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Enzimologa

Cintica qumica
Enzimologa. Velocidad de reaccin. Reacciones enzimticas. Ecuacin de Michaelis.
Parmetros cinticos

Enviado por: Fco Javier Chichon

Idioma: castellano

Pas: Espaa

19 pginas

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Tema 2
Cintica Qumica
Como ya vimos en Fsica-Qumica, la velocidad de reaccin es funcin de diversos
factores:

Concentracin de Enzima. [E]

Concentracin de sustrato, de producto, de activador e inhibidor. [S], [P], [Act] y
[Inh]

pH

Temperatura. T

Fuerza Ionica. FI
Una vez analizadas todas estas variables para una reaccin dada (variaciones de la
velocidad en funcin de cada una de ellas), podemos llegar a algunas
conclusiones:

Mecanismo cintico, orden de unin y liberacin del sustrato y el producto,

respectivamente. Nmero de etapas, de intermedios de reaccin. Complejos enzima
sustrato que se forman.
Concentraciones fisiolgicas de P y S (mediante anlisis in vitro).

Sentido fisiolgico de la reaccin. Tambin por anlisis in vitro, teniendo en cuenta

las concentraciones fisiolgicas.

Tambin in vitro podemos averiguar los potenciales de regulacin de inhibidores

y/o activadores.

Mediante el anlisis cintico podemos averiguar los potenciales de los aminocidos

implicados en el mecanismo cataltico.

Todo esto nos introduce en el estudio cintico de la velocidad.

Velocidad inicial
Cuando hablamos de velocidad de reaccin, siempre nos referiremos a velocidad
inicial, salvo que digamos lo contrario. La velocidad inicial tiene la ventaja de ser
constante en unas condiciones dadas ([S], [E], [P], T, pH, etc.). Se define como la
tangente a la curva definida por las ecuaciones de velocidad ([S], [P] Vs t) a tiempo
0.

Aunque la definicin parece no tener sentido, grficamente si lo tiene, (mirar

hojas). La desaparicin de S y la aparicin de P frente al tiempo muestran un tramo
lineal, que se corresponde con la velocidad inicial y, por tanto:

Ecuacin de Velocidad
Siguiendo con la reaccin sencilla de transformacin de A en producto,
necesitamos la ecuacin de velocidad integrada. En este caso es sencilla:

K es la constante de velocidad de la reaccin y la concentracin de A es la inicial,

como indica el subndice, el cual no se volver a colocar.
Ordenes de reaccin
La ecuacin de velocidad, siempre va a presentar esa forma V=K[S], pudiendo
estar la concentracin elevada al cuadrado, o estar multiplicada por la de otro
cosustrato, (en el caso de reacciones ms complejas).
Se define como orden de reaccin total, la suma de los exponentes a los que se
encuentran elevadas las concentraciones que aparecen en la ecuacin de
velocidad. En este caso simple, el orden es uno. Si recordamos de Qumica-Fsica,
el coeficiente al que se eleva la concentracin en la ecuacin de velocidad de las
etapas elementales coincide con el coeficiente estequiomtrico del mismo. Esto no
quiere decir que coincidan con los de la ecuacin global.
Reacciones de primer orden

Es el caso ms simple (si exceptuamos las de orden 0 de las que ya hablaremos).

Analizando las unidades de la constante de velocidad vemos que: K =

Molar/minutos/Molar = minutos-1. Ms genricamente, las unidades de K es

tiempo-1 para las reacciones de primer orden.
Si representamos las velocidades obtenidas a diferentes concentraciones, vemos
una lnea recta, cuya pendiente es K, la constante de velocidad.
Reacciones de segundo orden

La ecuacin de velocidad para las ecuaciones de segundo orden es la siguiente:

Esta ecuacin puede simplificarse si igualamos las concentraciones de A y B, de

modo, que:

De este modo vemos que las unidades de K de una reaccin de segundo

orden son M-1tiempo-1. La representacin grfica, (V Vs [A])no da en este
caso una lnea recta, sino una parbola, como se ve en las hojas.
El anlisis, no suele coincidir con idnticas concentraciones de los sustratos, de
modo, que lo que se hace es mantener una de las dos constante. Esto se consigue
aadiendo uno de los dos en exceso, con lo que podemos considerar su variacin
constante con el tiempo.
Al ser constante, la concentracin de ese sustrato se incluye en la constante de
velocidad, que ahora denominamos K'.

Esta reaccin se denomina de 1er orden aparente o pseudoprimer orden,

siendo K' la constante de primer orden aparente, con unidades de
constante de primer orden, tiempo-1.
Reacciones de orden 0
Como ya adelantbamos, la mayor simplicidad cintica, est en este tipo de
reacciones. Como se sobrentiende, se trata de una reaccin en la cual la velocidad
es independiente de las concentraciones de los sustratos.
De este modo, la representacin grfica de la [S] Vs t, nos da una lnea horizontal,
clara idea de independencia de la velocidad con respecto a la concentracin de
sustrato.
Si la velocidad no depende de las concentraciones de sustrato, la nica forma de
hacerla variar, ser mediante cambios en la temperatura, el pH o la concentracin
de enzima, inhibidores o potenciadores.
Podramos encontrarnos reacciones de orden 3 o 4, pero al igual que sucede con la
cintica inorgnica, al escoger las etapas elementales, el orden se reduce a 1 o 2.

Reacciones enzimticas
Estudiaremos principalmente reacciones monosustrato:

La representacin de la velocidad inicial frente a diferentes concentraciones de

sustrato, define dos reas de interpretacin sencilla y una intermedia de interfase:
Viendo esta grfica, se observa como a concentraciones bajas de sustrato,
tenemos una cintica de primer orden, mientras que a concentraciones
altas, se satura la enzima, obteniendo una reaccin de orden 0.
A este tipo de cintica se la denomina cintica hiperblica. Si recordamos, hay otro
tipo de cintica, la alostrica, con una representacin sigmoidea. Hay que aclarar
que no todas las enzimas alostricas dan representaciones sigmoideas y que hay
enzimas sin regulacin alostrica con representacin sigmoidea.
Tema 3
Ecuacin de Michaelis
A principios de este siglo, se empezaron a proponer modelos cinticos, pero fueron
Michaelis y Menten los que a travs de una propuesta cintica, encontraron una
respuesta matemtica a la representacin hiperblica.
Modelo cintico
El planteamiento que propusieron se basaba en la etapa limitante. Se consider
una primera etapa rpida de formacin del complejo ES con constantes de
formacin K1 y de disociacin K "1. Y una lenta de formacin del producto que
actuar de etapa limitante. Hay que decir que ninguna formacin de producto se
realiza realmente en un solo paso, pero la simplificacin facilita enormemente los
clculos matemticos.
A la hora de buscar la ecuacin de velocidad, slo cogemos la reaccin con
constante K2, debido a que consideramos velocidad inicialy, por tanto, no
hay producto a t=0. Esto, imposibilita la reaccin contraria. Escogemos entonces
esta reaccin por ser la etapa lenta, obteniendo esta ecuacin de velocidad:

A concentraciones bajas de sustrato, la cantidad de complejo ES es

proporcional a la concentracin de sustrato, manteniendo
laconcentracin de enzima constante. En esta etapa la reaccin es de orden 1.
Cuando aumenta la concentracin de sustrato, toda la enzima se encuentra
saturada y, por tanto, la velocidad se hace independiente de [S], con lo que
es de orden 0. En esta etapa [ES]max=[E]o=[E]Total y consiguientemente, la
velocidad es la velocidad mxima alcanzable a esa concentracin de enzima. La
ecuacin de velocidad nos queda como sigue:

Relacionar la velocidad con la concentracin de enzima no es muy conveniente, es

mejor relacionarlo con la [S].
Modelos tericos

Aproximacin del equilibrio. Michaelis y Menten.

Aproximacin al estado estacionario. Briggs y Haldane.

Ambos modelos presentan una serie de aproximaciones y premisas comunes:
Consideramos la transformacin ms simple, con un complejo ES y la posterior
formacin de producto.
La concentracin inicial de enzima, debe ser al menos dos rdenes de magnitud
menor que la concentracin de sustrato.
Consideramos la velocidad inicial hasta que se halla consumido un 5%. Hasta
entonces [S]o se considera constante. Con estas premisas,K"2 es totalmente
despreciable. Esto, como ya hemos dicho, se debe al escaso producto formado a
tiempos cercanos a 0.
Ya que la etapa lenta es la que implica a K"2, es la que determina la velocidad
de reaccin.
Aproximacin al equilibrio
Se la considerara como la 5 premisa de M&M. se basa principalmente en
considerar K2 al menos dos rdenes de magnitud menor que K"1. Esto implica que
despreciamos la formacin de producto a partir del complejo enzima sustrato,
frente a la formacin y disociacin de dicho complejo.
E + S ES E + P
Como se ve, esto implica o favorece, segn se mire, el establecimiento de un
equilibrio, con las constantes de formacin y disociacin del complejo ES. La
evolucin de las especies E y S, para dar el complejo ES se da a razn de
milisegundos. De este modo, no podemos observar lo que ocurre en los primeros
momentos de la reaccin, cuando, dependiendo de la concentracin de sustrato
que introduzcamos, conseguiremos saturar o no la enzima. Como he dicho no
veremos la evolucin inicial (desaparicin de la enzima libre y aparicin del
complejo en funcin de [S]). Si conseguimos saturar la enzima, evidentemente, a
pocos milisegundos, la [E] libre se aproximar a 0 y la [ES], a la [E]o.
Este principio, nos facilita los clculos. Comenzamos estableciendo la constante de
equilibrio:

Sabemos que [E] = [E]T [ES], de modo que sustituimos [E] en la ecuacin anterior:

Llevamos al primer miembro las constantes y deshacemos el factor comn:

bien, ya tenemos el valor de [ES], ahora lo sustituimos en la ecuacin de velocidad

de la etapa lenta, que hemos dicho que es la de la reaccin:

De este modo, concluimos que la ecuacin de velocidad, tambin

llamada Ecuacin de Michaelis segn el modelo de aproximacin al equilibrio es:

Esta es la ecuacin de una hiprbola, con lo que se ajusta a lo observado

empricamente.
Aproximacin al estado estacionario
En esta ocasin, la quinta premisa, sera que la velocidad de formacin y
desaparicin (para dar P E + S), es la misma. Esto supone que [ES] se mantiene
constante. En este supuesto, no mantenemos que la formacin de producto es
despreciable y, por tanto, no partimos de la misma ecuacin a la hora de sacar la
ecuacin de velocidad.

Como hacamos en QF, con este modelo, igualamos las velocidades, y de la

ecuacin resultante despejamos [ES], igual que hacamos antes:

A partir de ah, los pasos son anlogos a los realizados en el modelo anterior, con
las mismas sustituciones: [E] = [E]T [ES] en la ecuacin anterior, y todo, una vez
despejado [ES], en la ecuacin de velocidad de la etapa lente, que sigue siendo
V= K 2 [ES].
La Vmax sigue siendo K 2 [E]T, pero ahora no hay una K S, sino una relacin de
las constantes que hemos considerado en el modelo cintico. A esta se la
llama Km o constante de Michaelis. La ecuacin resultante es la misma que la
anterior, salvo que hemos complicado el valor de la constante de K S a Km

Tambin a esta se la denomina Ecuacin de Michaelis, ya que evidentemente la

anterior y esta, son ecuaciones idnticas, correspondientes a hiprbolas. K S se
puede considerar un extremo particular de Km, en condiciones de K 2 << K 1
(condiciones para la aproximacin al equilibrio). Por esto, tambin puede ser
llamada Km.
Una vez determinadas las ecuaciones que definen la cintica enzimtica, vamos a
la interpretacin cintica que se hace de cada uno de los parmetros que aparece
en ellas.
Significados cinticos
La velocidad mxima, da la ecuacin de la recta asntota, a la cual tender la
velocidad cuando [S] tienda a ", pero que nunca podr alcanzar. Por esto se la
denomina en ingls limiting rate. Como se ve en la grfica, la proyeccin sobre el
eje [S] de la mitad de la velocidad mxima nos da el valor de Km.

Significado cintico de Km

En la aproximacin al equilibrio, Km en K S, la constante de disociacin

, sin embargo, en un caso ms general, como en la aproximacin al estado
estacionario Km es una funcin de las constantes implicadas en la formacin y
desaparicin del complejo
. Si sobre esta expresin de Km aplicamos la condicin principal de la aproximacin
al equilibrio, K 2 << K 1, entonces Km = Ks. Por esto decamos que la

aproximacin al equilibrio es un caso particular de la aproximacin al estado

estacionario, cuando se da la condicin de poder despreciar la etapa de formacin
de producto.
Significados matemticos
Aunque de ellos ya hemos hablado anteriormente, a la hora de introducir la
representacin grfica, volvemos a tratarlos, ahora con un poco de ms rigor.

Significado matemtico de Km
Si en la ecuacin de Michaelis, imponemos como valor de velocidad Vmax /2:

Por ello, Km siempre tiene unidades de concentracin.

Diferentes parmetros cinticos
A partir de ahora veremos para que nos sirven los valores cinticos:
Kcat: parmetro derivado de la velocidad mxima.
Km.

Constante de especificidad, que se define como

.
Velocidad mxima (Vmax)

Unidades: Como toda velocidad, tiene unidades de concentracin tiempo1. En

lugar de en concentracin, tambin puede encontarse enmoles de sustrato por
unidad de tiempo.

Relacin con Kcat: Este nuevo parmetro, se define, en ciento modo, a partir de
Vmax. Si sabemos que Vmax = K2 [E]T para una sola etapa de transformacin de S
a P (como es el caso sencillo que estamos tratando), diramos que en este caso Kcat
= K2. De este modo, vemos queKcat es la constante de proporcionalidad que
multiplica a la concentracin total de enzima para dar la velocidad mxima. Lo
interesante de este parmetro, es que al aparecer la Vmax en funcin de Kcat, no
importa lo complicado que sea el paso ES P + E, porque las nuevas constantes
cinticas de los pasos elementales se englobarn en Kcat y la expresin de Vmax no
cambiar. Entonces, decimos que Kcat es siempre funcin de las constantes
cinticas de cada unos de los pasos elementales de que conste el paso de complejo
ES a producto y, por tanto, es aplicable a cualquier otro supuesto (que no sea la
aproximacin al equilibrio y el estado estacionario) por muy complicado que sea
este.

Utilidad de Kcat

Poder o capacidad cataltica: Se define una vez que el sustrato est unido al
centro activo como el nmero de molculas de sustrato transformadas por centro
activo en unidad de tiempo.

Rango de valores que suele presentar: Siempre en tiempo1, suele oscilar

entre 101 y 107 s1. Teniendo mayor poder cataltico aquellas que rondan 107 s1.

Si la enzima tiene varios centros activos: En un ensayo cintico, conocemos

[E], [S], y sus pesos moleculares. Con la expresin de Vmax que hemos descrito, el
valor de Kcat que hayamos, (Kcat = Vmax/[E]T) implica a toda la enzima, tanto si es
multimrica como con un solo centro activo. Entonces se define como poder
cataltico por molcula de Enzima o Kcat molecular. Por ello hay que intentar
incorporar el nmero de centros activos a la expresin de la velocidad, para que esta
sea correcta. Evidentemente, para conseguir el Kcat por centro activoKcat,C..A.. no
hay ms que dividir el molecular por el nmero de centros activos. Kcat, Este se
define en ingls como turnover number y en espaol, esto se traduce como
constante cataltica, nmero de recambio, ndice de recambio o actividad molecular.
Tiempo del ciclo cataltico
Se define como el tiempo empleado en la transformacin de 1 molcula de
sustrato por centro activo. Para ello realizamos la inversa de Kcat, con lo que el
resultado nos da en segundos. Con una valor de constante cataltica de 105, nos
dara un valor de 10 s. Si este es el orden de magnitud de todo el proceso (de E +
S a E + P), imaginemos el tiempo de las etapas elementales.
Actividad y Actividad especfica
Aunque el parmetro tiene mucho sentido para una enzima, su aplicacin es
menos aparente. Para determinar la actividad y la Ae, de una preparacin dada,
hay que trabajar necesariamente en condiciones de Vmax, lo que implica
saturacin por sustrato.
Actividad: Se define como cantidad de enzima activa en condiciones de
saturacin, como hemos dicho antes. Se mide en Unidades internacionales (U),
de modo que: 1U = 1mol min1. Tambin podemos encontrarla como Katal, (mol
s1). Pero es una medida del orden de 6.000.000 mayor, con lo que se utiliza
menos. En algunas analticas se dan valores de U por litro o 100 ml, indicando la
cantidad de enzima en ele volumen.
Actividad Especfica: Como vimos en Metodologa, es la actividad
(concentracin de enzima activa) con respecto al total de protena. Act/mg de
protena. Nos sirve para determinar la pureza de diferentes muestras en
experimentos de purificacin. Siempre hay que tener en cuenta que durante un
proceso de purificacin, la actividad especfica tiene que aumentar, ya que se
supone que mantenemos constante la actividad (numerador) pero reducimos el
denominador (mg de protena).
Km (cantidad de sustrato a la cual se obtiene de Vmax)

Unidades: La definicin se debe a la resolucin matemtica de la ecuacin

genrica de una hiprbola. En esta, el trmino que multiplica a la variable en el
numerador es la asntota, en nuestro caso Vmax, y el trmino que se suma a la
variable en el denominador es el valor de dicha variable a la mitad de la asntota. Por
esto, Km tiene unidades de concentracin, siempre.

Relacin con Vmax: A parte de lo antes explicado, pero algo intuitivo, es que si
conocemos el valor de Km, podemos encontrar la [S] a la cual alcanzamos la
Vmax, o lo que es lo mismo, la [S] saturante, y no perder tiempo en realizar toda la
cintica.
Esto se hace sustituyendo [S] en la ecuacin de M&M el valor de Km aumentado
varias veces, de modo que:

Si [S] = 10 Km, v = 0,909 Vmax, se aproxima un 90.9% a Vmax.

S [S] = 20 Km, v = 0,95 Vmax.

S [S] = 50 Km, v = 0,98 Vmax.

S [S] = 100 Km, v = 0,99 Vmax.

Pero trabajar a altas concentraciones de sustrato, no siempre es posible, ya que
puede ser que Km = 10 "5 M, y entonces [S] para alcanzar un 99% de Vmax sera
de 1 mM. Pero si Km = 10"3, la concentracin de sustrato para alcanzar un 99% de
Vmax sera de 100 mM,extremadamente alta. Esto implica, que adems de
alejarse de las concentraciones fisiolgicas, llegamos al que se denomina mximo
de Fuerza Ionica, del que no se puede pasar en un ensayo cintico. Este mximo es
de 150 mM, que aunque podamos pensar que an nos quedan 50 mM, hay que
tener en cuenta, que se aade tampn (3 " 20 mM) y muy posiblemente iones
como cofactores de la enzima.
En estos casos, trabajaremos a 20 " 25 Km, lo que implica llegar slo al 90 o 95%
de Vmax, pero es mucho mejor as.
Km como constante de disociacin aparente
Se denomina constante de disociacin aparente porque slo es Ks en el caso
especfico de la aproximacin del equilibrio de M&M, mientras que en modelos ms
complejos, como el de la aproximacin del estado

estacionario,
y, por tanto, no es Ks.
El modelo de Michaelis es vlido para determinar Km por muy complicado que sea
el mecanismo, ya que se observa que:

Constante de especificidad

Unidades: Como razn entre dos constantes, tiene como unidades M"1 s"1
(concentracin"1 tiempo"1). Debido a estas unidades, se trata de una constante de
velocidad de 2 orden aparente. Hay que tener en cuenta que no es una
constante cintica en s, sino la razn de muchas (recordar las que ya se
incluyen en Km y Kcat).

Constante de especificidad: Nos define la eficiencia, no el poder

cataltico de la enzima. Habamos dicho que se trataba de una constante de
velocidad de segundo orden aparente, pero no solo por las unidades, sino por el
resultado de sustituir [ES] ([ES] = [E] [S] / Km) en la ecuacin genrica de velocidad
(v = Kcat [ES]). Esto da como resultado la velocidad de una reaccin qumica de
segundo orden aparente (ya que aparece la enzima y el sustrato). Esta velocidad
tiene una constante de proporcionalidad Kcat/Km que nos marca la eficiencia de
los encuentros de E y S para dar productos. Una alta eficiencia implica un valor
alto del cociente, y esto se puede conseguir, bien con una altaKcat, bien con una Km
baja, no se trata ms que jugar con los dos elementos de la fraccin.

Mximo valor de la constante de especificidad: Lo nico que hay que hacer

es desglosar las constantes cinticas que componen tantoKcat, como Km. El
resultado:

Con todo esto, vemos que

. Hay que recordar que k1 nos indica la tendencia de la enzima a unir sustrato, por
lo que es lgico que no pueda haber ms de un 100% de eficiencia, ya que eso
implicara que una vez el sustrato en el centro activo, este se transformara en
producto, sin opcin a salir. Ahora es intuitivamente ms fcil entender que es, lo
que nos marca la relacin entre las constantes Kcat y Km.
El valor mximo terico de la constante de especificidad es de 10 9 M"1s"1, sin
embargo, el mximo observado como valor de k1 es de 10 8 M"1s"1 y, por tanto,
no es posible que la constante de especificidad supere este valor.

Kcat/Km como constante de especificidad: En efecto, y como ya hemos

avanzado, esta constante nos da la eficiencia de los choques entre la enzima y el
sustrato. como ya sabemos hay enzimas capaces de catalizar una misma reaccin
sobre dos sustratos distintos. uno de estos ejemplos es la hexoquinasa, capaz de
fosforilar en C6 tanto a la fructosa como a la glucosa. una pregunta que se puede
platear es A que sustrato prefiere?. Para averiguarlo, se pone en un mismo tubo
de ensayo la enzima, el sustrato 1 y el 2. Se formar entonces una especie de ciclo,
donde la enzima libre podr escoger entre S1 o S2, compitiendo ambos por el C.A.
Tendremos entonces dos velocidades de conversin a productos v1 y v2, ambas

caracterizadas por la ecuacin

. Recordamos ahora que Kcat/Km era la constante de velocidad de los encuentros E

S, y ser especfica para cada sustrato. Pero ya que la cantidad de E es la misma

para las dos ecuaciones, podemos eliminarlaal divisir las dos velocidades. Si adems
consideramos Vo, lo que nos permite considerar constantes las [S], tanto de uno
como de otro, y aadimos la misma concentracin de ambos sustratos, el resultado
es que tambin podemos eliminar [S] de las ecuaciones, ya que sern iguales. El
resultado de tanta eliminacin y suspuesto es el siguiente:
Esta relacin nos da la respuesta a la pregunta que planteamos antes, ya que sin
ms que calcular Kcat y Km en un ensayo cinetico, a igual concentracin de E y de
S para ambos sustratos, podremos predecir a cual preferir la enzima. Si v1/v2 >
1, significar que v1 > v2 y, por tanto, que (Kcat/Km)S1 > (Kcat/Km)S2. Si la
constante de especificidad es mayor para uno que para otro, significa que el
rendimiento de los encuentros entre la enzima y ese uno es mayor, o lo que es lo
mismo que la enzima lo prefiere como sustrato. Y es pos esto que se le denomina
constante de especificidad, porque nos permite saber cual es el sustrato ms
especifico para la enzima.

Ecuacin de Haldane: Podramos plantearnos dejar que la ecuacin llegara al

equilibrio, o lo que es lo mismo, que la velocidad de retorno hacia el sustrato, a partir
del producto k2 sea significativa. Eso hara que la reaccin fuera ahora:
E + S ES E + P
Estamos en el equilibrio, de modo que [S] y [P] son constantes, como
plantebamos en la ecuacin de M&M. Esto significa que podemos suponer Vo y,
por tanto, plantear las velocidades de transformacin de S a P y viceversa en
forma de ecuacin de Michaelis. El equilibrio nos permite igualar estas velocidades
y utilizar Keq, que como sabemos no es modificable por la enzima. El resultado de
englobar y desarrollar todas estas ecuaciones se muestra a continuacin:

La ecuacin de Haldane, nos indica que si la eficiencia para un determinado

sentido es alta, para mantener el equilibrio, la otra no puede ser aleatoria, ya
que son proporcionales, sino que debe ser baja.
Siempre hay que recordar que la afinidad de la enzima por el sustrato, no nos
la da Km, sino Ks, la constante de disociacin que incluye las constantes
implicadas en el equilibrio, y solamente esas (k1 y k"1), no como Km que incluye
tambin las constantes de la reaccin siguiente. Claro est que hay un caso en el
que s se puede decir, el ms sencillo, la aproximacin al equilibrio.
Determinacin grfica de los parmetros cinticos Vmax y Km
Como ya he sugerido en varias ocasiones, la determinacin de Vmax, y
posteriormente de Km sobre la ecuacin de M&M, presenta serios problemas.

 La falta de exactitud de la representacin de los datos formando una hiprbola,

puede llevar a error en los valores de los parmetros cinticos, bastante
significativos en algunos casos.
Para determinar Vmax hay que llegar a saturacin, algo no siempre posible ya
que podramos rebasar el mximo de FI si Km es alta.
El hecho de tener que hallar Km a partir del valor de Vmax amplia
notablemente el error, adems de estar totalmente vinculado al trazo de la curva
que hallas dibujado.
En conclusin, es preferible utilizar la representacin hiperblica nicamente para
orientarse acerca de los posibles valores que puedan tomar Vmax y Km, pero no
para determinarlos.
Para hallar valores ms exactos y no dependientes de la saturacin de la reaccin
se idearon mtodos de linearizacin. Estos consisten en transformar
matemticamente la ecuacin de M&M hasta que quede en forma de ecuacin de
una recta, siempre y cuando se representen en los ejes las variables x e y que nos
salgan. El resultado de la representacin de los valores experimentales nos dar
una lnea recta, que cortar a los ejes y que tendr una pendiente. En cada caso
los cortes o la pendiente representar una o varias constantes cinticas y sern
estos datos los que utilizaremos.
Los mtodos de linearizacin son los siguientes:

Lineweaver"Burk o la Representacin de inversos.

Eadie"Hofstee

Hanes"Woolf

Eisenthal y Cornish"Bowden

Lineweaver"Burk o la Representacin de Inversos

y = ax + b
y = 1/v x = 1/[S]
a = Km/Vmax b = 1/Vmax
Tal vez una de las formas ms utilizadas, pero se intenta eliminar ya que oculta los
errores experimentales.
Eadie"Hofstee

y = ax + b
y = v x = v/[S]
a = "Km b = Vmax
Hanes"Woolf

y = ax + b
y = [S]/v x = [S]
a = 1/Vmax b = Km/Vmax
La ms recomendada ya que no esconde los errores experimentales como la de
inversos ni los potencia como las otras, se quedan como lo que son.
Eisenthal y Cornish"Bowden

y = ax + b
y = v x = [S]
a = v/[S] b = v
Hay que tener en cuenta la escala y las unidades.
Los cortes en los ejes determinan las velocidades y las concentraciones.
Las pendientes es lo que se representa ya que nos vale con dos puntos
conocidos [S] y Vmax.
El resultado en la mediana, no la media

ENZIMOLOGA
22
Cintica
7
Vo
[S]o
Tramo lineal

1er orden
Tramo independiente
orden 0
K"1
K2
K1

Vmax
Vo
[S]o
[S]=Km

k2 dividido por l mismo ms algo, siempre es 1

k1 multiplicado por un nmero 1

k1
k2
1/v
k"2
k"1
1/[S]
"1/Km

1/Vmax
Km/Vmax
v
v/[S]
"1/Km
"Km
Vmax
[S] /v
[S]
"Km
Km/Vmax
1/Vmax
v4 v3 v2 v1
Vmax
Km
[S]
v
[S]1 [S] 2 [S] 3 [S]4
Se rechaza
Se hace la media de los puntos de cort