UNIVERSIDAD DE LA FRONTERA

Facultad de Medicina
Dpto. de Ciencias Bsicas

GUIA DE LABORATORIO N5:

RECONOCIMIENTO DE ACTIVIDAD ENZIMTICA
Asignatura: Ciencias Biolgicas y Qumicas (MBA 004)
Docentes:
Prof. Viviane de Jourdan R. y Prof. Edoardo Tosti-Croce A.
OBJETIVOS:
Comparar el efecto que tienen sobre un sustrato, catalizadores de naturaleza inorgnica y
orgnica.
Identificar los productos obtenidos de la actividad enzimtica.
Reconocer factores que afectan la actividad enzimtica.
Adquirir destrezas en la manipulacin de instrumentos y materiales de laboratorio.
ACTIVIDADES
Actividad N1: Accin de catalizadores.
Rotule con papel engomado 6 tubos de ensayo y enumrelos. Siga el procedimiento que se indica
para cada tubo.
Tubo 1: 2 ml. de perxido de hidrgeno (H 2O2) y, con una esptula, agregue una muy pequea
cantidad de dixido de manganeso (MnO2). *Tape el tubo con el dedo pulgar protegido con un
trozo de polietileno. Agite el tubo para mezclar. Inmediatamente, introduzca en la boca del
tubo un rollito de papel en estado de ignicin (encendido pero sin llama), cuidando que el
papel no toque las paredes del tubo. Observe qu sucede.* Adicione al tubo otros 2 ml de
perxido de hidrgeno. Tape con polietileno, mezcle e introduzca, nuevamente, el rollito de papel
en estado de ignicin.
Tubo 2: 2 ml. de perxido de hidrgeno + papa cruda, rallada. Repita el procedimiento indicado
en negritas y entre asteriscos (*).
Tubo 3: 2 ml de perxido de hidrgeno + hgado crudo, macerado con arena de cuarzo. Repetir
el procedimiento indicado entre asteriscos (*).
Tubo 4: 2 ml de perxido de hidrgeno + papa rallada, previamente cocida. Repita el procedimiento indicado en negritas y entre asteriscos (*).
Tubo 5: 2 ml de perxido de hidrgeno + hgado macerado con arena de cuarzo, previamente
cocido. Repita el procedimiento indicado en negritas y entre asteriscos (*).
Tubo 6: 2 ml de perxido de hidrgeno y una pequea cantidad de arena de cuarzo. Repita el
procedimiento indicado en negritas y entre asteriscos (*).
Compare lo sucedido en los 6 tubos.
Actividad 2: Factores que afectan la actividad enzimtica.
En 6 tubos de ensayo, que llamaremos serie A, vierta 1 ml de saliva. Para este fin, marque
previamente cada tubo con papel engomado a la altura que corresponda. De esta forma evitar
tener que pipetear secrecin salival.
En otra serie de 6 tubos (serie B), ponga las siguientes soluciones:
-

1 B: 1 ml sol. buffer pH 3
2 B: 1 ml sol. buffer pH 12
3 B, 4 B, 5 B y 6B: 1 ml sol. buffer pH 7

Con papel indicador de pH verifique los valores de las soluciones buffer

Mantenga los tubos sealados a las temperaturas indicadas, durante 5 minutos:

-

Los tubos 1, 2, 3 y 6 de ambas series (A y B) a baomara termorregulable a 35 C,

Los tubos 4 A y 4 B a baomara con hielo.
Los tubos 5 A y 5 B a baomara en ebullicin.

Utilizando un termmetro determine la temperatura de los tubos 4 y 5.

Trascurridos los 5 minutos, vierta los contenidos de los tubos B en los A respectivos.
Luego de ello y sin retirar los tubos de las condiciones trmicas en que se encuentran, agregue a
los tubos 1 al 5, 1 ml de la suspensin al 0,05% de almidn. Al tubo 6, agregue 1 ml de agua
destilada.
Mantenga los 6 tubos durante 10 minutos a las temperaturas respectivas y luego, sin retirarlos,
para evitar cambios de temperatura, aplique en cada uno de ellos, el test de lugol (5 gotas de
solucin). Observe y anote. Determine si hubo reaccin positiva o negativa en cada tubo.
Qu significa desde el punto de vista de la actividad enzimtica si en algn tubo la reaccin con
lugol result positiva?
Ordene sus resultados en una tabla.
Finalizado el trabajo, deje todo limpio y ordenado.
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Enzimas. Aspectos generales. Nomenclatura. Clasificacin internacional de las enzimas.

Modo de accin. Regulacin de su actividad. Cintica enzimtica. Efecto del pH y de la
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2

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ETC / VdeJ / 2008.05.05