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Tcnicas de siembra en agar para seguimiento del crecimiento vegetal

Uno de los aspectos metodolgicos clave de nuestro proyecto Germinacin y crecimiento de


plantas en microgravedad simulada era desarrollar una tcnica sencilla y asequible
econmicamente que nos permitiera realizar un seguimiento controlado de las primeras
etapas de crecimiento de las plantas objeto de nuestro estudio (soja, Glycine max, y lenteja,
Lens culinaris), comenzando por su germinacin.
Necesitbamos algn tipo de contenedor simple, con, al menos, alguna cara transparente
para visualizar el proceso de crecimiento cuando fuese necesario. Decidimos que tambin
deba ser bastante aplanado para limitar los ejes en los que se observaran los cambios y as
poder realizar mediciones ms precisas. Comentamos el problema con varios profesores y el
profesor de Tecnologa nos dio la idea de emplear viejos estuches de CD. El dispositivo
result ser una opcin muy buena: resistente, ligero, transparente y muy barato! Tena
adems las dimensiones adecuadas para estudiar el crecimiento de nuestras plantas en un
sistema de referencia prximo a las dos dimensiones, lo cual facilitara mucho las medidas
de nuestras observaciones.
El segundo problema que debamos solucionar era encontrar un medio de siembra que
pudiera ser contenido en los estuches, que proporcionara agua a las semillas de forma
permanente y que permitiera fijar la posicin de la semilla pero que no las ocultara para
poder seguir su crecimiento. Elegimos la opcin de usar el agar-agar.
El agar es una sustancia de aspecto parecido a la gelatina corriente, pero que en realidad es
un polisacrido que se extrae de algas pertenecientes al gnero Gelidium. Como la gelatina,
se puede disolver en agua a partir de 80C, pero al enfriarse se solidifica formando un gel
con un alto contenido de agua. El agar es muy empleado en microbiologa para cultivar
bacterias en placas de Petri, pero nosotros bamos a cultivar semillas.
Lo primero que hicimos fue poner a punto la tcnica. Inicialmente aprendimos a sellar los
laterales de los estuches de CD con plstico adhesivo para poder verter el agar an fundido
y formar una fina lmina de agar. El mecanismo era sencillo, pero a la vez complicado. El
agua caliente haca que si el sellado no era perfecto, todo el agar se escapara rpidamente
por cualquier rendija.
Durante la puesta a punto de la tcnica, descubrimos es que era importante dejar una fina
capa de aire entre la lmina de agar y una de las paredes de los estuches. Si no lo hacamos
las semillas se comportaban exactamente de la misma forma que si estuvieran sumergidas
en agua: no germinaban. Por el contrario, permitiendo el contacto de toda la superficie de
agar
con el aire, las semillas s germinaban. Suponemos que el problema era la
disponibilidad de oxgeno para las plantas.
Las siguientes pruebas las dedicamos a seleccionar la concentracin de agar ms adecuada.
Si la concentracin del medio de agar era demasiado baja, el peso de la propia lmina de
agar al ser colocado el estuche verticalmente haca que la preparacin se derrumbara. Por el
contrario, si la concentracin era demasiado elevada, el crecimiento de la raz se vea
dificultado y la deshidratacin ocurra rpidamente. Despus de probar diversas
concentraciones, observamos que la ms adecuada era de un 1% (m/v).
Puedes ver algunos pasos de la tcnica en el siguiente video, en el que tambin te
mostramos el funcionamiento de los dispositivos que vamos a usar para simular
microgravedad.
Para facilitar realizar las siembras siempre de la misma forma preparamos unas plantillas de
siembra realizadas con LibreCad. Las usbamos para orientarnos en el momento de colocar

las semillas en la lmina de agar. Este era otro momento un poco delicado. Debamos colocar
las semillas cuando el agar estaba an fundido pero lo suficientemente fro como para no
afectar a las semillas. Nuestro coordinador nos ayudaba a decidir ese momento. Tambin
procurbamos situar las semillas con una misma orientacin para comparar ms fcilmente
los resultados.

Otro problema que debimos afrontar fue el crecimiento de hongos sobre la lmina de agar.
Estos tardaban varios das en hacerse visibles, pero en ocasiones crecan lo suficiente como
para afectar a una parte de la preparacin. Para minimizar el problema adoptamos varias
estrategias. En primer lugar, los estuches eran cuidadosamente desinfectados con aguay
leja o con alcohol antes de la siembra. Observamos que los hongos aparecan dispersos en
la lmina y no asociados a las semillas, por lo que dedujimos que estos no estaban en las
semillas sino que accedan a la preparacin desde el exterior.
Tambin probamos a aadir una pequea cantidad de sulfato de cobre (que se usa
habitualmente como antifngico) al medio. Nos encontramos con la dificultad de que,
aunque las plantas adultas toleran ms o menos bien esta sustancia, las pequeas plntulas
en crecimiento de nuestros estuches eran especialmente sensibles al sulfato de cobre. Tras
probar varias concentraciones concluimos que una concentracin del 0,01% mejoraba la
resistencia del medio al crecimiento de hongos sin afectar significativamente a la
germinacin de las semillas.
Despus de poner a punto la tcnica durante varias semanas nos dispusimos a desarrollar
algunas observaciones preliminares con semillas de soja. Para ellos tambin tuvimos que
aprender algunas tcnicas para realizar anlisis de imagen sobre las que te ofrecemos
informacin en la siguiente entrada.