxicity of the supernatant of bacteria isolated from the neem
plant, Azadirachta indica, the Spodoptera frugiperda.Foram used the bacterial isolates
supernatant of Epi 01, Epi 09, Epi 12, 05 Nim, and Nim 08 Nim 10. to obtain the supernatant,
the bacterial suspensions were prepared from the addition of sterile NaCl solution (0.85%)
used for scraping the colonies grown in the medium containing TSA plates. These
suspensions were subjected to centrifugation for 15 minutes at a speed of 10 000 rpm. After
removal of the centrifuge, the supernatant was separated and the bacterium used for the
treatment of pieces of maize leaves of the cartridge region. The treated sections were left
exposed under laboratory conditions to lose moisture from the suspensions and then
transferred to glass tubes plugged with cotton, and sterilized, containing a small layer of
water-agar on the bottom to maintain humidity fragment sheet. On sheet was transferred a
newly hatched caterpillar S. frugiperda. The treated leaf caterpillar received only once, except
the control, which was replaced after 72 hours with a new untreated. This procedure lasted
until pupation. The experiment was performed in CRD with six treatments and 50 replications
for each treatment. The duration and larval and pupal mortality, weight of male and female
pupae and deformation of pupae and adults were evaluated. The mortality and pupal, pupal
and adult deformation variables were submitted to the Kruskal - Wallis Past by statistical
program. Variables larval and pupal duration, pupal weight of male and female had their
averages compared by Tukey test at 5% probability by Sisvar statistical program. The
supernatant i ngestion of bacterial isolates caused by the larvae larval mortality, reduction in
duration and pupal weights of male pupae and adults increase in deformation. The supernatant
of Epi 01, Epi 09, Epi 12, 08 and Nim 10 isolates when ingested by the larvae caused larval
mortality. When the caterpillars fed on the supernatant from isolated Epi 12 is reduced pupal
weight. The caterpillars that consumed maize leaves treated with supernatants of Nim05 and
Nim 10 isolates result in deformed adults.
Key words: alternative control armyworm corn, endophytic microorganisms.

SUMRIO
1 INTRODUO ..................................................................................................................... 8
2 OBJETIVOS ........................................................................................................................ 10
3 REVISO DE LITERATURA ........................................................................................... 11
3.1 Spodoptera frugiperda ....................................................................................................... 11
3.1.1 Importncia econmica ................................................................................................. 11
3.1.2 Biologia, descrio e dano ............................................................................................. 12
3.1.3 Mtodos de controle....................................................................................................... 13
3.1.3.1 Qumico ....................................................................................................................... 13
3.1.3.2 Transgnico ................................................................................................................. 14
3.1.3.3 Plantas inseticida ........................................................................................................ 15
3.2 Microrganismos associados a plantas ............................................................................. 18
4.1 Cultivo do milho ............................................................................................................... 20
4.2 Criao de Spodoptera frugiperda em dieta artificial .................................................... 20
4.3 Criao de Spodoptera frugiperda em folhas de milho .................................................. 21
4.4. Multiplicao dos isolados de bactria .......................................................................... 21
4.5 Toxicidade do sobrenadante de bactrias isoladas de Azadirachta indica a lagartas de
Spodoptera frugiperda ............................................................................................................. 22
5 RESULTADOS E DISCUSSO ........................................................................................ 24
6 CONCLUSO...................................................................................................................... 29
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ................................................................................. 30

8
1 INTRODUO

O cultivo do milho est amplamente distribudo em todos os continentes, mas tem

como um dos fatores que mais afeta sua produtividade os insetos-praga. Os insetos pragas de
destaque so a lagarta do cartucho, Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) (Lepidoptera:
Noctuidae), a broca-do-colo, Elasmopalmus lignosellus, (Zeller) (Lepidoptera: Pyralidae), o
curuquer dos capinzais, Mocis latipes (Guene) ( Coleoptera: Elateridae), a larva alfinete ou
vaquinha, Diabrotica speciosa (Germar) ( Coleoptera: Chrysomelidae), a lagarta rosca,
Agrotis ipsilon (Hufnagel) (Lepidoptera: Noctuidae) e a lagarta da espiga, Helicoverpa zea
(Boddie) (Lepidoptera: Noctuidae) (MENDES et al., 2009).
Spodoptera frugiperda destaca-se no Brasil como praga chave da cultura do
milho, ocorrendo em todas as regies produtoras, nos cultivos de vero e de segunda safra ou
safrinha (FIGUEREDO et al., 2006). A mdia percentual de prejuzos causados por essa
praga depende do estdio em que a planta se encontra na ocasio do ataque. Sendo assim, at
os 30 dias de desenvolvimento da cultura podem ser esperados prejuzos da ordem de 15%, j
no florescimento podem chegar a 34% (BARROS, 2012).
O controle da lagarta-do-cartucho, normalmente, tem sido feito atravs do uso de
produtos qumicos sintticos que, alm de aumentarem os custos de produo podem poluir o
ambiente e deixar resduos nos alimentos. As aplicaes de inseticidas realizadas de forma
incorreta causam impactos negativos sobre os inimigos naturais, polinizadores e organismos
no alvos, alm de resultarem no desenvolvimento da resistncia das pragas (BOGORNI e
VENDRAMIM, 2003). J existem exemplares de S. frugiperda no Brasil, resistentes ao milho
que expressa a protena Bt, que teoricamente deveria possuir alta resistncia a algumas
espcies de lepidpteros-praga, incluindo a lagarta-do-cartucho do milho (GLOBO RURAL,
2013).
Nos ltimos anos, os estudos sobre os mtodos alternativos de controle de pragas
tem aumentado muito. Um destes mtodos realizado atravs da utilizao de compostos a
base de produtos vegetais, as denominadas plantas inseticidas. Normalmente, dada
preferncia por plantas que sejam de fcil acesso ao produtor e de baixo custo, que causem
baixo impacto ao meio ambiente e risco sade humana (SAITO, 2004).
Azadirachta indica A. Juss, nim, (Meliaceae), planta oriunda da ndia, mas
amplamente distribuda por todos os continentes considerada uma das mais promissoras e
estudadas planta inseticida. Esta planta possui muitos componentes txicos aos insetos, como

9
a azadiractina que pode estar presente nas sementes, na casca e nas folhas. A Azadiractina o
principal composto responsvel pelos efeitos txicos aos insetos (MORDUE e NISBET,
2000; SCHMUTTERER, 1990). Os efeitos da azadiractina sobre os insetos incluem
repelncia, deterrncia alimentar, interrupo do crescimento, interferncia na metamorfose,
esterilidade e anormalidades anatmicas (MARTINEZ e EMDEN, 2001; MORDUE e
NISBET, 2000; SCHMUTTERER, 1990).
A eficincia de controle de algumas plantas sobre os insetos pode estar
relacionada aos metablitos secundrios produzidos por esses vegetais ou mesmo pela
presena de microrganismos associados (RADU e CHEAH, 2002). Estes organismos podem
estar presentes no interior ou sobre as plantas podendo englobar fungos e bactrias. Estas
ltimas esto presentes em maior quantidade de maneira endoftica e podem ser as
responsveis pela grande eficincia do nim no controle de insetos. Algumas bactrias
endofticas vem sendo utilizadas ao longo do tempo no controle biolgico sendo Bacillus
thuringiensis Berliner a mais utilizada (TESTER, 1992) o que indica que os resultados com
bactrias isoladas do nim podem ser promissores e devem ser estudados.
O sobrenadante constitudo de metablitos secundrios resultantes da
alimentao das colnias bacterianas, e pode conter diversas substncias com elevado
potencial inseticida.

10
2 OBJETIVO
Avaliar o efeito do sobrenadante de culturas bacteriana isoladas de folhas da
planta nim sobre a biologia de S. frugiperda.

11
3 REVISO DE LITERATURA

3.1 Spodoptera frugiperda

3.1.1 Importncia econmica

As espcies do gnero Spodoptera so amplamente distribudas no mundo e, das

30 descritas, metade so consideradas pragas de vrias culturas de importncia econmica
(POGUE, 2002). Uma das principais espcies S. frugiperda, tambm conhecida como a
lagarta-do-cartucho do milho ou lagarta militar. Este inseto originrio das regies tropicais e
subtropicais das Amricas, pode ser encontrado em regies de clima temperado do hemisfrio
norte-americano nos perodos de primavera e vero (SANTOS et al., 2004).
O primeiro surto de S. frugiperda ocorreu em 1899 nos EUA, quando foram
observadas lagartas atacando milho, feijo, arroz, sorgo e trigo, alm de aveia, algodo e
pastagens. No Brasil, o primeiro relato de surto ocorreu em 1964, quando foram constatados
danos severos em milho, arroz e pastagens (CRUZ, 1995). Este inseto polfago, tendo
preferncia por se alimentar de gramneas, mas, pode ser encontrado atacando cerca de 60
espcies diferentes de plantas, com destaque no milho, arroz, sorgo, algodo, cana-de-acar,
amendoim, feijo, tomate e batata (CRUZ et al., 1999; YU et al., 2003).
Spodoptera frugiperda se alimenta de todas as fases de crescimento das plantas de
milho, mas tem preferncia pelo cartucho das plantas jovens (GIOLO et al., 2002). Este inseto
capaz de causar grandes danos ao tecido vascular das folhas, reduzindo significativamente o
rendimento da planta (BROOKS et al., 2005). O perodo crtico de ataque desta praga em
milho ocorre na poca prxima ao florescimento. A lagarta-do-cartucho do milho pode em
perodos de seca, quando sua populao est alta no milho safrinha, modificar seu hbito
alimentar e cortar plntulas rente ao solo, de forma semelhante a lagarta-rosca (Agrotis
ipsylon Hufnagel). Nesta situao, a lagarta do cartucho passa o dia enrolada sob pequenos
gravetos ou pedras presentes no solo e prximos planta hospedeira, mas noite saem para se
alimentar da base do colmo das plantas de milho, corta-as rente ao solo. Alm disso, tambm
pode, em perodos de seca e quando o ciclo da cultura est no final, danificar as espigas de

12
milho, adquirindo hbito alimentar semelhante a lagarta-da-espiga (Helicoverpa zea Boddie)
(PAPA, 2006).

3.1.2 Biologia, descrio e dano

Spodoptera frugiperda um inseto holometbola, ou seja, possui metamorfose

completa, passando pelas fases de ovo, lagarta, pupa e adulto. O inseto adulto uma mariposa
que mede cerca de 35 mm de envergadura e 15 mm de comprimento do corpo (CRUZ et al.,
1999). Nesta fase, possuem hbito crepuscular, podendo ser vistos tambm ao longo do dia
(CARDOSO, 2004). Os machos se diferenciam das fmeas por possurem manchas mais
claras nas asas anteriores, sendo as posteriores de ambos os sexos de colorao clara
acinzentada (CRUZ et al., 1999).
Os adultos de S. frugiperda, sob condies de laboratrio e a 25C, apresentam
longevidade mdia 16 dias, perodo em que as fmeas passam ovipositando, aps um perodo
de pr-oviposio de trs dias (MURA e VIRLA, 2004). As fmeas depositam em mdia
1.000 ovos que so colocados, geralmente, nas folhas da planta de milho, mas tambm no
colmo (GASSEM, 1996). Os ovos de S. frugiperda so, normalmente, colocados em camadas
que compe as posturas de colorao verde clara, passando alaranjada aps algumas horas
da postura e, prximos ecloso, os ovos tornam-se escuros, devido a presena da cabea da
lagarta que pode ser vista atravs do crion (CARDOSO, 2004).
As lagartas de S. frugiperda de 1 nstar, medem cerca de 1,9 mm de
comprimento, j no ltimo podem medir cerca de 50 mm. As lagartas apresentam a parte
dorsal de colorao marrom acinzentada, a ventral esverdeada e a lateral com manchas de
colorao marrom-avermelhada. A durao desta fase de cerca de 12 a 30 dias, dependendo
da temperatura. As lagartas recm-eclodidas iniciam sua alimentao raspando uma das faces
da folha, deixando a epiderme do outro lado intacta. Lagartas maiores fazem furos na folha,
chegando a destruir completamente o cartucho do milho quando passam para o 4 e 5 nstares
(CRUZ, 1995).
A pupa de S. frugiperda, assim que se forma, apresenta colorao verde-clara e
tegumento transparente, mas depois de alguns minutos torna-se alaranjada e finalmente passa
para a colorao marrom-avermelhada. Quando o inseto est prximo emergncia a pupa
torna-se escura, quase preta. A pupa mede de 13 mm a 16 mm de comprimento e 4,5 mm de

13
dimetro (CRUZ, 1995). O perodo pupal de 8 dias no vero e 25 dias no inverno, aps o
qual ocorre a emergncia dos adultos (GALLO et al., 2002) e o ciclo de desenvolvimento da
espcie se reinicia.

3.1.3 Mtodos de controle

3.1.3.1 Qumico

O Brasil um dos lderes mundiais no consumo de agrotxicos (ABRASCO,

2012), por exemplo, em 2012 foram gastos no pas cerca de 1.400 toneladas de inseticidas
(MIURA et al., 2013). Entretanto, esse fato, no tem implicado em um controle eficiente de
pragas. Este fato pode ser constatado para o caso de S. frugiperda, que um inseto de difcil
controle, j que possuem o hbito de ovipositar na face inferior das folhas. Alm disso,
polfaga, alimentando-se de diversas plantas hospedeira sendo,inclusive,capaz de atacar
uniformemente a lavoura atravs de sua disperso e migrao para culturas vizinhas
(RIBEIRO et al., 2005).
Bogorni e Vendramim (2003) afirmaram que aplicaes com inseticidas
realizadas de forma incorreta causam impactos negativos sobre os inimigos naturais,
polinizadores e organismos no alvos, alm de resultarem no desenvolvimento de resistncia
das pragas e resduos txicos nos alimentos.
Silva (1999) avaliou a aplicao do inseticida metomil pulverizado quando as
plantas de milho estavam no incio do ataque de S. frugiperda. Os autores obtiveram para esta
situao 88,0% de eficincia de controle.
Viana et al. (2002) observaram que 17 dias aps a semeadura, alguns inseticidas
sistmicos possibilitaram o controle de S. frugiperda, quando as condies de suprimento de
gua estavam satisfatrias. Os autores constataram que, sob estresse hdrico, o tratamento das
sementes no foi eficiente, necessitando pulverizaes suplementares que foram dirigidas para
o local de ataque do inseto.
Segundo Camillo et al. (2005), o inseticida tiodicarbe foi o mais efetivo na
reduo do ataque de lagartas de S. frugiperda em plantas de milho,na fase inicial de
infestao.

14
De acordo com Figueiredo (2006), o tratamento de sementes de milho com
inseticidas pode prevenir o ataque de S. frugiperda quando as plantas forem recmgerminadas. Segundo este autor, existem diversos produtos qumicos registrados para o
controle desta praga, como o clorpirifs, que proporcionou menor dano e maior rendimento
das plantas, quando comparado s parcelas no tratadas.
Diante do excessivo uso de inseticida nas lavouras, principalmente de milho,
foram muitos os interesses em diminuir tal uso e estimular a implementao do manejo
integrado de pragas (FIGUEIREDO et al., 2006). Um dos grandes avanos no melhoramento
gentico foi a introduo de um gene da bactria Bacillus thuringiensis Berliner (Bt) em
plantas de milho, originando o milho geneticamente modificado, milho Bt,que apresenta alta
resistncia a algumas espcies de lepidpteros-praga (ARMSTRONG et al., 1995).
.
3.1.3.2 Milho transgnico

No Brasil, a aceitao da tecnologia Bt pelos produtores de milho foi bastante

rpida. A primeira safra de milho Bt no pas ocorreu em 2008/2009, com os cultivares
comerciais transformados MON810, que expressa a toxina Cry 1A(b). Aps trs anos essa
tecnologia j estava sendo utilizada em cerca de 44,4% das reas de plantio de milho de vero
e 75,0% de safrinha (MENDES et al., 2011).
Lynch et al. (1999) avaliaram a sobrevivncia de lagartas de S. frugiperda com
quatro dias de idade em diferentes hbridos de milho que expressavam a toxina Cry 1A(b). A
sobrevivncia deste inseto variou de 45,0% no material Btk 0906 a 54,0% no Btk 0907. Os
autores comentaram que a tecnologia que deveria estar matando as lagartas de S. frugiperda na
lavoura de milho transgnico no estava conseguido eliminar esta praga.
Fernandes et al. (2003) verificaram que, em condies de campo, as cultivares
comerciais DKB 806 YG e DKB 909 YG que expressam a toxina Cry 1A(b), apresentaram
nveis diferentes de infestao de S. frugiperda, de acordo com o estdio fenolgico da
cultura, a poca do ano e a localizao geogrfica do cultivo. Os autores concluram que, a
eficcia e a expresso da resistncia destas plantas so complexas e podem ser influenciadas
por fatores biticos e abiticos.
Dutton et al. (2005) verificaram a ocorrncia de menor mortalidade larval nos
ltimos nstares de Spodoptera littoralis (Biosduval), quando alimentadas com o milho N4640

15
Bt. Segundo estes autores, as lagartas nos primeiros nstares so mais sensveis s toxinas Bt,
em razo de alteraes na atividade especfica de proteases do suco intestinal.
Keller et al. (1996) demonstraram que o suco intestinal dos ltimos nstares de S.
littoralis tem alta atividade proteollica, sendo capaz de degradar completamente a protena
Cry 1C. Hardke et al. (2011) tambm observaram alta sobrevivncia larval de S. frugiperda,
cerca de 83%, quando as lagartas se alimentaram do hbrido DKC 6703 YGCB.
Mendes et al. (2011) verificaram que a biomassa de lagartas e pupas de S.
frugiperda alimentadas com milho Bt, que expressam a toxina Cry 1A(b), foram menores do
que aquelas criadas com o milho no Bt. A durao larval de S. frugiperda foram maiores nas
lagartas sobreviventes que foram alimentadas com milho Bt.
Na safra agrcola de 2012/2013, no estado do Paran e Distrito Federal, foram
constatadas a ocorrncia de S. frugiperda em nveis de dano econmico em lavouras de milho
que expressavam as protenas Bt (GLOBO RURAL, 2013).
Um outro mtodo alternativo no manejo de pragas so os compostos a base de
produtos vegetais obtidos de plantas denominadas inseticidas e que vem sendo muito
estudado para o controle de S. frugiperda. Estas substncias presentes nas espcies vegetais e
que apresentam atividade inseticida podem ser oriundas de produtos intermedirios ou finais
do metabolismo secundrio das plantas.

3.1.3.3 Plantas inseticidas

Os compostos a base de produtos vegetais so encontrados nas razes, folhas,

caules e sementes das plantas, podendo ser rotenonas, piretroides, alcaloides e terpenoides.
Elas podem interferir no metabolismo do inseto, causando deterrncia alimentar e diminuio
na oviposio, esterilizao, bloqueio do metabolismo e interferncia no desenvolvimento,
sem necessariamente causar a morte do inseto (LACHER, 2000; MEDEIROS, 1990).
Os produtos vegetais podem ser utilizados na prtica na forma de extratos aquosos
ou no, podendo ser uma alternativa ao uso dos inseticidas sintticos. Os produtos vegetais
apresentam baixa toxicidade e persistncia, fazendo com que os extratos vegetais estejam
associados a um menor impacto ambiental (COSTA et al., 2004). Seu uso associado a outras
prticas de controle de insetos pode contribuir para a reduo das doses e aplicaes de
inseticidas qumicos sintticos.

16
O objetivo principal do uso dos extratos vegetais a reduo do crescimento da
populao de insetos pragas. A mortalidade do inseto apenas um dos efeitos, podendo afetar
tambm a mdio ou a longo prazo a alimentao, desenvolvimento e reproduo da praga
(GALLO et al., 2002, TAGLIARI, 2007).
Machado et al. (2007) observaram que existem variaes na eficincia de controle
dos extratos de plantas sobre os insetos. Isso ocorre, principalmente, devido s diferenas nas
concentraes dos ingredientes ativos, alm do baixo efeito residual. Esta constatao tem
determinado a necessidade de haver vrias aplicaes desses produtos em perodos
relativamente curtos.
Vrios estudos j foram realizados com extratos botnicos sobre S. frugiperda.
Hernndez e Vendramim (1996) avaliaram extratos de caules de Cabralea canjerana (Vell.)
Mart. e Trichilia pallida (Swartz), de sementes de Cedrella fissilis (Vell.)e de folhas e caules
de Mellia azedarach(L.). Os autores observaram elevada mortalidade das lagartas, quando
estas foram alimentadas com dietas artificiais misturadas a estes extratos.
Hernndez e Vendramim (1997) verificaram que o peso das pupas de S.
frugiperda foi reduzido quando suas lagartas foram alimentadas com dietas artificiais
misturadas aos extratos de folhas de C. canjerana e Swieteniama crophylla (King).
Vendramim e Scampini (1997) tambm observaram diminuio no peso de pupas. Diferentes
autores relataram que o menor peso das pupas foi consequncia da inibio da alimentao ou
da menor eficincia de converso do alimento ingerido pelas lagartas (LOWERY e SMIRLE,
200; MARTINEZ e VAN EMDEN, 2001).
Coutinho (2010) ao avaliar o efeito do leo essencial e dos extratos aquosos de
capim citronela sobre S. frugiperda verificou que tanto o leo quanto o extrato reduziram a
longevidade dos adultos, bem como, a fecundidade e fertilidade das fmeas. Este mesmo
autor ainda concluiu que, em concentraes maiores que 0,001% o leo essencial do capim
citronela promoveu alta taxa de mortalidade larval, quando aplicado em folhas de algodo ou
em dieta artificial.
Santos (2012) ao avaliar diferentes espcies de plantas, observou que os extratos
de pinha, noni e algodo-de-seda apresentaram atividade inseticida sobre as lagartas de S.
frugiperda.
Azadirachta indica A. Juss.(nim), Meliaceae, uma planta inseticida originria da
ndia que tem ampla distribuio por todos os continentes, sendo a mais estudada para o
controle de insetos. Essa espcie vegetal tem demonstrado possuir acentuada atividade

17
inseticida, sendo, por isso, muito utilizada para o controle de diversas pragas, incluindo a
lagarta-do-cartucho (SCHUMUTTERER, 1988; VIANA e PRATES, 2003; 2005).
A azadiractina um dos principais componentes presentes na planta nim, sendo
encontrada em maior concentrao nas sementes e, em menor quantidade na casca e nas
folhas. Este composto o principal responsvel pelos efeitos txicos sobre os insetos
(MORDUE e NISBET, 2000). A azadiractina provoca efeitos de repelncia, deterrncia
alimentar, interrupo do crescimento, interferncia na metamorfose, esterilidade e
anormalidades anatmicas (MARTINEZ e EMDEN, 2001; MORDUE e NISBET, 2000). Os
produtos derivados do nim tem as vantagens de no serem txicos ao homem e serem
rapidamente degradados no solo e nas plantas (ISMAN, 2006).
Blaney et al. (1990) verificaram que 1 ppm de azadiractina reduziu a alimentao
de S. littoralis em dieta artificial, quando esta substncia foi aplicada sobre o substrato de
locomoo da lagarta. Os resultados encontrados por Adel e Sehnal (2000), para esta mesma
espcie de inseto demostraram que as misturas de leo de semente de nim, contendo de 0,1 a
10 ppm de azadiractina adicionados a dieta artificial causou interrupo e reduo na
alimentao do inseto e retardamento da sua ecdise. Alm disso, causou mortalidade larval e
pupal e esterilidade dos adultos emergidos. Resultados semelhantes foram encontrados por
Martinez e Emden (2001), quando avaliaram as concentraes de 0,01;0,05; 0,1; 0,5 e 1 ppm
de azadiractina adicionadas a dieta artificial da S. frugiperda.
Maredia et al. (1992) avaliaram o efeito do p (5g e 10 g) e do leo das sementes
(1 mL) de nim misturados a cada kilograma de dietas artificiais utilizadas na alimentao de
seis pragas do milho. Os autores observaram que tanto o p como o leo da semente de nim
reduziram a sobrevivncia e o desenvolvimento de H. zea, S. frugiperda, Diatraea
saccharalis (Fabricius) e D. grandiosella (Dyar). Perez et al. (1998) utilizaram trs inseticidas
derivados da semente de nim que foram avaliados para o controle de S. frugiperda presente
em campo, na cultura do milho e de Acanthoscelides obtectus (Say), infestando sementes
armazenadas de caupi. Os autores observaram que S. frugiperda s foi controlada a partir da
terceira ou quarta aplicao.
Viana e Prates (2003) verificaram que o extrato aquoso de nim aplicados em
folhas de milho atravs de imerso e tambm pulverizado sobre lagartas de S. frugiperda
causou mortalidade de 87,3% e 94,4%, respectivamente.
Ribeiro et al. (2012) avaliaram a ingesto de folhas de milho tratadas com
emulses de leo de nim por lagartas de S. frugiperda. Os autores verificaram elevada
mortalidade larval e alteraes fisiolgicas nas mesmas durante as mudanas de instares, em

18
todas as concentraes de leo de nim avaliadas. Nas concentraes acima de 4 ppm de
azadiractina ocorrem 100% de mortalidade

3.2 Microrganismos associados a plantas

Os microrganismos endofticos foram mencionados pela primeira vez no incio do

sculo XX, mas foi Bary (1866) quem primeiro delineou uma possvel diferena entre eles e
os fitopatgenos (AZEVEDO, 1998). Os endofticos so definidos como aqueles que vivem
no interior das plantas, tanto nas folhas, como nos ramos e razes, sem causarem nenhuma
formao externa, em pelo menos uma das fases do seu ciclo de vida (AZEVEDO et al.,
2002).
A maioria dos fungos endofiticos biotrfico mutualista (BACON et al., 1997),
sendo os mais comuns pertencentes aos gneros Neotyphodium, Balansia, Epichloe e Myrio
genospora. Entretanto, so as bactrias as mais frequentemente encontradas, quando so
feitos os isolamentos das plantas, sendo elas dos gneros Bacillus, Pseudomonas,
Enterobacter e Agrobacterium (HALLMANN et al., 1997; HALLMANN, 2001).
Potter (1909) foi o primeiro a citar os microrganismos epifticos, definindo-os
como aqueles que vivem e se multiplicam na superfcie das folhas, que segundo Lindow e
Brandl (2003) apresenta variaes de umidade, temperatura e nutrientes disponveis. Alm
disso, os autores comentam que em uma mesma planta, a diversidade de microrganismos
varia muito, mesmo quando se considera uma pequena poro da folha e o tempo e que so as
bactrias os habitantes mais abundantes dessa regio.
Os primeiros relatos avaliando a capacidade dos endfiticos para o controle de
insetos foi feito por Webber (1981). Ele observou que o fungo endoftico Phomopsis oblonga
(Desm) foi capaz de controlar o besouro Physocnemum brevilineum (Say), vetor do agente
causal Ceratocystis ulmi (Buisman). O controle se deu devido ao efeito de repelncia do
inseto aos compostos txicos produzidos pelo fungo endoftico, o que foi confirmado por
Claydon et al. (1985), que constataram que este fungo sintetizava metablitos secundrios os
quais afetavam as larvas do besouro. Gaynor e Hunt (1983) verificaram correlao entre as
plantas contaminadas por fungos e a reduo na frequncia de ataque do besouro Listronotus
bonariensis (Kuschel).

19
Os fungos endofticos conseguem repelir os insetos a partir da produo de
toxinas, levando o inseto a perder peso, diminuir o seu crescimento, reduzir o seu
desenvolvimento e at mesmo aumentar a taxa de mortalidade da praga (AZEVEDO et al.,
2000). Segundo Carroll (1988), o modo de ao de alguns fungos se baseia na capacidade de
tornar a planta desagradvel para vrios tipos de pragas, como pulges, besouros e
gafanhotos.
O fungo endoftico, Muscudor vitigenus, isolado do cip Paullinia paullinioides
(Radlk) presente na Amaznia peruana foi capaz de produzir naftaleno que atua como
repelente de insetos (DAISY et al., 2002). J o fungo endoftico Neotyphodium coenophialum
(Morgan-Jones e Gams) que infecta brotos da planta Festuca arundinacea (Schreber) reduziu
a populao de afdeos, afetando sua reproduo (BULTMAN e BELL, 2003).
Bultman e Conard (1998) observaram uma diminuio no peso e na sobrevivncia
da lagarta-do-cartucho, quando submetidas ao contato com os fungos endfiticos isolados de
galhos de azevm. Resultados semelhantes tambm foram observados por Bultman e Ganey
(1995).
Gramneas infectadas com fungos endofiticos apresentaram nveis mais elevados
do alcalide peramina, que estava ausente nos indivduos da mesma espcie de gramneas no
infectados com os endofticos (ROWAN e GAYNOR, 1986). Segundo Siegel et al. (1990),
este composto atua na defesa da planta, influenciando o desenvolvimento e a sobrevivncia de
insetos. Em certas gramneas, a presena de fungos endofticos reduz o ataque de S.
frugiperdae S. eridiana ( Stoll.) (BREEN, 1993).
Valicente et al. (2004) avaliaram lagartas de S. frugiperda com trs e seis dias de
idade atravs da exposio as toxinas de B. thuringiensis e observaram elevada mortalidade
larval. Os autores observaram que a mortalidade aumentou com o aumento do tempo de
exposio (24, 48 e 72 horas) das larvas toxina do patgeno.
Monnerat (2003) ao avaliar quinze estirpes de B. thuringiensis isoladas de plantas
de algodo sobre lagarta de S. frugiperda verificou que estes insetos tiveram seu ciclo de
desenvolvimento alterado e morreram aps cinco dias do contanto com a bactria.
Soares (2013) avaliou um total de 33 bactrias endofticas, epifticas e obtidas a
partir de extrato fermentado de folhas de nim. O autor verificou que a mortalidade larval de S.
frugiperda variou de 0,0% a 34,0%, quando as lagartas foram alimentadas com folhas de
milho tratadas com as suspenses bacterianas.

20
4 MATERIAL E MTODOS

Os experimentos foram realizados nos laboratrios de Controle Biolgico e

Bioatividade de Produtos Vegetais, Patologia de Insetos e de Fitopatologia da Universidade
Estadual de Montes Claros, UNIMONTES. Os insetos utilizados foram resultantes da criao
mantida no laboratrio de Controle Biolgico e Bioatividade de Produtos Vegetais. As
bactrias foram provenientes da bacterioteca do laboratrio de Fitopatologia desta
Universidade onde permanecem armazenadas, sob condies ambientais de laboratrio, em
gua mineral esterilizada. Essas bactrias foram isoladas de folhas de nim, A. indica, a partir
de extratos fermentados de nim (Nim) e da superfcie das folhas desta planta (epiftica - Epi).

4.1 Cultivo do milho

Plantas de milho da variedade AG 1051 foram cultivadas em canteiros localizados

na rea Experimental da UNIMONTES, Campus de Janaba, MG. Os canteiros foram
preparados atravs da capina, visando eliminao das ervas daninhas. A adubao foi feita
de acordo com a recomendao da 5 aproximao (ALVES et al. 1999), sendo as aplicaes
feitas no plantio, utilizando o formulado 4-14-8 e o restante parcelado em duas coberturas. A
irrigao foi feita duas vezes ao dia atravs de micro-asperso. Neste cultivo no foi utilizado
defensivos agrcolas.

4.2 Criao de Spodoptera frugiperda em dieta artificial

Lagartas recm-eclodidas de S. frugiperda, obtidas da criao de laboratrio,

foram transferidas para tubos de vidro de fundo chato (8,5 cm x 2,5 cm), contendo dieta
artificial de Greene et al. (1976). Essa dieta constituda de feijo, casena, germe de trigo,
protena de soja, levedo de cerveja (fontes proteica), cido ascrbico, cido srbico, nipagin,
soluo vitamnica, tetraciclina (antibitico), formaldedo (40%), gar e gua. Antes da
colocao da dieta artificial nos tubos, estes foram tamponados com algodo higrfobo e,

21
ento, esterilizados em estufa de secagem e esterilizao a 180C, por 4 horas. Os tubos
contendo dieta foram esterilizados externamente em cmara de fluxo atravs de luz germicida,
por 20 minutos. Aps esses procedimentos, as lagartas recm-eclodidas foram transferidas
para os tubos, onde permaneceram se alimentando da dieta artificial at a pupao.
As pupas obtidas foram retiradas dos tubos, limpas e sexadas, conforme Butt e
Cantu (1962). Para a obteno das posturas, cinco pupas machos e cinco fmeas foram
colocadas no interior de uma placa de Petri (2,0 cm de altura x 12,0 cm de dimetro), que
serviu de base para uma gaiola constituda por um tubo de PVC (15,0 cm de dimetro x 25,0
cm de altura). A extremidade superior dessa gaiola foi fechada com um tecido fino do tipo
voil, preso por um elstico. Os adultos foram alimentados com uma soluo de mel a 10% e
gua. A parte interna do tubo de PVC foi forrada com papel-toalha, que serviu de substrato
para postura. Diariamente, enquanto as fmeas estavam ovipositando, os ovos foram retirados,
acondicionados em placas de Petri, que foram tampadas e mantidas em laboratrio sob
condies controladas a 25 1 C, UR de 70 10 % e fotofase de 14 horas. Aps a ecloso,
as lagartas foram transferidas para a dieta artificial, reiniciando o ciclo.

4.3 Criao de Spodoptera frugiperda em folhas de milho

Lagartas recm-eclodidas de S. frugiperda, obtidas da criao de laboratrio,

foram transferidas para placas de Petri (2,0 cm de altura x 12,0 cm de dimetro), forradas com
papel filtro umedecido e alimentadas com folhas de milho tenras, obtidas da regio do
cartucho. As lagartas permaneceram juntas se alimentando nestas condies por 10 dias,
quando foram individualizadas em tubos de vidro. Nos tubos as lagartas foram alimentadas
com folhas de milho at a pupao. As pupas foram retiradas dos tubos, limpas e sexadas,
conforme Butt e Cantu (1962). A montagem das gaiolas dos adultos foi feita conforme
especificado no item 4.2, visando a obteno de posturas que foram colocadas em placas de
Petri para a ecloso das lagartas e criao das mesmas, reiniciando o ciclo.

22
4.4 Multiplicao dos isolados bacterianos

Os isolados das bactrias Epi 01, Epi 09, Nim 10, Epi 12, Nim 08 e Nim 05 foram
retirados da bacterioteca e repicados em meio T.S.A (Tryptic Soy Agar), que foi previamente
esterilizado em autoclave a 120 C, durante 20 minutos. Em seguida o meio esterilizado foi
levado a cmara de fluxo laminar para ser vertido em placas de Petri (1,5 cm x 9,0 cm). Aps
a secagem do meio nas placas os isolados bacterianos foram repicados atravs da
transferncia de uma pequena alquota (bactria+gua mineral), utilizando uma ala de
platina. As placas contendo as bactrias foram incubadas sob condies de laboratrio, pelo
perodo de 48 horas.
Para obteno das suspenses bacterianas adicionaram-se em cada placas de Petri
contendo as colnias bacterianas multiplicadas, 3 mL de uma soluo de NaCl (0,85 %)
estril e com o auxlio de uma ala de Drigalski. As suspenses bacterianas foram colocadas
em tubos de plstico, para serem levadas a centrifuga, onde permaneceram por 15 minutos em
rotao de 10.000 rpm. Transcorrido esse perodo, os tubos foram retirados da centrfuga e o
sobrenadante foi vertido em um novo tubo, sendo separado das bactrias. O sobrenadante foi
levado para cmara de fluxo laminar e utilizado nos experimentos.

4.5 Efeitos dos sobrenadantes bacterianos sobre Spodoptera frugiperda

Nos sobrenadantes bacterianos obtidos aps a centrifugao foram imersos

pedaos de folhas de milho que foram cortados (2,0 x 2,0 cm)e oferecidos as lagartas recmeclodidas de S. frugiperda conforme descrito no item 4.3. Para isso, folhas novas retiradas do
cartucho do milho foram coletadas dos canteiros, levadas ao laboratrio, lavadas, secas e,
ento cortadas. At o momento de serem utilizados, os frascos contendo os sobrenadantes
permaneceram sob constante agitao e os pedaos de folha foram imersos por cerca de 20
segundos. Aps a imerso, os discos foram deixados para secar sobre a mesa do laboratrio,
que foi forrada com papel toalha. Os discos tratados e secos foram transferidos para tubos de
vidro (2,5 cm x 8,5 cm),que foram previamente esterilizados e tampados com algodo
higrgrafo e, contendo uma pequena camada de gar-gua no fundo, para manuteno da
umidade da folha. Sobre a folha foi transferida uma lagarta recm-eclodida de S. frugiperda e

23
aps 72 horas foi substituda por uma nova folha no tratada. Esse procedimento durou at a
pupao.
O experimento foi realizado em delineamento experimental inteiramente
casualizado, constando de seis tratamentos (sobrenadantes) e uma testemunha (folha imersa
em gua). Cada tratamento foi constitudo por 50 repeties composta por uma lagarta recmeclodida de S. frugiperda.
Foram avaliadas as variveis mortalidade larval e pupal, durao larval e pupal,
peso de pupas macho e fmea, obtido 24 horas aps a pupao e deformao de pupas e
adultos e adultos viveis. A sexagem das pupas foi realizada conforme descrito por Butt e
Cantu (1962).
Os resultados foram submetidos a anlise de varincia e as mdias das variveis
mortalidade larval, mortalidade pupal, deformao de pupas e adultos e adultos viveis foram
comparados pelo teste de Kruskal-Wallis. As variveis durao da fase larval e pupal e peso
de pupas tiveram suas mdias comparadas pelo teste Tukey, a 5% de probabilidade. Para as
analises estatsticas foram utilizados os programas estatsticos Past (HAMMER, 2001) e
Sisvar, verso 5.3 (FERREIRA, 2010).

24
5 RESULTADOS E DISCUSSO

A ingesto de folhas de milho tratadas com o sobrenadante bacteriano por lagartas

recm-eclodidas de S. frugiperda afetou significativamente o desenvolvimento do inseto
(Tabelas 1 e 2). A mortalidade larval de S. frugiperda foi uma das variveis afetadas pela
ingesto do sobrenadante pelas lagartas (Tabela 1). Os sobrenadantes provenientes das
suspenses bacterianas dos isolados Epi 01 e Epi 12 provocaram mortalidade larval de 38,0%
e 34,0%, respectivamente, que foram superiores a testemunha, e aos isolados Nim 05 e Nim
10. J, os isolados Epi 09 e Nim 08 causaram valores de mortalidades intermedirios (26,5% e
22,4%, respectivamente) aos isolados Epi 01 e Epi 12 e a testemunha e ao Nim 05. Para esta
varivel o isolado Nim 10 provocou valor de mortalidade semelhante aos isolados Epi 09 e
Nim 08.
Os isolados avaliados neste trabalho j foram estudados por Soares (2013), que
tambm trabalhou com S. frugiperda, mas esta estava com 10 dias de idade. Alm disso, o
autor avaliou a ingesto de folhas de milho tratadas com a suspenso bacteriana mais o
sobrenadante, no tendo sido realizada a centrifugao. Em seu trabalho o autor observou
mortalidade larval mxima de 34% causada pelo isolado Nim 05, e o isolado Epi 12 foi
semelhante a este causando 28% de mortalidade. Neste trabalho o sobrenadante do isolado
Nim 05 provocou somente 14,3% de mortalidade (Tabela 1) enquanto que o Epi 12 causou
34% de mortalidade. Isso indica que a bactria Nim 05 patognica as lagartas de S.
frugiperda, inclusive quando estas estavam com maior idade e alimentadas com dieta artificial
contendo antibitico, fator que pode ter reduzido a eficincia da bactria. Assim, a utilizao
associada da clula bacteriana com o sobrenadante do microrganismo pode promover
resultados promissores para o controle de S. frugiperda. .
Os valores de mortalidade encontrados neste experimento foram relativamente
baixos ao que se espera para um microrganismo entomopatognico. Entretanto, neste caso, foi
utilizado somente o sobrenadante bacteriano, resultado da centrifugao da suspenso das
clulas bacterianas, que possivelmente possuam substncias txicas em sua composio, mas
carecem da presena das bactrias. Como observado para o isolado Nim 05, a presena da
bactria mostrou-se necessria para elevar o potencial patognico do microrganismo. Alm
disso, para a identificao de agentes de biocontrole h a necessidade de uma amostragem
bastante ampla, o que no ocorreu neste trabalho. Valicente (2008) ao analisar cerca de 4.700
isolados de B. thuriginensis sobre lagartas de S. frugiperda com 2 dias de idade relatou que

25
apenas 3,0% deles causaram mortalidade acima de 75,0%. Polanczyk (2004) avaliou 83
isolados de B. thuringiensis sobre lagartas de 2 nstar de S. frugiperda e selecionaram
somente os isolados ESALQ 3.7 e ESALQ 8.7, que causaram mortalidade acima de 75%.
Perotoni (2010) constatou que o sobrenadante obtido dos isolados bacterianos
2AA e 627AA associados a condios de M. anisopliae provocaram reduo na taxa de
sobrevivncia do percevejo Dysdercus peruvianus Gurin-Mneville

TABELA 1
Durao e mortalidade larval e pupal de Spodoptera frugiperda alimentadas, quando recmeclodidas, com folhas de milho tratadas com os sobrenadantes obtidos da centrifugao de
suspenses de bactrias isoladas de plantas de nim, Azadirachta indica.
Larvas
Durao1

Mortalidade2

Durao1

Mortalidade2

(Dias)

(%)

(Dias)

(%)

Testemunha

16,9 a

6,1c

9,4 b

0,0 a

Epi 01

17,5 a

38,0 a

8,3a

6,5 a

Epi 09

17,1 a

26,5ab

8,4 ab

2,8 a

Epi 12

17,7 a

34,0 a

9,4 b

3,0 a

Nim 05

17,2 a

14,3bc

8,7 ab

2,4 a

Nim 08

17,9 a

22,4ab

8,7 ab

7,9 a

Nim 10

17,6 a

20,0b

9,3 ab

5,1 a

CV

10,26

18,91

Tratamentos

1
2

Pupas

Medias seguidas de mesma letra, na coluna, no diferem entre si, pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade.
Medias seguidas de mesma letra, na coluna, no diferem entre si, pelo teste de Kruskal-Wallis, a 5% de

probabilidade.

A durao larval de S. frugiperda no foi afetada pela ingesto de folhas de milho

tratadas com os sobrenadantes bacterianos, resultando em valores semelhantes ao obtido para
testemunha (Tabela 1).
Soares (2013) ao avaliar isolados bacterianos do nim sobre S. frugiperda verificou
que alguns deles provocaram alongamento ou reduo da durao larval.

26
A durao pupal foi afetada de maneira significativa pela ingesto de folhas de
milho tratadas com os sobrenadantes bacterianos pelas lagartas (Tabela 1). Sendo que o
isolado Epi 01 causou uma reduo na durao desta fase.
Estes resultados diferem dos encontrados por Soares (2013) que ao avaliar o efeito
de 33 bactrias isoladas do nim sobre S. frugiperda, constatou que 18 destas bactrias
causaram alongamento na durao pupal.
Valicente e Fonseca (2004) verificaram que a ingesto de B. thuringiensis no
afetou a durao pupal de S. frugiperda, independente da concentrao utilizada e do tempo
de exposio.
A mortalidade pupal no foi afetada significativamente pela ingesto de folhas de
milho tratadas com os sobrenadantes (Tabela 1).
Resultados similares foram encontrados por Valicente e Fonseca (2004) que ao
avaliarem isolados de B. Thuringiensis var. tolworthi sobre lagartas de 1 nstar de S.
frugiperda no observaram mortalidade significativa de pupas. No entanto, Soares (2013) ao
avaliar os mesmos isolados utilizados neste trabalho sobre lagartas de 10 dias de S.
frugiperda, verificou que 42% destes isolados causaram significativa mortalidade de pupas. A
diferena entre os resultados obtidos neste trabalho e os de Soares (2013) pode estar
relacionado a suspenso avaliada por este autor ser composta de clulas bacterianas
juntamente com o sobrenadante. Sendo que est elevada mortalidade possa ter sido causada,
principalmente, pelas bactrias.
O peso de pupas macho, mas no os das fmeas foi afetado significativamente
pela ingesto de folhas de milho tratadas com sobrenadante bacteriano, por lagartas recmeclodidas de S. frugiperda (Tabela 2). Somente o sobrenadante do isolado Epi 12 causou
reduo de 18% no peso das pupas macho, que foi diferente da testemunha e do isolado Nim
08. Os demais isolados avaliados proporcionaram pesos de pupas que foram intermedirios
aos isolados Epi 12 e a testemunha e o isolado Nim 08.
A reduo no valor do peso das pupas pode levar a emergncia de adultos
menores e, possivelmente, menos fecundos e frteis, podendo at influenciar a longevidade
dos adultos.
Polanczyk e Alves (2005) observaram que 54,5 e 42,4 % dos isolados avaliados
de B. thuringiensis reduziram o peso de pupas machos e fmeas de S. frugiperda em
aproximadamente 23,9% e 29,5%, respectivamente. Soares (2013) avaliando isolados
bacterianos do nim observou que os isolados Epi 09, Epi 12 e Nim 05causaram reduo no
peso das pupas macho.

27

TABELA 2
Peso de pupas macho e fmea e deformao de pupas e adultos de Spodoptera frugiperda,
provenientes de lagartas alimentadas, quando recm-eclodidas, com folhas de milho tratadas
com os sobrenadantes obtidos da centrifugao de suspenses de bactrias isoladas de plantas
de nim, Azadirachta indica.

Tratamentos

Deformao2 (%)

Adultos viveis2

Macho

Fmea

Pupas

Adultos

(%)

Testemunha

188,1 b

181,8 a

0,0 a

2,2 b

10,0 a

Epi 01

174,9 ab

180,5 a

0,0 a

6,9ab

42,0 b

Epi 09

172,7 ab

175,7 a

0,0 a

11,4ab

36,0 ab

Epi 12

153,8 a

164,7 a

3,0 a

6,3ab

38,0 b

Nim 05

178,9 ab

164,1 a

2,4 a

14,6 a

28,0 ab

Nim 08

189,1 b

186,3 a

0,0 a

11,8ab

32,0 ab

Nim 10

182,3 ab

166,9 a

2,6 a

15,8 a

32,0 ab

16,32

15,34

CV
1

Peso de pupas1 (mg)

Medias seguidas de mesma letra, na coluna, no diferem entre si pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade.
Medias seguidas de mesma letra, na coluna, no diferem entre si pelo teste de Kruskal-Wallis, a 5% de

probabilidade.

Ramachandram et al. (1993) avaliaram as mariposas Choristoneura fumiferana

(Clemens) e Hyphantria cunea (Drury) aps ingesto de isolados bacterianos e, no
verificaram alterao no peso de pupas. Valicente e Fonseca (2004) no constataram
interferncia de B. thuringiensis a ponto de causar deformao de adultos de S. frugiperda.
Soares (2013) observou que a ingesto de isolados bacterianos da planta nim causou reduo
e aumento do peso de pupas de S. frugiperda. Os resultados observados por estes autores em
seus trabalhos indicam que os efeitos sobre o peso pupal pode variar em decorrncia do inseto
avaliado e do microrganismo utilizado.
A ingesto de folhas tratadas com o sobrenadante bacteriano por lagartas de S.
frugiperda provocou significativa deformao de adultos (Tabela 2). Somente os
sobrenadantes dos isolados Nim 05 e Nim 10 provocaram deformaes (14,6% e 15,8%,
respectivamente) nos adultos de S. frugiperda, valores que foram superiores a testemunha. Os

28
demais tratamentos causaram deformaes de adultos em valores que foram intermedirios a
testemunha e aos isolados Nim 05 e Nim 10.
A ocorrncia de deformao nos adultos causada pela ingesto de folhas tratadas
pelas lagartas um fator importante de ser observado, j que reduz o nmero de adultos
viveis da populao. Os adultos deformados, na maioria das vezes, so incapazes de se
reproduzir.
Soares (2013) ao avaliar isolados bacterianos da planta nim verificou que o
isolado Epi 01, Nim 08 e Nim 10 provocaram deformaes nos adultos da ordem de 17,0% a
31,0%. Salama et al. (1981) demonstraram a ocorrncia de deformao em adultos de S.
littoralis, S. exgua e H. armigera.
A varivel deformao de pupas no foi afetada significativamente pela ingesto
de folhas de milho tratadas pelas lagartas de S. frugiperda (Tabela 2).
Queiroz (2013) ao avaliar lagartas de S. frugiperda alimentadas com folhas de
milho tratadas com os isolados bacterianos verificou que o Epi 05, Nim 09, Nim 12 e Nim 14
causaram significativa deformao de pupas.
A porcentagem de adultos viveis foi afetada pelos tratamentos, sendo que os
isolados Epi 12 e Epi causaram elevada reduo diferindo da testemunha.
Resultados semelhantes foram encontrados por Soares (2013) que avaliou os
mesmos isolados bacterianos utilizados neste trabalho sobre lagarta de S.frugiperda e
verificou que os isolados Epi 01 e Epi 12 causaram reduo na quantidade de adultos viveis
diferindo da testemunha.
Neste trabalho avaliou-se apenas seis isolados visando testar possveis efeitos
associados ao sobrenadante do cultivo bacteriano. Os resultados observados neste trabalho
apesar de no terem sido expressivos ao ponto de viabilizar uma seleo podem demonstrar
que o metabolismo microbiano no induzido pela presena da praga pode influenciar na
biologia da mesma. A compreenso desta pode conduzir um novo olhar para a busca de
mecanismos envolvidos nos isolados de screening. Alm disso, a interpretao do efeito de
extratos sobre insetos deve ser realizado com cautela, pois, possvel que o efeito observado
possa estar relacionado a carga microbiana associada a este bem com os seus efeitos indiretos
do metabolismo microbiano.

29
6 CONCLUSO
O sobrenadante de culturas bacterianas possui efeito txico sobre a biologia de S.
frugiperda.

30
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ABRASCO, Associao Brasileira de Sade Coletiva. DOSSI ABRASCO Uma alerta

sobre o impactos dos Agrotxicos na Sade ABRASCO, Rio de Janeiro, abril de 2012, 1
parte. 98p. Disponvel em:
http://www.abrasco.org.br/UserFiles/File/ABRASCODIVULGA/2012/DossieAGT.pdf.
Acesso em: 25/12/2013.
ARMSTRONG, C.L. et al. Field evaluation of european com borer control in progeny of 173
transgenic com events expressing an insecticidal protein from Bacillus thuringiensis. Crop
Science, v.35, p.550-557, 1995.
ADEL, M.M.; SEHNAL, F. Azadirachtin potentiates the actionof ecdsysteroid agonist RH2485 in Spodoptera littoralis. Journal of Insect Physiology, , v.46, p.267-274, 2000.
ALVES, V. M. C. et al. Milho. In: RIBEIRO, A.C.; GUIMARAES, P.T.G.; ALVAREZ V.,
V.H. (Eds.). Recomendao para o uso de corretivos e fertilizantes em Minas Gerais: 5.
aproximao. Viosa: Comisso de Fertilidade do Solo do Estado de Minas Gerais, 1999. p.
314-316.
AZEVEDO, J. L. et al. Microrganismos endofticos e seu papel em plantas tropicais. In: Eds.
SERAFINI, L. A.; BARROS, N. M.; AZEVEDO, J. L. (Eds ). Biotecnologia: avano na
agricultura e na agroindstria. Caxias do Sul: EDUCS, 2002. p. 233-269.
AZEVEDO, J. L. Biodiversidade microbiana e potencial biotecnolgico. In: MELO, I. S.;
AZEVEDO, J. L.(Eds.). Ecologia Microbiana. EMBRAPA-CNPMA, 1998. p.117-137.
AZEVEDO, J. L. et al. Endophytic microorganisms: a review on insect control and recent
advances on tropical plants. EJB Electronic Journal of Biotechnology, v. 3 n. 1, p. 40-65,
2000.
BACON, C.W.; RICHARDSON, M.D.; WHITE JR. J.F. Modification and uses of
endophytic-enhanced turf grasses: a role for molecular technology. Crop Science, v.37,
p.1415-1425, 1997.
BARROS, R. Pragas do milho. Tecnologia e produo: soja e milho 2011/2012. Disponvel
em: http://www.fundacaoms.org.br/uploads/publicacoes/14%20%20pragas%20do%20milho_274738388.pdf. Acesso em: 20/03/2014.
BLANEY, W.M. et al. Antifeedant effects of azadirachtin and structurally related compounds
on lepidopterous larvae. Entomologia Experimentalis et Applicata, , v.55, p.149-160, 1990.

31
BOGORNI, P. C.; VENDRAMIM, J. D. Bioatividade de extratos aquosos de Trichilia ssp.
Sobre Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) em milho. Neotropical
Entomology, v. 32, n. 4, p. 665-669, 2003.
BREEN, J. P. Enhanced resistance to fall armyworm (Lepidoptera: Noctuidae) in
Acremonium endophyte-infected turf grasses. Journal of Economic Entomology. v. 86, p.
621-629, 1993.
BROOKS, T.D.; et al. Quantitative trait loci conferring resistance to fall armywormam and
southwestern corn borer leaf feeding damage. Crop Science, n.45, p.2430-2434, 2005.
BULTMAN, T.L.; BELL, G.D. Interaction between fungal endophytes and environmental
stressors influences plant resistance to insects. Oikos, v. 103, p. 182190, 2003.
BULTMAN, T.L.; CONARD, N.J.. Effects of endophytic fungus, nutrient level and plant
damage on performance of fall armyworm (Lepidoptera: Noctuidae). Environmental
Entomology, , 1998.
BUTT, B. A.; CANTU, F. Sex determination of lepidopterous pupae. Washington: USDA,
1962. 7 p.
CAMILLO, M. F. et al. Uso do tratamento de sementes na cultura do milho para controle de
Spodoptera frugiperda(J. E. Smith). Ecossistema, , v. 30, p. 55-59, 2005.
CARDOSO, A. M. Manejo de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1797) (Lepidoptera:
Noctuidae) em milho, Zea mays L.: bases para avaliao populacional e controle biolgico
utilizando o parasitide de ovos Trichogramma atopovirilia Oatman e Platner, 1983
(Hymenoptera: Trichogrammatidae). 2004. 112 p. Tese (Doutorado em Entomologia) Universidade de So Paulo, Ribeiro Preto, 2004.
CLAYDON, N.; GROVE, J. F.; POPLE, M. Elm bark beetle boring and feeding deterrents
from Phomopsis oblonga. Phytochemistry, v. 24, p. 937-943, 1985.
COSTA, E. L. N.; SILVA, R. F. P.; FIUZA, L. M. Efeitos, aplicaes e limitaes de extratos
de plantas inseticidas. Acta Biolgica Leopoldensia, v. 26, n. 2, p. 173-185, 2004.
COUTINHO, C. R. Efeito da citronela (Cymbopogon nardus) na biologia da lagarta do
cartucho do milho (Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1797)). 2010. 46 p. Monografia
(Graduao em Agronomia) -Universidade Estadual de Montes Claros, Janaba, 2010.

32
CRUZ, I. A lagarta-do-cartucho na cultura do milho. Sete Lagoas: EMBRAPA, Centro
Nacional de Pesquisa de Milho e Sorgo, 1995. 45 p.
CARROLL, G. C. Fungal Endophytes in stems and leaves: from latent pathogen to
mutualistic symbiotic. Ecology, v. 69, p. 2-9, 1988.
CRUZ, I.; FIGUEIREDO, M. de L. C.; MATOSO, M. J. Controle biolgico de Spodoptera
frugiperda utilizando o parasitoide de ovos Trichogramma. Sete Lagoas: Embrapa Milho e
Sorgo, 1999. 40 p.
DAISY, B. H. et al. Naphthalene, an insect repellent, is produced. Biochemical
characteristicson insecticide resistance in the fallarmy worm, Spodoptera frugiperda
(J.E.Smith). Pesticide Biochemistry and Physiology, San Diego, v. 77, n. 1, p. 1-11, 2003.
DUTTON, A.; ROMEIS, J.; BIGLER, F. Effects of Bt maize expressing Cry1Ab and Bt spray
on Spodoptera littoralis.Entomologia Experimentalis Applicata, v.114, p.161-169, 2005.
FERREIRA, D. F. SISVAR: Sistema de anlise de varincia. Verso 5.3. Lavras-MG: UFLA,
2010.
FERNANDES, O.D. et al. Efeito do milho geneticamente modificado MON810 sobre a
lagarta-do-cartucho Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae).
Revista Brasileira de Milho e Sorgo, v.2, p.25-35, 2003.
FIGUEIREDO, M. L. C., PENTEADO-DIAS, A. M., CRUZ, I. Efeito do inseticida
chlorpyrifos e sua interao com inimigos naturais na supresso de Spodoptera frugiperda (J.
E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae) na cultura do milho. Revista Brasileira de Milho e
Sorgo, v. 5, n. 3, p. 325-339, 2006.
FIGUEIREDO, M. L. C.; MARTINS-DIAS, A. M. P.; CRUZ, I. Efeito do inseticida
clorpyrifos e sua interao com inimigos naturais na supresso de Spodoptera frugiperda (J.
E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae) na cultura do milho. Revista Brasileira de Milho e
Sorgo, v. 5, n. 3, p. 325-339, 2006.
GALLO, D. et al. Entomologia agrcola, Piracicaba: FEALQ, 2002. 920 p.
GASSEN, D.N. Manejo de pragas associadas cultura milho. Passo Fundo: Aldeia Norte,
1996. Cap.5. p.85-104.

33
GAYNOR, D. L.; HUNT, W.F. The relationship between nitrogen supply, endophytic fungus
and Argentine stem well resistance in ryegrass. Proceedings of the New Zealand Grassland
Association, v. 44, p. 257-263, 1983.
GIOLO, F. P. et al. Parmetros biolgicos de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1979) (Lep.:
Noctuidae) oriundas de diferentes localidades e hospedeiros. Revista Brasileira de
Agrocincia, v. 8 n.3, p. 219-224, 2002.
GLOBO RURAL. Lagartas atacam plantaes de milho transgnico no Paran e no DF. Disponvel em
http://g1.globo.com/economia/agronegocios/noticia/2013/03/lagartas-atacam-plantacoesde-milho-transgenico-no-parana-e-no-df.html. Acesso em: 30/01/14.
GREENE, G. L.; LEPPLA, N. C.; DICKERSON, W. A. Velvetbean caterpillar: a rearing
procedure and artificial medium. Journal of Economic Entomology, v. 69, p. 488-497, 1976.
HALLMANN, J. Plant interactions with endophytic bacteria. In: JEGER, M.J.; SPENCE, N.J.
(Eds.) Biotic interactions in plant-pathogen associations. London. CAB International.
2001. pp. 87-119.
HALLMANN, J.; et al. Bacterial endophytes in agricultural crops. Canadian Journal
Microbiology 1997.
HAMMER, O., HARPER, D.A.T., RYAN, P.D. 2001. PAST: Paleontological statistics
software package for education and data analysis. Palaeontologia Electronica 4(1): 9pp.
http://palaeo-electronica.org/2001_1/past/issue1_01.htm. Acesso em: 28/05/2014
HARDKE, J.T.; LEONARD et al. Damage and survivorship of fall armyworm (Lepidoptera:
Noctuidae) on transgenic field corn expressing Bacillus thuringiensis Cry proteins. Crop
Protection, v.30, p.168-172, 2011.
HERNNDEZ, C. R.; VENDRAMIM, J. D. Avaliao da bioatividade de extratos aquosos
de Meliaceae sobre Spodoptera frugiperda. Revista de Agricultura, v. 72, p. 305-318, 1997.
HERNNDEZ, C. R.; VENDRAMIM, J. D. Toxicidad de extractos acuosos de Meliaceae em
Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae). Manejo Integrado de Plagas, v. 42, p.1422, 1996.
ISMAN, M.B. Botanical insecticides, deterrents, and repellents in modern agriculture and an
increasingly regulated world. Annual Review of Entomology, v.51, pp.45-66. 2006.

34
KELLER, M. et al. Digestion of delta-endotoxin by gut proteases may explain reduced
sensitivity of advanced instar larvae of Spodoptera littoralis to Cry1C. Insect Biochemistry
and Molecular Biology, v.26, p.365-373, 1996.
LIMA, J.F.M. et al.Ao de inseticidas naturais no controle de Spodoptera frugiperda (J.E.
Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae) em milho cultivado em agroecossistema de vrzea.
Cincia Rural, v.38, n.3, p.607- 613, 2008.
LINDOW, S. E.; BRANDL, M.T. Microbiology of the Phyllosphere. Applied and
Environmental Microbiology, v. 69, p. 1975-1883, 2003.
LOWERY, D.T.; SMIRLE, M. J. Toxicity of insecticides to oblique and ed leafroller,
Choristoneura rosaceana (Lepidoptera: Tortricidae), larvae and adults exposed previously to
neem seed oil. Entomologia Experimentalis et Applicata, v. 95, p. 201-207, 2000.
LYNCH, R.E.; et al.Evaluation of transgenic sweet corn hybrids expressing Cry1A (b) toxin
for resistance to corn earworm and fall armyworm (Lepidoptera: Noctuidae). Journal of
Economic Entomology, v.92, p.246-252, 1999.
MACHADO, L. A.; SILVA, V. B.; OLIVEIRA, M. M. Palestra: Uso de extratos vegetais no
controle de pragas em horticultura. Arquivos do Instituto Biolgico, v. 69, n. 2, p. 103-106,
2007.
MAREDIA, K.M.; SEGURA, O.L.; MIHM, J.A. Effects of neem, Azadirachta indica, on six
species of maize insect pests. Tropical Pest Management, v.38, p.190-195, 1992.
MARTINEZ, S. S.; VAN EMDEN, H. F. Growth disruption, abnormalities and mortality of
Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae). Neotropical Entomology, v. 30, p. 113-125,
2001.
MEDEIROS, A. R. M. Alelopatia: importncia e suas aplicaes. Horti Sul, v. 1, n. 3, p. 2732, 1990.
MENDES, S. M. et al. Respostas da lagarta-do-cartucho a milho geneticamente modificado
expressando a toxina Cry 1 (b) Pesquisa Agropecuria Brasileira, v. 46, n. 3, 2011.

35
MENDES, S. M.; WAQUIL, J. M.; VIANA, P. A. Pragas: manejo integrado de pragas em
lavouras plantadas com milho geneticamente modificado com gene bt (Milho Bt). In: CRUZ,
J. C. (Ed.). Cultivo do milho. 5. ed. Sete Lagoas: Embrapa Milho e Sorgo, 2009. (Embrapa
Milho e Sorgo. Sistemas de produo, 1).Disponvel em:
http://www.cnpms.embrapa.br/publicacoes/milho_5_ed/milhoBT.htm>. Acesso em:
14/02/2014.
MIURA, M.; TSUNECHIRO, A.; FERREIRA. C. R. R. P. T. Gastos com inseticidas,
fungicidas e herbicidas na cultura do milho safrinha, Brasil, 2008-2012. In: SEMINRIO
NACIONAL. Dourados, MS. 2013. Anais on line SEMINRIO NACIONAL.
MORDUE, A. J.; NISBET, A. J. Azadirachtin from the neem tree Azadirachta indica: its
action against insects. Anais da Sociedade Entomolgica do Brasil, Anais da Sociedade
Entomolgica Brasileira. v.29, p.615-632, 2000.
MURA, G.; VIRLA, E. Population parameters of Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lep.:
Noctuidae) fed on corn and two predominant grass in Tucuman (Argentina). Acta Zoolgica
Mexicana, 2004.
PAPA, G.; MOSCA, H.R. Danos comparados da lagarta-da-maa, Heliothis virescens e
lagarta militar, Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae), em algodoeiro. In:
CONGRESSO BRASILEIRO DE ENTOMOLOGIA, 21., 2006, Recife. Anais on line:
CONGRESSO BRASILEIRO DE ENTOMOLOGIA...
PEREZ, G.; et al. Efecto de trs plaguicidas naturales derivados del nim sobre el combate de
plagas en col y maiz en el campo y en Vigna unguiculata em almacenamiento. AgronomiaCostarricense, Cienfuegos, v.21, p.259-266, 1998.
PEROTONI, G. Seleo de bactrias ambientais para o controle biolgico de Dysdecus
peruvianus, associado ao fungo Metarhizium anisopliae. 2010. 58p. Trabalho de Concluso
de Curso (Graduao em Cincias Biolgicas) Universidade Federal do Rio Grande do Sul,
Porto Alegre, 2010.
POGUE, M. G. A world revision of the genus Spodoptera Guene ( Lepidoptera: Noctuide).
Memoirs of the American Entomological Society, v. 43, p. 1-202, 2002.
POTTER, M. C. Bacteria in their relation to plant pathology. Transactions of the Bristish
Mycological Society, v. 3, p. 50-68, 1909.

36
POLANCZYK, R. A. Estudos de Bacillus thuringiensis Berliner visando ao controle de
Spodoptera frugiperda (J. E. Smith). 2004. 158 p. Tese (doutorado - entomologia) - Escola
Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Piracicaba, 2004.
POLANCZYK, R. A.; ALVES, S. B. Biological parameters of Spodoptera frugiperda (J.E.
Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) assayed with Bacillus thuringiensis Berliner. Scientia
Agricola, Piracicaba, v. 62, n. 5, p. 464-468, Sept./Oct. 2005.

QUEIROZ, V. C.; Patogenicidade de isolados bacterianos obtidos de nim (azadirachta

indica a. juss) para o controle de Spodoptera frugiperda (J. E. SMITH) (Lepidoptera:
Noctuidae). 2013. 42 p. Monografia (Graduao em Agronomia) -Universidade Estadual de
Montes Claros, Janaba, 2013.
RADU, S.; YOKE, C. Preliminary screening of endophytic fungi from medicinal plants in
Malaysia for antimicrobial and antitumor activity. Malaysian Journal of Medical Sciences,
v. 9, n. 2, p. 23-33, 2002.
RAMACHADRAN, R. et al. Behavioral responses and sublethal effects of spruce budworm
(Lepidoptera: Tortricidae) and fall webworm (Lepidoptera: Arctiidae) larvae to Bacillus
thuringiensis Cry1Aa toxin in diet. Environmental Entomology, Columbia, v. 22, n. 1, p.
197-211, 1993.
RIBEIRO, W. C. et al. Controle da lagarta-do-cartucho do milho com inseticidas biolgicos e
qumicos. In: SEMINARIO DE INICIAO CIENTIFICA E JORNADA DE PESQUISA E
PS-GRADUAO, 3/1., 2005, Anpolis. Anais Anpolis: UEG, 2005. p. 5.
ROWAN, D.D.; GAYNOR, D.L. Isolation of feeding deterrents again Argentine stem weevil
from ryegrass infected with the endophyte Acremonium loliae. Journal of Chemical Ecology
p 647-58. 1986.
SAITO, M. L. As plantas praguicidas. Informativo Meio Ambiente e Agricultura,
Jaguarina, v. 12, n. 47, p. 1-4, 2004. LACHER, W. Ecofisiologia vegetal. So Carlos: Rima,
2000. p. 519.
SANTOS, B. A. Bioatividade de extratos vegetais sobre Spodoptera frugiperda (J. E.
Smith) (Lepidoptera: Noctuidae). 2012 68 p. Dissertao (Mestrado em Produo Vegetal
no Semirido), Universidade Estadual de Montes Claros-Janaba, 2012.
SANTOS, L. M. et al. Fertilidade e longevidade de Spodoptera frugiperda (J. E. Smith)
(Lepidoptera: Noctuidae) em gentipos de milho. Cincia Rural, v. 32, 350 p, 2004.

37
SCHMUTTERER, H. L. Properties and potential of natural pesticides from the neem tree,
Azadirachta indica. Annual Review of Entomology, v. 35, p. 271-297, 1990.
SIEGEL, M. R.; et al.Fungal endophyte-infected grasses: alkaloid accumulation and aphid
response. Journal of chemical Ecology, v. 16, p. 3301-3315, 1990.
SILVA, M.T.B. Fatores que afetam a eficincia de inseticidas sobre Spodoptera frugiperda
(Smith) em milho. Cincia Rural, v.29, n.3, p.383-387, 1999.
SOARES, E. P. S. Patogenicidade de bactrias isoladas de nim Spodoptera frugiperda
(J.E. Smith). 2013. 66p. Dissertao (Mestrado em Produo Vegetal no Semirido),
Universidade Estadual de Montes Claros, Janaba, 2013.

TAGLIARI, S. R. A. No-preferncia para oviposio, alimentao e antibiose de Plutella

xylostella (L., 1758) (Lepidoptera: Plutellidae) por gentipos de couve (Brassica oleracea
L. var. acephala D.C.). 2007. 76 p. Dissertao (Mestrado em Agronomia) - Faculdade de
Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista, Jaboticabal, 2007.

TESTER, C.F. Influence of a genetically modified endophytic bacterium on composition and

decomposition of corn residue. Soil Biology and Biochemistry, Oxford, UK, v. 24, p. 11071112, 1992.
VALICENTE, F. H.; FONSECA, M. M. Suscetibilidade da lagarta-do-cartucho do milho
Spodoptera frugiperda, a diferentes isolados de Bacillus thuringiensis. Revista Brasileira de
milho e sorgo, v. 3, n. 1, p. 21-29, 2004.
VALICENTE, F. H. Controle biolgico da lagarta do cartucho, Spodoptera frugiperda,
com Bacillus thuringiensis. Sete lagoas: EMBRAPA Milho e sorgo, 2008. p. 65. (Circular
tcnica 105)
VENDRAMIM, J. D.; SCAMPINI, P. J. Efeito do extrato aquoso de Melia azedarach sobre o
desenvolvimento de Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) em dois gentipos de milho. Revista
de Agricultura, v.72, n. 2, p. 159-170, 1997.
VIANA, P. A.; PRATES, H. T. Desenvolvimento e mortalidade larval de Spodoptera
frugiperda em folhas de milho tratadas com extrato aquoso de folhas de Azadirachta indica.
Bragantia, v. 62, p. 69-74, 2003.

38
VIANA, P. A.; PRATES, H. T. Mortalidade de lagarta de Spodoptera frugiperda alimentadas
com folhas de milho tratadas com extrato aquoso de folhas de nim (Azadirachta indica).
Revista Brasileira de Milho e Sorgo, v. 4, n. 3, p.316-322, 2005.
VIANA, P. A.; WAQUIL, J. M.; CRUZ, I. Cultivo do milho: pragas iniciais. Sete Lagoas:
Embrapa Milho e Sorgo, 2002. 13 p.
WEBBER, J. A. A natural control of Dutch eim disease. Nature, v. 85, p. 195-2002, 1981.