UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA

FACULTAD DE CIENCIAS DE INGENIERA

ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL Y
SANITARIA

GRUPO 4: CAZADORES DE MCROBIO

:

TEMA
ASIGNATURA :

MICROBIOLOGIA

SECCION

DOCENTE
:
ESTUDIANTES:

ACUA MONTAEZ NOEMI

ANCCASI ESTEBAN CINTHIA
APUMAYTA HUAMANI FISHER
ARECHE QUISPE RENZO
CENTENO SOTO SECARIO
DIAZ FERNANDEZ IVAN
LEDESMA GIRALDEZ WILDER
ORTIZ ZUARNABAR RAFAEL
RAMOS GOMEZ EDITH
ZEBALLOS APARCO ERNESTO

NOTA

HUANCAVELICA 2015

PREPARACIONDE MEDIOS
DE CULTIVO

CULTIVOS DE
MICROORGANISMOS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA

ESTE PRESENTE TRABAJO LE DEDICAMOS A DIOS POR LA VIDA QUE NOS DA Y L

PARA ENSEAR.

PRACTICA N2

INTRODUCCION:
Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin de las bacterias, para
observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio, los medios de cultivos son
fuentes nutritivas naturales que se asemejan al nicho ecolgico de los
microorganismos en la cual se desarrollan.
Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de enriquecimiento
que tratan de aumentar el nmero de bacteria existente, si consideramos que se
encuentran en cantidad muy exigua, a la vez que inhiben la flora de asociacin
acompaante y de aislamiento (que tienen por fin conseguir una colonia o clon, es
decir, grupo de bacterias procedentes de una sola, con todas sus propiedades); Los
medios selectivos son aquellos que poseen algn componente que permite el
crecimiento de una especie bacteriana, carcter de importancias para su
identificacin, y los diferenciales, aquellos que las diversas especies que hay que
testar alteran de forma distinta, por lo que suelen llevar indicadores (sustancias
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DE CULTIVO

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MICROORGANISMOS

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que varan su coloracin segn el pH del medio) u otros ndices de reacciones

qumicas definidas.
Para estudiar los microorganismos es necesario cultivarlos en los medios
apropiados. La tcnica y el medio seleccionado dependen de la naturaleza de la
investigacin en general se pueden presentar tres situaciones:

Se puede levantar una cosecha de clulas de una especie en particular que se tiene.

Puede ser necesario determinara el nmero y tipos de microorganismos

El objetivo clsico del aislamiento es la separacin de los microorganismos en
grupos, que puedan identificarse siguiendo los principios de la microbiologa.
(Ledesma, 2015)

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DE CULTIVO

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MICROORGANISMOS

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I.

OBJETIVO:

OBJETIVO GENERAL
Proporcionar al estudiante el conocimiento cientfico y las habilidades
prcticas de los mtodos y tcnicas utilizados en Microbiologa para el
aislamiento e identificacin de los principales agentes patgenos para el
hombre a partir de muestras.
OBJETIVO ESPECIFICO

Practicar el manejo asptico de medios de cultivo.

Aprender a esterilizar el asa bacteriolgica.
Conocer las diferentes tcnicas de siembra.
Realizar la transferencia (repique) de bacterias desde un cultivo puro

(cepa) a diferentes tipos y medios de cultivo.

Trabajar con una muestra real.
Marcar (identificar) adecuadamente los medios de cultivo.
Aprender a tomar una muestra de la pseudomona putida.

II.

FUNDAMENTO TERICO:
De manera general se denomina medio de cultivo a cualquier material que presente
una adecuada combinacin de nutrientes para permitir el crecimiento o el incremento
del nmero de clulas de una poblacin microbiana. En los Laboratorios de
Microbiologa se utiliza una gran variedad de medios de cultivos para mantener las
cepas, aislar

o identificar

microorganismos,

tienen

un uso creciente

en

la Biotecnologa y la proteccin medioambiental, por lo que es una necesidad de

mantenerlos de manera que las propiedades que los hacen importantes permanezcan
estables.

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Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin
de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.
El agar es un elemento solidificarte muy empleado para la preparacin de medios de
cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento
de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l. La Gelatina es otro
agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan
su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el
valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden
para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado
por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.
1- DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otra sustancia inductoras del crecimiento.

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Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o
captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a
muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamnica.
Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de
inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2- CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado
semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto
de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,
pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente
extendido en el laboratorio.
3- PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXGENO Y OTROS GASES
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una
atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias
(tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
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4- CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas
de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el
medio.
5- LUZ AMBIENTAL
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.

6- pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar
que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos
normales.
7- TEMPERATURA
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y
43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los termfilos a 80C o incluso a
temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos
crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos
tienen rangos ms amplios.
8- ESTERILIDAD DEL MEDIO
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
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crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en dichos medios.

El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
vapor de agua a presin como agente esterilizante).
Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como ciencia en
el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observacin de los
primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de
cultivo y la utilizacin del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de
inflexin en su evolucin.
La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo nos llega del miclogo
Brefeld, que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos realizados
a base de gelatina.
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamao) y
no fue hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un mtodo enfocado al cultivo puro
basado en diluciones seriadas en un medio lquido.
Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata
como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne lquido,
diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un medio slido
transparente ideal para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias
microbianas.
En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en relacin
con los medios de cultivo: el mdico alemn Walter Hesse introduce el agar-agar
(polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal
planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas
bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las
bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron gran
importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. Disearon
este tipo de medios de tal forma que su especial composicin qumica favoreca el
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crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en funcin de sus procesos

metablicos, eran los nicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes
del medio.

III.

MATERIALES Y METODOS:
3.1. MATERIALES:

MATER
IAL
MEDIOS
DE
CULTIVO

ASA
BACTERE
OLOGICA

ASA
DRIGALK
I

FUNCIN

IMAGEN

Habitan en el suelo y forman parte de la

flora nativa del intestino de varias
especies animales son de vida libre.

Se emplea para transportar, arrastras o

transvasar inculos (pequeo volumen
que tiene organismo en suspensin)
desde la solucione de trabajo llamada
tambin solucin madre al medio de
cultivo (solido liquida) o de un medio a
otro (resiembra). Tambin sirve para la
realizacin de frotis.
Estas asas de siembre estn diseadas
para simplificar el trabajo en el cultivo
de las bacterias.

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EMBUDO
DE
VIDRIO

VASO
PRECIPIT
ADO

PROBETA
MILIMET
RADA

MECHER
O
DE ALCO

El embudo es un instrumento empleado

para
canalizar lquidos y materiales slidos gran
ulares en recipientes con bocas estrechas.
Es usado principalmente en cocinas,
laboratorios,
actividades
de construccin, industria, etc.
Pude ser de vidrio, plstico.
Un vaso de precipitados o vaso de
precipitado es un recipiente cilndrico de
vidrio fino que se utiliza muy comnmente
en el laboratorio, sobre todo, para preparar
o calentar sustancias y traspasar lquidos.
Generalmente de vidrio pero tambin hay
de plstico y metal.
Es un instrumento volumtrico, que
permite medir volmenes considerables
con un ligero grado de inexactitud. Sirve
para contener lquidos.
De vidrio.
Sirve para calentar sustancias con alcohol
o ron.
De vidrio o metal.

HOL O
RON
TUBO DE
ENSAYO

MATRAZ

Es un tubo cilndrico pequeo utilizado en

la contencin de muestras lquidas y
tambin para calentarla, etc.
De vidrio.
Recipiente de cristal donde se mezclan las
soluciones qumicas, generalmente de
forma esfrica y con un cuello recto y
estrecho, que se usa para contener lquidos;
se usa en los laboratorios.
De vidrio.

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MICROORGANISMOS

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PLACA

La placa de Petri es un recipiente redondo,

de cristal o plstico, con una cubierta de la
misma forma que la placa, pero algo ms
grande de dimetro, para que se pueda
colocar encima y cerrar el recipiente,
aunque no de forma hermtica. Es parte de
la coleccin conocida como material de
vidrio. Se utiliza en Microbiologa para
cultivar clulas, observar la germinacin
de las semillas o examinar el
comportamiento de pequeos animales.

PETRI:

ESPTUL
A:

BALANZA
ANALTIC

La esptula es un material de laboratorio

para extraer los reactivos con sumo
cuidado para no contaminar el reactivo.

Balanza de laboratorio diseado para

medir pequeas masas.

3.2. METODO DE PREPARACION DE MEDIOS

DE CULTIVO:
En este mtodo utilizamos 4 pasos muy bsicos que son:
3.2.1. Pesar las sustancias en las formulas respectivas calculando las cantidades en
relacin con los volmenes requeridos.
Para la preparacin del agar pseudomonas seguimos los mtodos de
preparacin que es 38 gr para 1000 ml pero nuestra finalidad es obtener 400
ml de agar pseudomonas por lo que recurrimos a realizar clculos y a si
obtener nuestro objetivo:

38 gr

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1000 ml
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400 ml

x=

( 400 ml )(38 gr )
1000 ml
x=15.2 gr de agar pseudomona .
3.2.2. Disolverlas en la cantidad de agua destilada necesaria llevndole a ebullicin.
Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121 C.
Ya obtenido el valor del clculo procedemos a preparar nuestro agar
pseudomonas a una capacidad de 400 ml.
Lo primero que realizamos es vertir el soluto a un matraz que
sobrepase la capacidad de 400 ml y seguido por un embudo para
agregar el agua destilada, usamos este mtodo para preparar mejor la
solucin con la finalidad de no obtener grumos en el momento de
disolverlas, luego de disolverlas llevamos a la estufa para que la
solucin est libre de grumos o pequeas partculas adherida al

matraz.
Seguidamente llevamos la solucin del agar pseudomonas al
autoclave por 15 minutos a un temperatura de 121 C, esto nos
permitir esterilizar las solucin que puede haber sido contaminado al
momento de preparar la muestra.

3.2.3. Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121 C.

Seguidamente llevamos la solucin del agar pseudomonas al
autoclave por 15 minutos a un temperatura de 121 C, esto nos
permitir esterilizar las solucin que puede haber sido contaminado al
momento de preparar la muestra.
3.2.4. Servir en placas de Petri, tubos de ensayo completamente estriles y siempre
a una llama (mechero)

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Utilizando 3 mtodos de cultivo de microorganismo para el agar

pseudomonas que son; incorporacin, por superficie y por estra.

3.3. METODO DE CULTIVO DE

MICROORGANISMOS:
3.3.1

SIEMBRA POR INCORPORACION:

Esterilizando nuestra rea de trabajo con un poquito de ron y fuego libre.

se abre la placa de Petri con mucho cuidado, con un ngulo pequeo

para evitar el ingreso de las bacterias del aire.
se toma 1 ml de muestra (bacteria Putida en disolucin) y se vierte
sobre una placa de petri.

la superficie del frasco que contiene el agar licuado debe soportar la

mano(estar frio)

, para luego agregar este

agar nutritivo de

pseudomona( aproximadamente 20ml y la mitad de la placa) , sobre el

centro de una placa de Petri que contiene la bacteria en dislocacin y se
tapa,

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poner la placa

sobre la mesa previamente esterilizado y hacer los

movimientos de homogenizacin con la mano uno en forma antihorio,

otro en forma horario otra en direccin hacia arriba y hacia abajo.
se procede al rotulado de la palca de Petri con :
el n de masa
nombre de la bacteria
nombre del personal que hace esta siembra
seccion:

invertir las placas de petri e encubar las a 37c por 24 a 48 horas

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luego usaos el mtodo de la observacin y se describe las formas de

colonias que crecieron sobre el agar.

3.3.2.

SIEMBRA POR SUPERFICIE:

Desinfectar el rea de trabajo con la ayuda del ron de 97 y con el mechero

prendido en esa rea.

Al lado del mechero se realizara el cultivo de los microorganismos.

Se le agrega a la placa de Petri el caldo de cultivo hasta la mitad, y esperar
hasta que se solidifique, pero siempre al lado de la flama para que no se
contamine el ambiente.

Estando ya solidificada agregar 0.1 ml de la muestra solucin madre con la

ayuda de la pipeta.

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Limpiar el aza drigalky con la ayuda del ron y llevarlo al mechero para as
desinfectar el material.

Una vez desinfectada, la aza se le enfra en la parte de la tapa de la placa

para as no daar a las bacterias.
Ya enfriada la aza, se esparce por toda la placa a las bacterias.

Con el fin de que las bacterias se reproduzcan alimentndose de todo el

nutriente que se encuentran en toda la superficie.
Rotular todas las muestras (placa de Petri):

el n de masa
nombre de la bacteria
nombre del personal que hace esta siembra
seccion:

invertir la placa de Petri e Incubarlas a 37 grados en la mufla por 24h o 48h.

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luego usaos el mtodo de la observacin y se describe las formas de colonias

que crecieron sobre el agar.

3.3.3. SIEMBRA POR ESTRIA:

Esterilizando nuestra rea de trabajo con un poquito de ron y fuego libre.

se abre la placa de Petri con mucho cuidado, con un ngulo pequeo

para evitar que entren las bacterias del aire y contaminen nuestro

resultado.
se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo (agar nutritivo de
pseudomona) previamente licuado, es decir sin ninguna acumulacin de
grumos, aproximadamente la mitad de la placa de Petri (20 ml de

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cantidad), y se deja enfriar para luego poder solidificarse (condensarse o

fundirse) segn baje la temperatura.
Se realiza el proceso de esterilizacin de la aza bacteriolgica de la
siguiente manera.

se sumerge la punta de la aza bacteriolgica en un poco de ron para

luego ser calentada al calor del mechera de forma verticalmente, es

decir formando un ngulo de 90 hasta que este de color rojo brillante.

se toma con la otra mano el tubo de ensayo que esta contenido de la
bacteria Putida en solucin y con la otra enfriar la punta de la aza
bacteriolgica en las paredes del tubo(bacteria) para luego sumergirlo y
sacar (cargar) una pelcula de bacteria Putida

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IV.

RESULTADOS

V.

De las diez siembras que realizamos solo unos el 60 % de las placas se reprodujeron
y Los resultados obtenidos se explican en el siguiente recuadro:

MTODOS DE CULTIVO DE MICROORGANISMOS

Siembra por
Por este mtodo
Incorporacin

obtuvimos
menos resultados
solo 1 de 3 se

Siembra en

reprodujeron.
Por este mtodo

superficie

solo 2 de 3 las
cuales nos
indican que es

Siembra por estra

ms preferible.
Por este mtodo
obtuvimos
mejores
resultados 3 de 3
preferible y ms
puntual.

VI.

DISCUSION:
Dentro de marco de discusiones podemos enmarcar diversos aspectos importantes y
fundamentales de la prctica de microbiologa. Destacamos el resultado positivo
sobre los medio de cultivo, ya que en el aplicamos toda la teora estudiada en la
clase es decir los diversos modos de cultivo fueron necesarios para hacer un buen
cultivo y de esta manera definir el que se acomodara de mejor forma a la prctica
que elaboramos.
Despus de aplicar y utilizar el medio de cultivo donde se utiliz agar es preciso
decir que la consistencia de nuestra solucin era mucho ms gelatinosa. Otro punto a
debatir es de los microorganismos que creci en el cultivo. Hablamos de que dentro
del cultivo crecieron una gran cantidad de microorganismos en especial la putida en
las placas de Petri y en algunos no, esto se debe al mal manejo al momento de
cultivar (sembrar) los microorganismos.
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VII.

CONCLUSIONES:
se aprendi a la correcta esterilizacin de los materiales que se utilizara para

la preparacin y cultivo de los microorganismos.

Se aprendi a utilizar la mufla y autoclave para la esterilizacin de los
materiales.
aprendimos a preparar el caldo nutritivo para los microorganismos de la
misma manera la importancia del cuidado al prepararlas.
Se aprendi a cultivar microorganismo con el uso adecuado al prepararlas, la
posicin de la mano y de qu manera evitar que se contamine el ambiente.
Obtuvimos los resultados y observamos cmo se haban reproducido y que
muestra no obtuvo resultado.

De acuerdo a esta prctica se sugiere que los alumnos

que estn trabajando en el laboratorio que
mucho

cuidado,

porque

estamos

tengan

trabajando

con

microorganismos que pueden ser perjudiciales para

nuestra salud.
Principalmente las sugerencias van para el grupo de
cazadores de microbios que tengan un poco ms de

VIII.

SUGERENCIAS
cuidado en el momento de cultivar (siembra) porque
hay muestran que no han tenido resultados positivos,
esto se debe a que no han tenido un cuidado necesario
en el momento de cultivar los microorganismos.

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IX.

BIBLIGRAFIIA:

http://es.slideshare.net/rebecaoloarte/preparacin-de-medios-decultivo
http://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-cultivo-ypruebas-bioquimica-presentation
http://www.ecured.cu/index.php/medio_de_cultivo_(microbiolo
g%c3%ada)
http://annymojica.blogspot.pe/2012/03/practica-no3preparacion-de-mediospara.html
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf
http://www.monografias.com/trabajos101/manualpracticasmicrobiologia/manual-practicas-microbiologia.shtml
http://es.slideshare.net/shakaroon/medios-de-cultivo-15379886
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/seminariomedios.htm

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X.

ANEXOS

ILUSTRACIN 1ESTERILIZANDO LA AZA BACTEREOLOGICA Y ENFRIAMIENTO DEL CAMPO DE ESTUDIO

Ilustracin 2RESULTADO DEL PROCES DE SEMBRIO DE BACTERIAS

Ilustracin 3LICUANDO EL AGARE

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Ilustracin 4PRAPARANOD LA SOLUCION NITIDA

Ilustracin 5MUESTRA ROTULADA Y VEREMOS EL CUERPO ,

Ilustracin 6MOSTRANDO EL RESULTADO NOO

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Ilustracin 7SACANDO UAN PELICULA DE BURBUJA

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