Diagnstico Serolgico de Sfilis

Tcnicas treponmicas

T.M. Rodrigo Colina Morales

Laboratorio de Infecciones de
Transmisin Sexual
Seccin Bacteriologa
Mayo 2014

Tcnicas treponmicas
FTA-ABS (Fluorescent Treponemal Antibody Absorption)
MHA-TP (Micro Hemagglutination Assay for antibodies to
Treponema pallidum
ELISA Enzimainmunoensayo (Quimioluminiscencia)
Inmunocromatografa
Western blot

Tcnicas treponmicas
Son tcnicas que usan antgenos de membrana externa de
Treponema pallidum y antgenos recombinantes
Detectan anticuerpos IgG e IgM anti Treponema pallidum
Son exmenes confirmatorios (FTA-Abs y MHA-Tp)
Son muy sensibles
Son muy especficos
Permanecen reactivos de por vida
Son exmenes cualitativos
No sirven para monitoreo de terapia: Acs persisten elevados
No sirven para re-infeccin
No estandarizados para diagnstico de Neurosfilis

Tcnicas treponmicas
FTA-Abs
Es el mtodo de referencia para la deteccin de anticuerpos
Muestra de suero inactivado a 56C en baotermorregulado
por 30 minutos.
Usa fracciones de Treponemas como antgeno.
El conjugado consiste en Antiglobulina humana con
isotiocianato de fluorescena
Es una tcnica compleja y de alto costo, se requiere
equipamiento y personal adiestrado.
Microscopio Inmunofluorescencia
Permanece positiva de por vida.
Tcnica operador dependiente

Tcnicas treponmicas
FTA-Abs
Es til en todas las etapas de la enfermedad
Presenta alrededor de un 1% de falsos positivos
Est sometida a mltiples causas de error si no se
estandarizan previamente todos los reactivos entre si.
Utilizacin de siete controles para estandarizacin de la
tcnica.
Lectura menos objetiva (fluorescencia inespecfica)
Debe realizarse previa absorcin del suero para eliminar la
reaccin cruzada con otros treponemas. (sorbente)
La reactividad se declara en cruces por la intensidad de la
fluorescencia.

Tcnicas treponmicas
MHA-Tp
Utiliza glbulos rojos de pollo como fase slida,
sensibilizados con protenas de Treponema pallidum.
Mtodo de aglutinacin
Es una tcnica sencilla
No requiere de equipamiento complejo. Espejo lector y
microplacas con fondo concavo

Tcnicas treponmicas
MHA-Tp
La lectura se realiza a travs de diluciones sucesivas del
suero hasta 1:80
El intensidad de la reaccin se declara en cruces, de acuerdo
a la intensidad de la aglutinacin
No est demostrada la utilidad de cuantificar el resultado
Puede en algunos casos no ser til en el inicio de la
enfermedad.
Tampoco esta homologada para su empleo en LCR
Produce menos falsos positivos que FTA-ABS

Tcnicas treponmicas
FTA-Abs

MHA-Tp

APLICACION

Confirmacin diagnstica

Confirmacin diagnstica

ANTIGENO

Treponema pallidum

Glbulos rojos sensibilizados

REACCION

Inmunofluorescencia Ag-Ac

Aglutinacin Ag-Ac

EXAMEN

Cualitativo

Cualitativo

LECTURA

Microscpica

Macroscpica

TIEMPO

4 horas

2 horas

MUESTRA

Suero

Suero

TECNICA

Relativamente difcil.
Costosa

Relativamente fcil. No muy

costosa

Tcnicas treponmicas

Tcnicas treponmicas
ELISA
Mtodo de cuantificacin inmunolgica que evala la
reaccin antgeno-anticuerpo mediante una reaccin
enzimtica
Usa protenas recombinantes de Treponema pallidum.
Es una tcnica que es capaz de reconocer memoria
inmunolgica.
Es la tcnica de eleccin para tamizaje de bancos de sangre.
Es automatizable y los datos son documentados.
Detecta anticuerpos IgG o IgM

Tcnicas treponmicas
ELISA
Estas pruebas permiten la automatizacin de grandes
cantidades de muestras y lecturas objetivas.
Excelente sensibilidad, aunque presentan una menos
especificidad que el FTA-Abs y MHA-Tp
Un test de ELISA positivo para treponema puede significar
enfermedad actual o antigua, y la sangre se considera no
segura (Tamizaje). En esta situacin se indica realizar
exmen no treponmico (VDRL, RPR o USR)

Tcnicas treponmicas
Inmunocromatografa
El inmunocomplejo se une a las protenas recombinantes del
Treponema y en la lnea de prueba se produce una reaccin
de color
Un exceso de conjugado reacciona en la lnea de control
formando una 2 lnea
Test pack rpido como tamizaje
Esta prueba gener mucha expectativa
Posee excelente sensibilidad, pero menos especificidad que
las tcnicas confirmatorias.

Tcnicas treponmicas
Western Blot
Es una tcnica que detecta anticuerpos para eptopes
especficos en antgenos, previamente separados por
electroforesis de alta resolucin, de acuerdo al peso
molecular
Al tener contacto el anticuerpo con estas protenas se
observan bandas de reaccin.
Esta prueba tiene una gran utilidad en la confirmacin de
enfermedad congnita cuando empleamos como revelador
de la reaccin Anti IgM. Su sensibilidad es del 90% y la
especificidad del 83%.

Tcnicas treponmicas
PCR
Detecta ADN bacteriano directo de las lesiones.
Sensibilidad descrita para lceras y en sfilis mucocutnea
>95%, para LCR 31 65%
La prueba de PCR que detecta ADN de Treponema pallidum,
es de gran utilidad en el diagnstico de aquellas sfilis cuyo
diagnstico representa dificultad como son sfilis congnita, la
sfilis tarda y en detectar infeccin persistente en individuos
que han recibido tratamiento ineficaz
La ventaja es que al amplificar ADN especfico de Treponema
pallidum, se elimina la posibilidad de detectar falsos positivos,
adems que puede realizarse en gestacin temprana,
mediante el estudio del lquido amnitico
PCR ni WB no han mostrado ser mejor que VDRL para el
diagnstico de neurosfilis en LCR.

Tcnicas treponmicas
Falsos positivos

Mononucleosis
Lepra
Enfermedad de colgeno
Borreliosis
Leptospirosis
HIV
Anemia hemoltica autoinmune
Adictos a drogas por va parenteral

Tcnicas treponmicas
Existe la creencia de que la utilizacin de las pruebas
diagnsticas est predeterminada en el sentido de emplear
las "reagnicas" para analizar gran nmero de muestras y las
treponmicas para confirmar los resultados positivos
obtenidos con aquellas. Este proceder, que es aceptable
para rastrear poblaciones con baja prevalencia de
enfermedad, no es tan claro en los pacientes de riesgo, con
clnica compatible o sospecha de enfermedad. Ante el
diagnstico de la infeccin debemos tener presente que:
Realizar en suero solo pruebas no treponmicas puede
conducirnos a obtener falsos negativos en sfilis latentes
tardas o en los periodos terciarios de la enfermedad.

Tcnicas treponmicas
Ensayar los sueros nicamente con pruebas treponmicas
puede llevarnos a falsos negativos en los estadios primarios
de la infeccin.
Ambas pruebas, por separado, pueden producir falsos
positivos, por lo que el valor predictivo positivo individual
(VPP) de cada una de ellas se ve incrementado cuando se
realizan conjuntamente.
Por todo ello se recomienda realizar los dos tipos de pruebas
a todos los sueros que nos remitan para realizar un
diagnstico indirecto. En la mayora de los casos el
diagnstico serolgico del estadio de la enfermedad es
imposible hacerlo si no se dispone de informacin clnica.

Muchas gracias

T.M. Rodrigo Colina M.

Encargado Laboratorio ITS
e-mail: rcolina@ispch.cl
Fono: 25755434 - 255434