COLUMNA DE WINOGRADSKY

Angie Salazar G.; Margarita Muoz Z.; Mara Fernanda Prez E.

Facultad de Ingeniera; Departamento de Ingeniera Ambiental,
Universidad Central Sede Centro Bogot, Colombia
Correos electrnicos:
asalazarg1@ucentral.edu.co
mpereze@ucentral.edu.co

OBJETIVOS
Generar un ecosistema en el laboratorio donde aparezcan distintos tipos de bacterias
interrelacionadas metablicamente.
Identificar las diferentes etapas que ocurren durante el ciclo del azufre.

MARCO TERICO
Fue desarrollada por el microbilogo ruso Sergey Winogradsky (1853 1956), es una
representacin sencilla y a escala de como se encuentra formado un ecosistema acutico natural,
tambin permite conocer cmo se constituyen los tapetes microbianos formados principalmente por
diferentes clases de microorganismos, la manera en que se desarrollan sus ciclos, y la interaccin
entre ellos que les permite coexistir entre ellos. La columna representa un sistema completo y
autnomo. En la columna se pueden diferenciar claramente tres zonas que son:
a) Zona aerobia o superficial: Como su nombre lo indica se encuentra ubicada en la parte
superior de la columna y se caracteriza por contener una alta concentracin de oxigeno y
una muy baja de azufre, en ella se puede encontrar abundantes poblaciones de bacterias de
diferentes clases, que generalmente se desarrollan en regiones acuticas ricas en materia
orgnica como arroyos poco profundos y estanques. Muchas especies son flageladas lo que
les permite moverse y establecerse en diferentes zonas. Tambin se desarrollan gran
cantidad de organismos foto trfica proveniente principalmente del lodo utilizado en el
montaje de la columna.
A pesar de ser una zona muy baja en concentracin de azufre, pueden llegar pequeas
cantidades de H2S que permite el desarrollo de bacterias que se especializan en oxidar el
azufre como Beggiotoa Thiobacillus, que adems sintetizan el CO2.

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La formacin del tapete microbiolgico se puede observar en las zonas superiores formada
principalmente por cianobacterias dndole una coloracin verde y su principal caractersticas
es que realizan el proceso de la fotosntesis.
b) Zona microaerfilia: Se caracteriza por presentar una concentracin parcial de oxigeno y de
azufre, en ella se desarrollan principalmente los organismos facultativos y donde podemos
encontrar algunas bacterias sulfatos reductores y bacterias foto hetertrofos como el
Rhodospirillum y rhodospseudomonas que no se desarrollan bien en concentraciones altas
de H2S, en la columna se identifican por su coloracin naranja.
c) Zona anaerobia o inferior: En esta zona se encuentra muy baja concentracin de oxigeno y
en ella se desarrollan diferentes tipos de microorganismos que crecen en condiciones
anaerobias: los que presentan respiracin anaerobia y fermentan la materia orgnica
degradndola de manera incompleta.
En la parte inferior de la columna se desarrollan bacterias que necesitan de una alta
concentracin de H2S formando una capa rosada o purpura como le caso de la
Amoebobacter, y luego de unas semanas bajo las mismas condiciones del genero
Clostridium.
La coloracin negra denota la presencia de microorganismos sulfatos reductores como por
ejemplo el Desulfovibrio, Desulfotomaculum o Desulfomonas. La coloracin es debida a la
precipitacin de sulfuro de metales pesados (hierro, manganeso), como se explica en la
siguiente reaccin:
MATERIA ORGANICA REDUCIDA

MATERIA ORGANICA OXIDADA

(H+) PODER DE REDUCCION.

SO -24

ION SULFATO

H2S
Fe +2
FeS

SULFURO DE HIERRO

La columna planteada para esta prctica permite describir como se desarrolla el ciclo del azufre con
las zonas bien diferenciadas.

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Figura No. 1. Zonas de la columna de Winogradsky

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MATERIALES Y REACTIVOS

Esptula
Botella plstica de 500 ml
Papel peridico
Lodo rico en materia orgnica
Sulfato de Calcio
Carbonato de cido de sodio
Cloruro de amonio
Balanza

PROCEDEIMIENTO

Utilizar una
botella de 100 ml.

Tapar la botella
con la tapa.

Llenar la botella
con agua de
charco hasta 1/3.

Aadir tiras de
papel peridico.

Aadir agua de charco

hasta llenar la botella.

Colocar cerca donde reciba luz

solar atenuada.

Aadir Sulfato de
Calcio (CaSO4) y
Carbonato de Calcio
(CaCO3)

Aadir Bicarbonato Sdico (NaHCO3),

Cloruro de Amonio (NH4Cl) y tampn fosfato.

Examinar la botella
peridicamente.

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CUESTIONARIO
1. Realice los dibujos correspondientes a cada una de las observaciones realizadas.

2. Investigar las principales reacciones de oxidacin y reduccin que se presentan en las zonas
de la columna indicando la clase de microorganismos.
Microorganismos de la columna de Winogradsky
Una vez establecida la columna, se pueden diferenciar tres zonas caractersticas en base a su
concentracin relativa de oxgeno: 1) zona aerbica, es la ms superficial, dispone de una alta
concentracin de oxgeno; 2) zona microaerfila, inmediatamente debajo de la anterior, con una
menor concentracin de oxgeno; 3) zona anaerbica, que constituye el lecho de lodo (Fig. 2).Las
algas y cianobacterias forman una capa superficial de color verde brillante, y al producir oxgeno
ayudan a mantener la aerobiosis en la zona superior de la columna. Mientras que, en el fondo de la
columna, las bacterias reductoras del sulfato producen sulfuro, que provoca el crecimiento de
bacterias rojas y verdes del azufre (fottrofos anoxignicos). De modo que se establecen dos
gradientes en la columna, uno de oxgeno y otro de sulfuro de hidrgeno (H2S).
Las bacterias quimiorganotrofas crecen a lo largo de toda la columna, los microorganismos aerobios
y microaerfilos en la parte superior, los anaerobios en las zonas donde hay sulfuro de hidrgeno.

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Al cabo de cuatro o seis semanas comenzarn a observarn una serie de comunidades microbianas
en la columna, que de arriba abajo son (Figs. 2 y 3):
Zona aerbica: esta es la parte de la columna ms rica en oxgeno y ms pobre en azufre.
El agua de la parte superior de la columna contiene abundantes poblaciones de
microorganismos aerobios, que aparecen normalmente en hbitats acuticos ricos en
materia orgnica (estanques poco profundos, arroyos, etc.). Suelen ser microorganismos
flagelados, lo que les permite moverse y establecerse en nuevas reas, as como
microorganismos fotosintticos: algas (diatomeas) y cianobacterias filamentosas. El oxgeno
que producen estos productores primarios difunde desde la superficie, creando condiciones
similares a las que existen en un lago con sedimentos ricos en nutrientes.
Zona microaerfila: es la zona en la que solapan ambos gradientes, el de oxgeno y el de
sulfuro de hidrgeno. Aparecen bacterias oxidadoras del azufre como Beggiotoa,
Thiothrix oThiobacillus, que usan como fuente de carbono la materia orgnica, y oxidan el
H2S que llega por difusin desde las capas inferiores a azufre elemental. La reaccin
qumica que se lleva a cabo es la siguiente (reaccin de Bunsen): O2+ H2S H20 + S0.
Son, por lo tanto, microorganismos mixtrofos. Estos gneros acumulan grnulos de
azufre en sus citoplasmas por oxidacin del H2S. Si se deja evolucionar el sistema, cuando
la concentracin de H2S es muy baja, los grnulos de azufre elemental intracitoplasmtico

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presentes en estas bacterias empiezan a desaparecer por oxidacin total a sulfato (H2S
S0 SO42).
Zona anaerbica: esta zona contiene H2S (procedente del fondo), en la zona anaerbica
superior predominan las bacterias fotosintticas anaerobias, y en la columna se observan
una serie de bandas de colores rojo y verde:
o Bacterias rojas no del azufre: Rhodospirillum, Rhodomicrobiumo Rhodopseudomonas,
son bacterias anaerobias fotoorgantrofas, que slo pueden realizar la fotosntesis en
presencia de una fuente de carbono orgnico. Forman una capa de color rojo
anaranjado. Las bacterias verdes no del azufre son termfilas y, por lo tanto, no crecen
en la columna a temperatura ambiente.
o Bacterias rojas del azufre (Chromatium, Rhodospirillum, Thiocapsa, forman una capa de
color rojo-prpura) y bacterias verdes del azufre (Chlorobium, Pelodyctium). Estas
bacterias son fotolittrofas y realizan una fotosntesis anoxignica, no producen oxgeno
ya que no utilizan H2O como elemento reductor sino H2S, generando en este proceso
sulfatos (SO42 ). La reaccin que tiene lugar es la siguiente: 2 H2S + CO2 [CH2O] +
H2O + 2 S0. Estos microorganismos aparecen como zonas decrecimiento en el lodo de la
columna, pero tambin pueden desarrollarse en el agua si los fottrofos oxignicos
son escasos.
En la zona anaerobia ms profunda, de color negro intenso, aparecen microorganismos capaces de
realizar respiracin anaerbica y fermentacin.
Bacterias reductoras del sulfato (BRS): Desulfovibrio, Desulfobacter, Desulfotomaculum
Desulfomonas. Usan el sulfato, u otras formas parcialmente oxidadas de azufre como el
tiosulfato, y generan grandes cantidades de H2S en el proceso. La reaccin de reduccin
bacteriana del sulfato es la siguiente: SO42 + 8 H+H2S + 2 H2O + 2 OH . EsteH2S
reaccionar con el hierro presente en el sedimento, produciendo sulfuro de hierro (II), que
precipita y da el color negro. Es por esto que, en la naturaleza, los sedimentos acuticos son
frecuentemente negros.
La reaccin sera la siguiente: SO42 H2S (sulfuro de hidrgeno) (in sulfato) Fe2+SFe
(Sulfuro de hierro) Precipitado negro
Sin embargo, no todo el H2S reacciona con el hierro (II), parte de ste difunde hacia arriba a lo largo
de la columna de sedimentos y es utilizado por las bacterias verdes y rojas del azufre que crecen en
las zonas superiores.
o Bacterias fermentadoras: utilizan la celulosa del papel aportado como fuente primaria para
su metabolismo, aparecen las bacterias del gnero Clostridium. Son anaerobias estrictas, y
no empiezan a crecer hasta que el oxgeno desaparece del sedimento. Estas bacterias
degradan la celulosa hasta residuos de glucosa y, a continuacin, fermentan la glucosa para
obtener la energa que necesitan, produciendo una serie de compuestos orgnicos simples
(etanol, cido actico, cido lctico, cido succnico, etc.) como productos finales de esa

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fermentacin. Estos compuestos orgnicos sern, a su vez, respirados por las bacterias
reductoras del sulfato. Cuando la celulosa se agote, usarn la materia orgnica producida
por el resto de bacterias.
o Tambin pueden aparecer bacterias metano gnicas que generan CH4, que se observa
como burbujas de gas en el fondo de la columna.

3. Investigar cmo se relaciona la prctica con los ciclos biogeoqumicos.

El Ciclo del Carbono
El carbono es esencial para construir las molculas orgnicas que caracterizan a los organismos
vivos.
La principal fuente de carbono para los productores es el CO 2 del aire atmosfrico, que tambin se
halla disuelto en lagos y ocanos.
Adems hay carbono en las rocas carbonatadas (calizas, coral) y en los combustibles fsiles (carbn
mineral y petrleo).
Durante la fotosntesis, las plantas verdes toman CO2 del ambiente abitico e incorporan el carbono
en los carbohidratos que sintetizan. Parte de estos carbohidratos son metabolizados por los mismos
productores en su respiracin, devolviendo carbono al medio circundante en forma de CO 2. Otra
parte de esos carbohidratos son transferidos a los animales y dems hetertrofos, que tambin
liberan CO2 al respirar.

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El ciclo completo del carbono requiere que los descomponedores metabolicen los compuestos
orgnicos de los organismos muertos y agreguen nuevas cantidades de CO2 al ambiente. A todo lo
anterior debe sumarse la enorme cantidad de CO2 que llega a la atmsfera como producto de la
actividad volcnica, la erosin de las rocas carbonatadas y, sobre todo, la quema de combustibles
fsiles por el hombre.

Ciclo del Nitrgeno

Los seres vivos cuentan con una gran proporcin de nitrgeno en su composicin qumica. El
nitrgeno oxidado que reciben como nitrato (NO3) es transformado a grupos aminocidos
(asimilacin). Para volver a contar con nitrato hace falta que los descomponedores lo extraigan de la
biomasa dejndolo en la forma reducida de ion amonio (NH4+), proceso que se llama amonificacin;
y que luego el amonio sea oxidado a nitrato, proceso llamado nitrificacin.
As parece que se cierra el ciclo biolgico esencial. Pero el amonio y el nitrato son sustancias
extremadamente solubles, que son arrastradas fcilmente por la escorrenta y la infiltracin, lo que
tiende a llevarlas al mar. Al final todo el nitrgeno atmosfrico habra terminado, tras su conversin,
disuelto en el mar. Los ocanos seran ricos en nitrgeno, pero los continentes estaran
prcticamente desprovistos de l, convertidos en desiertos biolgicos, si no existieran otros dos
procesos, mutuamente simtricos, en los que est implicado el nitrgeno atmosfrico (N 2). Se trata
de la fijacin de nitrgeno, que origina compuestos solubles a partir del N2, y la desnitrificacin, una
forma de respiracin anaerobia que devuelve N2 a la atmsfera. De esta manera se mantiene un
importante depsito de nitrgeno en el aire (donde representa un 78% en volumen).

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Ciclo del Azufre

Es menos importante que los otros elementos que hemos visto, pero imprescindible porque forma
parte de las protenas.
Su reserva fundamental es la corteza terrestre y es usado por los seres vivos en pequeas
cantidades.
El azufre es un nutriente secundario requerido por plantas y animales para realizar diversas
funciones, adems el azufre est presente en prcticamente todas las protenas y de esta manera es
un elemento absolutamente esencial para todos los seres vivos.
El azufre circula a travs de la biosfera de la siguiente manera, por una parte se comprende el paso
desde el suelo o bien desde el agua, si hablamos de un sistema acutico, a las plantas, a los
animales y regresa nuevamente al suelo o al agua.
Algunos de los compuestos sulfricos presentes en la tierra son llevados al mar por los ros. Este
azufre es devuelto a la tierra por un mecanismo que consiste en convertirlo en compuestos
gaseosos tales como el cido sulfhdrico (H2S) y el dixido de azufre (SO2). Estos penetran en la
atmsfera y vuelven a tierra firme. Generalmente son lavados por las lluvias, aunque parte del
dixido de azufre puede ser directamente absorbido por las plantas desde la atmsfera.
La actividad industrial del hombre esta provocando exceso de emisiones de gases sulfurosos a la
atmsfera y ocasionando problemas como la lluvia cida.

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Ciclo del Hierro

El hierro es otro de los elementos indispensables para el desarrollo del ser vivo, entre otras
funciones es necesario para la gnesis de los glbulos rojos por su presencia en la hemoglobina,
tambin es necesario para determinados seres vivos como pigmento transportador de del oxgeno.
En la biosfera aparece como hierro orgnico, hierro inorgnico bien soluble o en sedimento. La
aparicin de sedimentos de hierro lo desencadenan los cambios en el pH del medio al igual que
algunos microorganismos, a este grupo de bacterias se le denominan ferrobacterias - Gallionella,
Siderocapsa y Sideromonas -.
El hierro organico pasa a formas de mayor o menor estado de oxidacin. El ion ferroso puede
transformarse en ion frrico y viceversa pasando finalmente de nuevo hierro organico.
Algunas bacterias como el Thiobacillus ferroxidans obtiene la energa a partir de la oxidacin del
hierro, de sulfato ferroso a sulfato ferrico, con esta energa que obtienen reducen el anhdrido
carbnico (reduccin no fotosinttica)

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CONCLUSIONES
Experimentalmente se pudo comprobar las tres zonas caractersticas de la columna, zona
aerbica, zona microaerofila y la zona anaerbica. Aunque nos hizo falta un poco mas de
tiempo para que estas tres zonas se desarrollaran un poco mas.
El Sulfato de Calcio y el Carbonato de cido de sodio, favorecieron el desarrollo microbiano
en la columna realizada en laboratorio.
El poner el recipiente en un lugar donde no haya luz, ayuda a la produccin de O2 en la
parte superior, por medio de la respiracin anaerbica en los primeros das.
En la columna se puede observar una parte de bacterias oxidaras no fotosintticas, aun no
es una poblacin bastante desarrollo debido al tiempo.

BIBLIOGRAFIA
http://es.scribd.com/doc/59281261/Columna-de-Winogradsky
Atlas, R.M. Y R. Bartha. 2001. Ecologa microbiana y microbiologa ambiental. Cuarta
edicin Addison Wesley.
http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/Ciclo_del_azufre.htm
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema_09_micro_ambiental.pdf
http://www.diversidadmicrobiana.com/index.php?option=com_content&view=article&id=368&
Itemid=450
http://www.elergonomista.com/biologia/cicloh.htm
Sagardoy.A. y M.Mandolesi Biologa del suelo Gua de estudio. Editorial Universidad
Nacional del sur/Pg. 76

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