SULFATO
CALDO.
Medio recomendado por A.P.H.A. para deteccin y recuento de coliformes en aguas, aguas
residuales y alimentos.
Fundamento
Siembra
Para recuento de coliformes totales, tcnica del Nmero Mas Probable:
a.- Para el anlisis de muestras fluidas como el agua, sembrar por triplicado: 10 ml en
caldo doble concentracin y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentracin.
Nmero
Volumen de
Volumen de
Concentracin
de tubos
la muestra
medio
del medio
3
10 ml
10 ml
Doble
3
1 ml
10 ml
Simple
3
0.1 ml
10 ml
Simple
b.- Para muestras slidas (alimentos, cosmticos, frmacos), efectuar diluciones seriadas
10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilucin por triplicado en medio de cultivo simple
concentracin.
Nmero
Dilucin dela
Volumen de
Volumen de
Concentracin
de tubos
muestra
la muestra
medio
del medio
3
10-1
1 ml
10 ml
Simple
3
10-2
1 ml
10 ml
Simple
10-3
1 ml
10 ml
Simple
Crecimiento
Enterobacter aerogenes
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Bueno a excelente
Bueno a excelente
Bueno a excelente
Inhibido
Produccin
de gas
+
+
Inhibido
El resultado del nmero mas probable se expresa por 100 ml para muestras fluidas y por
gramo para muestras slidas.
Almacenamiento:
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-174-05
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepcin de coliformes, y la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentacin de la lactosa con produccin de
cido y gas.
Frmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Bilis de buey deshidratada
20.0
Suspender 40 g del polvo deshidratado por litro de
agua destilada. Disolver y distribuir 10 ml por tubo
Lactosa
10.0
con campanita de Durham. Preparar adems, el
Peptona
10.0
medio a doble concentracin. Esterilizar en autoclave
Verde brillante
0.0133
a 121C durante 15 minutos.
pH final: 7.2 0.2
Siembra
a.- Para el anlisis de coliformes totales en muestras fluidas, sembrar por triplicado: 10 ml
en caldo doble concentracin y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentracin.
Nmero
Volumen de
Volumen de
Concentracin
de tubos
la muestra
medio
del medio
3
10 ml
10 ml
Doble
3
1 ml
10 ml
Simple
3
0.1 ml
10 ml
Simple
b.- Para el anlisis de coliformes totales en muestras slidas (alimentos, cosmticos,
frmacos), efectuar diluciones seriadas 10 -1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilucin por
triplicado en medio de cultivo simple concentracin.
Nmero
Dilucin dela
Volumen de
Volumen de
Concentracin
de tubos
muestra
la muestra
medio
del medio
3
10-1
1 ml
10 ml
Simple
3
10-2
1 ml
10 ml
Simple
3
10-3
1 ml
10 ml
Simple
c.- Para anlisis de coliformes fecales, a partir de cada tubo positivo en el test presuntivo
de coliformes totales (proveniente de Verde Brillante y Bilis 2% Caldo Mac Conkey Caldo
Lauril Sulfato, utilizando la tcnica del NMP), o a partir de colonias presentes en
diferentes medios, que se presume sean coliformes, transferir una ansada a un tubo con
Verde Brillante y Bilis al 2% caldo fresco, incubando a 45 +/- 0.5 C y otra en Agua
Triptona con incubacin a 35-37 C, para detectar la produccin de indol.
Incubacina- Para de coliformes totales: a 35-37 C durante 24 horas.
b- Para coliformes (fecales): a 44.5-45.5 C durante 24 horas.
Resultados
E. C. Medio.
Medio utilizado para el recuento de coliformes totales, coliformes fecales y Escherichia coli
Indol#
+*
-*
-*
Variable
-
Siembra
Para recuento de coliformes totales, tcnica del Nmero Mas Probable: a.- Para el anlisis
de muestras fluidas como el agua, sembrar por triplicado: 10 ml en caldo doble
concentracin y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentracin.
Nmero
Volumen de
Volumen de
Concentracin
de tubos
la muestra
medio
del medio
3
10 ml
10 ml
Doble
3
1 ml
10 ml
Simple
3
0.1 ml
10 ml
Simple
b- Para muestras slidas (alimentos, cosmticos, frmacos), efectuar diluciones seriadas
10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilucin por triplicado en medio de cultivo simple
concentracin.
Nmero
Dilucin dela
Volumen de
Volumen de
Concentracin
de tubos
muestra
la muestra
medio
del medio
3
10-1
1 ml
10 ml
Simple
3
10-2
1 ml
10 ml
Simple
3
10-3
1 ml
10 ml
Simple