UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

CENTRO DE TECNOLOGIA
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA DE MATERIAIS

Curso de Graduao

MTR0304 TCNICAS DE MICROSCOPIA

Aula 1: Apresentao da disciplina

Prof. Dr. Edson Noriyuki Ito

Prof. Dr. Maurcio Mhirdaui Peres

1. Semestre 2013

Objetivos:
Introduzir conhecimentos de microscopia;
Ensinar aos alunos o preparo de amostras para caracterizao microscpica;
Ensinar os alunos na utilizao de equipamentos de microscopia.

Contedo:
Fundamentos de microscopia tica. Tcnicas materiologrficas. Ataque
qumico e trmico. Fundamentos de microscopia eletrnica de varredura.
Microssonda eletrnica: EDS e WDS. Microscopia eletrnica de transmisso.
Microscopia de fora atmica. Preparao de amostras. Prticas laboratoriais.

Competncias e habilidades:
Identificar a preparao de amostra em funo da tcnica microscpica
utilizada
Distinguir o melhor mtodo de caracterizao microscpica em funo do
tipo de material.

Metodologia:
Mdulos de aulas agrupadas por coerncia dos temas de modo a potencializar

o entendimento dos diferentes contedos. Aulas tericas e prticas de

laboratrio.

Avaliaes:

Provas
Seminrios
Relatrios de prtica no laboratrio
Presena do aluno em sala de aula/laboratrio

Quarta avaliao:

Prova terica abrangendo todo o contedo de todas as atividades

desenvolvidas nas trs etapas.

MP 7,0 APROVADO
MP < 3,0 REPROVADO

3,0 MP < 7,0 Consolidao de Estudos

REPROVAO POR FALTA: 25% ausncia as aulas

Introduo das tcnicas de caracterizao

microscpicas

MICROSCPIO
PTICO?

ORIGENS DO MICROSCPIO
PTICO?

ORIGENS DO MICROSCPIO
PTICO?

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ANLISE DE HOOKE

11

TEORIA BSICA
DA
MICROSCOPIA

12

TEORIA BSICA
DA
MICROSCOPIA

13

TEORIA BSICA
DA
MICROSCOPIA

14

PROPRIEDADES
FUNDAMENTAIS
DA LUZ

15

PROPRIEDADES
FUNDAMENTAIS
DA LUZ

16

PROPRIEDADES
FUNDAMENTAIS
DA LUZ

17

PROPRIEDADES
FUNDAMENTAIS
DA LUZ

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O QUE UM MICROSCPIO
PTICO?
constitudo por um componente mecnico que
suporta e permite controlar um componente ptico
que amplia as imagens.
O microscpio ptico um instrumento usado para ampliar e
regular, com uma srie de lentes multicoloridas e ultravioleta
capazes de enxergar atravs da luz, estruturas pequenas e
grandes impossveis de visualizar a olho ou sem culos.

Microscopia ptica
Resoluo

200 nm

Ampliao

2 - 2.000

Observao

Interior ou superfcie

Meio

Ambiente

Preparao de Amostra

Fcil

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RESOLUO DE UM MICROSCPIO
PTICO?
Microscopia ptica
Resoluo

200 nm

Ampliao

2 - 2.000

Observao

Interior ou superfcie

Meio

Ambiente

Preparao de Amostra

Fcil

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Exemplo de Projeto a ser

desenvolvido at o final de curso
(Referente a Projeto a ser
desenvolvida
at
o
dia
13/06/2012).
MO
MEV-FEG

LUPA

PALHA DE MILHO

MICROSCPIO PTICO
PARTE MECNICA
A poro mecnica composta por:
P ou base serve de apoio dos restantes componentes do
microscpio.
Coluna ou Brao fixo base, serve de suporte a outros
elementos.
Mesa ou Platina onde se fixa a preparao a observar; tem
uma janela por onde passam os raios luminosos e tambm
parafusos dentados que permitem deslocar a preparao.
Tubo ou canho suporta a ocular na extremidade superior.
Revlver ou ptico pea giratria portadora de objetivas de
diferentes ampliaes que podem ser de 20x, 40x e 100x.
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MICROSCPIO PTICO
PARTE PTICA
Fonte luminosa a mais utilizada actualmente a luz artificial,
fornecida por uma lmpada de tungstnio ou de halogneo, includa no
aparelho juntamente com um interruptor com restato, que permite
regular a intensidade da luz emitida.

Condensador conjunto de duas ou mais lentes convergentes que

orientam e espalham regularmente a luz emitida pela fonte luminosa
sobre o campo de viso do microscpio.

Diafragma constitudo por palhetas que podem

ser aproximadas ou afastadas do centro atravs de
uma alavanca ou parafuso, permitindo regular a
intensidade da luz que incide no campo de viso do
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microscpio.

MICROSCOPIA PTICA BSICA

Formao da imagem, anatomia do microscpio, tipos de microscpio, contraste,
aumento e resoluo.

MICROSCOPIA PTICA AVANADA

Microscopia de luz polarizada, contraste de fase, campo escuro, fluorescncia
e fotomicrografia.

ANLISE DE IMAGEM
Formao de imagem em sistemas digitais.

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MICROSCOPIA PTICA

DE REFLEXO
DE TRANSMISSO
COM CONTRASTE COM
LUZ
POLARIZADA
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MICROSCPIO PTICO
PARTE PTICA
Oculares sistema de lentes que permite ampliarem a imagem real
fornecida pela objetiva, formando uma imagem virtual que se situa a
aproximadamente 25 cm dos olhos do observador. As oculares mais
utilizadas so as de ampliao 10x, mas nos microscpios binoculares
tambm existem oculares de 12,5, 8x e 6x.
emitida.

Objetivas permitem ampliar a imagem do objeto 10x, 40x, 50x, 90x ou

100x. As objetivas de 10x, 40x e 50x so designadas objetivas secas
pois entre a preparao e a objetiva existe somente ar. As objetivas de
90x e 100x so designadas objetivas de imerso, uma vez que, para as
utilizar, necessrio colocar uma gota de leo de imerso entre elas e a
preparao, o qual, por ter um ndice de refraco semelhante ao do
vidro, evita o desvio do feixe luminoso para fora da objetiva.
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OPERAO
A intensidade luminosa regulvel: aumenta-se a intensidade
luminosa subindo-se o condensador e abre-se o diafragma ou
diminui-se a intensidade luminosa descendo o condensador e
baixa-se o diafragma.

A ampliao consiste no grau de aumento da imagem em relao

ao objeto. A ampliao total obtida com o microscpio ptico
consiste no produto da ampliao da objetiva pela ampliao da
ocular. Esta, sem distoro, no ultrapassa as 1200x.
O fator mais significativo para a obteno de uma boa imagem ,
contudo, o poder de resoluo, que corresponde distncia
mnima que necessrio existir entre dois pontos para que possam
ser distinguidos ao microscpio. Para o microscpio ptico essa
distncia de 0,2 m devido ao comprimento de onda das
radiaes visveis. Com efeito, a propriedade da ampliao s tem
interesse prtico se for acompanhada de um aumento do poder de
resoluo.
27

MICROSCPIO PTICO

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MICROSCPIO PTICO DE
TRANSMISSO
A luz emitida pela fonte luminosa e concentrada pelas lentes condensadoras
atravessa a amostra e penetra na objetiva. A objetiva forma uma imagem real,
ampliada, do objeto e as oculares formam uma imagem virtual, tambm
ampliada, da imagem real produzida pela objetiva. A imagem virtual situa-se
distncia de 25 cm do olho do observador, e a imagem que pode ser
observada.
A ampliao total o produto dos fatores de ampliao da objetiva e das
oculares, podendo existir outros dispositivos no trajeto da luz que introduzam
fatores multiplicativos adicionais. O feixe luminoso que atravessa a amostra
modificado por interaes com esta, que consistem na absoro de certos
comprimentos de onda produzindo cor, difrao, refrao, reflexo, diferena
de fase etc. Estas interaes vo-se traduzir na produo de diferenas de cor
ou de intensidade luminosa na imagem do objeto, que podem ser percebidas
pelo olho humano.
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MICROSCPIO PTICO DE
CONTRATE DE FASE
Em certos casos, as alteraes do feixe luminoso no podem ser
diretamente percebidas pelo olho humano. o caso das diferenas de fase.
possvel neste caso, construir microscpios que transformam as diferenas de
fase em diferenas de intensidade (microscpios de contraste de fase).

Exemplo de aplicao do microscpio de contraste de fases:

permite o estudo de muitos detalhes celulares. Tm dispositivos que
transformam as diferenas de fases entre as ondas luminosas que
atravessam estruturas celulares de diferentes ndices de refrao. Em
diferena de amplitudes, resultando em diferena de intensidade luminosa,
para as quais a retina sensvel.

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(Aplicao)

MICROSCPIO PTICO DE
CONTRATE DE FASE
AVALIAO DO SMEN DO JUNDI, RHAMDIA QUELEN, ARMAZENADO
SOB REFRIGERAO

Paulo Csar Falanghe Carneiro - Orientador

Mrcio Saporski Segui - Co-Orientador
Csar Roberto Iris Filho - Bolsista PIBIC/CNPq
Jorge Daniel Mikos, Claire Juliana Francisco, Adriano do Prado Cordeiro,
Marianne Schorer - Colaboradores
Zootecnia e Medicina Veterinria CCAA
Introduo: A preservao e o armazenamento do smen sob refrigerao so
tcnicas que se encaixam como possveis alternativas para a utilizao
racional do smen de peixes que apresentam potencial para a aquicultura
comercial.
Objetivos: O presente trabalho objetivou a avaliao do smen do jundi,
Rhamdia quelen, armazenado sob refrigerao na fecundao de vulos para
a produo de alevinos.
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MICROSCPIO PTICO DE
CONTRATE DE FASE

Mtodo: Machos de jundi foram submetidos induo hormonal com extrato

hipofisrio para coleta de smen, e posterior armazenamento sob refrigerao
(5,7C) por 12 dias. A fertilizao foi feita pela mistura de 10(l de smen de
cada um dos machos com 5 g de vulos, possibilitando a avaliao do smen
fresco at aquele armazenado por 12 dias. A taxa de fertilizao foi
determinada 15-20 horas aps a fertilizao, quando os ovos foram colocados
em mini-incubadoras com volume til de 1,5 L. Durante o processo de
fertilizao foi determinada a mobilidade do smen em microscpio ptico com
aumento 400X. A avaliao da sobrevivncia dos espermatozides foi feita a
partir de lminas com extenses de smen corados com colorao supra vital
(eosina e nigrosina), analisadas em microscpio de contraste de fases com
aumento 1200X.
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MICROSCPIO PTICO DE
CONTRATE DE FASE
Resultados: Durante a incubao ocorreram problemas de falta de energia
eltrica que comprometeram o desenvolvimento embrionrio de algumas das
parcelas experimentais, colaborando para o elevado coeficiente de variao
observado para a taxa de fertilizao. Contudo, alquotas de dois peixes
mantidas por 12 dias sob refrigerao fertilizaram 18,4 e 80,8% dos ovos. A
falta de diferena estatstica entre os resultados de motilidade deve-se pela
grande variao dos valores entre as repeties. Porm, da mesma forma que
para a taxa de fertilizao, algumas das alquotas de smen mantidas por 12
dias sob refrigerao ainda apresentaram mobilidade por 20 a 51 segundos.
Foi registrada reduo gradativa na porcentagem de espermatozides vivos
no decorrer do perodo, partindo de 74,5% e chegando a 15,5% ao final de 12
dias.
Concluso: Mesmo observando reduo na atividade do espermatozides
durante o perodo experimental, o presente trabalho sugere a viabilidade do
armazenamento do smen do jundi sob refrigerao e refora a necessidade
de mais estudos nessa rea.
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MICROSCPIO PTICO DE
REFLEXO
Nestes aparelhos a luz incide na amostra e refletida por esta, podendo
existir outras interaes, como a absoro de certos comprimentos de onda,
que origina cor. A luz refletida entra na objetiva e processada pelas lentes de
modo a formar a imagem. Este tipo de microscpio utilizado para a
observao de amostras opacas. A iluminao tem de ser colocada de modo a
incidir sobre a superfcie da amostra. Em muitos aparelhos a luz proveniente da
fonte luminosa focada sobre a amostra pela prpria lente objetiva.

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MICROSCPIO DE
FLUORESCNCIA
um microscpio de luz incidente, como o microscpio de reflexo o feixe
luminoso tem apresenta um comprimento de onda apropriado (habitualmente na
regio azul ou ultravioleta) para excitar substncias fluorescentes
(fluorocromios) que se encontram na amostra. Estas substncias podem fazer
parte da composio natural da amostra ou serem introduzidas pelo
processamento tcnico como corantes. A luz emitida pelos fluorocrmios
excitados pelo feixe luminoso entra na objetiva para formar a imagem.

Entende-se por fluorescncia a propriedade que algumas substncias

possuem, aps serem excitadas com radiao de baixo comprimento de onda,
resultando na emisso de radiao de maior comprimento de onda. Assim,
determinadas substncias absorvem a energia da luz ultravioleta e emitem
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depois radiao dentro do espectro de luz visvel.

MICROSCPIO INVERTIDO
um microscpio ptico de transmisso, em que as posies da objetiva
e do condensador encontram-se invertidas relativamente platina.

Microscpio invertido binocular, tica plana

cromtica, campo claro, contraste de fase e
fluorescncia, com objetivas de 10x, 25x e
40x, oculares de 10 e 16x, lmpada de
6V/20W, filtros cbicos, com fonte externa,
bivolt.

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MICROSCPIO

Dois tipos de microscpio ptico so utilizados na anlise de materiais, o de

reflexo e de transmisso .

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MICROSCPIO:
INVERTIDO E NORMAL

38

MICROSCPIO
PTICO

39

MICROSCPIO
PTICO

40

MICROSCPIO
PTICO

41

MICROSCPIO
PTICO

42

MICROSCPIO
PTICO

43

MICROSCPIO
PTICO

44

MICROSCPIO
PTICO

45

MICROSCPIO
PTICO

46

MICROSCPIO
PTICO

47

MICROSCPIO
PTICO

48

MICROSCPIO
PTICO

49

MICROSCPIO
PTICO

50