UNIVERSIDAD DE PUERTO RICO- HUMACAO

DEPARTAMENTO DE BIOLOGA
BIOL 3013

Experiencia de Laboratorio: Macromolculas: hidratos de carbono, lpidos y protenas

Adaptado y traducido por la Dra. Melissa Coln Cesario, UPRH 2009 de:

Exercise Six: Biologically Important Molecules, Biology Laboratory Manual, Vodopich &
Moore, McGraw Hill, 2008.
Laboratory #3: Chemical Composition of Cells, Laboratory Manual Biology, Mader,
McGraw Hill, 2007.

Objetivos:
1.
2.
3.
4.
5.

Reconocer la importancia de los carbohidratos y lpidos

Utilizar pruebas bioqumicas para detectar la presencia de almidn y azcares.
Reconocer los componentes de un lpido.
Utilizar la pruebas para detectar la presencia de lpidos.
Utilizar pruebas bioqumicas para detectar la presencia de protenas en una solucin.

Introduccin a macromolculas:

Todos los organismos se componen de la unidad bsica de la materia conocida como el

tomo. Cuando los tomos se unen con otros tomos producen molculas. Las molculas
orgnicas estn directamente asociadas con los organismos vivos, debido a que son los
bloques que componen la estructura celular. Las molculas orgnicas grandes se forman
mediante la sntesis por deshidratacin y se destruyen mediante el proceso de hidrlisis. Lo
que implica que para romper una macromolcula tenemos que romper una molcula de agua
(hidrlisis), mientras que al formar una macromolcula se produce una molcula de agua
(sntesis de deshidratacin).

Entre las diferentes clases de molculas orgnicas que existen nos vamos a enfocar en
los hidratos de carbonos (monosacridos, disacridos, polisacridos), los lpidos (grasas) y las
protenas. Para detectar estas molculas en diferentes soluciones vamos a utilizar agentes
bioqumicos que reaccionan solo cuando estas molculas estn presente.

Hidratos de Carbono: Los hidratos de

carbono son macromolculas que se
componen de pequeas molculas
conocidas como monmeros. Estos
monmeros son azcares simples
conocidas como monosacrido (Ej.
Glucosa). Otros carbohidratos tienen una
organizacin ms compleja, como los
disacridos y los polisacridos. Los
disacridos se componen de dos
unidades de azcar como la maltosa.
Los polisacridos se componen de
cadenas de glucosas como por ejemplo
el glucgeno, el almidn y la celulosa.

La glucosa es utilizada como fuente de energa en los organismos vivos. La energa se

libera cuando la glucosa se rompe formando dixido de carbono (CO2) y agua (H2O). Esta
energa liberada es la que utilizan los organismos para hacer trabajo. Nosotros los animales
almacenamos el azcar en forma de glucgeno, mientras las plantas las almacenan en forma
de almidn.

Lpidos: Los lpidos son molculas que son insolubles en agua y solubles en solventes como
alcohol y eter. Por lo general, los aceites y las grasas se componen de tres molculas de
cidos grasos unidos y una molcula de glicerol (triglicrido). Las grasas son la fuente de
almacenaje a largo plazo de energa en el cuerpo humano. Los lpidos incluyen a las grasas,
los aceites, los fosfolpidos, los esteroides y el colesterol.

Protenas: Las protenas son molculas con estructuras verstiles que se encuentran en las
diferentes formas de vida. Los monmeros de las protenas son conocidos como los amino
cidos, los cuales estn compuestos por un grupo amino (-NH2), un grupo carboxilo (-COOH) y
un grupo variable (R). El grupo R es quien da la propiedad distintiva de cada amino cido. Al
igual que los hidratos de carbono y los lpidos los enlaces entre los amino cidos es mediante
la sntesis por deshidratacin. El enlace entre amino cidos es conocido como un enlace
peptdico. Un enlace peptdico se forma entre el grupo amino (-NH2) de un amino cido y el

grupo carboxlico (-COOH) del amino cido adyacente. Las protenas se caracterizan por tener
cuatro niveles de organizacin en su estructura: primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria.
La estructura primaria est relacionada con la secuencia de amino cidos, mientras que la
secundaria est asociada con la formacin de puente de hidrgeno entre amino cidos que no
estn adyacentes. La estructura terciaria est envuelta con la tridimensionalidad de la protena.
Las protenas son funcionales solo y cuando su estructura terciaria sea correcta. Algunas
protenas adquieren la estructura cuaternaria, es decir se asocian con otras cadenas de
polipptidos para ser funcionales (Ejemplo: la hemoglobina). Entre las funciones que tienen las

protenas en la clula se encuentran: generar estructura, movimiento, defensa, almacenaje,

seales y catlisis.

Detectar la presencia de hidratos de carbohidratos, lpidos y protenas

Para detectar la presencia de lpidos e hidratos de carbonos en las soluciones se

utilizan algunas sustancias qumicas que reaccionan con el sustrato produciendo un cambio en
color. Si el cambio en color es observado, entonces la reaccin es positiva e indica que la
molcula orgnica de inters est presente. Si no se observa cambio en color, entonces la
reaccin es negativa e implica que la molcula orgnica de inters no est presente, solo est
presente el solvente. Para cada experimento recuerda incluir o identificar al grupo control
adecuado. El grupo control te permite observar las diferencias entre los resultados positivos y
negativos.
Prueba para detectar almidn:

Para detectar la presencia del almidn se utiliza una solucin de iodo(I2KI). La solucin
de iodo distingue al almidn de los monosacridos, disacridos y otros polisacridos. La
solucin de iodo (amarillo-marrn) reacciona qumicamente con los espirales que se forman en
la molcula de almidn cambiando a un color azul-negro. Si los hidratos de carbono no estn
en espiral, entonces la solucin de iodo no reacciona (permanece amarillo-marrn).

Procedimiento:
Identifique 5 tubos de ensayos limpios.

Tubo 1
1. Mezcla 1 mL de agua y 5 gotas de solucin de iodo.
2. Anota el color de la solucin en la Tabla 1.
Tubo 2
1. Agita la solucin de almidn que se encuentra en la mesa central antes de obtener tus
muestras. Despus de agitar la solucin de almidn, mezcla 1 mL de la solucin de 1%
almidn y 5 gotas de solucin de iodo. Agita.
2. Anota el color de la solucin en la Tabla 1.
Tubo 3
1. Mezcla 1 mL de jugo de cebolla (tritura pequeos pedazos de cebolla en un mortero y
aade agua) con 5 gotas de solucin de iodo. Agita.
2. Anota el color de la solucin en la Tabla 1.
3.
Tubo 4
1. Mezcla 1 mL de jugo de papa (jugo de papa: tritura pequeos pedazos de papa en un
mortero y aade agua) con 5 gotas de solucin de iodo. Agita.

2. Anota el color de la solucin en la Tabla 1.

Tubo 5
1. Mezcla 1 mL de solucin de glucosa y 5 gotas de solucin de iodo. Agita la mezcla.
2. Anota el color de la solucin en la Tabla 1.

Preguntas:
De los resultados obtenidos, conteste las siguientes preguntas. Escriba su conclusin en la
Tabla 1.
1. Cul de las soluciones es el control positivo? Explique su contestacin.

2. Cul es el control negativo? Explique su contestacin.

3. Cul tiene un color ms intenso el jugo de papa o el jugo de cebolla? Por qu?

Prueba para detectar azcares:

Muchos de los monosacridos (glucosa y fructosa) son agentes reductores, porque en su

estructura molecular poseen grupos aldehdos (-CHO) o cetonas (-C=O) libres que reaccionan
con agentes oxidantes dbiles. Para detectar azcares se utiliza el reactivo Benedict, el cual
contiene un agente oxidante dbil (cobre) que reacciona con las azcares. Las azcares
reaccionan con el reactivo Benedict despus de ser calentado en un bao de agua caliente,
generando un cambio de la solucin de color azul a verde, amarillo, anaranjado o rojo (ver
Tabla 2).

Procedimiento Experimental:
Identifique 5 tubos de ensayos limpios.

Tubo 1
1. Mezcla 1 mL de agua y 7 gotas del Reactivo Benedict.
2. Calienta en un bao de agua caliente de 5 a 10 minutos. Anota el color de la solucin
en la Tabla 3.
Tubo 2
1. Mezcla 1 mL de solucin de glucosa con 7 gotas de Reactivo Benedict.
2. Calienta en un bao de agua caliente de 5 a 10 minutos. Anota el color de la solucin
en la Tabla 3.

Tubo 3
1. Mezcla 1 mL de jugo de cebolla y 7 gotas del Reactivo Benedict.
2. Calienta en un bao de agua caliente de 5 a 10 minutos. Anota el color de la solucin
en la Tabla 3.
Tubo 4
1. Mezcla 1 mL de jugo de papa con 7 gotas del Reactivo Benedict.
2. Calienta en un bao de agua caliente de 5 a 10 minutos. Anota el color de la solucin
en la Tabla 3.
3.
Tubo 5
1. Mezcla 1 mL de solucin de almidn y 7 gotas del Reactivo Benedict.
2. Calienta en un bao de agua caliente de 5 a 10 minutos. Anota el color de la solucin
en la Tabla 3.

Preguntas:
De tus resultados, determina cul de estas soluciones est compuesta por azcares. Cmo
llegas a esta conlusin? Escribe tu conclusin en la Tabla 3.

1. Cul de las soluciones es el control positivo? Explique su contestacin.

2. Cul es el control negativo? Explique su contestacin.

3. Cul tiene ms azcares, el jugo de papa o el jugo de cebolla? Cmo llegas a esta
conclusin?

Compare los resultados de la Tabla 1 y la Tabla 3. En las clulas de las plantas la glucosa
frecuentemente se almacena en forma de almidn
i)

La glucosa se almacena en forma de almidn en la papa?

ii)

La glucosa se almacena en forma de almidn en la cebolla?

iii)

Cmo estos hallazgos explican los resultados de la Tabla 3?

Prueba detectar los Lpidos

Las pruebas para los lpidos estn basadas en la habilidad de absorber pigmentos en
forma selectiva. El Nile Blue A es un colorante soluble en grasas que genera un cambio de
color en la solucin de lpidos (de azul a violeta claro).

Procedimiento:
1. Identifique 4 tubos de ensayos limpios

2. Aade los materiales listados en la Tabla 4.

3. Aade 250 L de la solucin Nile Blue A a los tubos
4. Mezcla el contenido de cada tubo. Anota el color en la Tabla 4.
Preguntas:
1. Cul de los tubos es el control positivo para la prueba de lpidos?

2. Qu tipo de molculas orgnicas estn presentes en la solucin l desconocida A y B?

Explique su contestacin.

3. Los lpidos proveen ms del doble de caloras por gramo que los carbohidratos. Basado
en sus resultados, cul solucin tiene ms calorias, el desconocido A o B? Explique su
contestacin.

Pruebas para detectar protenas

El reactivo de Biuret es utilizado para detectar protenas o pptidos debido a que es una
solucin que detecta los enlaces peptdicos. El reactivo de Biuret (azul) contiene una solucin
fuerte de hidrxido de sodio o potasio (NaOH o KOH) y pequeas cantidades de solucin de
sulfato de cobre (CuSO4). Es el cobre (Cu+2) del reactivo de Biuret quien identifica los enlaces
peptdicos de las protenas produciendo un color violeta en la solucin.

Procedimiento:

1. Identifica cuatro tubos de ensayo con los nombres listado en la Tabla 6. Aade a cada
tubo el volumen determinado.
2. Aade a cada tubo 5 gotas del reactivo de Biuret. Mezcla la solucin.
3. Anota los colores en la Tabla 6.

Preguntas:

1. Cul de las soluciones es el control positivo? Explique su contestacin.

2. Cul es el control negativo? Explique su contestacin.

3. Cul solucin contiene ms protenas la albmina o el almidn? Explique su

contestacin.

4. Los amino cidos libres tienen enlaces peptdicos?

Prueba detectar los Lpidos

Las pruebas para los lpidos estn basadas en la habilidad de absorber pigmentos en forma
selectiva. El Sudan IV es un colorante soluble en grasas que genera un cambio de color en la
solucin de lpidos (de azul a rojo-anaranjado).

Procedimiento:
1. Identifique 4 tubos de ensayos limpios

2. Aade los materiales listados en la Tabla 4.

3. Aade 5 gotas de la solucin Sudan IV a los tubos
4. Mezcla el contenido de cada tubo. Anota el color en la Tabla 4.

Preguntas:
1. Cul observacin indica una prueba positiva para los lpidos?

2. La solucin lpida es soluble en agua?

3. La miel contiene muchos lpidos?

4. Los lpidos proveen ms del doble de caloras por gramo que los carbohidratos. Basado
en sus resultados, cul solucin tiene ms calorias, la solucin de aceite o la miel?

Referencias:

Audesirk T, Audesirk, G & Byers B.E. Captulo 4: Molculas biolgicas. Biologa: La vida en
la Tierra. (8va ed.). Pearson Prentice Hall.

Campbell, Reece, Urry, Cain, Wasserman, Minorsky & Jackson. (2008) Chapter 4: Carbon
and Molecular Diversity. Biology. 8va Ed. Pearson Benjamin Cummings, USA.

Raven, Johnson, Losos, Mason & Singer. (2008) Biology. 8va Ed. McGraw Hill, USA

Primera Clase Graduada de Microbiologa en el 1990: