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Anti HBc

Ref. 414

Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos totais contra o antgeno core do vrus da hepatite B
(anti-HBc) em soro ou plasma.
ELISA - Competio
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de Lavagem
concentrada (no 3) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua purificada (mL)

36

72

108

144

180

216

252

288

324

360

396

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)


O reagente Cromgeno (no 5) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 5) diretamente no frasco de Tampo Substrato (no 4) que contm 14 mL e
homogeneizar bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo

Absorbncia 0,100
Cada replicata no deve variar mais que 20% da mdia das quatro replicatas.
A mdia das absorbncias deve ser 0,600.
A mdia das absorbncias deve ser 0,100

RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Negativo e do Controle Positivo. Somar as duas mdias e
multiplicar o resultado por 0,4. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = ( x CN + x CP) X 0,4
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


< 0,90
1,10
0,90 e < 1,10

Anti HBc
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,05 mL do Controle Positivo (2 replicatas), Controle Negativo (4 replicatas) e amostras aos poos
correspondentes.

Adicionar 0,05 mL de Conjugado (no 2) em todos os poos, exceto ao poo reservado para o Branco de
Substrato.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 - 25 C) e ao abrigo da luz.

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 8) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e os
mesmos intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno.

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Anti HBc IgM

Ref. 415

Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos IgM contra o antgeno core do vrus da hepatite B
(anti-HBc IgM) em soro ou plasma.
ELISA Imunocaptura
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada (no 5) deve ser diluda 1:25 com gua deionizada.
Adicionar 40 mL da Soluo de Lavagem Concentrada a 960 mL de gua. Estvel 1 semana entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

10

13

16

19

22

25

28

31

34

37

168

240

312

384

456

528

600

672

744

816

888

gua purificada (mL)

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do Uso)


O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:50 com o Diluente do Conjugado (no 3).
Adicionar 0,24 mL do Conjugado Concentrado a 11,76 mL do Diluente de Conjugado. No caso de no utilizar uma
placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
1

10

11

Diluente Conjugado (mL)

0,98

1,96

2,94

3,92

4,90

5,88

6,86

7,84

8,82

9,80

10,78

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

N Tiras requeridas

DILUIO DAS AMOSTRAS


As amostras devem ser diludas 1/4000 antes de iniciar o ensaio.
Colocar 0,99 mL de Diluente de Amostras (no 4) em um tubo. Adicionar 0,01 mL de amostra e homogeneizar bem.
Em outro tubo adicionar 0,39 mL de Diluente de Amostras (no 4). Adicionar 0,01 mL da diluio do 1 tubo.
Homogeneizar bem. O fator de diluio no 2 tubo ser 1/4000.
NO DILUIR O CALIBRADOR E OS CONTROLES. ELES ESTO PRONTOS PARA USO.
VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do substrato

Calibrador
Controle Negativo
Controle Positivo
C. Positivo C. Negativo

Absorbncia 0,150
A absorbncia de cada replicata deve ser < 0,120.
Se uma replicata se encontrar fora deste intervalo, deve-se descart-la e calcular
a mdia com os outros 2 valores.
Se 2 replicatas se encontrarem fora deste intervalo, o teste deve ser repetido.
A mdia das absorbncias deve ser < 0,120.
Absorbncia < 0,120
Absorbncia entre 0,500 e 2,500
> 0,450

RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador e somar 0,200. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador + 0,200
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10

Anti HBc IgM


1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Adicionar 0,1 mL do Controle Positivo e Controle Negativo (1 replicata de cada), Calibrador (3 replicatas) e
as amostras diludas aos poos correspondentes.
O Calibrador e os Controles esto prontos para uso.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 120 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 4 vezes, perfazendo um total de 5 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 30 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido.

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo a cada poo, exceto ao poo reservado ao Branco de Substrato.
Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar 60 minutos 37 C.

Ao final da incubao, retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno (no 6) em todos os poos, inclusive no poo


reservado para o Branco de Substrato.

Incubar por 30 minutos temperatura ambiente ( 20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

10

Parar a reao adicionando 0,1 mL da Soluo de Parada (no 10) em cada poo, respeitando a mesma
sequencia e intervalos de tempo observados na adio da Soluo Substrato-Cromgeno.

11

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Anti HBe

Ref. 417

Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos especficos contra o antgeno e do vrus da


hepatite B (anti-HBe) em soro ou plasma.
ELISA - Competio
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada (no 6) deve ser diluda 1:25 com gua deionizada.
Adicionar 40 mL da Soluo de Lavagem Concentrada a 960 mL de gua. Estvel 1 semana entre 2 - 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

15

18

21

24

27

30

33

gua purificada (mL)

72

144

216

288

360

432

504

576

648

720

792

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do Uso)


O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:50 com o Diluente do Conjugado (no 3).
Adicionar 0,24 mL do Conjugado Concentrado a 11,76 mL do Diluente de Conjugado. No caso de no utilizar uma
placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Diluente Conjugado (mL)

0,98

1,96

2,94

3,92

4,90

5,88

6,86

7,84

8,82

9,80

10,78

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do substrato
Calibrador
Controle Negativo
Controle Positivo
C. Negativo C. Positivo

Absorbncia 0,150
A absorbncia de cada replicata deve estar entre 0,500 e 2,500.
Se uma replicata se encontrar fora deste intervalo, deve-se descart-la e calcular
a mdia com os outros 2 valores.
Se 2 replicatas se encontrarem fora deste intervalo, o teste deve ser repetido.
Absorbncia entre 0,500 e 2,500.
Absorbncia entre 0,050 e 0,300.
> 0,250

RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador e multiplicar por 0,5. O valor que se obtm o Cut-off do
ensaio.
Cut-off = x Calibrador x 0,5
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


< 0,90
1,10
0,90 e < 1,10

Anti HBe
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,05 mL do de Tampo de Incubao (no 4) a todos os poos, exceto ao poo reservado ao
Branco de Substrato.

Adicionar 0,05 mL do Controle Positivo e Controle Negativo (1 replicata de cada), Calibrador (3 replicatas) e
amostras aos poos correspondentes.

Adicionar 0,05 mL de Soluo Neutralizante (no 5) a todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco
do Substrato.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 120 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 4 vezes, perfazendo um total de 5 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 30 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido.

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo a cada poo, exceto ao poo reservado ao Branco do Substrato.
Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar 60 minutos 37 C.

Ao final da incubao, retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 6.

10

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno (no 7) em todos os poos, inclusive no poo


reservado para o Branco de Substrato.

11

Incubar por 30 minutos temperatura ambiente ( 20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

12

Parar a reao adicionando 0,1 mL da Soluo de Parada (no 11) em cada poo, respeitando a mesma
sequencia e intervalos de tempo observados na adio da Soluo Substrato-Cromgeno.

13

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Anti HBs

Ref. 413

Sistema para a determinao qualitativa e quantitativa de anticorpos especficos contra o antgeno de


superfcie do vrus da hepatite B (anti-HBs) em soro ou plasma.
ELISA Sanduche (Ag-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada (no 3) deve ser diluda 1:10 com gua deionizada.
Adicionar 50 mL da Soluo de Lavagem Concentrada a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua purificada (mL)

36

72

108

144

180

216

252

288

324

360

396

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)


O reagente Cromgeno (no 5) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 5)
diretamente ao frasco de Tampo Substrato (no 4) que contm 14 mL e homogeneizar bem. A soluo para uso
rsea e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se torne azul. No caso de no
utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
1

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

N Tiras requeridas

VALIDAO DO ENSAIO (O ensaio ser considerado vlido apenas se cumprir os critrios abaixo):
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Calibrador Positivo Baixo
Calibrador Positivo Alto

Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Absorbncia > 0,070
Deve tambm ser maior que o dobro da mdia do Controle Negativo.
Absorbncia entre 0,800 e 2,100

RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = mdia Calibrador Positivo Baixo
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relao Absorbncia / Cut-off
Reativa ou Positiva
1,10
No Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10
RESULTADOS QUANTITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Negativo. A concentrao de anti-HBs Zero.
2- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. A concentrao de anti-HBs de 10 mUI/mL.
3- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Alto. A concentrao de anti-HBs de 100 mUI/mL.
4- Representar em uma folha de papel milimetrado, as mdias das absorbncias dos calibradores e controle na
ordenada (eixo y) contra suas respectivas concentraes em mUI/mL na abscissa (eixo x).
5- Traar uma linha passando pelos 3 pontos.
6- Utilizando o grfico possvel encontrar as concentraes das amostras a partir de suas absorbncias.
Para facilitar os clculos, utilizar a planilha: anti-HBs RESULTADOS QUANTITATIVOS, disponvel em
www.labtest.com.br.

Anti HBs
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,1 mL do Controle Negativo, Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto (2 replicatas de
cada) e amostras aos poos correspondentes.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido.

Adicionar 0,1 mL do Conjugado (no 2) em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato.

Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 - 25 C) e ao abrigo da luz.

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 9) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e os
mesmos intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno.

10

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Ref. 421

CHAGAS

Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos totais especficos anti-Trypanosoma cruzi em soro
ou plasma.
ELISA Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de
Lavagem concentrada (no 5) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua purificada (mL)

36

72

108

144

180

216

252

288

324

360

396

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)


O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 3,0 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente.
Preparar no momento do uso. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Diluente de Conjugado (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)


O reagente Cromgeno (no 7) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 7) diretamente no frasco de Tampo Substrato (no 4) que contem 14 mL e
homogeneizar bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo

Absorbncia 0,100
A absorbncia de cada replicata deve ser 0,200. Se uma replicata se encontrar fora
dessa margem, deve-se descart-la e calcular a mdia com os outros 2 valores.
Se 2 replicatas se encontrarem fora dessa margem, o teste dever ser repetido.
A mdia das absorbncias deve ser 0,600

RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Negativo e somar 0,300.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x CN + 0,300
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10

CHAGAS
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,2 mL do Controle Positivo (2 replicatas) e Controle Negativo (3 replicatas) aos poos
correspondentes.
No diluir os controles, pois esto prontos para uso.
Adicionar 0,2 mL de Diluente de Amostras (no 4) aos poos correspondentes.
Adicionar 0,01 mL de amostra em cada poo de amostra.

Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.

Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 5.

Adicionar 0,1 mL da Soluo substrato-Cromgeno diludo em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

10

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

11

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 10) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno.

12

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Ref. 406

CMV IgG

Sistema para a determinao qualitativa e quantitativa de anticorpos IgG especficos anti-CMV em soro
ou plasma.
ELISA Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de Lavagem
concentrada (no 5) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas
Soluo Lavagem Concentrada (mL)
gua purificada (mL)

1
4
36

2
8
72

3
12
108

4
16
144

5
20
180

6
24
216

7
28
252

8
32
288

9
36
324

10
40
360

11
44
396

DILUIO DO CONJUGADO CONCENTRADO (Preparar no momento do Uso)


Diluir o Conjugado Concentrado (no 2) 1/51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de Conjugado
Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente do Conjugado. Homogeneizar suavemente. No caso de no
utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
2

N Tiras requeridas
Diluente do Conjugado (mL)
Conjugado Concentrado (mL)

1
1,0
0,02

2
2,0
0,04

3
3,0
0,06

4
4,0
0,08

5
5,0
0,10

6
6,0
0,12

7
7,0
0,14

8
8,0
0,16

9
9,0
0,18

10
10,0
0,20

11
11,0
0,22

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)


O reagente Cromgeno (no 7) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 7)
diretamente no frasco de Tampo Substrato (no 6) que contm 14 mL e homogeneizar bem. Preparar 10 minutos
antes do Uso. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas
Tampo Substrato (mL)
Cromgeno (mL)

1
1,0
0,02

2
2,0
0,04

3
3,0
0,06

4
4,0
0,08

5
5,0
0,10

6
6,0
0,12

7
7,0
0,14

8
8,0
0,16

9
9,0
0,18

10
10,0
0,20

11
11,0
0,22

DILUIO DAS AMOSTRAS


Preparar diluies 1/101 dos Calibradores (no 8 e 9), Controle Negativo (no 10) e amostras.
Exemplo: Pipetar 1,0 mL do Diluente de Amostras (no 4) em um tubo e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.
ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

CMV IgG
VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do substrato
Controle Negativo
Calibrador Positivo Baixo
Calibrador Positivo Alto
Relao Calibrador Positivo Alto / Calibrador Positivo Baixo
Relao Controle Negativo / Calibrador Positivo baixo

Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Absorbncia 0,150
Absorbncia 0,600
2,0
0,5

RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador Positivo Baixo
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10

RESULTADOS QUANTITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo.
A concentrao de IgG anti-CMV de 0,25 UI/mL.
2- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Alto.
A concentrao de IgG anti-CMV de 2,5 UI/mL.
3- Representar em folha de papel semi-logaritmico, as mdias das absorbncias dos calibradores na ordenada
(eixo y, linear), contra suas respectivas concentraes em UI/mL na abscissa (eixo x, log).
4- traar uma linha passando pelos 2 pontos.
5- Utilizando o grfico possvel encontrar as concentraes das amostras a partir de sua absorbncia.
Para facilitar os clculos dos resultados quantitativos, utilizar planilha: CMV IgG RESULTADOS
QUANTITATIVOS, disponvel em www.labtest.com.br.

CMV IgG
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,1 mL do Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto e Controle Negativo (2 replicatas de
cada) e amostras aos poos correspondentes.
Diluir Calibradores, Controle e amostras conforme orientao.

Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido.

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto no poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva.

Aspirar e lavar a placa como no passo 4.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 - 25 C) e ao abrigo da luz.

10

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 11) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e os
mesmos intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno.

11

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

Ref. 407

CMV IgM

Sistema para a determinao qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos IgM especficos anti-CMV em


soro ou plasma.
ELISA Sanduche-Imunocaptura (Ac-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de Lavagem
concentrada (no 5) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas
Soluo Lavagem Concentrada (mL)
gua purificada (mL)

1
4
36

2
8
72

3
12
108

4
16
144

5
20
180

6
24
216

7
28
252

8
32
288

9
36
324

10
40
360

11
44
396

DILUIO DO CONJUGADO CONCENTRADO E CONTROLE DE ANTGENO (Preparar no momento do Uso)


Diluir o Conjugado Concentrado (no 2) e o Controle de Antgeno (no 3) 1/101 com o Tampo Diluente (no 4).
Adicionar 0,12 mL de Conjugado Concentrado mais 0,12 mL do Controle de Antgeno e 12 mL do Tampo
Diluente. Homogeneizar suavemente.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela
abaixo:
N Tiras requeridas
Tampo Diluente (mL)
Conjugado Concentrado (mL)
Controle de Antgeno (mL)

1
1,0
0,01
0,01

2
2,0
0,02
0,02

3
3,0
0,03
0,03

4
4,0
0,04
0,04

5
5,0
0,05
0,05

6
6,0
0,06
0,06

7
7,0
0,07
0,07

8
8,0
0,08
0,08

9
9,0
0,09
0,09

10
10,0
0,10
0,10

11
11,0
0,12
0,12

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)


O reagente Cromgeno (no 7) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Adicionar 1,2 mL do Cromgeno (no 7) a
10,8 mL do Tampo Substrato (no 6). Homogeneizar bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em
recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se torne azul.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela
abaixo:
N Tiras requeridas
Tampo Substrato (mL)
Cromgeno (mL)

1
0,9
0,1

2
1,8
0,2

3
2,7
0,3

4
3,6
0,4

5
4,5
0,5

6
5,4
0,6

7
6,3
0,7

8
7,2
0,8

9
8,1
0,9

10
9,0
1,0

11
9,9
1,1

DILUIO DAS AMOSTRAS


Preparar diluies 1/101 das amostras. Exemplo: Em um tubo pipetar 1,0 mL do Tampo Diluente (no 4) e
adicionar 0,01 mL da amostra. Homogeneizar suavemente.
No diluir os Controles (no 8, 9 e 10) pois esto prontos para uso.
ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

CMV IgM
VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do substrato
Controle Positivo Baixo
Relao Controle Positivo Alto/Controle Positivo Baixo
Relao Controle Negativo/Controle Positivo Baixo

Absorbncia 0,100
A absorbncia de cada replicata no deve variar
mais do que 25% em relao mdia das 4
absorbncias.
A mdia deve ser entre 0,200 e 0,600.
> 3,0
< 0,7

RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Positivo Baixo. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relao Absorbncia / Cut-off
Reativa ou Positiva
1,10
No Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10
RESULTADOS SEMI-QUANTITATIVOS
1- Calcular o valor do Cut-off como descrito anteriormente.
2- Calcular a concentrao das IgM em Unidades Arbitrrias (UA/mL) dividindo a absorbncia da amostra pelo
valor do Cut-off e multiplicando o resultado por 10.
UA/mL = absorbncia da amostra / Cut-off x 10
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


11
<9
9 e < 11

CMV IgM
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,1 mL do Controle Positivo Alto, Controle Negativo (2 replicatas de cada), Controle Positivo
Baixo (4 replicatas) e amostras diludas aos poos correspondentes.

Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 4 vezes, perfazendo um total de 5 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido.

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto no poo reservado ao Branco de
Substrato.
Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 60 minutos.

Ao final da incubao, retirar a folha adesiva.

Aspirar e lavar a placa como no passo 4.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 - 25 C) e ao abrigo da luz.

10

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 11) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e os
mesmos intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno.

11

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

Ref. 416

HBeAg

Sistema para a determinao qualitativa do antgeno e do vrus da hepatite B (HBeAg) em soro ou


plasma.
ELISA Sanduiche (Ac-Ag-Ac)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:25 com gua deionizada. Adicionar 40 mL da Soluo de
Lavagem concentrada (no 5) a 960 mL de gua. Estvel 1 semana entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

15

18

21

24

27

30

33

gua purificada (mL)

72

144

216

288

360

432

504

576

648

720

792

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)


O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:50 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,24 mL de
Conjugado Concentrado a 11,76 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela
abaixo:
1

10

11

Diluente de Conjugado (mL)

0,98

1,96

2,94

3,92

4,90

5,88

6,86

7,84

8,82

9,80

10,78

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

N Tiras requeridas

VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato

Caibrador

Controle Negativo
Controle Positivo
Controle Positivo - Controle Negativo

Absorbncia 0,150
A absorbncia de cada replicata deve ser < 0,120. Se uma
replicata se encontrar fora dessa margem, deve-se
descart-la e calcular a mdia com os outros 2 valores. Se
2 replicatas se encontrarem fora dessa margem, o teste
dever ser repetido.
Absorbncia < 0,120
Absorbncia entre 0,500 e 2,500
> 0,450

RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador e somar 0,060.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador + 0,060
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10

HBeAg
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,05 mL do Tampo de Incubao (no 4) a todos os poos, exceto ao poo reservado para o
Branco de Substrato.

Adicionar 0,1 mL do Controle Positivo Alto, Controle Positivo Baixo (1 replicata de cada), Calibrador (3
replicatas) e amostras aos poos correspondentes.

Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 C por 120 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 4 vezes, perfazendo um total de 5 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 30 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 60 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 5.

Adicionar 0,1 mL da Soluo substrato-Cromgeno (no 6) em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

10

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

11

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 10) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno

12

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Ref. 412

HBsAg

Sistema para a determinao qualitativa do antgeno de superfcie do vrus da hepatite B (HBsAg) em


soro ou plasma.
ELISA Sanduiche (Ac-Ag-Ac)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de
Lavagem Concentrada (no 4) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua purificada (mL)

36

72

108

144

180

216

252

288

324

360

396

PREPARO DO CONJUGADO (preparar no momento do uso)


O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,24 mL de
Conjugado Concentrado a 12 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. Preparar no momento
do uso. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a
tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Diluente de Conjugado (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (preparar 10 minutos antes do uso)


O reagente Cromgeno (no 6) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 6) diretamente no frasco de Tampo Substrato (no 5) que contem 14 mL e
homogeneizar bem. A soluo para uso rsea e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato

Controle Negativo

Controle Positivo

Absorbncia 0,100
A mdia das absorbncias deve ser < 0,120
A absorbncia de cada replicata deve ser maior do que a mdia das absorbncias
vezes 0,5. ( x CN x 0,5).
Se uma replicata se encontrar fora dessa margem, deve-se descart-la e calcular a
mdia com os outros 2 valores.
Se duas replicatas se encontrarem fora dessa margem, o teste dever ser repetido.
Absorbncia 0,700

RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Negativo e somar 0,040.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle negativo + 0,040
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relao Absorbncia / Cut-off
Reativa ou Positiva
1,10
No Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10

HBsAg
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,1 mL do Controle Positivo (1 replicata), Controle Negativo (3 replicatas) e amostras aos poos
correspondentes.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva.

Aspirar e lavar a placa como no passo 4.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

10

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 9) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno

11

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Ref. 418

HCV

Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos totais especficos contra o vrus da hepatite C
(HCV) em soro ou plasma.
ELISA Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de
Lavagem Concentrada (no 5) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua purificada (mL)

36

72

108

144

180

216

252

288

324

360

396

PREPARO DO CONJUGADO

(Preparar no momento do uso)

O Conjugado Concentrado (n 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente.
Preparar no momento do uso. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
necessria, de acordo com a tabela abaixo:
1

10

11

Diluente de Conjugado (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

N Tiras requeridas

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)


O reagente Cromgeno (no 7) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 7) diretamente no frasco de Tampo Substrato (no 4) que contem 14 mL e
homogeneizar bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

VALIDAO DO ENSAIO (O ensaio ser considerado vlido apenas se cumprir os critrios abaixo):
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo Baixo
Controle Positivo Alto
Relao Controle Positivo Alto / Controle Positivo Baixo
Relao Controle Negativo / Controle Positivo Baixo

Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Cada absorbncia no deve variar mais do que
30% em relao mdia das absorbncias.
A mdia das absorbncias deve ser 0,200
Absorbncia 0,800
> 2,5
< 0,5

RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Positivo Baixo e multiplicar por 0,9.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo x 0,90
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10

HCV
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,2 mL do Controle Positivo Alto, Controle Positivo Baixo e Controle Negativo (2 replicatas de
cada) aos poos correspondentes.
No diluir os controles, pois esto prontos para uso.

Adicionar 0,2 mL de Diluente de Amostras (no 4) aos poos correspondentes para as amostras.
Adicionar 0,01 mL de amostra em cada poo de amostra.

Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 5 vezes, perfazendo um total de 6 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva.

Aspirar e lavar a placa como no passo 5.

Adicionar 0,1 mL da Soluo substrato-Cromgeno diludo em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

10

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

11

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 11) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno.

12

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

HIV-1+2

Ref. 419

Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos contra HIV-1, HIV-2 e subtipo O em soro ou
plasma.
ELISA Sanduiche (Ag-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:20 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de
Lavagem Concentrada (no 5) a 950 mL de gua. Estvel 1 semana entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua purificada (mL)

76

152

228

304

380

456

532

608

684

760

836

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)


O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,24 mL de
Conjugado Concentrado a 12 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No caso de no utilizar
uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Diluente de Conjugado (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)


O reagente Cromgeno (no 7) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,12 mL do Cromgeno (no 7) a 12 mL de Tampo Substrato (no 6) e homogeneizar bem. A soluo
para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se torne azul.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume necessrio, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,01

0,02

0,03

0,04

0,05

0,06

0,07

0,08

0,09

0,10

0,11

VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato

Controle Negativo

Controle Positivo HIV-1


Controle Positivo HIV-2

Absorbncia 0,100
A mdia das absorbncias deve ser < 0,150
A absorbncia de cada replicata deve ser maior do que a mdia das absorbncias x 0,5
>( x CN x 0,5) e menor ou igual mdia das absorbncias vezes 1,5 ( x CN x 1,5).
Se uma replicata se encontrar fora dessa margem, deve-se descart-la e calcular a
mdia com os outros 2 valores. Se 2 replicatas se encontrarem fora dessa margem, o
teste dever ser repetido.
Absorbncia maior ou igual mdia do Controle Negativo + 0,700
( x CP1 x CN + 0,700)
Absorbncia maior que o Cut-off.

RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Negativo e somar 0,250.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Negativo + 0,250
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10

HIV-1+2
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,1 mL de Diluente de Amostras para todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato.

Adicionar 0,05 mL do Controle Positivo HIV-1 (2 replicatas), Controle Positivo HIV-2 (1 replicata), Controle
Negativo (3 replicatas) e amostras aos poos correspondentes.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 5.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

10

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

11

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 11) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno

12

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos. Recomenda-se realizar leitura bicromtica
utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Rubola IgG

Ref. 401

Sistema para a determinao qualitativa e quantitativa de anticorpos IgG especficos anti-rubola em soro
ou plasma.
ELISA Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de
Lavagem Concentrada (no 5) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua purificada (mL)

36

72

108

144

180

216

252

288

324

360

396

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)


O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No
caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela
abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Diluente de Conjugado (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)


O reagente Cromgeno (no 7) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 7) ao frasco que contm 14 mL de Tampo Substrato (no 6) e homogeneizar
bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se
torne azul.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume necessrio, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

DILUIO DAS AMOSTRAS


Preparar diluies 1:101 do Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto, Controle Negativo e Amostras com
o Diluente de Amostras (no 4).
Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.

Rubola IgG - Ref. 401


VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Calibrador Positivo Alto
Calibrador Positivo Baixo
Relao Calibrador Positivo Alto / Calibrador Positivo Baixo
Relao Controle Negativo / Calibrador Positivo Baixo

Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Absorbncia 0,600
Absorbncia 0,150
2,0
0,5

RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador Positivo Baixo
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relao Absorbncia / Cut-off
Reativa ou Positiva
1,10
No Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10
RESULTADOS QUANTITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. A concentrao de IgG anti-rubola do
Calibrador Positivo Baixo de 10 UI/mL.
2- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Alto. A concentrao de IgG anti-rubola do
Calibrador Positivo Alto de 200 UI/mL.
3- Representar em coordenadas linear-log, em folha de papel semi-logartmico, as mdias das absorbncias dos
calibradores na ordenada (eixo y, linear) contra suas respectivas concentraes em UI/mL na abscissa (eixo x,
log).
4- Traar uma linha passando pelos 2 pontos.
5- Utilizando o grfico com a reta obtida, encontra-se a concentrao das amostras a partir de suas absorbncias.
6- Para facilitar os clculos dos resultados quantitativos, utilizar planilha: RUBOLA IgG RESULTADOS
QUANTITATIVOS, disponvel em www.labtest.com.br.
ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Rubola IgG
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,1 mL do Controle Negativo, Calibrador Positivo Baixo e Calibrador Positivo alto (2 replicatas de
cada) e amostra aos poos correspondentes. Ver item Diluio de Amostras.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

10

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 11) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno

11

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos. Recomenda-se realizar leitura bicromtica
utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

Rubola IgM

Ref. 402

Sistema para a determinao qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos IgM especficos anti-rubola


em soro ou plasma.
ELISA Sanduche-Imunocaptura (Ac-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de
Lavagem Concentrada (no 4) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C. Para preparar volumes
menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua purificada (mL)

36

72

108

144

180

216

252

288

324

360

396

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)


O reagente Cromgeno (no 6) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 6) ao frasco que contm 14 mL de Tampo Substrato (no 5) e homogeneizar
bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se
torne azul.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume necessrio, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

DILUIO DAS AMOSTRAS


Preparar diluies 1:101 das Amostras com o Diluente de Amostras (no 4). Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de
Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar suavemente.
NO DILUIR OS CONTROLES (no 7,8 e 9), POIS ESTO PRONTOS PARA USO.

Rubola IgM - Ref. 402


VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo Baixo
Controle Positivo Alto
Relao Controle Positivo Alto / Controle Positivo Baixo
Relao Controle Negativo / Controle Positivo Baixo

Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Cada absorbncia no deve variar mais que
30%em relao mdia das 3 replicatas.
A mdia das absorbncias deve ser 0,120
Absorbncia 0,600
2,5
0,5

RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Positivo Baixo e multiplicar por 0,8.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo x 0,8
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relao Absorbncia / Cut-off
Reativa ou Positiva
1,10
No Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10
RESULTADOS SEMI-QUANTITATIVOS
1- Calcular o Cut-off como descrito anteriormente.
2- Calcular a concentrao das IgM em Unidades Arbitrrias (UA/mL) dividindo a absorbncia da amostra pelo
valor do Cut-off e multiplicando o resultado por 10.
UA/mL = absorbncia da amostra / Cut-off x 10
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Resultado em UA/mL
11
<9
9 e < 11

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

Rubola IgM
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,1 mL do Controle Negativo e Controle Positivo Alto (2 replicatas), Controle Positivo Baixo (3
replicatas) e amostras diludas aos poos correspondentes.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL do Conjugado (no 2) em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 60 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

10

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 10) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno

11

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

TOXO-IgG

Ref. 408

Sistema para a determinao qualitativa e quantitativa de anticorpos IgG especficos anti-toxoplasma em


soro ou plasma.
ELISA Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de
Lavagem Concentrada (no 5) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua purificada (mL)

36

72

108

144

180

216

252

288

324

360

396

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)


O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente de Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No
caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela
abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Diluente de Conjugado (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)


O reagente Cromgeno (no 7) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 7) ao frasco que contm 14 mL de Tampo Substrato (no 6) e homogeneizar
bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se
torne azul.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume necessrio, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

DILUIO DAS AMOSTRAS


Preparar diluies 1:101 do Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto, Controle Negativo e Amostras com
o Diluente de Amostras (no 4).
Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.

TOXO-IgG

Ref. 408

VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Calibrador Positivo Alto
Calibrador Positivo Baixo
Relao Calibrador Positivo Alto / Calibrador Positivo Baixo
Relao Controle Negativo / Calibrador Positivo Baixo

Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Absorbncia 0,600
Absorbncia 0,150
2,5
0,5

RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador Positivo Baixo
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10

RESULTADOS QUANTITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. A concentrao de IgG anti-toxoplasma do
Calibrador Positivo Baixo de 10 UI/mL.
2- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Alto. A concentrao de IgG anti-toxoplasma do
Calibrador Positivo Alto de 200 UI/mL.
3- Representar em coordenadas linear-log, em folha de papel semi-logartmico, as mdias das absorbncias dos
calibradores na ordenada (eixo y, linear) contra suas respectivas concentraes em UI/mL na abscissa (eixo x,
log).
4- Traar uma linha passando pelos 2 pontos.
5- Utilizando o grfico com a reta obtida, encontra-se as concentraes das amostras a partir de suas
absorbncias.
Para facilitar os clculos dos resultados quantitativos, utilizar planilha: TOXO IgG RESULTADOS
QUANTITATIVOS, disponvel em www.labtest.com.br.
ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

TOXO-IgG
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,1 mL do Controle Negativo, Calibrador Positivo Baixo e Calibrador Positivo alto (2 replicatas de
cada) e amostra aos poos correspondentes.
Ver item Diluio de Amostras.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

10

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 11) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno.

11

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos. Recomenda-se realizar leitura bicromtica
utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.

TOXO-IgM

Ref. 409

Sistema para determinao qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos IgM especficos anti-toxoplasma


em soro ou plasma.
ELISA Sanduche-Imunocaptura (Ac-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de
Lavagem Concentrada (no 4) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

12

16

20

24

28

32

36

40

44

gua deionizada (mL)

36

72

108

144

180

216

252

288

324

360

396

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)


O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No
caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela
abaixo:
N Tiras requeridas

10

11

Diluente de Conjugado (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Conjugado Concentrado (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)


O reagente Cromgeno (no 7) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 7) ao frasco que contm 14 mL de Tampo Substrato (no 6) e homogeneizar
bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se
torne azul.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume necessrio, de acordo com a tabela abaixo:
1

10

11

Tampo Substrato (mL)

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

9,0

10,0

11,0

Cromgeno (mL)

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

N Tiras requeridas

DILUIO DAS AMOSTRAS


Preparar diluies 1:101 das Amostras com o Diluente de Amostras (no 4).
Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.
NO DILUIR OS CONTROLES (no 7,8 e 9), POIS ESTO PRONTOS PARA USO.

TOXO-IgM

Ref. 409

VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo Baixo
Controle Positivo Alto
Relao Controle Positivo Alto / Controle Positivo Baixo
Relao Controle Negativo / Controle Positivo Baixo

Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,120
Cada absorbncia no deve variar mais que
30%em relao mdia das 3 replicatas.
A mdia das absorbncias deve ser 0,200
Absorbncia 0,600
1,5
0,5

RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Positivo Baixo.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Relao Absorbncia / Cut-off


1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10

RESULTADOS SEMI-QUANTITATIVOS
1- Calcular o Cut-off como descrito anteriormente.
2- Calcular a concentrao das IgM em Unidades Arbitrrias (UA/mL) dividindo a absorbncia da amostra pelo
valor do Cut-off e multiplicando o resultado por 10.
UA/mL = absorbncia da amostra / Cut-off x 10
3- Resultados:

Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva

Resultado em UA/mL
11
<9
9 e < 11

ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.

TOXO-IgM
1

PROCEDIMENTO

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Transferir 0,1 mL do Controle Negativo e Controle Positivo Alto (2 replicatas), Controle Positivo Baixo (3
replicatas) e amostras diludas aos poos correspondentes.

Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.


Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.

Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido

Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 60 minutos.

Ao final da incubao retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo


reservado ao Branco de Substrato.

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

10

Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 11) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno

11

Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.