DNA Mitocondrial en la normalidad y la Enfermedad

Autores:
Carlos Garca
Sebastin Merino
Alondra Vjar
Gustavo Gmez Barbieri
Licenciatura Medicina, Escuela de Medicina, Facultad de Ciencias
El FISH es una tcnica de caracterizacin citogentica que se utiliza para demarcar los
cromosomas y determinar las alteraciones en el cariotipo que no pueden ser determinadas por
las tcnicas de marcaje bandeo de Giemsa tradicionales, con el fin de determinar aneuploidas
y aberraciones coromosmicas, constituyendo un cariotipo molecular. Para ello efectuar un
FISH es necesaria una sonda de ADN y una secuencia diana.
Durante su implementacin antes de la hibridacin, la sonda de ADN est demarcada por
diversos medios, como el marcaje de un cebador en forma aleatoria, y PCR. Dos estrategias de
etiquetado son comnmente utilizados: marcaje indirecto (panel izquierdo) y el marcaje directo
(panel derecho). Para el marcaje indirecto, las sondas se marcan con nucletidos modificados
que contienen un antgeno que luego se reconoce mediante un anticuerpo marcado, mientras
que el marcaje directo utiliza nucletidos que han sido modificados directamente para contener
un fluorforo. (c) La sonda marcada y el ADN diana se desnaturalizan. (d) combinar la sonda
desnaturalizada y diana permite la hibridacin de secuencias de ADN complementarias. (e) Si
la sonda ha sido etiquetado indirectamente, se requiere un paso adicional para la visualizacin
del anticuerpo no fluorescente que utiliza un sistema de deteccin enzimtica o inmunolgica.
Considerando que el sondaje es ms rpido con sondas marcadas directamente, el marcaje
indirecto ofrece la ventaja de amplificacin de la seal mediante el uso de varias capas de
anticuerpos, y por lo tanto podra producir una seal que es ms brillante en comparacin con
los niveles de fondo.

Fig.1 Diferencias de tcnicas de FISH medante uso de marcaje por haptenos y

fluorfors.
Fig .2 Marcaje pacientes infantes con leucemia linfoctica aguda con FISH
La tcnica de FISH es importante en el diagnstico clnico de diversas anomalas cromosmicas
, incluyendo deleciones , duplicaciones y translocaciones . La Figura 2A muestra un ejemplo en
el que los investigadores utilizan FISH junto con cariotipo estndar para analizar una
translocacin del paciente. La sonda de hibridacin corresponda a un segmento del
cromosoma 19 que se sospecha que incluye el punto de interrupcin de translocacin . Tres

reas de hibridacin son evidentes en la imagen fluorescente . Un punto corresponde a copia

normal del cromosoma 19 ( nl19 ) del paciente, y los otros dos puntos corresponden a
derivados de los cromosomas 11 y 19 que se produjeron durante la translocacin . Por lo
tanto , los investigadores fueron capaces de utilizar los datos tanto de la regin de rotura en el
cromosoma 19 y identificar el segundo cromosoma implicado en la translocacin
Nuevas aplicaciones emocionantes de FISH que amplan su gama se siguen
desarrollando . Por ejemplo, citogenetistas ahora utilizan hibridacin genmica comparativa
(CGH) para detectar diferencias cuantitativas , como variaciones en el nmero de copia, en los
cromosomas de sus pacientes. Recientemente, los investigadores tambin han sido capaces de
aumentar la resolucin de FISH utilizando cromosomas en interfase que poseen la cromatina
ms estirada, lo que permite mayor accebilidad a las sondas ( Parra y Windle , 1993) o
microarrays como objetivo. Con herramientas como stas, la citogentica ha sido capaz de
pasar de estudiar los cromosomas enteros en la escala macroscpica , a estudiar el ADN de los
cuales estos cromosomas se componen

Referencias

(1)

Cheung, V. G. et al. Integration of cytogenetic landmarks into the draft sequence

of the human genome. Nature 409, 954 (2001.)

(2) Speicher, M. R. et al. The new cytogenetics: blurring the boundaries with molecular biology. Nature Reviews
Genetics 6, 784 (2005).
(3)

Speicher, M. R., & Carter, N. P. The new cytogenetics: Blurring the boundaries
with molecular biology. Nature Reviews Genetics 6, 782792 (2005)
doi:10.1038/nrg1692