Laboratorio virtual de PCR

Biologa Molecular

PCR, siglas para Reaccin en Cadena de la Polimerasa es una herramienta simple y

econmica que puede usarse para localizar un segmento de ADN y copiarla billones de veces.
La PCR es usada todos los das para diagnosticar enfermedades, identificar bacterias y virus,
relacionar criminales a escenas del crimen y muchos otros usos.

Jeison Cano Edilberto Blanco Felipe Gmez

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El genoma humano est compuesto por 3 billones de pares de bases. Los cientficos a menudo
necesitan aislar segmentos especficos de DNA partiendo de una gran cantidad de material
gentico. Desde este pequeo fragmento, el cual es una pequea parte del genoma, ellos
necesitan bastantes copias suficientes para trabajar con l.

La reaccin en cadena de la polimerasa o PCR, puede generar 100 billones de copias idnticas
de una secuencia especifica de ADN en cuestin de horas. El inventor de la PCR explica que
esta tcnica no requiere ms que una probeta, algunos reactivos simples y una fuente de
calor

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Para realizar una reaccin de PCR se necesita ADN extrado desde las clulas. Debido a que
el propsito de la PCR es obtener ms copias de ADN, no se necesita mucho de este para
iniciar la reaccin. Por ejemplo, puede extraerse ADN desde una pequea muestra de sangre,
piel, saliva e incluso de una hebra de cabello.

Inicie moviendo el ADN extrado dentro de un tubo especial para PCR. Esta reaccin ocurre
por el calentamiento y el enfriamiento de la solucin una y otra vez, as que los tubos para
PCR estn diseados para una distribucin uniforme del calor.
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Mueva el ADN extrado hacia el tubo para PCR

Soltar del ADN dentro del tubo

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Luego, aada el primer 1 o forward al tubo de PCR. Los primers o cebadores se adhieren a
los sitios extremos de las hebras de ADN que queremos copiar. Estos son poderosas
herramientas para copiar segmentos muy especficos de ADN, ya que hay muy poca
probabilidad de que estos seleccionen el sitio incorrecto.
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Adicione el primer 1 en el tubo de PCR

Ahora, aada el primer 2 el cual se adherir al segundo sitio.

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Aada los nucletidos a el tubo de PCR. Los nucletidos son los A, C, G, T. Estos conforman
el cdigo gentico. Estos bloques genticos sern usados para crear billones de copias de
ADN.
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Aada los nucletidos al tubo de PCR.

Por ltimo, se aade la DNA polimerasa al tubo de PCR. Esta molcula funciona como una
pequea mquina que lee el cdigo gentico y luego adhiere los nucletidos complementarios
para crear copias de ADN. Esta DNA polimerasa en particular, fue diseada para soportar
las altas temperaturas de la reaccin de la PCR.
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Aada la DNA polimerasa al tubo de PCR.

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Ahora el tubo de PCR est lleno con todos los componentes de la reaccin, ahora debe
ponerse dentro de un termociclador. Esta mquina puede, en tiempos determinados, calentar
y enfriar el tubo durante la siguiente hora. Estos cambios de temperatura son cruciales para
hacer que esta reaccin funcione.
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Introducir el tubo de PCR dentro del termociclador.

Presione el botn START del termociclador

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Dentro del tubo de PCR, el primer ciclo ha comenzado. El termociclador se calienta hacia
los 95C o 203F, cerca del punto de ebullicin. A esta temperatura, las dobles hlices del
ADN se separan, creando dos molculas de ADN simples.

Ahora, el termociclador baja su temperatura a 50C o 122F. A esta temperatura, las

molculas sencillas de ADN naturalmente tratan de emparejarse. Sin embargo, hay muchos
ms primers que hebras de ADN en el tubo. Los primers se desplazan y bloquean su objetivo
antes de que las hebras puedan unirse de nuevo.

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El termociclador ahora cambia su temperatura hacia los 72C, la cual activa la DNA
polimerasa. Cuando esta localiza al primer unido a la hebra simple de ADN, empieza a aadir
nucletidos complementarios en la hebra. Esta continua hasta que llega al final de la hebra y
se desprende.
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El primer ciclo se ha completado.

Los mismos tres pasos se repiten en el ciclo dos. La temperatura es aumentada de nuevo para
separar las hebras. La temperatura disminuye para que los primers sean adheridos y la
temperatura sube de nuevo para estimular a la DNA polimerasa para copiar la secuencia.

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Durante el ciclo tres, los productos esperados empiezan a aparecer, dos hebras que empiezan
con el primer 1 y finalizan con el primer 2. Estas son copias de ADN de solamente del
segmento seleccionado. A pesar de que en este ciclo solo se dispone de dos fragmentos
esperados, a medida que continan los ciclos, estos productos rpidamente se multiplicaran.
Al final del cuarto ciclo, se obtendrn ocho fragmentos que contienen solamente la secuencia
objetivo.
Ciclo 5. Ahora se han obtenido 22 fragmentos que contienen solo la secuencia objetivo y solo
diez copias largas.

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Luego de treinta ciclos se obtienen billones de fragmentos que contienen la secuencia

objetivo, y solo sesenta copias largas. Ahora, se cuenta con una solucin casi pura de
secuencia objetivo.

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