UNIVERSIDAD CENTRAL DEL

ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

LABORATORIO DE Q.A. INSTRUMENTAL

I
SEMESTRE:
MATERIA:
GRUPO:

6TO
Q.A. INSTRUMENTAL I
1

FECHA:
DA:
HORA:

2015-05-20
MIRCOLES
10:00-12:00

INTEGRANTES:

Calle Santiago
Quishpe Josu
Ruiz Nelson
Sotalin Alexis

BIOQUMICA CLNICA
BIOQUMICA CLNICA
QUMICA
QUMICA

PRCTICA No. 6
1.-Tema: Fotocolorimetra
2.- OBJETIVOS:

Determinar el funcionamiento del espectrofotmetro.

Realizar determinaciones colorimtricas mediante el empleo de tubos de nessler.
Establecer la longitud de onda de mxima absorbancia del KMnO4 en solucin.
Obtener los siguientes grficos:
A vs. c
A vs. (para el estndar tres)
A vs. (para todos los estndares a 526 y 620 nm; dos grficos)
%T vs. c
Determinar el contenido de manganeso en una muestra de suelo.

3.- CONSULTA:
MARCO TEORICO

Fundamento de la absorcin molecular de la radiacin electromagntica:

La absorcin por molculas poliatmicas, es un proceso considerablemente ms complejo

que la absorcin atmica, ya que el nmero de estados de energa est muy aumentado.
Aqu la energia total de una molcula est dada por:

E = Eelectrnica + Evibracional + Erotacional

Para cada estado de energa electrnica de la molcula hay normalmente varios estados
vibratorios posibles y a su vez, para cada uno de stos existen numerosos estados
rotatorios. Como consecuencia el nmero de posibles niveles de energa de una molcula
es mucho mayor que el de una partcula atmica. Es por ello que los espectros de
absorcin aparecen como anchas bandas.
La absorcin de radiacin ultravioleta y visible por una especie M, puede considerarse
como un proceso en dos etapas, la primera de las cuales corresponde a la excitacin
segn:
M+h.vM*
donde M* representa la partcula atmica o molecular en su estado electrnico excitado
que se produce como resultado de la absorcin del fotn h v. Este estado excitado tiene
un breve tiempo de existencia (10-8 a 10-9 s) y desaparece a travs de travs de algunos
de los diferentes procesos de relajacin (calor).
M*M+calor
La absorcin de la radiacin ultravioleta o visible, se produce por lo general como
consecuencia de la excitacin de los electrones de enlace; debido a esto, la longitud de
onda de los picos de absorcin se puede correlacionar con los tipos de enlace existentes
en la especie que se estudia.

Por qu las sustancias presentan coloracin?

Una sustancia puede absorber radiacin si su energa corresponde exactamente a la

necesaria para que suba a un nivel de mayor energa. Los fotones de la luz visible
generalmente tienen la energa suficiente para que los electrones de una sustancia suban
a un nivel ms energtico. Pero un electrn en un tomo o una molcula no tiene
permitido absorber cualquier cantidad de energa. Como los fotones de luz de cada color
tienen diferente energa, una sustancia puede absorber unos colores y otros no.

Definicin de Absorbancia y Transmitancia

Transmitancia.- se define como la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en
determinada cantidad de tiempo.

I es la cantidad de luz transmitida por la muestra e I0 es la cantidad total de luz

incidente.
Absorbancia.-un haz de luz incide sobre un cuerpo traslcido, una parte de esta luz

es absorbida por el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo.

I es la intensidad de la luz que pasa por la muestra (luz transmitida) y I0 es la

intensidad de la luz incidente.

Diseo y funcionamiento del colormetro de Duboscq, fotmetro de filtro.

Basado en la ley de absorcin de la luz habitualmente conocida como de "LambertBeer". El colormetro permite la comparacin de dos disoluciones, una de las cuales,
para que pueda ser empleado con fines analticos, debe ser de concentracin
conocida. La luz reflejada mediante el espejo inferior atraviesa los recipientes en los
cuales se encuentran la muestra patrn y la muestra estudiada. Los tubos de vidrio
(TC) permiten regular la distancia recorrida por el haz luminoso en la disolucin.
Finalmente, un prisma recoge estos rayos luminosos y los dirige al ocular, en el cual
se pueden observar dos semicrculos procedentes cada uno de cada muestra y, de
este modo, se puede comparar las intensidades de salida. Si se vara la posicin de
los tubos TC, se pueden obtener en el ocular dos semicrculos de igual intensidad y
calcular el valor de la concentracin de la disolucin analizada, mediante el siguiente
procedimiento:
c1 = c2 * d2/d1, d1 y d2 representan la longitud de las columnas de lquido que
pueden regularse a voluntad.
Diseo: luz proviene de una fuente uniforme de iluminacin, oculta en la base del
aparato, pasa por las ventanas (filtros mate blanco) de la parte superior de la base,
luego por las soluciones a comparar y por los vstagos. Los dos haces de luz que
pasan por los vstagos se llevan a un eje comn mediante un sistema de prismas.
Finalmente llega al ocular en el cual se ve un amplio campo circular, proviene de una
cubeta que ilumina la mitad del campo y la luz que ha pasado por una segunda
cubeta, ilumina la otra mitad del campo. El ojo humano es el detector del comparador
de Duboscq.

Mtodos de medicin de la absorcin de la radiacin:

a) Mtodo de las series patrn
Se aade una alcuota de la muestra cantidad conocida de un elemento de
nmero atmico cercano al del problema. La radiacin caracterstica de este
elemento de referencia debe ser absorbido de modo anlogo a la radiacin
caracterstica del elemento problema. Dentro de un campo limitado de
concentraciones existe una relacin lineal entre la intensidad de lnea y la
concentracin. Se mide el anlisis se realiza midiendo la intensidad de la lnea
caracterstica antes y despus de la adicin de la muestra conocida a la sustancia
problema.

b) Mtodo de compensacin
Se mide la intensidad de Iu de una line determinada del problema y se compara
con la intensidad Is de la misma lnea emitida por un patrn de compensacin
composicin conocida, si el problema y el patrn son de composicin muy
parecida, los clculos se pueden se pueden basar en I u/Is = Cu/Cs pero si la
composicin varia es necesario construir un grafica de calibrado que relaciona I u/Is
con la concentracin lo que exige utilizar una serie de patrones de concentracin
conocida.

4.- TABLAS DE DATOS:

Tabla 1. Preparacin de los estndares de trabajo
Estndares
0
1
2
3
4
5

ml. KMnO4
0,001N
0
10
20
30
40
50

ml. H2O estabilizante

50
40
30
20
10
0

Elaborado por: Calle,Quishpe,Ruiz,Sotalin

Tabla 2. Valores de absorbancia y transmitancia para los estndares y muestra a diferentes
longitudes
de
onda
St.
A530
T530
A620
T620
Espectrofotmetro
0
0.000
100.00
1
1,796
1,60
2
1,699
2,00
3
1,721
1,80
4
1,745
1,90
5
0,983
2,20
M
0,023
94,9
Calle,Quishpe,Ruiz,Sotalin

Espectrofotmetro
0.000
100.00
0,298
50,5
0,595
25,4
0,807
15,7
1,155
6,9
1,377
4,2
0,018
95,8

Elaborado por:

Tabla 3. Valores de absorbancia y transmitancia para el estndar tres a diferentes

longitudes de onda
Estndar 3
nm
%T
A
420
64,4
0,191
470
1,7
1,770
530
0,9
2,046
620
12,7
0,896
670
33,8
0,472
Elaborado por: Calle,Quishpe,Ruiz,Sotalin

5.- CLCULOS Y RESULTADOS:

5.1 Clculo de la concentracin molar de los estndares
Estndar 1

N KMn O =
4

m
Peq .V L

m=N . Peq . V L

m= 0,001

Eq
L

g
(0,01 L)
)( 157,93
5
Eq )

m=3,1586 x 104 g
N St 1=

N St 1=

m
Peq .V L

( 3,1586 x 104 g )
g
( 0,05 L )
( 157,93
5
Eq )

N St 1=2 x 104 Eq/ L

N St 1=5 M
4

2 x 10
M St 1=
5

M St 1=4 x 105

Estndar
1
2
3
4
5

N, Eq/L
2x10-4
4x10-4
6x10-4
8x10-4
0,001

M, mol/L
4x10-5
8x10-5
1,2x10-4
1,6x10-4
2x10-4

5.2 Clculo del coeficiente de absortividad molar y absortividad especifica a

cada longitud de onda
Tabla 4. Absortvidad molar y especfica
Estndar 3
(nm)

Absortividad
especfica
(mg.L-1.cm-1)

420

Absortividad
molar
(mol.L-1.cm-1)
1591,67

2,5110

470

14750

2,3310

530

17050

2,6910

620

7466,67

1,1810 9

660

3933,33

6,21

Elaborado por: Calle,Quishpe,Ruiz,Sotalin

Absortividad molar

108

A= b C
Dnde:
A= absorbancia
b= longitud de celda
C= concentracin

= Absortividad molar
=

A
bC

0,191
( 1cm ) (1,2 x 104 mol / L)

=1591,67

mol
cm. L

Absortividad especfica

1591,67 x

mol
158 g
103 mg
8 mg

=2,5110
cm. L 1 mol KMnO 4
1g
cm. L

5.3 Clculo de absortividad a una longitud de onda de 535nm (o la ms cercana)

St.

(530nm)
Absortividad Molar

44900

21237,50

14341,67

10906,25

5
Estndar 1

4915

A= b C
=

A
bC

1,796
( 1cm ) ( 4 x 105 mol / L)

=44900

mol
cm . L

5.4 Concentracin de los estndares:

Tabla 5.- Clculo de la concentracin de los estndares
Estndar

g Mn/ml

0
1
2
3
4
5

0
2,20
4,40
6,60
8,80
11,00

g KMnO 4 /ml

ppm Mn

ppm KMnO 4

0
0
0
6,32
2,20
6,32
12,64
4,40
12,64
18,96
6,60
18,96
25,28
8,80
25,28
31,60
11,00
31,60
Elaborado por: Calle,Quishpe,Ruiz,Sotalin

Estndar 1

4 x 105

mol
158 g
10 g
1L

=6,32 g KMnO 4 / ml
L
1 mol KMnO4
1g
1000 ml

mol
55 g Mn
106 g
1L
Mn
4 x 10

=2,20 g
L
1 mol KMnO 4
1g
1000 ml
ml
5

4 x 105

mol
55 g Mn
103 mg

=2,20 ppm Mn
L
1 mol KMnO4
1g

ppm MnO2
0
3,48
6,96
10,44
13,92
17,40

4 x 105

mol
158 g
103 mg

=6,32 ppm KMnO 4

L
1 mol KMnO4
1g

87 g Mn O2
mol
103 mg
4 x 10

=3,48 ppm Mn O 2
L
1 mol KMnO4
1g
5

5.5.- Concentracin de Mn en el suelo, expresado:

ESPECTROFOTOMETRO

Estndar
0
1
2
3
4
5

Absorbancia
0,000
1,796
1,699
1,721
1,745
0,983

Ppm Mn
0,00
2,20
4,40
6,60
8,80
11,00

Elaborado por: Calle,Quishpe,Ruiz,Sotalin

a) Como % de Mn y ppm de Mn, ppm de KMnO4, ppm MnO2
Para el espectrofotmetro: (

Estndar
1
2
3
4
5
Muestra

530 )
Absorbancia
1,796
1,699
1,721
1,745
0,983
0,023

Concentracin (mol/L)

Elaborado por: Calle,Quishpe,Ruiz,Sotalin

4x10-5
8x10-5
1,2x10-4
1,6x10-4
2x10-4

A
2
f(x) = - 4067.28x + 1.96
R = 0.75

1.5

Absorbanncia

Linear (A)

0.5
0
0

Concentracion

C M=

A1,9597
4067,3

C M=

0,0232,7863
4067,3

C M =4,76 x 104

ppm KMnO 4=4.76 x 104

mol/L KMnO4

mol KMnO 4 157,93 g KMnO 4 1000 mg

x
x
L
1mol
1g

ppm KMnO 4=75,17

ppm Mn=4.76 x 104

mol KMnO 4
1 mol Mn
54,94 g Mn 1000 mg
x
x
x
L
1mol KMnO 4 1 mol Mn
1g

ppm Mn=26,15
Mn=26,15

mg soluto 1 g de soluto 1 kg muestra

x
x
x 100 g muestra
kg muestra
1000mg
1000 g

Mn=0,0 02615

ppm MnO2=26,15

mg Mn
1 g Mn
86,94 g Mn 1000 mg MnO 2
x
x
x
kg
1000 mg Mn 54,94 g Mn
1 g MnO2

ppm MnO2=41,38

b) En meq de Mn/ 100 g de suelo

meq Mn=26,15

mg Mn
7 meq Mn
1 kg
x
x
x 100 g
kg
54,94 mg Mn 1000 mg

meq Mn=0.3332

meq Mn
100 g suelo

c) Suponiendo una capa arable de 15 cm de espesor y la densidad del

suelo=2,65g/ml, expresar en kg de Mn por hectrea de suelo

V = Aespesor=

26,15 mgMn
1kgsuelo
kgsuelo
2,65 gsuelo
1000 gsuelo
0,001 kgMn
2
m2( 100 cm)
1cm 3
V=
151000
1000 mgMn
1m2

V =10,39

kg Mn
hectarea suelo

Tabla 6. Clculo de la concentracin de Mn en la muestra

CONCENTRACIN
Mn (%)
Mn (ppm)

ESPECTROFOTMETRO
0,002615
26,15

KMnO4 (ppm)
MnO2 (ppm)
Mn (meq/100g suelo)
Mn (Kg/Ha suelo)
Elaborado por: Calle,Quishpe,Ruiz,Sotalin

75,17
41,38
0,3332
10,39

5.7 Clculo Estadstico

Promedio %Mn

x =

x1+ x2
2
4

x = 2,0110 +1,3710
2
x =1,69104 Mn

Desviacin Estndar

S= N 1=

S= N 1=

( X i X )
i=1

N1
2

( 2,01104 ) + ( 1,37104 )

21

N1=4,52105 Mn
% Mn 3 n-1
4

1,69* 10

(1,69* 10

3 (4,52* 10
4

1,36 * 10

) %Mn

6.- ESTADSTICA:
Tabla 7. Tratamiento estadstico
Estndar
1

% Mn

Espectrofotmetro

x1

1,34x 10

x2

1,46x 10

x3

1,44x 10

4
5
Promedio
Desviacin
estndar
Resultado

x4

1,40x 10

x5

26,15x 10

1,65x 10

n 1

5,41x 10

x 2 n 1

(1,65x 10

% Mn
%Mn
3

1,08x 10

% Mn
Elaborado por: Calle,Quishpe,Ruiz,Sotalin
7. GRFICOS:

A vs c

A vs C
2.200
1.200

A 530

A530

A620

0.200
-0.800

10

15

20

25

A vs (para el estndar tres)

GRAFICO A vs (para el estndar tres):

30

35

40

45

50

A620 vs
1.400
1.200
1.000
0.800
A620
Linear (A620)
A620
0.600

MUESTRA

0.400
0.200
0.000
619 619.5 620 620.5 621
(nm)

A530 vs
2.000

A530
1.500

Linear (A530)

A530 1.000

0.500
MUESTRA

0.000
529

530

531

(nm)

GRAFICO %T vs (para el estndar tres):

%T vs
65
55
45
35

%T

%T

25
15
5
-5
400

450

500

550

600

650

700

(nm)

%T vs c

% T vs C (%v/v)
90.0

70.0

50.0

%T 620

%T

%T 530

30.0

10.0

-10.0

10

15

20

25

C (%v/v)

30

35

40

45

50

8. CONCLUSIONES:
El espectrofotmetro es un instrumento que tiene la capacidad de proyectar un haz
de luz monocromtica a travs de una muestra y medir la cantidad de luz que es
absorbida por dicha muestra.
La longitud de onda mxima del KMnO 4 en solucin es 420nm, el mismo que se
puede comprobar en el grfico.
Los tubos Nessler nos permiten observar el cambio de coloracin en funcin de la
concentracin de los estndares para que luego puedan ser comparados con la
muestra y poder aproximar su concentracin.
La muestra obtenida al ser comparada con la coloracin de los estndares tiene
una similitud con el estndar 2.
La concentracin de manganeso en la muestra de suelo determinado mediante
4

fotocolorimetra y espectofotometra es 2,01x 10

% y 1,37x 10

respectivamente.
En el grfico de Absorbancia vs concentracin se puede observar que la
absorbancia que presentan los estndares es proporcional a su concentracin.
En el grfico de transmitancia vs concentracin se puede observar que la
transmitancia es inversamente proporcional a la concentracin, es decir, a medida
que aumenta la concentracin disminuye la transmitancia.

9. DISCUSIONES:

Los resultados estuvieron sujetos a diferentes mrgenes de error tanto aleatorios

como sistemticos, los errores sistemticos se fundamentan principalmente en la
calibracin y sensibilidad del equipo y principalmente en apreciacin; ya que el
espectrofotmetro tiene una mayor apreciacin que el colormetro de Duboscq.
Otro factor importante que pudo haber influido en la variacin de los resultados es
que los reactivos utilizados no son completamente puros, sino con un ligero
porcentaje de sustancias diferentes, por lo que pudo haber generado una
interferencia en el equipo espectrofotomtrico causando as un error en la
determinacin de los resultados.
Las cubetas utilizadas en la determinacin tanto de la absorbancia como
transmitancia no fueron hechas del material adecuado para el anlisis, por lo que
cualquier rayadura o mancha que pudo proceder del analista, afect directamente
en los valores antes mencionados
Una de las razones que pudo afectar al resultado se puede deber a la interferencia
del ruido en el momento de la lectura espectrofotomtrico, causando con ello un
error relativo en las mediciones obtenidas.
A medida que las soluciones estndar aumentan su concentracin, existen ms
molculas en el medio, por lo cual la absorbancia aumenta, pero la transmitancia
disminuye.

10. BIBLIOGRAFA
K.A. Connors, Curso de anlisis farmacutico, Editorial Revert.
S. Glasstone, Tratado de Qumica Fsica, Editorial Aguilar.
AYRES, G. (1970). Anlisis Qumico Cuantitativo 2da Edicin. Harla. Mxico. P.
463-471.
MELOAN, C y KISER, R. (1973). Problemas Y Experimentos En Anlisis
Instrumental. Revete. Mxico. P. 1-3.
SKOOG, D y LEARY, J. (1994) Anlisis Instrumental 4ta. Edicin. Mc Graw- Hill.
Madrid. p. 66-78, 84, 142-147.
WILLARD, H., MERRITT, L. Y DEAN, J. (A981). Mtodos Instrumentales de
Anlisis. Continetal. Mxico. P. 103-115.