3º SESIÓN DE

APRENDIZAJE
VERSIÓN DE IMPRESION
CINETICA ENZIMATICA I

Dr. Diomedes Camones M.

MODO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS

• En las reacciones espontáneas, los productos

finales tienen menos energía libre de Gibbs
(DG) que los reactantes (Figura inferior
izquierda). Por tanto, en las reacciones
espontáneas se libera energía de Gibbs (DG<0).
Sin embargo, el comienzo de la reacción
requiere un aporte inicial de energía. Esta
energía inicial que hay que suministrar a los
reactantes para que la reacción transcurra se
llama energía de activación (Ea). Cuanto
menor es la Ea más fácilmente transcurre la
reacción.

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MODO DE ACCIÓN DE LOS ENZIMAS

• La acción de los catalizadores consiste, precisamente, en
disminuir la Ea (Figura superior derecha). Los enzimas son
catalizadores especialmente eficaces, ya que disminuyen la Ea
aún más que los catalizadores inorgánicos. Por ejemplo, la
descomposición del agua oxigenada (H2O2) para dar H2O y
O2 puede ocurrir sin catalizador, con un catalizador inorgánico
(platino), o con un enzima específica (catalasa). Las
respectivas Ea para cada proceso son 18, 12 y 6 Kcal/mol. Así,
se puede calcular que el platino acelera la reacción 20.000
veces, mientras que la catalasa la acelera 370.000 veces.
• Para que una reacción química tenga lugar, las moléculas de
los reactantes deben chocar con una energía y una orientación
adecuadas. La actuación de la enzima (1) permite que los
reactantes (sustratos) se unan a su centro activo con una
orientación óptima para que la reacción se produzca y (2)
modifica las propiedades químicas del sustrato unido a su
centro activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando la
formación de otros nuevos (Figuras siguiente)
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MODO DE ACCIÓN DE LOS ENZIMAS

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CINÉTICA ENZIMÁTICA
• La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas.
• Estos estudios proporcionan información directa acerca del
mecanismo de la reacción catalítica y de la especificidad de la
enzima.
• La velocidad de una reacción catalizada por una enzima puede
medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es
necesario purificar o aislar la enzima. La medida se realiza
siempre en las condiciones óptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de
reacción observada es la velocidad máxima (Vmax). La
velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición
de los productos o la desaparición de los reactivos.

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CINÉTICA ENZIMÁTICA
MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN

• Los estudios sistemáticos del efecto de la concentración

inicial del sustrato sobre la actividad enzimática
comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX.
• En 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-
sustrato como intermediario del proceso de catálisis
enzimática.
• En 1913, Leonor Michaelis Para explicar la relación
observada entre la velocidad inicial (v0) y la
concentración inicial de sustrato ([S]0) Michaelis y
Menten propusieron que las reacciones catalizadas
enzimáticamente ocurren en dos etapas: En la primera
etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la
segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la
formación del producto, liberando la enzima.

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CINÉTICA ENZIMÁTICA
• Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de
desaparición del sustrato) en función del tiempo se obtiene
la llamada curva de avance de la reacción, o
simplemente, la cinética de la reacción. A medida que la
reacción transcurre, la velocidad de acumulación del
producto va disminuyendo porque se va consumiendo el
sustrato de la reacción (Figura siguiente). Para evitar esta
complicación se procede a medir la velocidad inicial de
la reacción (v0). La velocidad inicial de la reacción es
igual a la pendiente de la curva de avance a tiempo cero
(Figura siguiente). De esta forma, la medida de v0 se
realiza antes de que se consuma el 10% del total del
sustrato, de forma que pueda considerarse la [S] como
esencialmente constante a lo largo del experimento.
Además, en estas condiciones no es necesario
considerar la reacción inversa, ya que la cantidad de
producto formada es tan pequeña que la reacción inversa
apenas ocurre. De esta forma se simplifican enormemente
las ecuaciones de velocidad.
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CINÉTICA ENZIMÁTICA
Para estudiar la cinética enzimática se mide el
efecto de la concentración inicial de sustrato
sobre la velocidad inicial de la reacción,
manteniendo la cantidad de enzima constante. Si
representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una
gráfica como la de la Figura siguiente. Cuando
[S]0 es pequeña, la velocidad inicial es
directamente proporcional a la concentración de
sustrato, y por tanto, la reacción es de primer
orden. A altas [S]0, la enzima se encuentra
saturada por el sustrato, y la velocidad ya no
depende de [S]0. En este punto, la reacción es
de orden cero y laDr.velocidad
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es máxima (Vmax).33
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OXIDASAS
 Son Hemoproteinas, Presentan Grupo Prostético HEM.
 Algunas tienen Cu++ en su molécula.
 Su aceptor final es el Oxigeno.
 Producto final agua (H2O) y producto oxidado.
CLASES DE OXIDASAS
 A. QUE CONTIENEN COBRE.
 Citocromo oxidasa: Cit. a y Cit a3
 Son inhibidos por el Cianuro, Monóxido de carbono y H2S
B. QUE CONTIENEN FLAVOPROTEINAS.
 Son la FMN y FAD.

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 INHIBIDORES
 Los inhibidores son sustancias que
disminuyen la velocidad de reacción
enzimática y en algunos casos la detienen.
No Desnaturalizan a la enzima, actúan en
cantidades pequeñas, inhiben algún punto de
la reacción enzimática.
 Permiten conocer la vía metabólica de la
catálisis enzimática, también la especificidad
de la enzima y la naturaleza de los grupos
químicos o funcionales.
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CLASES
 De acuerdo a esto los fenómenos de inhibición pueden ser:
 Inhibidores Competitivos.
 Inhibidores no Competitivos.
A.- INHIBIDORES COMPETITIVOS
En este caso el inhibidor no permite la formación del complejo enzima –
sustrato normal, ya que se forma el complejo enzima - inhibidor, una vez
que el inhibidor ocupa el lugar activo de la enzima, el complejo enzima –
inhibidor no se separa en vista de que la enzima no tiene acción sobre el
inhibidor y por lo tanto queda bloqueada la parte activa de la enzima. El
sustrato no puede entrar al lugar activo que está ocupado por el
inhibidor y de esta manera se impide la acción enzimática. Un ejemplo
clásico es el de la deshidrogenasa succínica que en presencia de ac.
Succínico y de un aceptor adecuado convierte al ac. Succínico y de un
aceptor adecuado convierte al ac. Succínico en fumárico, reduciendo
simultáneamente al aceptor de hidrógeno.
 El inhibidor tiene una estructura semejante al sustrato, cuando la
concentración es alta el sustrato desplaza al inhibidor.
 La Velocidad de la Rx, depende de la Concentración del Sustrato y no
se modifica la estructura de la enzima.
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B. INHIBIDORES NO COMPETITIVOS

Consiste en la disminución de la velocidad de la

reacción por acción de un inhibidor que no tiene
nada que ver con la concentración del sustrato;
generalmente actúa sobre la enzima ya sea en el
centro activo o fuera de él de modo irreversible,
cuando actúa el inhibidor fuera del centro activo
este sitio se llama SITIO ALOSTERICO, los
compuestos que producen este tipo de inhibición
se clasifican en dos grupos :
 Inhibidores específicos.
 Inhibidores no específicos.
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INHIBIDORES
ESPECÍFICOS.

 Pueden mencionarse a los cianuros,

monóxido de carbono, azida sódica, estos
tres inhibidores actuan sobre el grupo
prostético HEM de la hemoglobina o
mioglobina específicamente sobre el
átomo de Fierro II interrumpiendo la
cadena oxidativa.

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 INHIBIDORES NO
ESPECÍFICOS.
 Entre ellos tenemos metales pesados (Pb – Hg – Zn – Mg).
Existen algunos inhibidores que atacan como agentes
bloqueadores del radical sulfihidrilo presente en las cadenas
laterales del aminoácido cisteina común a todas las
moléculas proteicas formando sales (proteinato del metal).
Los metales actúan sobre el grupo SH- de la proteína,
formando mercapturos o sea: Crisol – proteína
2R – SH + Hg R – S – Hg – S – R (mercapturo).
No específica por que no solo actúa sobre el grupo SH- de la
proteína sino en cualquier lugar en donde exista grupo
sulfihidrilo, además dentro de éstos inhibidores se tiene:
Ferricianuro, yodoacetato, el famoso gas empleado con fines
bélicos la lewisita y otras sustancias de tipo arsenical
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REGULACION ENZIMATICA

 Inducción: Favorece la reacción enzimática

 Represión: Disminuye la reacción enzimática
 Interacción alostérica: Regulación por interacción
en un sitio diferente al centro activo.
 Modificación Covalente: Se da a través de
reacciones de glucosilación, acilación, hidroxilación.
 Proteólisis: Se da por cortes proteolíticos que
generan cambios conformacionales y crean el sitio
catalítico.
 Isoenzimas: Regulación por enzimas similares.
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