1. A que grupos de compuestos pertenece(n) el (los) pigmentos?

Glucinolatos, Carotenos y , licopenos, antocianinas, flavonoides, lutena y zeaxantina.

2. A qu se debe que estos compuestos sean coloridos?
3. Explique la diferencia entre cromatografa de adsorcin y particin.
Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de la fase
estacionaria y mvil. Si la fase estacionaria es un slido el proceso se denomina cromatografa
de adsorcin, mientras que si es un lquido se llama cromatografa de particin. La diferencia
entre s se puede atribuir a las fuerzas que influyen en la distribucin de los solutos entre las dos
fases.
4. Cules son las ventajas y desventajas de la cromatografa en capa fina en comparacin
con la cromatografa en columna?
La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros mtodos
cromatogrficos (en columna) ya que el utillaje que precisa es ms simple. El tiempo que se
necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separacin es generalmente
mejor. Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruiran el cromatograma. El
mtodo es simple y los resultados son fcilmente reproducibles, lo que hace que sea un mtodo
adecuado para fines analticos.
5. Explique las diferencia(s) que existe(n) entre el adsorbente utilizado en cromatografa en
capa delgada y el de columna. Hacer una lista de ellos en orden creciente de actividad.
Columna: puede usarse cualquier medio adsorbente siendo los ms generales la celulosa, gel de
slice, almina, oxido de magnesio, oxido clcico y carbn activo. Se emplea para la separacin
de mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa.
Capa delgada:
a) Gel de slice (se utiliza en el 80% de las separaciones)
b) Oxido de Aluminio Almina (cida, neutra o bsica)
c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
d) Poliamidas
6. Hacer una lista de los eluyentes usados comnmente en columna y capa delgada en
orden creciente de polaridad.
ter de petrleo
ter dietlico
Ciclohexano
Acetato de etilo
Tetracloruro de carbono
Benceno
Etanol
Cloroformo
Metanol

Diclorometano
Agua
cido actico
7. . Hacer una lista de capacidad de adsorcin de los grupos funcionales de los compuestos
orgnicos

7.1 Qu compuesto es ms retenido una amina o alqueno, ejemplifique en una placa

cromatogrficas?
Un alqueno por la polaridad de este
8. Cmo se prepara el capilar para aplicar la muestra en la cromatoplaca?
Se aplica calor al calor y estirndolo para tener un orificio con dimetro muy pequeo
9. Por qu es necesario que la cmara de elucin este saturada con los vapores del
eluyente?
Si la atmsfera del recipiente no est saturada con los vapores del eluyente, ste se evapora de
la placa durante la cromatografa. Esto provoca que el tiempo necesario para alcanzar una
determinada altura del frente aumente. Tambin aumenta el valor de los Rf de las manchas. En
el caso de usar un eluyente con varios componentes, los componentes ms voltiles se
evaporarn ms rpidamente, por lo que la composicin del eluyente vara. Como la velocidad
de evaporacin es mayor en los bordes de la placa que en la zona central, los valores de Rf de
una misma sustancia sern mayores en los bordes que en el centro.
10. Explique cada uno de los siguientes trminos: eluyente, eluato, elucin fraccionada,
adsorcin, particin, actividad de adsorbente y afinidad por el adsorbente.
Eluyente: Sustancia que se aade a una columna cromatogrfica para mover el producto de

inters.
Eluato: es la fraccin que se obtiene en una CC cuando emerge por la salida de la columna.
Elucin fraccionada: Se utilizan sucesivamente distintos disolventes, cada uno de los cuales
es un eluyente ms energtico que el anterior. Este procedimiento permite abreviarla elucin

de las sustancias fuertemente absorbidas.

Adsorcion: La adsorcin es un proceso donde un slido se utiliza para eliminar una sustancia
soluble del agua. Es un proceso por el cual tomos, iones o molculas son atrapados o
retenidos

 Particin: En el proceso de separacin se produce una competicin entre la fase mvil y la

fase estacionaria por el componente, es decir, se establece un equilibrio entre la
concentracin del componente presente en la fase mvil y la concentracin presente en la
fase estacionaria.
Elusin: se produce por el flujo de una fase mvil de gas inerte

Adsorbente: es un slido que tiene la capacidad de retener sobre sus+ superficie un

componente presente en corrientes lquidas o gaseosas.

11. Cmo se clasifica la cromatografa en funcin de su fase estacionaria?

Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de las fases
estacionarias y mviles. Si la fase estacionaria es un slido el proceso se denomina
cromatografa de adsorcin, mientras que si es un lquido se llama cromatografa de particin.
12. Cul es la funcin de la fase mvil y como se lleva a cabo la separacin en la
cromatografa de adsorcin?
La fase mvil juega un papel activo en la adsorcin de los solutos y por lo tanto en la fijacin del
valor de la razn de particin. Los disolventes se clasifican en dbiles y fuertes: los disolventes
dbiles favorecen las razones de particin grandes y los disolventes fuertes favorecen las
razones de particin pequeas. Las propias molculas del disolvente compiten para cubrir los
puntos activos de adsorcin, y los que son fuertemente adsorbidos son disolventes fuertes.
Cuando la interaccin entre las molculas del disolvente y las del soluto en solucin predomina
sobre otras interacciones, aumenta la fuerza del disolvente pues aumenta la tendencia del soluto
a disolverse en l. Cuando predomina la interaccin entre el disolvente adsorbido y el soluto, la
fuerza del disolvente puede resultar aumentada o disminuida, dependiendo de si el complejo
formado es adsorbido ms o menos fuertemente que el propio soluto.
13. Cmo se prepara la papilla para la cromatografa en capa fina?, por lo menos dos
mtodos.
14. Cundo es conveniente activar una placa y cmo se activa?
Antes de que se puedan usar las placas generalmente deben ser calentadas para retirar el agua
que acta como una impureza y evita una buena separacin. La magnitud de calor depende del
tipo de separacin que se requiere para compuestos hidrofilicos o polares, el secado al aire o
con un secador de pelo son generalmente adecuados, para los compuestos hidrofbicos o no
polares es necesario un calentamiento ms intenso. Las placas de xido de aluminio y de gel de
slice con adhesivo requieren ser secadas al aire durante aproximadamente 30 min. Y despus
activadas en un horno a 100C alrededor de 30 min. Las placas de celulosa debern secarse al
aire libre durante 30 min. y activarse al horno durante 10 min. A 105C.
15. Qu espesor debe tener la fase estacionaria en una C.C.D?

El espesor de la placa generalmente suele ser de:

0.1-0.2 mm para separaciones analticas
0.5-2 mm para separaciones preparativas
la placa debe quedar libre de grumos y rugosidades que afectaran al desarrollo del proceso
16. Explique brevemente si existe una relacin entre la cantidad de adsorbente y las
dimensiones de la columna para separar una mezcla de compuestos.
Generalmente se requiere 20 g de slice o 30 g de almina por cada gramo de muestra. En
muchos casos esta cantidad ser insuficiente y se necesitar ms adsorbente.
17. Cmo debe de ser la polaridad del eluyente al empacar la columna?
La polaridad del eluyente debe ser mayor
18. Con relacin al RX
18.1
Cundo se usa el Rx en cromatografa en capa delgada?

18.2

Qu significa la obtencin de Rx igual a 1?

19. Cul es el orden de polaridad en que salen los compuestos de una cromatografa en
columna?
En la cromatografa de columna las molculas de una mezcla son separadas en base a la
afinidad de las molculas por la fase estacionaria o por la fase mvil. Si una molcula A tiene
ms afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajar ms rpido que A.

20. A qu se llama frente del eluyente en cromatografa en capa delgada?, demustrelo en

una placa.

21. Cmo se controla la salida de los componentes en una cromatografa en columna?

Se controla con la llave de la bureta y el eluato se va colocando en tubos de ensaye o vasos de
precipitado.
22. Por qu no debe dejarse secar la columna cromatogrficas? En caso de que se fracture.
Que se recomienda hacer?
Es muy importante que la fase estacionaria est distribuida de forma homognea, sin fracturas
ni burbujas de aire, siendo tambin fundamental que los extremos de la columna sean planos
para evitar eluciones simultneas de ms de una fraccin, especialmente si la capacidad de
separacin de la columna no es muy grande
23. Por qu es importante que las muestras a separar por cromatografa deben estar lo ms
secas posible?
A mayor volumen afecta la eficiencia de la columna
24. Qu pH presenta la almina?, mencione tres casos.
La almina puede ser tratada qumicamente para conseguir alminas cidas, bsicas y neutras.
La almina cida es aproximadamente de pH. 4.5, la almina bsica comprende
aproximadamente en un pH 10.
25. Por qu cuando se usa almina como adsorbente no se recomienda usar acetona como
eluyente?
Un problema que plantea la almina es que con muchos solutos puede provocar reacciones
catalizadas por bases. La acetona, en particular puede reaccionar con la almina y, por lo tanto,
no debe usarse como disolvente con este adsorbente.
26. Cules son los pasos a seguir para la preparacin de una placa preparativa?
Una papilla ms espesa ayuda a estabilizar el grosor de las placas que se precisa para una
carga de mayor magnitud. El espesor ptimo oscila desde un mnimo de 1 mm. hasta un
mximo de 2 mm.
Las placas utilizadas en cromatografa preparativa son placas grandes, de aproximadamente
20x20 cm. que permiten separar aproximadamente 1 g. de mezcla utilizando unos 35 g. de
adsorbente. La siembra de la muestra se realiza mediante la ayuda de una jeringuilla o tubo
capilar. La siembra se realiza a lo largo de una lnea recta (existen en el mercado diverso
utensilios para evitar torcerse). Si al terminar la primera siembra todava queda muestra, se

seca la primera siembra y se aplica la segunda, intentando que sta quede sobre la anterior,
para as conseguir que el frente sea lo ms estrecho posible. La siembra debe realizarse a lo
ancho de la placa.
27. Cul es la aplicacin de la columna en placa preparativa?
Se usa para purificar suficiente cantidad de sustancia para un uso posterior, ms que para
anlisis.
28. Qu diferencia existe entre cromatografa en capa delgada analtica y cromatografa en
placa preparativa?
Las placas deben poseer mayor cantidad de fase estacionaria que en la cromatografa analtica
29. Cmo se clasifican los reveladores en forma general?
El revelado puede dividirse en dos: los mtodos fsicos que utilizan propiedades particulares de
los compuestos; y los mtodos qumicos que consisten en hacer reaccionar a las sustancias con
algn agente qumico con el que formen algn compuesto coloreado.
30. Cuando una sustancia orgnica no se revela con I 2 o luz ultravioleta, Qu otros
reveladores pueden usarse para observar la sustancia?
Una vez desarrollada la placa, la visualizacin de los cromatograma se realiza, caso de no
tratarse de compuestos coloreados, mediante iluminacin con luz ultravioleta, si la fase
estacionaria lleva un indicador de fluorescencia, o bien mediante pulverizado de la placa con
reveladores de carcter general (yodo, cido sulfrico, etc.) si se quieren visualizar nicamente
compuestos de un tipo determinado.
Revelador Universal: CCF yodo, HPLC detector I. Refraccin; Especfico: CCF luz UV 254 nm,
Dragendorff para alcaloides, Kedde para cardiotnicos, ninhidrina para aminocidos, etc.; HPLC:
Detector UV-Vis var., fluormetro, E. De masas, etc.
31. Con relacin a la cromatografa en placa preparativa, conteste lo siguiente.
31.1
Cundo se usa? Se utiliza para la separacin y aislamiento de los componentes de
una mezcla en cantidades comprendidas entre 100-200 mg
31.2
Cmo se aplica la muestra? En la superficie del adsorbente (gel de slice), mediante
una pipeta Pasteur, se traza una lnea continua con la muestra disuelta y se introduce la
placa en posicin vertical en la cmara.
31.3
Cmo se recupera la muestra? Una vez se han separado los productos que
componen la muestra, se marca con una cuchilla el contorno del compuesto a aislar y con
ayuda de una esptula de desprende del soporte de vidrio el slica gel con el compuesto
adsorbido. una vez transferido a un erlenmeyer se aade un disolvente en el cual el soluble
el producto, se filtra el gel de slice y una vez eliminado el disolvente tenemos el producto
puro.
31.4
Cmo comprueba que la muestra se obtuvo pura? Haciendo una cromatografa en
capa fina y poner estndares.
32. Qu revelador especifico usara cuando se tiene un:
32.1
Aminocido: Ninhidrina

32.2
32.3

Fenol: lmpara UV, ferrocianuro de potasio, vapores de amonio.

Cetona: 2,4 - dinitrofenilhidracina