INTRODUO
Por as enzimas serem os catalisadores utilizados pelos seres vivos na
maioria das reaes, muito importante saber quais leis regem a cintica destes
biocatalisadores e quais variveis afetam a taxa de reao, pois esse conhecimento
vai projetar e operar processos enzimticos. [3]
Cintica Enzimtica estudada para determinar as constantes de afinidade
do substrato e dos inibidores (Km e Ki), conhecer as condies timas da catlise (T,
pH, [S] etc), ajudar a elucidar os mecanismos de reao (estudo ordem reao e tipo
cintica); e determinar a funo de uma determinada enzima em uma rota
metablica (para um dado S). [2]
O mecanismo mais simples para explicar a ao enzimtica o modelo de
Michaelis-Menten:
E +S ES E + P
Neste modelo, a enzima (E) liga-se ao substrato (S) para formar um
complexo enzima-substrato (ES). Este pode separar-se novamente em enzima e
substrato livre ou transformar o substrato em produto (P). Como em qualquer reao
elementar (uma reaco que ocorre por simples coliso entre reagentes), a
velocidade de cada passo ser proporcional concentrao dos reagentes desse
passo. Em cada caso, a constante de proporcionalidade ser uma funo da energia
de ativao desse passo. Na maior parte das enzimas, verifica-se que o equilbrio E
+S ES se atinge muito rapidamente (em poucas dezenas de milissegundos). Uma
vez atingido o equilbrio, a concentrao de ES mantm-se constante, uma vez que
sempre que um complexo ES se dissocia em produto e enzima livre, esta se liga
muito rapidamente a uma nova molcula de substrato, regenerando o complexo ES.
Nestas condies, a velocidade de degradao de ES igual velocidade da sua
formao. [1]
2. OBJETIVOS
2.1. Objetivo geral
Analisar o efeito dos diferentes pHs e da concentrao de substrato sobre a
velocidade da reao, determinando a velocidade mxima da reao e sua
constante de Michaelis.
2.2. Objetivo especfico
Realizar um ensaio com oito amostras distintas para a anlise do efeito do pH e
outro ensaio com seis amostras para a anlise da concentrao de substrato;
Efetuar a leitura das absorbncias de cada amostra no espectrofotmetro na
faixa de 540nm;
Traar um grfico de absorbncia por pH e outro de absorbncia por
concentrao de substrato, para a anlise do comportamento da enzima;
Determinar a constante de Michaelis e a velocidade mxima obtida.
3. MATERIAIS E MTODOS
3.1. Efeito do pH
3.1.1. Materiais
Tubos de ensaio;
Estante para tubos de ensaio;
Pipetas automticas;
Pipeta graduada de 10ml;
Pipetador;
Bquer;
Espectrofotmetro;
Chapa de aquecimento com banho-maria.
3.1.2. Reagentes
horas em banho-maria;
Soluo de sacarose 0,2mol/L;
gua destilada;
Soluo tampo acetato 0,05mol/L com pHs 4 e 5;
Soluo de 3,5-dinitrosalicilato (DNS): mistura de cido dinitrosaliclico
dissolvido em NaOH 2mol/L e tartarato duplo de sdio e potssio
3.1.3. Metodologia
Em nove tubos de ensaios distintos, adicionaram-se os reagentes conforme
a tabela abaixo:
Tubos de ensaio;
Estante para tubos de ensaio;
Pipetas automticas;
Pipeta graduada de 10mL;
Pipetador;
Bquer;
Espectrofotmetro;
Chapa de aquecimento com banho-maria.
3.2.2. Reagentes
horas em banho-maria;
Soluo de sacarose 0,2mol/L;
Soluo de sacarose 0,1mol/L;
Soluo de sacarose 0,05mol/L;
Soluo de sacarose 0,02mol/L;
Soluo de sacarose 0,01mol/L
gua destilada;
Soluo tampo acetato 0,05mol/L com pH 4,7;
Soluo de 3,5-dinitrosalicilato (DNS): mistura de cido dinitrosaliclico
dissolvido em NaOH 2mol/L e tartarato duplo de sdio e potssio
dissolvido em gua destilada;
3.2.3. Metodologia
Em seis tubos de ensaios distintos, adicionaram-se os reagentes conforme a
tabela abaixo:
4. RESULTADOS E DISCUSSO
4.1. Resultados
4.1.1. Efeito do pH
Leitura de absorbncia no espectrofotmetro na faixa de 540nm:
1
V mx
=1,1239
1
V mx = =0,8898
B
A=
Km
=0,0847
V mx
K m= AV mx =0,0754
4.2. Discusso
5. CONCLUSO
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6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
[1] http://homepage.ufp.pt/pedros/bq/Enzimas.htm
[2] http://www.eq.ufrj.br/biose/nukleo/aulas/Enzimol%20Grad/aula2.pdf
[3] CINTICA ENZIMTICA 2 MATERIAL DIDTICO
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