UNIVERSIDAD NACIONAL

SANTIAGO ANTUNEZ DE MAYOLO

FACULTAD DE CIENCIAS DEL AMBIENTE
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA
AMBIENTAL

PRACTICA DE LABORATORIO N
01

BIOENSAYO EN CEBOLLAS
ASIGNATURA

:
BIOTECNOLOGA AMBIENTAL

DOCENTE

:
Dr. PALOMINO CADENAS Edwin Julio

INTEGRANTES

:
- OBISPO PADILLA Yeny
- RIOS LEIVA Dani.

HUARAZ - JUNIO 2014

INDICE
I.

INTRODUCCION....3

II.

MARCO TEORICO-CONCEPTUAL...4
II.1 BIOENSAYO......4

III.

II.2

BIOENSAYOS PARA DETERMINAR LA TOXICIDAD

DEL AGUA

II.3
II.4

LA ESPECIE ALLIUM CEPA COMO BIOINDICADOR.5

BIOENSAYOS CON CEBOLLAS..5

METODOLOGIA.....7
III.1
PREPARACIN
DE
LAS
SOLUCIONES
ANTES
DE
LA
III.2

PRUEBA..7
ENSAYO DE TOXICIDAD CON ALLIUM CEPA (CEBOLLA) MEDIANTE LA
EVALUACIN DE LA INHIBICIN DEL CRECIMIENTO PROMEDIO DE
RACES DE CEBOLLA.

IV.

RESULTADOS.....8

V.

DISCUSIN......9

VI.

CONCLUSIONES......10

VII.

RECOMENDACIONES............11

VIII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA......12

IX.

ANEXO............13

I.

INTRODUCCIN
Este informe trata acerca de los bioensayos con, que constituyen un conjunto de
tcnicas analticas que permiten comprender las respuestas biolgicas de los
organismos respecto a la toxicidad que sobre ellos provocan determinados
2

contaminantes o sustancias. Las plantas son los organismos ms utilizados para

este tipo de pruebas. La finalidad de todo bioensayo es establecer los lmites
permisibles para diferentes sustancias o productos, porque los anlisis fsicos y
qumicos de estas no son suficientes para comprender su toxicidad, ni para evaluar
el potencial contaminador de cualquiera de ellos sobre la biota.
En esta oportunidad utilizamos la cebolla, donde evaluamos los efectos txicos
que le provocan ciertos compuestos.
La prueba se bas en la determinacin de los efectos de intoxicacin en la cebolla
observados una semana despus de haberlos sometido a algunos desinfectantes y
contaminantes. Durante este ensayo se expuso la parte terminal de cada cebolla
(donde se hallan las races) a diferentes concentraciones de las muestras txicas.
Los resultados de cada cebolla fueron de acuerdo a las caractersticas finales que
adquirieron sus partes terminales, por ejemplo, el crecimiento de nuevas races o
la ausencia de estas.
Los resultados obtenidos de los bioensayos permiten el establecimiento de
criterios de calidad.

II.

MARCO TEORICO-CONCEPTUAL.
2.1.

BIOENSAYO.
El bioensayo es una tcnica de anlisis, que consiste en identificar e
interpretar las respuestas biolgicas de los organismos cuando son expuestos
a diferentes concentraciones de sustancias, ya sea contaminantes (aguas
residuales, lixiviados, relave, etc.) o productos comerciales (desinfectantes,

xenobiticos, etc.), los cuales se encuentran alterando la vida en nuestro

ambiente.
Los bioensayos de toxicidad, en esencia, son utilizados con el objeto de
evaluar en forma efectiva y eficiente los efectos txicos agudos y crnicos
de sustancias sobre los organismos vivos. Asimismo, permite establecer los
lmites permisibles para diferentes sustancias o productos que se desechan,
porque los anlisis fsicos y qumicos de estas no son suficientes para
comprender la toxicidad de cualquier producto, ni para evaluar el potencial
contaminador de cualquiera de ellos sobre la biota. Los resultados obtenidos
de los bioensayos, facilitan el establecimiento de criterios de calidad
diferentes usos del agua, y en algunos casos estos son adoptados como
normas sociales en diferentes pases.
Esta tcnica cuantifica la relacin concentracin-efecto de compuestos
qumicos conocidos o mezclas complejas, por medio de respuestas
biolgicas medidas bajo condiciones controladas y estandarizadas.
Segn FAO (1981), citado por Reish y Oshida (1987), se entiende por
bioensayo "una prueba en, que un tejido, organismo o grupo de organismos
vivos se usan como reactivo para determinar la potencia de cualquier
sustancia fisiolgicamente activa, cuya actividad se desconoce".
Los efectos en los organismos son muy diversos y pueden manifestarse con
inhibicin o magnificacin, es decir: muerte, crecimiento, multiplicacin,
cambios morfolgicos, fisiolgicos o histolgicos, etc.
2.2.

TIPOS DE BIOENSAYOS
POR EL TIEMPO DE DURACIN.
Las pruebas pueden durar varios periodos de tiempo, pero las de 96 horas
son las ms comunes. Los individuos son expuestos a concentraciones
crecientes del txico para determinar cambios en el organismo. En

general la muerte es el criterio ms utilizado en la prueba de 96 horas.

Bioensayos de corta duracin.- Estas pruebas pueden ser estticas, de
renovacin o flujo continuo, dependiendo de los organismos de prueba, los
objetivos, el equipo, el agua suministrada y el txico. Estas pruebas se usan para
dar una idea de la toxicidad de efluentes, desechos o materiales para organismos

acuticos especficos. Sirven de base para la seleccin de concentraciones del

-

efluente o material de desecho que se usar en bioensayos a largo plazo.

Bioensayos de duracin intermedia.- Estos bioensayos tambin pueden ser
estticos o de flujo continuo, con duracin de 15 a 90 das. Estas pruebas pueden
tener una duracin de 24 h con efluentes de baja toxicidad o que son de
actividad lenta, pero se pueden continuar hasta 30 das, que es la duracin

general.
Bioensayos de larga duracin.- Estas pruebas son con amplia exposicin sobre
todos los estadios del ciclo de vida que sea posible, para determinar la mxima
concentracin del efluente, desecho material que no produce efectos dainos con
exposicin continua. Este tipo de pruebas se utilizan para determinar efectos
sobre crecimiento, reproduccin, desarrollo de productos sexuales, maduracin,
logro de la nidada, crecimiento y supervivencia de diferentes estados de vida,
conducta y bioacumulacin.

POR SUS EFECTOS.

- Bioensayos de toxicidad aguda.- Ocurren dentro de un periodo
corto (minutos, horas o algunos das) en relacin con el periodo
de vida del organismo de ensayo. Las pruebas agudas cuantifican
las concentraciones letales de un xenobitico a una especie en
particular. El valor calculado se denomina concentracin letal
media (CL50) y corresponde a la concentracin de un xenobitico
que causa la muerte al 50% de la poblacin experimental al cabo
de un tiempo determinado, generalmente en 48 o 96 h.
-

Bioensayos de toxicidad crnica.- Ocurren durante un periodo

relativamente largo de exposicin (una porcin significativa de la
vida del organismo >10%). Las pruebas crnicas estiman la
concentracinefecto media (CE50) de la sustancia de prueba que
causa un efecto al 50% de la poblacin experimental, al cabo de
un tiempo determinado, depende de la estada de vida considerada
o del ciclo de vida del organismo empleado.

Alternativamente, un ensayo definitivo puede utilizarse para estimar el

tiempo requerido para producir un efecto al 50% de los organismos
(TE50), a una concentracin especfica.

POR LA APLICACIN DE SUS TRATAMIENTOS.

5

Bioensayos estticos.- Se efecta sin la renovacin continua del

flujo constante de las diluciones sometidas al ensayo. Son pruebas
dirigidas en laboratorio para determinar los efectos de toxicidad
sobre algunas especies de organismos acuticos, sometiendo los
ejemplares de prueba a condiciones ms o menos arbitrarias; la
toxicidad evaluada no est asociada con la demanda de oxgeno y
es debida a sustancias relativamente estables. Los bioensayos
estticos se usan para organismos de prueba de fitoplancton,
zooplancton y peces, porque no es necesario renovar su solucin a
prueba antes de 96 h.

Bioensayos con renovacin peridica.- Los especmenes se

someten a una preparacin fresca de la misma concentracin
inicialmente empleada, peridicamente (generalmente cada 24
horas). Los bioensayos a corto plazo de renovacin o flujo
continuo son usados con macro invertebrados y peces. Pueden
realizarse con organismos en diferentes estados de su ciclo de
vida. Determinan la toxicidad comparativa de diferentes desechos
o efluentes, as como la sensibilidad de los organismos a un
material dado, determinan tambin los requerimientos en corto
plazo de oxgeno, pH, temperatura y otros factores ambientales.

Bioensayos de flujo continuo.- Circula continuamente una

corriente de sustancia de prueba nueva en contacto con los
individuos experimentales. Se realizan con la renovacin continua
o casi continua de las diluciones sometidas al ensayo, con el fin
de mantener casi constantes las concentraciones de las sustancias
txicas activas (FAO, 1981), teniendo as una dinmica del agua y
del txico.

2.3.

LA

ESPECIE

ALLIUM

CEPA

COMO

BIOINDICADOR.

La especie vegetal denominada Allium cepa conocida vulgarmente como

cebollas cumple los requisitos para ser considerada un buen bioindicador
de calidad de agua: es una especie que muestra sensibilidad en el desarrollo
de las races, muestra un rpido crecimiento, es de fcil manejo en el
laboratorio y es sensible a la presencia de contaminantes.
6

2.4.

BIOENSAYOS CON CEBOLLAS

Los bioensayos con plantas vasculares constituyen una excelente
herramienta de diagnstico para la evaluacin del riesgo ambiental.
El objetivo de nuestro trabajo consisti en emplear una metodologa sencilla
y de bajo costo para la deteccin de contaminacin en el agua. Para ello
analizamos el posible efecto contaminante de diferentes concentraciones de
algunos productos de uso cotidiano sobre: 1) el desarrollo de las races de
cebolla (Allium cepa); 2) la germinacin de 3 variedades de arroz (Oryza
sativa) y 3) el crecimiento de races del repollito de agua (Pistia stratiotes).
En segundo trmino, sobre la base de las siguientes condiciones:
sensibilidad a los txicos, importancia ecolgica, abundancia, alta tasa de
crecimiento y facilidad de manejo en el laboratorio, evaluamos la
posibilidad de emplear algunas especies de nuestro medio como
bioindicadoras.
Finalmente, aplicamos estos bioensayos en la evaluacin del grado de
contaminacin en un ecosistema acutico de nuestra regin donde se vierten
efluentes de una planta textil.
A travs de la aplicacin estos bioensayos y de la deteccin de nuevas
especies que puedan ser empleadas para evaluar la calidad del agua de
nuestros ambientes acuticos, pretendemos contribuir al cuidado del medio
ambiente y al mejoramiento de la calidad de vida.

Resumen
Una de las necesidades ms relevantes en el manejo y la gestin ambiental,
es el desarrollo de mtodos de monitoreo para la evaluacin de los efectos
txicos sobre los seres vivos como consecuencia del uso y el vertido de
contaminantes provenientes de la actividad agro-industrial y del desarrollo
de grandes centros urbanos. Entre la metodologa existente, la aplicacin de
bioensayos de toxicidad con plantas vasculares, est siendo considerada de
manera creciente en bateras de ensayo para el diagnstico ecotoxicolgico.
En el presente trabajo se analiza el efecto de productos de uso cotidiano
sobre el desarrollo de algunos vegetales, se evalan algunas especies de
plantas que crecen en el Nordeste de Argentina como posibles
7

bioindicadores y se emplean bioensayos para determinar el grado de

contaminacin en un ecosistema acutico de la regin
A tal efecto se evalu el efecto de diferentes concentraciones (25%, 10% y
5%) de productos de uso cotidiano (detergente, shampoo, jugo concentrado
y vinagre) sobre: 1) el desarrollo de las races de cebolla (Allium cepa); 2)
la germinacin de 3 variedades de arroz (Oryza sativa) y 3) el crecimiento
de races del repollito de agua (Pistia stratiotes). Adems se emple el test
de Allium cepa para evaluar el nivel de contaminacin de un curso de agua
donde se vierten efluentes de una planta textil.
Los productos probados afectaron marcadamente el desarrollo de las races
de cebolla. El arroz y el repollito de agua tambin fueron sensibles a dichos
productos. Estas dos ltimas especies cumplen con las siguientes
condiciones: sensibilidad, abundancia, importancia ecolgica y fcil manejo
en el laboratorio. Sin embargo, el arroz debido a la lentitud del proceso de
germinacin, no constituira un material adecuado para ser utilizado en
bioensayos. De modo contrario, el repollito de agua podra emplearse como
herramienta de diagnstico. Con relacin a los ensayos para la deteccin de
contaminacin en un ecosistema acutico de la regin, se comprob que los
desechos vertidos por el establecimiento textil alteran el ecosistema
estudiado ya que el agua evaluada presentaba toxicidad aguda.
3. METODOLOGA.
3.1.

PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES ANTES DE LA PRUEBA.

Para las pruebas de bioensayo se prepararon las siguientes soluciones:

3.2.
-

Agua San Carlos

Detergente, 5 gramos en un litro de agua destilada.
Etanol, 70% para un litro de agua destilada.
Pinesol, 15.6ml en un litro de agua destilada.
Leja, 48ml en un litro de agua destilada.
Relave, 20 gramos en un litro de agua destilada.
Bicloruro de mercurio, 1 gramo en un litro de agua destilada
DESARROLLO DE LA PRUEBA.
Se utiliz a las cebollas como organismo de bioensayo (muestra
biolgica), que fueron sometidos a las diferentes soluciones preparadas.
En cada solucin de prueba se introdujo las cebollas (la parte
meristemal).
8

Despus de una semana observamos los efectos, identificando ciertas

caractersticas fsicas.

4. RESULTADOS.
4.1. BICLORURO DE MERCURIO

Anlisis individual:

Cebolla 01
Se observa, la ausencia
del crecimiento de los
meristemos.

Cebolla 02
Coloracin negrusca en
la parte final de la
cebolla.

4.2.

Cebolla 03
El interior de la cebolla
comienza a tornarse
amarrilla.

ETANOL

No

se

observ

el

crecimiento de races en la
cebolla.

La cebolla se
emblanqueci debido a
que absorbi el etanol
como mecanismo de
reaccin.

4.3. DETERGENTE

10

CEBOLLA 1
Ra
z
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

DATOS DE LA CEBOLLA
Tamao
Ra
Tamao
(cm)
z
(cm)
0.3
12
0.5
0.3
13
0.3
0.2
14
0.3
0.4
15
0.3
0.2
16
0.2
0.4
17
0.3
0.4
18
0.4
0.5
19
0.3
0.5
20
0.3
0.4
21
0.2
0.2
22
0.2

N 1
Ra
z
23
24
25
26
27
28
29
30
31

Tamao
(cm)
0.1
0.3
0.3
0.1
0.2
0.15
0.2
0.1
0.2

CEBOLLA 2
Ra
z
1
2
3
4
5
6
7
8
9

Tamao
(cm)
0.4
0.6
0.3
0.5
0.5
0.3
0.3
0.2
0.2

Ra
z
11
12
13
14
15
16
17
18
19

DATOS DE LA CEBOLLA
Tamao
Ra
Tamao
(cm)
z
(cm)
0.3
21
0.4
0.4
22
0.5
0.3
23
0.5
0.2
24
0.4
0.2
25
0.5
0.2
26
0.4
0.5
27
0.5
0.2
28
0.5
0.4
29
0.5

11

N 2
Ra
z
31
32
33
34
35
36
37
38
39

Tamao
(cm)
0.6
0.4
0.4
0.2
0.3
0.2
0.4
0.3
0.25

Ra
z
41
42
43
44
45
46
47
48
49

Tamao
(cm)
0.25
0.5
0.2
0.5
0.3
0.5
0.2
0.5
0.2

10

0.3

20

0.2

30

0.5

40

0.2

OBSERVACIN: Cambio el olor del agua.

CEBOLLA 3
En la cebolla 3 tiene mucosa y no se encontr meristemos.

4.4.

AGUA DE MESA SAN CARLOS

CEBOLLA 1
DATOS DE LA CEBOLLA
1
Ra
z
Tamao (cm)
1
2.1
2
1.2
3
1.9
4
1.5
5
1.4
6
0.9
7
1.9
8
1.6
9
1.1
10
0.7

Tamao de Raz
C1

CEBOLLA 2

Raz
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
12
14

DATOS DE LA CEBOLLA 2
Tamao
Tamao (cm) Raz
(cm)
0.4
15
3.0
2.9
16
5.5
3.2
17
2.5
4.7
18
1.1
6.0
19
0.4
2.6
20
2.5
3.0
21
0.9
4.0
22
2.4
4.9
23
6.0
5.3
24
2.8
0.8
25
5.3
4.3
26
0.5
0.9
27
1.5
0.5
28
4.0

Tamao de raz

C2

CEBOLLA 3

Ra
z
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Tamao
(cm)
1.9
3.7
3.2
2.4
4.7
4.4
1.6
3.5
3.6
4.2

Ra
z
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

Tamao
(cm)
5.5
2.2
5.2
4.9
4.4
4.0
0.5
0.6
4.1
5.4

Ra
z
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30

DATOS DE LA CEBOLLA 3
Tamao
Ra
Tamao
(cm)
z
(cm)
4.9
31
2.0
5.2
32
2.2
4.5
33
0.7
3.2
34
0.2
2.6
35
1.0
4.4
36
1.0
3.0
37
3.5
4.5
38
3.1
4.8
39
3.4
4.7
40
4.1

Ra
z
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50

Datos generales:
# de
Meristemos
Prom
Desv. Est.

C1

C2

C3

10.0

28.0

54.0

1.4
0.5

2.9
1.8

3.6
1.6

4.5.

13

PINESOL

Tamao
(cm)
4.7
5.7
5.0
6.0
5.5
3.4
1.0
0.5
5.9
4.5

Ra
z
51
52
53
54

Tamao
(cm)
4.0
4.6
5.3
4.8

CEBOLLA 1
DATOS DE LA CEBOLLA 1
Promedio
Desviacin estndar

0
0

CEBOLLA 2
DATOS DE LA CEBOLLA 2
Tamao
Raz
(mm)
1
2
2
3
Promedio
2.5
Desviacin estndar
1.53

MUETRA N 2

CEBOLLA 3
DATOS DE LA CEBOLLA 3
Raz
Tamao (mm)
1
4
2
3
3
4
14

4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
Promedio
Desviacin
estndar

3
3
2
5
5
4
5
4
5
4
3
5
4
3
5
3
5
3.95
0.94

MUESTRA N3

4.6.

SAPOLIO

CEBOLLA 1
Raz

tamao
(mm)
3
2.5
2
2
2
3
2.5
2

1
2
3
4
5
6
7
8
15

9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
Prom
Des. est

2
2.8
2.5
1.5
1.5
2
2
1
1.1
0.5
0.5
0.5
0.6
1
1.2
1.3
1
0.9
0.5
1
0.8
0.7
0.5
0.6
1
0.7
1
1.2
1.3
0.6
0.8
0.7
1.358
0.764

CEBOLLA 2
Raz
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

tamao
(mm)
3
3
1.5
1.5
2.5
1.5
1.2
1.2
2
1
1.2
2
1.5
2
1
1
16

17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
Prom.
Dev.est

1
1
1
1.2
0.8
0.7
1.1
0.7
1
1.3
1
0.9
1
1.2
1.367
0.609

CEBOLLA 3
tamao
(mm)
3.5
4
3
3
2
2
2
2.5
3
2
2.7
0.715

Raz
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
prom
devest

cebolla 1
cebolla 2
cebolla 3
Promedio
Desv.
Estand.

N de meristemos
40
30
10
26.66666667
15.27525232

4.7.

17

RELAVE

La cebolla se quem.
No hubo crecimiento
de races.

Como mecanismo
de reaccin la
cebolla gener
sulfuros (color
negro).

4.8.

LEGA

18

No hubo
crecimiento de
raz.
La cebolla se

5. DISCUSIN.
-

En el agua San Carlos, que es una sustancia sin ningn efecto txico, creci

muchas races.
La lega y el etanol blanquearon a la cebolla, ya que esta la absorbi como

mecanismo de reaccin.
El relave fue letal para la cebolla, ya que la quem. La cebolla gener sulfuro
como mecanismo de reaccin.

6. CONCLUSIONES.
-

Los bioensayos que se realizan en laboratorio nos proporcionan una

informacin valiosa para comprobar la toxicidad de las soluciones que se
prueban.

Las plantas, como la cebolla, son uno de los mejores indicadores biolgicos
que se pueden emplear debido a su rpida y notoria reaccin. Adems es un
procedimiento muy econmico.

Cada solucin sometida a prueba tuvo efectos distintos sobre las distintas
cebollas (efectos leves y letales).

19

7. RECOMENDACIONES.
-

El objetivo primordial de un bioensayo es reflejar la realidad de cmo

afectara a los organismos vivos en su medio natural y para ello sera
apropiado hacer una investigacin de esta afectacin de las plantas.

Con las tcnicas de bioensayos se podra llegar a establecer normas

convenientes, cuyos criterios nos permitan determinar ndices de toxicidad
que se encuentren en el medio ambiente acutico y que ocasionan una
afectacin en la vida de los organismos a corto, largo y mediano plazo.

Con datos cuantitativos podramos hacer una evaluacin estadstica para los
resultados de la concentracin.

20

8. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA.
-

FAO. (1981): Manual of methods in aquatic environment research. Part 4.

GONZALEZ, M. (1978): Bioensayos sobre los efectos del tetracloruro de

mercurio.
WANG D.Y. AND B.Q. HUANG. 1999. TBT (Tributyltin) Toxicity to the
Visual and Olfactory Functions of Tigerperch (Terapon jarbua Forsskl).

Zoological Studies 38(2):189-195.

Iannacone, J., Alvario, L., Caballero C. y J. Snchez. 2000. Cuatro
Ensayos Ecotoxicolgicos para Evaluar Lindano y Clorpirifos. Gayana 64(2):

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