Microbiologia

FACULTAD DE CIENCIAS AGRCOLAS Y PECUARIAS
RED NACIONAL UNIVERSITARIA
UNIDAD ACADMICA DE SANTA CRUZ
Veterinaria y Zootecnia
TERCER SEMESTRE
SYLLABUS DE LA ASIGNATURA DE
MICROBIOLOGA
Elaborado por: Lic. Shirley Ortiz Saucedo

Gestin Acadmica I/2013
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UDABOL
UNIVERSIDAD DE AQUINO BOLIVIA
Acreditada como PLENA mediante R.M. 288/01
VISION DE LA UNIVERSIDAD
Ser la universidad lder en calidad
educativa.
MISION DE LA UNIVERSIDAD
Desarrollar la educacin superior
universitaria con calidad y competitividad
al servicio de la sociedad
Estimado(a) estudiante:
El Syllabus que ponemos en tus manos es el fruto del trabajo intelectual de tus docentes, quienes han
puesto sus mejores empeos en la planificacin de los procesos de enseanza para brindarte una
educacin de la ms alta calidad. Este documento te servir de gua para que organices mejor tus
procesos de aprendizaje y los hagas mucho ms productivos.
Esperamos que sepas apreciarlo y cuidarlo.
Aprobado por:
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Fecha: Marzo de 2013
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SYLLABUS
Asignatura:
Cdigo:
Requisito:
Carga Horaria:
Horas Tericas:
Horas Prcticas:
Crditos:
Microbiologa
VET-302
VET-202
80 horas
40
40
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I. OBJETIVOS GENERALES DE LA ASIGNATURA.

Describir los microorganismos (bacterias y hongos) y los grupos a los que pertenecen.
Reconocer las bacterias ms importantes y sus caractersticas relevantes, como ser: hbitat,
caractersticas de celulares, de cultivo y bioqumicas, factores de resistencia y enfermedades
producidas.
Aplicar tcnicas laboratoriales en la observacin e identificacin de los agentes etiolgicos
(bacterias y hongos).
II. PROGRAMA ANALITICO DE LA ASIGNATURA.
UNIDAD I: MICROBIOLOGA GENERAL.
1.1. Definicin
1.2. Etiologa
1.3. Subdivisin de la microbiologa
1.4. Objeto de la microbiologa
1.5. Historia
1.6. El microscopio
1.7. Relacin con otras ciencias
1.8. Distribucin de los microorganismos
1.9. Microorganismos saprofitos
1.10. Microorganismos patgenos.
UNIDAD II: CLASIFICACIN Y NOMENCLATURA DE LAS BACTERIAS.
2.1. Generalidades
2.2. Reino de los hongos
2.3. Reino protista
2.4. Reino monera o procariota
2.5. Clulas eucariticas y procariticas.
2.6. Problemas de la clasificacin
UNIDAD III: MORFOLOGA Y ESTRUCTURA BACTERIANA.
3.1. Definiciones
3.2. Formas bacterianas
3.3. Citologa de las bacterias
3.4. Estructuras facultativas
UNIDAD IV: FISIOLOGA BACTERIANA I (NUTRICIN BACTERIANA).
4.1. Concepto e importancia
4.2. Requerimientos qumicos
4.3. Aerobios obligados
4.4. Anaerobios obligados
4.5. Anaerobios facultativos
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4.6. Anaerobios aerotolerantes

4.7. Microaerofilos.
4.8. Requerimientos fsicos.
4.9. Medios de cultivo
UNIDAD V: FISIOLOGA BACTERIANA II (MULTIPLICACIN Y DESARROLLO).
5.1. Definiciones
5.2. Multiplicacin
5.3. Desarrollo
5.4. Ciclo de crecimiento poblacional o desarrollo
5.5. Factores que afectan la multiplicacin y desarrollo de las bacterias.
5.6. Caractersticas de las colonias
UNIDAD VI: GENTICA MICROBIANA.
6.1. Bases de la herencia
6.2. Gen
6.3. Cromosoma procaritico
6.4. Mutacin
6.5. Transferencia intercelular
6.6. Transformaciones.
6.7. Transduccin
6.8. Conjugacin
6.9. Recombinacin
UNIDAD VII: ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN.
7.1. Generalidades
7.2. Definiciones
7.3. Esterilizacin
7.4. Desinfeccin.
7.5. Asepsia
7.6. Antisepsia.
7.7. Higienizacin
7.8. Modo de accin (agentes qumicos).
7.9. Agentes modificantes de grupos funcionales de protenas y de cidos Nucleicos
7.10.
Mtodos fsicos de esterilizacin.
7.11. Filtracin
7.12. Factores que afectan a la esterilizacin
UNIDAD VIII: ACCIN DE LOS AGENTES QUIMIOTERAPEUTICOS.
8.1. Resea histrica
8.2. Agentes quimioterapeticos
8.3. Origen
8.4. Efecto
8.5. Espectro
8.6. Mecanismo de accin
8.7. Resistencia bacteriana.
8.8. Test de sensibilidad
8.9. Uso indiscriminado de antibiticos
8.10. Sensibilizacin
8.11. Toxicidad
8.12. Enmascaramiento de infecciones.
UNIDAD IX: BACTERIAS DE INTERES VETERINARIO.
9.1. Cocos aerobios Gram positivos
9.2. Bacilos aerobios Gram positivos.
9.3. Bacilos anaerobios Gram positivos.
9.4. Bacilos anaerobios Gram negativos
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9.5 Cocobacilos aerobios Gram negativos

9.6. Bacterias pleomrficas aerobias Gram negativos-carentes de membrana Citoplasmtica.
9.7. Bacterias intracelulares obligadas aerobias y asociadas a clulas.
UNIDAD X: MICROBIOLOGA APLICADA.
10.1. Microbiologa del suelo
10.2. Ciclos biogeoqumicos
10.3. Microbiologa del aire
10.4. Microbiologa del agua
10.5. Agua de consumo humano
10.6. Microbiologa de los alimentos
10.7. Alteracin de los alimentos
10.8. Enfermedades de origen microbiano
10.9. Alimentos producidos por microorganismos
10.10. Microbiologa industrial.
III. EVALUACIN DE LA ASIGNATURA.
PROCESUAL O FORMATIVA.
A lo largo del semestre se realizarn 2 tipos de actividades formativas:

Las primeras sern de aula, que consistirn en clases tericas, exposiciones individuales y grupales,
repasos cortos semanales, trabajos prcticos como Work Papers y Difs.
Las segundas sern actividades de aula abierta que consistirn en la participacin del alumnado en
actividades terico - prcticas propias de la asignatura a realizarse fuera del recinto universitario y de
trabajo social mediante als Brigadas d ela carrera. Vinculando los contenidos de la asignatura de forma
directa e indirecta.
La participacin y la calidad de los trabajos resultantes de estos dos tipos de actividades se tomarn
como evaluacin procesual (sobre 50 puntos) independientemente de la cantidad de actividades
realizadas por cada alumno. Bajo la siguiente ponderacin.
Participacin. 10%
Calidad del trabajo y/o contenido. 20%
Instrumentos y/o medios utilizados. 20%
DE RESULTADOS DE LOS PROCESOS DE APRENDIZAJE O SUMATIVA (examen

parcial o final)
Se realizarn 2 evaluaciones parciales con contenido terico sobre 50 puntos cada una. El examen final
consistir en un examen escrito con un valor del 30% de la nota, la presentacin de los informes y
documentos del proyecto con el restante 20%.
IV.
BIBLIOGRAFA BSICA.
Angulo, Manuel: Microbiologa prctica. Ed. UAGRM. Santa Cruz. 2003. (576An47)
Merck & co: Manual de Veterinaria Merck & co. 2004. Ed. Ocano. 6ta. Edicin. BogotaColombia. (636.089 Ai27)
Nicolet, Jackes: Compendio de Bacteriologa Veterinaria. Ed. Acribia. Espaa. 1986. (589.9 N54)
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BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA.
Freeman, B. A: Microbiologa de Burrow. Editorial Interamericana. Madrid-Espaa. 1986.
Madigan, T.M., Martincko, M. J., Parker, J: Biologa de los Microorganismos. Octava Edic.
Espaa. 1997.
Pelczar, M.J., & E.C.S. Chan: Elementos de Microbiologa. Mc Graw- Hill, Madrid. 1984
Senasac: Manual de Procedimiento de Diagnostico de Brucelosis. Buenos Aires - Argentina.
1999
Stanier, r. Y., AAdelberg & J.L. Ingraham: Microbiologa. De. Revert S.A. Barcelona-Espaa.
1984
T.D.D.W. Smith S. T. Madigan.: Biologa de los microorganismos. 1994
V. PLAN CALENDARIO
SEMANA
1ra.
2da.
3ra.
4ta.
5ta.
6ta.
ACTIVIDADES ACADMICAS
Presentacin de la materia.
UNIDAD I: 1.1 - 1.2 - 1.3 - 1.4 - 1.5
- 1.6 - 1.7
1.8 - 1.9 - 1.10
UNIDAD II: 2.1 - 2.2 - 2.3 - 2.4
2.5 - 2.6
UNIDAD III: 3.1 - 3.2 - 3.3
3.4
UNIDAD IV: 4.1 - 4.2
Avance de
materia
Avance de
materia
Avance de
materia
Avance de
materia
Avance de
materia
Avance de
materia
4.10 - 4.11 - 4.12 - 4.13 - 4.14 - 4.15

- 4.16 - 4.17 - 4.18
Primera Evaluacin
Primera Evaluacin
Avance de
materia
UNIDAD V: 5.1 - 5.2 - 5.3 - 5.4 - 5.5

- 5.6 - 5.7 - 5.8 - 5.9 - 5.10
8va.
Avance de
materia
5.11 - 5.12 - 5.13 - 5.14

UNIDAD VI: 6.1 - 6.2 - 6.3 - 6.4 - 6.5
- 6.6 - 6.7 - 6.8 -
9na.
Avance de
materia
UNIDAD VII: 7.1 - 7.2 - 7.3 - 7.4 - 7.5

- 7.6 - 7.7 - 7.8
10ma.
Avance de
materia
7.9 - 7.10 - 7.11 - 7.12

UNIDAD VIII: 8.1 - 8.2 - 8.3 - 8.4 8.5 8.6 8.7
8.8 - 8.9 - 8.10 - 8.11 - 8.12
UNIDAD IX: 9.1 - 9.2
Avance de
materia
Avance de
12da.
materia
Avance de
13ra.
materia
11ra.
Avance de
materia
Avance de
materia
Avance de
16ta.
materia
Segunda Evaluacin
9.7 - 9.8 - 9.9 - 9.10
Segunda Evaluacin
10.4 - 10.5 - 10.6

10.7 - 10.8 - 10.9
Avance de
materia
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9.3 - 9.4 - 9.5 - 9.6
UNIDAD X: 10.1 - 10.2 - 10.3 - 10.3
15ta.
17ma.
Actividad del proyecto
4.3 - 4.4 - 4.5 - 4.6 - 4.7 - 4.8 - 4.9
7ma.
14ta.
OBSERVACIONES
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Avance de
materia
Avance de
19na
materia
Elaboracin de productos (Queso, vino,

etc.)
Examen Final
Elaboracin de productos (Queso, vino,
etc.)
Examen Final
18va.
20va
Entrega de Notas y Cierre de Gestipn
Segunda Instancia
VI. WORK PAPERs.
PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD

WORK PAPER # 1
UNIDAD O TEMA: UNIDAD I: Microbiologa general
TITULO: LUS PASTEUR
FECHA DE ENTREGA:
PERIODO DE EVALUACIN:
Naci el 27 de diciembre de 1822 en Dole, departamento de Jura, Francia. Su padre haba sido soldado
de Napolen, pero despus de dejar el ejrcito puso una curtidura, donde transcurri la infancia del
pequeo Louis. ste no fue un alumno especialmente aplicado o brillante en la escuela ni en la
Universidad. Tras licenciarse y asistir a las lecciones del gran qumico francs Jean B. Dumas, comenz a
interesarse por la qumica.
Fue profesor de qumica en Estrasburgo (1847-1853) y decano en Lille (1854). Adems, en 1857
desempe el cargo de director de estudios cientficos de la Escuela Normal de Pars, cuyo laboratorio
dirigi a partir de 1867.Hizo grandes descubrimientos.
Contribuciones en la qumica orgnica
Descubri el dimorfismo del cido tartrico, al observar al microscopio que el cido racmico presentaba
dos tipos de cristal, con simetra especular. Fue por tanto el descubridor de las formas dextrgiras y
levgiras. Y comprob que desviaban el plano de polarizacin de la luz con el mismo ngulo pero en
sentido contrario.
Este hallazgo le vali al joven qumico la concesin de la Legin de Honor Francesa, con slo 26 aos. En
1854 fue nombrado decano de la Facultad de Ciencias en la Universidad de Lille.
Investigaciones en la microbiologa
A peticin de viticultores y cerveceros de la regin, comenz a investigar la razn por la cual se agrian
el vino y la cerveza. De nuevo gracias al microscopio consigue identificar la levadura responsable.
Propuso eliminar el problema calentando la bebida lentamente hasta alcanzar 48 grados centgrados
para matar las levaduras, y despus encerrar el lquido en cubas bien selladas. Este proceso dio lugar
a la actual tcnica de pasteurizacin de los alimentos. Demostr que todo proceso de fermentacin y
descomposicin orgnica se debe a la accin de organismos vivos y que el crecimiento de los
microorganismos en caldos nutritivos no era debido a la generacin espontnea. Para demostrarlo
expuso caldos hervidos en matraces provistos de un filtro que evitaba el paso de partculas de polvo
hasta el caldo de cultivo, simultneamente expuso otros matraces que carecan de ese filtro pero que
posean un cuello muy alargado y tortuoso que dificultaba el paso del aire, y por ello de las partculas
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de polvo, hasta el caldo de cultivo. Al cabo de un tiempo observ que nada creca en los caldos
demostrando as que los organismos vivos que aparecan en los matraces sin filtro o sin cuellos largos
provenan del exterior, probablemente del polvo o en forma de esporas.
El propio Pasteur, en 1871 oblig a los mdicos de los hospitales militares a hervir el instrumental y los
vendajes. Describi un horno, llamado "horno Pasteur", til para esterilizar instrumental quirrgico y
material de laboratorio.
Utiliz un nuevo mtodo para eliminar microorganismos pueden degradar al vino, la cerveza o leche,
elevando su temperatura hasta los 55 grados durante un tiempo corto. Este procedimiento se
denomin "pasteurizacin" y ha tenido una aplicacin universal en la industria alimentaria.
Desarroll la metodologa para atenuar la virulencia de microorganismos patgenos que pudieron ser
entonces utilizados para la fabricacin de vacunas. El mismo obtuvo vacunas eficaces contra el clera
de los pollos, el ntrax y la erisipela del cerdo. Posteriormente obtuvo la vacuna contra el virus de la
rabia que fue probada con xito por primera vez para tratar al joven Joseph Meister.
Das finales y legado
Expuso la "teora germinal de las enfermedades infecciosas", segn la cual toda enfermedad
infecciosa tiene su causa (etiologa) en un germen con capacidad para propagarse entre las personas.
Esta sencilla idea representa el inicio de la medicina cientfica, al demostrar que la enfermedad es el
efecto visible (signos y sntomas) de una causa que puede ser buscada y eliminada mediante un
tratamiento especfico. En el caso de las enfermedades infecciosas se debe buscar el germen
causante de cada enfermedad para hallar un modo de combatirlo. Por sus trabajos es considerado el
pionero de la microbiologa moderna que inicia as la llamada "Edad de Oro de la Microbiologa".
Te animo a que te intereses por esos dominios sagrados llamados expresivamente laboratorios. Ten
en cuenta que son los templos del futuro, la salud y el bienestar. En ellos la humanidad crecer, se
fortalecer y mejorar. All, la humanidad aprender a progresar entendiendo la armona de la
naturaleza, evitando as su tendencia hacia la barbarie, el fanatismo y la destruccin. Louis Pasteur
Muri el 28 de septiembre de 1895.
CUESTIONARIO DEL WORK PAPERS:
1. Investigue la biografa y logros en el campo de la bacteriologa de:
a)
Hipcrates
b)
Francastorius
c)
Hooke
d)
Leeuwenhoek
e)
Redi
f)
Spallanzan
g)
Lister
h)
Kooch
i)
Tyndall

WORK PAPER # 2
UNIDAD O TEMA: UNIDAD II: CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS
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TITULO: CLULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

FECHA DE ENTREGA:
CLULAS PROCARIOTAS
Las clulas procariontes no poseen un ncleo celular delimitado por una membrana.
Los organismos procariontes son las clulas ms simples que se conocen. En este grupo se incluyen
las algas azul-verdosas y las bacterias.
CLULA EUCARIOTA
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Las clulas eucariontes poseen un ncleo celular delimitado por una membrana. Estas clulas forman
parte de los tejidos de organismos multicelulares como nosotros.
CLULA ANIMAL
Las clulas de los integrantes del reino Animal pueden ser geomtrica, como las clulas planas del
epitelio; esfricas, como los glbulos rojos; estrelladas, como las clulas nerviosas, o alargadas,
como las clulas musculares. La diversidad tambin se extiende a los tamaos: varan entre los 7,5
micrmetros de un glbulo rojo humano, hasta unos 50 centmetros, como ocurre con las clulas
musculares.
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CLULA VEGETAL
Estas clulas forman parte de los tejidos y rganos vegetales. La presencia de los cloroplastos, de
grandes vacuolas y de una pared celular que protege la membrana celular son tres las
caractersticas que diferencian una clula vegetal de una animal. La pared celular de las clulas
vegetales es rgida, lo que determina las formas geomtricas que encontramos en los tejidos
vegetales, como el hexagonal observado en las clulas de la cubierta de las cebollas.
1. Dibuje los organismos pertenecientes a cada reino.
2. Realice un sinptico de las diferencias encontradas.
3. Sintetice la biografa de Linneo.
4. Investigue una biografa de algn cientfico que contribuy en la clasificacin de las especies, bajo los
criterios agrupadores y los disgregadores.
5. Clasifique a los hongos segn el sistema taxonmico en sus diferentes rangos.
6. Encuentre la definicin de las ss palabras: Cepas, auttrofo, hetertrofo, fototrofia, aerobio, anaerobio,
mitosis, meiosis, clorofila, angiospermas, simbiosis, genealoga.
7. Defina que es la biologa molecular
8. Investigue en que campo trabaja la ingeniera gentica
9. Qu son cultivos celulares? Es lo mismo que cultivo de clulas madre?
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WORK PAPER # 3.
UNIDAD O TEMA: UNIDAD III: MORFOLOGA Y CITOLOGA
BACTERIANA
TITULO: MICROORGANISMOS GRAM POSITIVOS Y NEGATIVOS
FECHA DE ENTREGA:
Morfologa ultramicroscpica de las bacterias: estructuras internas

Pared celular
Debajo de las sustancias extracelulares, como son las cpsulas y cubiertas mucilaginosas, y en la
periferia de una delicada membrana que est en inmediato contacto con el citoplasma, se encuentra la
pared celular, que es una estructura rgida que da forma a la clula. Las paredes celulares pueden
destruirse o romperse en condiciones especiales.
Constituyentes importantes de la pared celular son los amnocidos, aminoazcares, azcares y
grasas. Estas sustancias (protenas, Hidratos de carbono, grasas) estn enlazadas formando el
polmero complejo que forma la pared celular.
Entre los constituyentes de la pared celular de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas existen
importantes diferencias. Por ejemplo, las paredes de las bacterias gram-positivas contienen menos
aminocidos que las gram-negativas; el contenido graso es mucho ms elevado en las gram-negativas
que en las gram-positivas. Este hecho se ha propuesto como explicacin del mecanismo de la reaccin
al gram (ver las dos imgenes juntas).
Bacteria Gram Positiva
Tiene una capa gruesa de peptidoglicano (mureina) y dos clases de cidos teicoicos. cido Lipoteicoico
que est en la superficie, empotrado en la capa de peptidoglicano y unido a la membrana citoplsmica. Y
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cido teicoico de la Pared que est en la superficie y se une slo a la capa de peptidoglicano. El cido
Teicoico es el responsable del determinante antignico del organismo.
Bacteria Gram Negativa
Tiene una capa delgada de peptidoglicano (mureina) unida a una membrana exterior por lipoprotenas.
La membrana exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido. En el lipopolisacrido, la
porcin de lpido est embebida en el fosfolpido y el antgeno O polisacrido est en la superficie. El
lpido se llama Lpido A y es txico, pero el lipopolisacrido entero se llama Endotoxina. La pared de la
clula tiene poros llamado Porines para el transporte de substancias de peso molecular bajo. Entre la
membrana citoplsmica y la pared celular hay un espacio periplsmico con enzimas hidrolticas,
enzimas inactivadoras de antibiticos y protenas de transporte.
Tambin existen diferencias en la composicin de la pared entre las clulas de las diversas especies.
Membrana Citoplsmica (citoplasmtica o protoplasmtica)
Inmediatamente debajo de la pared celular, existe una membrana fina, o envoltura, que se denomina
membrana citoplsmica o protoplsmica y est formada por una bicapa de fosfolpido integral y
protenas perifricas empotradas. La membrana citoplsmica tiene una significacin funcional de suma
importancia. Se trata de una membrana semipermeable, selectiva, que controla el paso de los
elementos nutritivos dentro de la clula y la salida de los productos de desecho. Tiene enzimas
respiratorias y durante la divisin celular el cromosoma se une a la membrana de la clula en el sitio
llamado Mesosoma.
Citoplasma
El material celular contenido dentro de Ia membrana citoplsmica puede dividirse en tres partes, regin
citoplsmica, de apariencia granular, la cual es rica en RNA, regin nuclear o cromatnica, que es rica
en DNA, y la parte lquida que mantiene disueltos los elementos nutritivos. El RNA, combinado con
protenas, forma partculas o corpsculos macromoleculares, de unos 200 A de dimetro, que forman
una masa densa y compacta en todo el citoplasma. Estas partculas de RNA-protena se denominan
ribosomas, y son el equivalente en las bacterias de los microsomas, o partculas que se encuentran en
las clulas animales y vegetales.
Estructuras Citoplasmticas
Nucleoide (cuerpo cromatnico). Las clulas bacterianas no contienen el ncleo caracterstico de las
clulas de las pIantas y animales superiores. Sin embargo, contienen en el citoplasma "cuerpos" que se
consideran como una estructura nuclear, el ADN de la clula bacteriana se encuentra confinado en este
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espacio, es nico y circular, doble hlice sin protenas. Como no se trata de un ncleo discreto, se ha
sugerido que se d a estas estructuras las denominaciones de cuerpo cromatnico, nucleoides,
equivalentes nucleares, y aun cromosomas bacterianos. Se demuestra con el mtodo de tincin de
Feulgen, especfico para el DNA, y por microscopia electrnica, porque la sustancia nuclear es menos
densa que el citoplasma cincundante.
Ribosomas. Tienen estrecha relacin con la sntesis de protenas (30S y 50S para formar un complejo
70S).
Plsmidos. Lazos extracromosmicos de ADN, algn cdigo para la resistencia a drogas, toxinas y otros
factores.
Endosporas. Algunas bacterias pueden transformarse en pequeos ovoides o esferas, que son formas
celulares muy resistentes, denominadas esporas, o endosporas, porque se producen intracelularmente.
Todos los organismos de los gneros Bacillus y Clostridium se caracterizan, en parte, por su propiedad
de producir esporas. Tambin tienen esta propiedad otros gneros de bacterias verdaderas, pero slo en
casos aislados. Las bacterias capaces de esporular pueden crecer y reproducirse en forma de clulas
vegetativas durante muchas generaciones. Sin embargo, en cierto perodo del desarrollo del cultivo en
medio nutritivo apropiado, se produce, dentro del citoplasma, la sntesis de nuevo protoplasma destinado
a transformarse en espora.
CUESTIONARIO DEL WORK PAPERs:
1. Vocabulario. Autoduplicacin, polmero, hipertnico, isotnico, hipotnico, dctil.
2. Dibujo de las formas
3. Esquematice las agrupaciones bacterianas.
4. Realice un resumen de la morfologa de las estructuras externas de la clula bacteriana.
5. Qu caracteriza a una clula alcohol cido resistente?
6. Cul es el fundamento de la coloracin de esporas?
7. Qu gneros poseen esporas?
8. Cules son los gneros bacterianos que no poseen pared celular?
9. Clasifique a las bacterias segn la presencia o no de flagelos
10. Dentro de las estructuras citoplasmticas la bacterias posen vacuolas o inclusiones, Qu sustancias
se encuentran en estas?

WORK PAPER # 4.
UNIDAD O TEMA: UNIDAD IV: Fisiologa bacteriana
TITULO: NUTRICIN
FECHA DE ENTREGA:
INTRODUCCIN: CONCEPTO E IMPORTANCIA

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- Una caracterstica clave de un sistema vivo es la capacidad de dirigir las reacciones qumicas y
organizar las molculas en estructuras especficas crecimiento.
- Las clulas microbianas estn constituidas de sustancias qumicas de una amplia diversidad de tipos
y, cuando una clula crece, todos sus constituyentes qumicos aumentan en cantidad apropiada
- Los elementos qumicos bsicos de una clula, viene del exterior, pero estos elementos qumicos
son transformados por la propia clula en los constituyentes caractersticos
Nutrientes.- Se llama as a los productos qumicos exteriores a partir de los cuales se construye una
clula. Los nutrientes son tomados por la clula y transformados en constituyentes celulares.
El proceso por el que una clula se construye a partir de nutrientes simples tomados del medio
exterior se denomina ANABOLISMO (Proceso de Biosntesis). El anabolismo es un proceso que
requiere energa.
Las clulas tambin necesitan de energa para otras funciones tales como movimiento celular
(motilidad) y transporte de nutrientes.
Como otros nutrientes, la energa se obtiene tambin del medio exterior celular de tal manera que se
pueden usar dos fuentes de energa:
- Luz
- Compuestos qumicos
Un determinado grupo de organismos obtienen su energa de la luz, la mayor parte lo hacen por
oxidacin de compuestos qumicos. Los productos qumicos utilizados como fuente de energa son
rotos en constituyentes ms simples se libera energa: A este proceso se denomina catabolismo
Tipos nutricionales.- Tradicionalmente, se agrupan a los microorganismos en clases metablicas
dependiendo de la fuente de energa que utilicen. Todos los trminos utilizados para describir estas
clases emplean la terminacin trofo que deriva del griego y significa alimentarse. Los
microorganismos pueden ser agrupados en clases nutricionales de acuerdo a cmo satisfacen sus
requerimientos de: energa, H+ / e- y carbono.
Existen slo dos fuentes de energa disponible para los microorganismos y tambin dos fuentes de
tomos de H+ / eFuente energa
Luz
Oxidacin de compuestos
Qumicos (Comp. orgnicos e inorgnicos)
Donador de e- / H+
Molculas inorgnicas reducidas
Molculas orgnicas
Fuente de carbono
CO2
Molculas orgnicas reducidas,
preformadas, de otros organismos
Tipo
Fottrofo
Quimitrofos
Tipo
Littrofos
Organtrofos
Tipo
Auttrofo
Hetertrofo
Pese a la gran diversidad metablica mostrada por los microorganismos, la mayora de ellos puede ser
considerado en uno de los cuatro tipos nutricionales de acuerdo a su fuente primaria de obtencin de
energa, fuente carbonada y de e- / H+
Caractersticas
Tipos nutricionales
FOTOLITOTRFICO AUTTROFO
Tambin llamado fotoauttrofo, usa energa luminosa como fuente

de energa y CO2 como fuente de carbono.
Las algas y las cianobacterias emplean H2O como donadores de
Energia y liberan O2.
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Las bacterias prpuras y verdes del azufre no pueden oxidar el agua, pero
extraen e- de donadores inorgnicos como H+, H2S y azufre elemental
Grupo menos abundante

Utiliza la luz como fuente de energa, donadores de e- inorgnicos
y molculas orgnicas simples como fuente de carbono
Ej. Bacterias fotosintticas prpuras no sulfreas y algunas verdes
del azufre que normalmente habitan en lagos contaminados y
afloramientos naturales del agua.
Grupo que oxida compuestos inorgnicos reducidos como fierro,
nitrgeno o molculas de S para obtener energa y e- para
biosntesis
El CO2 es la fuente de carbono
Sus representantes cumplen un rol ecolgico de importancia y
son las bacterias azufre-oxidantes, las bacterias del hidrgeno,
las del hierro y nitrificantes
FOTOLITOTRFICO
HETERTROFO
QUIMIOLITOTRFICO
AUTTROFO
Tambin llamado quimiohetertrofo, es el grupo nutricional ms

numeroso en representantes
Utilizan compuestos orgnicos como fuente de energa, de carbono, de
hidrgeno y de energa
Por lo general, el mismo nutriente orgnico satisface todos estos
requerimientos
Sus representantes son la mayora de bacterias no fotosintticas
y los hongos
Todos los microorganismos patgenos pertenecen a este grupo
QUIMIOLITOTRFICO
HETERTROFO
Un microorganismo puede pertenecer a uno de los cuatro grupos metablicos, sin embargo, algunas
presentan una flexibilidad metablica, como respuesta a cambios medioambientales marcados.
Ejemplo: Muchas bacterias prpuras no sulfreas actan como fotolittrofas hetertrofas en ausencia
de O2, pero oxidan compuestos orgnicos como quimitrofos en niveles normales de oxgeno
MIXOTRFICAS (Combinacin de metabolismo auttrofo y hetertrofo).
Requerimientos nutricionales.- Los nutrientes pueden ser divididos en dos clases:
1)
Macronutrientes.- Requeridos en grandes cantidades
2)
Micronutrientes.- Requeridos en pequeas cantidades
1.
2.
3.
4.
Realice un cuadro de las funciones de los macronutrientes

Esquematice las funciones de los micronutrientes
Investigue la composicin qumica de al menos tres medios de cultivo.
Averige que gneros bacterianos se clasifican dentro de los grupos: mesofilos, psicrfilos y
termfilos.
5. D ejemplos de los gneros bacterianos clasificados segn sus requerimientos de oxgeno.
6. Puntualice los gneros bacterianos clasificados dentro de los rangos de pH.
7. Cmo afecta al crecimiento de las bacterias la carencia de alguno de los nutrientes mencionados?
8. Investigue las caractersticas fsicas de las colonias bacterianas.
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WORK PAPER # 5.
UNIDAD O TEMA: UNIDAD VI: GENTICA MICROBIANA
TITULO: Conceptos bsicos
FECHA DE ENTREGA:
Un pequeo diccionario con los trminos ms usuales utilizados en Gentica mendeliana.

Gen. Unidad hereditaria que controla cada carcter en los seres vivos. A nivel molecular corresponde a
una seccin de ADN, que contiene informacin para la sntesis de una cadena protenica.
Alelo. Cada una de las alternativas que puede tener un gen de un carcter. Por ejemplo el gen que
regula el color de la semilla del guisante, presenta dos alelos, uno que determina color verde y otro que
determina color amarillo. Por regla general se conocen varias formas allicas de cada gen; el alelo ms
extendido de una poblacin se denomina "alelo normal o salvaje", mientras que los otros ms escasos,
se conocen como "alelos mutados".
Carcter cualitativo. Es aquel que presenta dos alternativas claras, fciles de observar: blanco-rojo;
liso-rugoso; alas largas-alas cortas; etc. Estos caracteres estn regulados por un nico gen que presenta
dos formas allicas (excepto en el caso de las series de alelos mltiples). Por ejemplo, el carcter color
de la piel del guisante est regulado por un gen cuyas formas allicas se pueden representar por dos
letras, una mayscula (A) y otra minscula (a).
Carcter cuantitativo. El que tiene diferentes graduaciones entre dos valores extremos. Por ejemplo la
variacin de estaturas, el color de la piel; la complexin fsica. Estos caracteres dependen de la accin
acumulativa de muchos genes, cada uno de los cuales produce un efecto pequeo. En la expresin de
estos caracteres influyen mucho los factores ambientales.
Genotipo. Es el conjunto de genes que contiene un organismo heredado de sus progenitores. En
organismos diploides, la mitad de los genes se heredan del padre y la otra mitad de la madre.
Fenotipo. Es la manifestacin externa del genotipo, es decir, la suma de los caracteres observables en
un individuo. El fenotipo es el resultado de la interaccin entre el genotipo y el ambiente. El ambiente de
un gen lo constituyen los otros genes, el citoplasma celular y el medio externo donde se desarrolla el
individuo.
Locus. Es el lugar que ocupa cada gen a lo largo de un cromosoma (el plural es loci).
Homocigoto. Individuo que para un gen dado tiene en cada cromosoma homlogo el mismo tipo de
alelo, por ejemplo, AA o aa.
Heterocigoto. Individuo que para un gen dado tiene en cada cromosoma homlogo un alelo distinto, por
ejemplo, Aa.
CUESTIONARIO EL WORK PAPERs:
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1. Haga un breve resumen de la biografa de Mendel

2. Enuncie la 1 Ley de Mendel
3. Interprete en experimento de Mendel de la 1 ley
6. Qu se entiende por retrocruce?
9. Nombre al menos 3 tipos de cruce industrial que se logran en ganadera de corte y, determine las
proporciones de las razas participantes.

WORK PAPER # 6.
UNIDAD O TEMA: UNIDAD VII: ANTISPTICOS Y DESINFECTANTES
TITULO: Antispticos
FECHA DE ENTREGA:
Se definen como sustancias que inhiben o destruyen la flora bacteriana cuando se aplican en piel,
heridas infectadas, instrumental y equipos quirrgicos, equipos odontolgicos, medio ambiente de las
salas quirrgicas y excretas.
Estos compuestos qumicos presentan alguna toxicidad sobre grmenes y organismos patgenos, y son
responsables de algunas de las manifestaciones teraputicas en un ser vivo.
La actividad antibacteriana est relacionada con:
- El tiempo de exposicin.
- La temperatura.
- La concentracin de la solucin.
El mecanismo de accin depende de 3 mecanismos bsicos (que a su vez dependen del grupo qumico)
1. Capacidad de coagular o precipitar protenas.
2. Alterando las caractersticas de permeabilidad celular
3. Toxicidad (envenenamiento) de los sistemas enzimticos de las bacterias.
Definicin de conceptos:
Las palabras desinfectante, antisptico, germicida, bactericida, etc, se usan frecuentemente de manera
indistinta. Aunque todos esos trminos denotan compuestos con caractersticas similares, es necesario
definirlos para establecer las diferencias y similitudes:
1. Desinfectante: Son sustancias usadas en objetos inanimados (como equipos y material quirrgico)
2. Para destruir los microorganismos y prevenir infecciones. Algunos de estos compuestos se utilizan
de forma diluida en tejidos (ya que a la concentracin que se utilizan como desinfectantes,
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destruiran los tejidos). Algunos compuestos de este grupo son el Hipoclorito, algunos Fenoles y
Aldehdos.
3. Antisptico: Es un compuesto que es capaz de inhibir o impedir el desarrollo bacteriano o de
destruir a microorganismos en tejidos vivos. A diferencia de los desinfectantes que son para objetos
inanimados, los antispticos se aplican en seres vivos.
Como mencionbamos anteriormente, algunos compuestos pueden usarse como desinfectantes o
antispticos segn la concentracin que se utilice (uno de estos compuestos es el Benzalconio de
Hidrgeno).
4. Germicida: Es una sustancia que destruye microorganismos (pero no esporas). Este tipo de
compuestos reciben el nombre axiomtico de bactericidas, fungicidas, viricidas, amebicidas, etc,
segn el tipo de microorganismo sobre el cual acten. Los Germicidas pueden ser antispticos o
desinfectantes.
5. Esterilizantes: Son compuestos que eliminan tanto las clulas vegetativas como las esporas cuando
son aplicados en diversos materiales durante un tiempo y a una temperatura especficos.
6. Agentes de Saneamiento: Son compuestos usados por las organizaciones de salud para la
desinfeccin de excretas y pantanos. Dentro de este grupo estn: Fenoles, Alcalis, Hipoclorito y
Aldehidos). Por ejemplo el DTT es un agente halogenado que se utiliza para la desinfeccin de
pantanos.
1. Cules son los modos de accin de los desinfectantes?
2. Detalle los agentes que daan la membrana citoplasmtica
3. Resuma los agentes que destruyen las protenas o inhiben su sntesis
4. Cules son los factores que afectan la potencia de un desinfectante?
5. Describa el proceso de Pasteurizacin
6. Describa los pasos de la Tyndalizacin
7. Nombre y explique al menos dos tipos de desinfeccin o esterilizacin utilizando medios fsicos.
8. Qu es un viricida? Nombre alguno de uso en MV?
9. Qu antiprotozooarico conoce?
10. Defina qu es un agente funguicida.

WORK PAPER # 7.
UNIDAD O TEMA: UNIDAD VIII: ANTIBITICOS
TITULO: Antibiticos
FECHA DE ENTREGA:
Introduccin
En el uso comn, un antibitico es un medicamento que mata o inhibe el crecimiento de ciertas clases
de bacterias, pero que normalmente es inofensivo (aunque vase reaccin adversa a medicamento)
para el husped y que se utiliza para tratar una infeccin. El trmino fue utilizado por primera vez para
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describir solamente las formulaciones antibacterianas derivadas de los organismos vivos, pero en la
actualidad est siendo usada para referirse a los antimicrobianos sintticos como las quinolonas,
sulfamidas y otros.
En trminos estrictos, un antibitico es una sustancia secretada por un microorganismo y que tiene la
capacidad de afectar a otros microorganismos como bacterias y hongos. De ah que los antibiticos no
sean efectivos en las enfermedades vricas.
Historia
El primer antibitico descubierto fue la penicilina. Alexander Fleming estaba cultivando una bacteria
(Staphylococcus aureus) en un plato de agar, el cual fue contaminado accidentalmente por hongos.
Luego l advirti que el medio de cultivo alrededor del moho estaba libre de bacterias. l haba
trabajado previamente en las propiedades antibacterianas de la lisozima, y por ello pudo hacer una
interpretacin correcta de lo que vio: que el hongo estaba secretando algo que inhiba el crecimiento de
la bacteria. Aunque no pudo purificar el material obtenido (el anillo prncipal de la molcula no era
estable frente a los mtodos de purificacin que utiliz), inform del descubrimiento en la literatura
cientfica. Debido a que el hongo era del gnero Penicillium (Penicillium notatum), denomin al producto
penicilina.
Debido a la necesidad imperiosa de tratar las infecciones provocadas por heridas durante la II Guerra
Mundial, se invirtieron muchos recursos en investigar y purificar la penicilina, y un equipo liderado por
Howard Walter Florey tuvo xito en producir grandes cantidades del principio activo puro en 1940. Los
antibiticos pronto se hicieron de uso generalizado desde el ao 1943.
El descubrimiento de los antibiticos, as como de la anestesia y la adopcin de prcticas higinicas por
el personal sanitario (por ejemplo, el lavado de manos y utilizacin de instrumentos estriles)
revolucion la sanidad y se ha llegado a decir que es el gran avance en materia de salud desde la
adopcin de la desinfeccin. Se les denomina frecuentemente a los antibiticos, "balas mgicas", por
hacer blanco en los microorganismos sin perjudicar al husped.
Abuso de los antibiticos
Las formas usuales de abuso de los antibiticos incluyen la toma de antibiticos para una enfermedad
no infecciosa o infeccin no bacteriana, en particular el uso de antibiticos para las infecciones vricas,
como un catarro o una gripe; y la administracin incompleta del antibitico, generalmente debido a que
el paciente se siente mejor una vez que la infeccin comienza a ceder.
En algunas ocasiones, los antibiticos son recetados innecesariamente por los propios mdicos, a
veces por presin del paciente y otras veces, incluso, sin que el paciente lo solicite.
Existe un debate sobre la conveniencia de incluir los antibiticos en la dieta de los animales de granja
sanos. Los opositores de esta prctica indican que conduce a la resistencia a los antibiticos,
incluyendo a las bacterias que infectan a los humanos. La prctica contina en muchos lugares, no
obstante, debido a que los antibiticos en la alimentacin del ganado proporcionan un aumento de peso
y porque tiene sentido econmico para las granjas o ranchos individuales.
Resistencia a los antibiticos
Uno de los efectos colaterales del mal uso o abuso de los antibiticos es que la bacteria se vuelva
resistente a los antibiticos. En 1984 la mitad de las personas con tuberculosis activa en los Estados
Unidos tena una variedad que resista al menos a un antibitico. Entre 1985 y 1991 la tuberculosis
aument en un 12% en los Estados Unidos y un 300% en frica donde el VIH y la tuberculosis se
suelen encontrar conjuntamente. El Staphylococcus aureus resistente a meticilina es un
microorganismo particularmente nocivo, que es muy comn en hospitales.
1. Investigue la biografa de Alexander Fleming.
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2. Realice un esquema en el que muestre los antibiticos y los agentes sensibles a los mismos.
3. La resistencia a los antibiticos puede ser de varias formas. Explique
4. Procure la posologa de los antibiticos mas usados en MV.
5. Cules son las vas de administracin de los antibiticos ms usadas?
6. Explique la tcnica a seguir para realizar un antibiograma.
7. Cules son las consideraciones para escoger un antibitico?
8. Por qu las bacterias se hacen resistentes a los antibiticos?
9. Qu alternativas existen para reemplazar a los antibiticos como promotores de crecimiento?
10. Qu bacterias se utilizan para la elaboracin de probiticos?

WORK PAPER # 8.
UNIDAD O TEMA: UNIDAD IX: BACTERIAS DE INTERES VETERINARIO
TITULO: Antispticos
FECHA DE ENTREGA:
Una molcula impide la destruccin de la bacteria 'Brucella'

Una investigacin con participacin de la Universidad de Navarra demuestra cmo una determinada
molcula contribuye a que un gran patgeno, la Brucella abortus, escape a la destruccin dentro de las
clulas que se encargan de eliminar agentes infecciosos (macrfagos). Dicha investigacin ha sido
publicada en la revista cientfica 'Nature Immunology'.
La Brucella es un modelo de parsito intracelular, una categora que incluye otras bacterias importantes,
como las de la tuberculosis o la legionelosis. La Brucella penetra en los macrfagos dentro de vesculas
membranosas, que no son fusionadas con los lisosomas (estructuras que contienen los productos
celulares necesarios para destruir bacterias) como ocurre con otros microorganismos. Por el contrario,
alcanzan determinados compartimentos dentro del macrfago. All las bacterias se multiplican y
establecen una cadena de sucesos que determina la enfermedad.
La brucelosis, enfermedad causada por esta bacteria, es de gran importancia mundial, con millones de
seres humanos y de animales domsticos afectados. Este descubrimiento supone no slo nuevas ideas
tiles para otros investigadores, sino tambin un mejor conocimiento de un patgeno muy importante. De
este conocimiento se pueden derivar productos tiles, como nuevas vacunas.
1. De cada uno de los gneros estudiados escoja la especie bacteriana que ms llame su atencin, y
presente un artculo similar de la misma. Este puede incluir todo lo referente a la enfermedad que
produce (etiologa, especies susceptibles, sintomatologa, patogenia) y al posible tratamiento.
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WORK PAPER # 9.
UNIDAD O TEMA: UNIDAD X: MICROBIOLOGA APLICADA
TITULO: Microbiologa del Agua de uso Domstico y de las Aguas Negras
FECHA DE ENTREGA:
Los microorganismos patgenos ms frecuentes transmitidos por el agua producen infecciones del
aparato digestivo fiebre tifoidea, paratifoidea, disentera (bacilar y amebiana) y clera. Los agentes
etiolgicos de sta se encuentra en las materias fecales y la orina de los infectados y cuando son
eliminadas pueden llegar a un depsito que desemboque en una fuente de agua para beber.
Virales o Virus. Constituyen un orden de microorganismos pequeos, filtrables y no visibles con el
microscopio comn, que provocan enfermedades en el hombre, los animales superiores y en vegetales
(incluso en las bacterias).
Provocan enfermedades como la poliomielitis, la viruela, la fiebre amarilla, etc. Pueden ser transmitidos
por insectos y caros.
Microorganismos Patgenos Banales y tiles. Microorganismos patgenos; originan enfermedad en
el ser vivo que parasitan o lo intoxican con sus toxinas.
Microorganismos banales; no producen enfermedad, pero pueden actuar por ejemplo sobre alimentos,
alterando su composicin.
Microorganismos tiles. Aquellos cuya actividad sobre ciertos sustratos producen sustancias tiles al
hombre.
Enzimas. Sustancias de naturaleza orgnica, producidas por las clulas vivas, capaces de actuar como
catalizadores, en y fuera de aquellas, sobre diversas sustancias, provocando su transformacin qumica.
Las enzimas se clasifican en:
a.-) Hidrolasas; provoca el desdoblamiento del producto.
b.-) Desmolasas; actan en la degradacin de los sustratos
Toxinas. Son sustancias de naturaleza proteica que dan origen a lesiones o sntomas de su accin
caractersticas, al invadir un organismo vivo.
Las exotoxinas: actan fuera de la clula bacteriana, esparcindose en el medio rpidamente.
Las endotoxinas; permanecen dentro del microorganismo en tanto est vivo y acta cuando es alisado y
se libera el contenido celular.
Inmunologa. Rama de la microbiologa que ha adquirido una gran importancia para la prevencin o la
curacin de enfermedades o intoxicaciones microbianas, a travs de la preparacin de vacunas y sueros.
(Formacin de anticuerpos en la fraccin globulnica de las protenas de la sangre)
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Principales Intoxicaciones Bacteriales. Botulismo; sntomas: dificultad para respirar y hablar, doble
visin, muerte por parlisis
Estafilococia; sntomas: Nuseas, vmitos, diarrea, dolores abdominales.
Salmonelosis; sntomas: Diarrea con fiebre.
Cl. Welchii; sntomas: nuseas, vmitos a veces, dolores abdominales y diarrea, dura 12 horas.
Bacillus Cereus; sntomas: disturbios intestinales sin fiebre.
Problemas Causados por la Actividad Microbiana.
Aleas: Taponamiento de distribuidores y equipos, produccin de oxgeno y proteccin y alimento a
algunas bacterias.
Hongos: Deterioro de la madera, taponamiento de equipos y alimentos y proteccin a algunas bacterias
Bacterias.
Las aerbicas formadoras de lino causan taponamiento, corrosin por celdas de
concentracin, protegen a las anaerbicas corrosivas.
Prevencin. Seleccin higinica de materias primas empleadas en la elaboracin de alimentos, debern
estar libres de microorganismos patgenos y en nmero muy bajo de microorganismos banales.
Usar recipientes libres de microorganismos, tanto para la materia prima como para los productos de
elaborados.
Controlar los ambientes de las fbricas y controlar la salud e higiene de todo el personal que labora.
Microbiologa Industrial. Los antibiticos son nicamente uno de los muchos productos de los
microorganismos que tienen importancia industrial. La buena marcha de las industrias de bebidas y del
vino dependen de la capacidad de las levaduras para producir alcohol. Vitaminas, aminocidos y otras
sustancias qumicas son producidas mediante procesos microbiolgicos.
La industria petrolera usa microorganismo como indicadores durante la exploracin en busca de
yacimientos.
1. Esquematices los ciclos biogeoqumicos ms importantes.
2. Investigue acerca de los microorganismos habitantes del suelo.
3. Esquematice de forma breve la microbiologa del aire y las enfermedades que se transmiten a travs
de este.
4. Cules son las bacterias comprometidas dentro del ciclo del agua?
5. Qu enfermedades pueden ser transmitidas por el agua?
6. Haga un sinptico de las fases por las que atraviesan las aguas negras y de cuales son las bacterias
que intervienen en las mismas.
7. Sintetice los pasos o procesos por los que atraviesan los RSU de la ciudad de SC.
8. Busque cules son los procesos de fabricacin de alimentos en los que intervienen las bacterias.
9. Prepare productos derivados de la leche bajo las pautas indicadas en la Gua de Laboratorio.
10. Describa el proceso de la fermentacin de la uva para la fabricacin del vino.
VII. DIFs:
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DIFs # 1.
UNIDAD O TEMA: UNIDAD X: MIICROBIOLOGA APLICADA
TITULO: MICROBIOLOGA DEL TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES
FECHA DE ENTREGA:
Introduccin.
El tratamiento de aguas residuales se inici en Inglaterra a finales del siglo XIX y principios del XX para
controlar los brotes infecciosos en las ciudades. Histricamente, el primer objetivo del tratamiento de
aguas era reducir el contenido en materia en suspensin del agua a menos de 30 mgl -1 y la demanda
biolgica de oxgeno (ver ms adelante) a menos de 20 mgl -1. La aguas a tratar pueden ser domsticas
(compuestas de aguas negras, restos de alimentos, patgenos y parsitos), y aguas industriales
(contaminadas principalmente por compuestos xenobiticos y metales pesados). Los objetivos del
tratamiento biolgico son tres: (1) reducir el contenido en materia orgnica de las aguas, (2) reducir su
contenido en nutrientes, y (3) eliminar los patgenos y parsitos.
Composicin de las aguas residuales domsticas.
Estn contaminadas con materia orgnica fcilmente biodegradable (40-60% de protenas, 25-50% de
carbohidratos y 10% de lpidos, con trazas de otros compuestos). La materia orgnica puede
encontrarse como carbono disuelto (Carbono Orgnico Disuelto, COD) o en forma particula (Carbono
Orgnico Particula, COP). Este ltimo puede separarse del disuelto por decantacin o por floculacin.
Existen tres mtodo principales para medir la cantidad de materia orgnica en el agua: 1.-) la medida de
la demanda biolgica de oxgeno, 2.-) la de la cantidad total de carbono y 3.-) la de la demanda qumica
de oxgeno. Todos los mtodos se basan en la valoracin de la cantidad de oxgeno necesaria para
oxidar diferentes fracciones de la materia orgnica presente en el agua.
Demanda biolgica de oxgeno: (DBO), es la concentracin de oxigeno disuelto consumido por los
microorganismos, presentes en el agua o aadidos a ella para efectuar la medida de este parmetro, en
la oxidacin de toda la materia orgnica presente en la muestra de agua. Su valor debe ser inferior a 8
mgl-1. La DBO puede descomponerse en dos factores: 1.-) la demanda de oxgeno para la oxidacin
realizada por los microorganismos quimioheterotrofos (DOH) y 2.-) el oxgeno consumido en las
oxidaciones de los quimioautotrofos nitrificantes (bacterias que oxidan el NH 4 para obtener energa,
DON).
La DOH se mide aadiendo la muestra de agua a analizar a una solucin tampn que contiene las sales
inorgnicas necesarias para el crecimiento de los microorganismos y que est saturada de O 2. La
muestra se incuba en estas condiciones durante cinco das a 20C en la oscuridad. Las concentraciones
de oxgeno se miden utilizando un electrodo de oxgeno. Es necesario aadir al experimento un inhibidor
de la nitrificacin (ver ms adelante). El clculo de la DOH se hace segn la frmula:
COH (mgl-1) = (D1-D5)/P
donde D1 y D5 son las concentraciones de oxgeno en la muestra el primero y el quinto da y P el
coeficiente de dilucin de la muestra. Para realizar esta medida se necesita una poblacin mixta de
microorganismos; si esta no es muy abundante puede suplementarse con un inculo destinado a la
degradacin del material orgnico en el tiempo requerido.
El valor de la DOH comprende todas las transformaciones oxidativas de la materia orgnica
biodegradable:
comp. Orgnicos + O2 + bacterias biomasa bacteriana + CO2 + NH4 + H2O
Biomasa bacteriana + O2 + protozoos biomasa de protozoos + CO2
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El rendimiento de la conversin de la biomasa bacteriana en la de protozoos es de 0,78 mg protozoos /

mg bacterias.
La DON es la cantidad de oxgeno consumida por los microorganismos nitrificantes que oxidan el NH 4
como fuente de energa. En general, el consumo viene a ser de unos 4.57 gr O 2 por gr de NH4
consumido; pero parte de este nitrgeno no se oxida a NO 2- o a NO3- sino que se incorpora a las
bacterias, por lo que el factor de correccin para los clculos es de 4.33:
DON = (Ndisponible - Nasimilado)x4.33
La DON es la causante de muchos altos valores de demanda de oxgeno en aguas con bajo contenido
de materia orgnica: en aguas ricas en NH4 la actividad de las bacterias nitrificantes puede consumir
entre el 25 y el 85% del total del oxgeno consumido.
Para distinguir entre la DOH y la DON se emplean inhibidores de la nitrificacin que no afectan al
consumo hetertrofo de materia orgnica. Un inhibidor de este tipo de la 2-cloro-6(tricloro-metil)-piridina.
Demanda qumica de oxgeno: (DQO) es la cantidad de oxgeno requerida para oxidar completamente
la materia orgnica utilizando oxidantes qumicos como el dicromato potsico (K 2Cr2O7) con cido
sulfrico.
Los valores de la DQO han de estar en relacin con los de la DBO; si la DQO es mucho mayor que la
DBO una parte importante de la materia orgnica presente en el agua no ser fcilmente biodegradable.
Para las aguas domsticas, la DQO es del orden de 250 a 1000 mgO 2 por litro,y la relacin DBO/DQO
oscila entre 0.4 y 0.8. Las aguas estabilizadas biolgicamente tienen una relacin DBO/DQO=0.12.
Carbono orgnico total: (COT) se mide mediante la oxidacin de la materia orgnica mediante calor y
oxgeno o mediante oxidantes qumicos y se detecta mediante anlisis de infrarrojo la produccin de
CO2. Los valores deben ser comparables con los de la DQO.
Pasos del tratamiento de aguas residuales
En el tratamiento de aguas residuales se pueden distinguir hasta cuatro etapas que comprenden
procesos qumicos, fsicos y biolgicos: (1) Tratamiento preliminar, destinado a la eliminacin de
residuos fcilmente separables. (2) Tratamiento primario que comprende procesos de sedimentacin.
(3) Tratamiento secundario que comprende procesos biolgicos (lodos activados) y qumicos
(desinfeccin) y (4) Tratamiento terciario o avanzado que est dirigido a la reduccin final de la DBO, la
disminucin de nutrientes y la eliminacin de patgenos y parsitos.
Procesos de lodos activados
Descripcin del sistema bsico:
Tratamiento iniciado en Inglaterra a principios de este siglo y que se ha difundido mucho. Consiste en un
tratamiento aerobio que oxida la materia orgnica a CO 2 y agua y NH4+ y nueva biomasa. El aire
necesario para el tratamiento se proporciona mediante difusin o por tratamiento mecnico. Durante el
tratamiento los microorganismos forman flculos que, posteriormente, se dejan sedimentar en un tanque
ad hoc denominado tanque de clarificacin. El sistema bsico comprende, pues, un tanque de aireacin
y un tanque de clarificacin por los que se hace pasar los lodos varias veces.
Los dos objetivos principales del sistema de lodos activados son (1) la oxidacin de la materia
biodegradable en el tanque de aireacin y (2) la floculacin que permite la separacin de la biomasa
nueva del efluente tratado.
Microorganismos presentes en los flculos:
Los flculos de lodo activado contienen partculas orgnicas, inorgnicas y bacterias. El tamao de las
partculas vara entre 1 m m y 1000 m m. Las clulas vivas del flculo representan entre el 5 y el 20%
del total de bacterias. Los microorganismos presentes en los flculos son bacterias, hongos, protozoos y
rotferos.
1.-) Bacterias: constituyen el principal componente. Los gneros principales son Zooglea,
Pseudomonas, Flavobacterium, Alcaligenes, Bacillus, Achromobacter, Corynebacterium y Acinetobacter;
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tambin hay formas filamentosas como Beggiatoa. Estas bacterias oxidan la materia orgnica y
producen polisacrtidos y otros polmeros extracelulares que facilitan la floculacin. Los
microorganismos aerobios representan una fraccin importante cuyo nmero vara inversamente al
tamao del flculo puesto que la difusin de O 2 al interior se va viendo ms dificultada. En los flculos
de gran tamao el interior es anaerobio y permite el crecimiento de anaerobios estrictos (tales como
metangenos) que han sobrevivido fases de mayor aerobiosis en pequeas bolsas anaerobias internas
en flculos de menor tamao.
Su nmero en los lodos activados llega a 10 8 ufcml-1 y entre ellas el grupo ms importante
numricamente es el de Pseudomonas. En los lodos activados tambin hay bacterias autotrofas tales
como las nitrificantes
(Nitrosomonas y Nitrobacter responsables de la DON) e incluso algunas
bacterias fotosintticas.
2.-) Hongos: Normalmente no estn presentes. Slo en condiciones ambientales muy especiales (bajo
pH, deficiencia de nitrgeno, presencia de productos txicos) pueden aparecer ciertos hongos de los
gneros Penicillium y Cephalosporium, entre otros.
3.-) Protozoos: Estn presentes como depredadores de las bacterias. Pertenecen a los tres grupos
(ciliados, flagelados y rizpodos). La actividad de los protozoos contribuye significativamente a la
reduccin de la DBO.
4.-) Rotferos: Son metazoos de tamao entre 100 y 500 m m. Son organismos que se unen al flculo y
desarrollan dos importantes funciones en l: (a) eliminan las bacterias libres que no se han agregado al
flculo, y (b) contribuyen a la formacin del flculo mediante la produccin de materia fecal rodeada de
capas de mucus.
Aspectos nutricionales del proceso:
Las aguas residuales domsticas tienen una relacin C:N:P de 100:5:1 lo que satisface las necesidades
nutritivas de muchos microorganismos que digieren la matera orgnica en pocas horas transformando la
DBO en biomasa. La aireacin en este tanque permite 1.-) mantener las condiciones de aerobiosis que
dirigen el proceso, y, 2.-) mantener en suspensin los flculos para que puedan acceder a todo el
volumen de lquido en tratamiento.
Cuando los microorganismos han reducido la cantidad de nutrientes de forma significativa entran en una
fase metablica similar a la estacionaria y en ella producen gran cantidad de polmeros extracelulares
(por ejemplo Zooglea) que permiten la agregacin del material del flculo. Los heteropolisacridos que
forman el ncleo del flculo son refractarios a la biodegradacin.
Digestin anaerobia de aguas residuales
Consiste en una serie de procesos microbiolgicos dirigidos a la digestin de la materia orgnica con
produccin de metano. Es un proceso en el que pueden intervenir diferentes tipos de microorganismos
pero que est dirigido principalmente por bacterias. Presenta una serie de ventajas frente a la digestin
aerobia: (1) muchas bacterias anaerobias pueden usar CO 2 como aceptor de electrones y, por tanto, no
hay necesidad de suministrar oxgeno por lo que el proceso es ms barato. (2) Se produce menos
cantidad de lodo porque la eficiencia energtica de las bacterias anaerobias es menor: el 50% del
carbono es convertido en biomasa en condiciones aerobias y slo el 5% en condiciones anaerobias. (3)
Se produce un gas til. (4) El requerimiento energtico es menor (5) Se pueden degradar compuestos
xenobiticos. Sin embargo, se pueden citar algunos inconvenientes: (1) Es un proceso lento, (2) Muy
sensible a agentes txicos.
TAREA DEL DIFs:
El equipo de trabajo revisar la literatura existente y por medio de la discusin grupal realizarn un
esquema de los procesos aplicados para el tratamiento de las aguas servidas en la Ciudad de Santa
Cruz.
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DIFs # 2.
UNIDAD O TEMA: MIICROBIOLOGA APLICADA
TITULO: TRATAMIENTO DE RESIDUOS SOLIDOS
FECHA DE ENTREGA:
Introduccin.
Los residuos slidos urbanos (RSU, en ingls Municipal Solid Waste, MSW) es un tipo de contaminacin
muy heterogneo en composicin (madera, tela, plstico, metal, restos de alimentos, papel, etc.) muy
concentrada en su produccin (los grandes ncleos urbanos producen ms RSU que los pueblos
pequeos) y a la que contribuimos todos de forma significativa. La composicin de los RSU vara
histricamente, estacionalmente y segn el nivel econmico del ncleo urbano que los produce.
Tratamiento de los RSU.
Las soluciones para el tratamiento de los RSU son variadas: 1.-) La ms clsica es el vertedero en el
que no se selecciona el material. Este procedimiento ha venido siendo poco costoso econmicamente
aunque no ecolgicamente. Actualmente plantea dos problemas: (a) no existe seguridad de que no se
produzcan filtraciones del material vertido a las aguas subterrneas; y (b) es muy difcil encontrar
nuevos emplazamientos para los vertederos cerca de los ncleos urbanos, lo que incrementa el coste
del vertido. La tendencia actual es hacia la reduccin del nmero y la capacidad total de los vertederos;
aunque seguirn existiendo como vertederos selectivos para el material biolgicamente inactivo que no
sea recuperable mediante reciclaje o compostaje. 2.-) Incineracin que presenta problemas econmicos
(las instalaciones son muy costosas) y ecolgicos (problemas relacionados con la seguridad y toxicidad
de los humos y cenizas). Sin embargo, la incineracin permite una gran reduccin del volumen (85%) y
del peso (75%) del material destinado a los vertederos. 3.-) Reciclado y compostaje. El reciclado
consiste en la de restos de papel, metal o cristal en materias primas para nuevos productos en los que
no cambia el material (el papel se convierte en nuevo papel). Compostaje es el proceso en el que los
residuos no reciclables pero biodegradables se convierten por un proceso microbiolgico en residuos
orgnicos estables con menos peso y volumen, inocuos desde el punto de vista sanitario, fcilmente
transportables y almacenables y tiles como aditivos en el tratamiento de suelos.
Para un tratamiento correcto de los RSU es necesaria su clasificacin por los consumidores (que son
sus principales generadores) mediante la separacin de los residuos siguiendo una de dos estrategias
alternativas: 1.-) Histricamente se ha prestado ms atencin al reciclado por lo que la separacin de los
residuos en dos fracciones se haca en reciclable/no reciclable ms compostable. 2.-) Alternativamente
se puede hacer la clasificacin en base al compostaje en dos fracciones: compostable/no compostable
ms reciclable. Esta ltima alternativa permite un compostaje ms permite obtener un compost de ms
calidad que en el caso anterior puesto que la separacin de los residuos no compostables se realiza por
el consumidor y, por lo tanto, se realiza en el origen. La separacin del material reciclable del no
reciclable, en este caso, se hace en la factora de tratamiento de los RSU.
La factora de tratamiento de los RSU ha de realizar en cualquiera de los dos casos, una clasificacin
final de los residuos, y un tratamiento inicial previo al compostaje que suele consistir en la disgregacin
y fractura del material en trozos pequeos y en humedecerlo para que tenga la cantidad de agua
adecuada para el proceso microbiolgico.
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Compostaje.
Definicin.
El compostaje es un proceso de fermentacin slida espontnea basado en el aumento de la
temperatura producido por la actividad de los microorganismos. El material a comportar es el medio de
cultivo, la fuente de nutrientes, el inculo, la fuente de agua y el producto final. El propio material retiene
el calor producido por los microorganismos y esto causa el aumento en la temperatura del proceso. Para
esto es necesario que la cantidad de material a comportar supere un mnimo crtico.
Generacin de calor durante el compostaje.
El aumento de la temperatura durante el proceso de compostaje se debe al catabolismo aerobio del
material compostable por los microorganismos que forman su flora natural. Como consecuencia de este
metabolismo aerobio se utilizan los carbohidratos, lpidos y protenas del substrato como fuente de
carbono y de energa por los microorganismos quimioheterotrofos; estos nutrientes son metabolizados
por rutas diferentes que convergen en ciclos productores de gran cantidad de energa (ciclo de Krebs o
de los cidos tricarboxlicos) tanto directamente utilizable (una molcula de ATP por ciclo completo)
como obtenible mediante la cadena transportadora de electrones (cadena respiratoria, 2 molculas de
NADH+H+, una de NADPH+H+ y una de FADH2 por vuelta de ciclo). Parte de esta energa la disipan los
microorganismos como calor, necesario para elevar la temperatura ambiental de forma que puedan
funcionar metablicamente de forma ms eficiente. Cuando, debido al apilamiento de material
compostable, parte del calor producido queda atrapado en el mismo material en proceso de compostaje,
se produce un efecto de retroalimentacin de la generacin de calor.
Ejemplo de proceso de compostaje.
El proceso de compostaje puede ejemplificarse con el tratamiento de las hojas en producidas en otoo:
al caer las hojas estn cubiertas por muchos microorganismos. Por separado no muestran variaciones
de temperatura como resultado del metabolismo microbiano; pero si se apilan para que contengan la
temperatura, sta sube y se produce un proceso de seleccin de los microorganismos: 1.-) las bacterias
y hongos mesfilos, mediante un proceso de retroalimentacin positiva incrementan su nmero y la
temperatura hasta que sta se hace limitante y mueren (hacia 45C-55C); (2) a esta temperatura los
microorganismos ms importantes son los termfilos que, mediante un segundo proceso de
retroalimentacin positiva-neutra-negativa, incrementan nmero y temperatura hasta alcanzar los 80C;
(3) a esta temperatura se produce un cierto proceso de autoesterilizacin del producto y la temperatura
desciende progresiva e irreversiblemente. Si el material de partida est muy compactado o con mucha
humedad, no se puede producir un intercambio efectivo de oxgeno y se desarrollan procesos
fermentativos que retrasan o impiden el aumento de temperatura.
El proceso espontneo de compostaje es relativamente lento debido al efecto inhibidor de la alta
temperatura y a la disminucin del oxgeno interno. Esto no es importante para procesos pequeos;
pero es muy problemtico en los procesos industriales debido al incremento del coste que supone.
Manipulacin del proceso de compostaje.
Industrialmente es necesario agilizar el proceso de compostaje para que se produzca totalmente con la
mxima rapidez. Para esto hay que manipular las variables del proceso de fermentacin para conseguir
las condiciones ptimas para el proceso. Los aspectos manipulables del proceso son el tamao y la
forma de la pila de compostaje, la agitacin mecnica del material y la ventilacin del proceso. Vamos a
estudiar varios casos en los que se alteran estas variables para estudiar su efecto en la velocidad del
proceso.
(1) Efecto del tamao y forma de la pila.
Como ejemplo estudiaremos con ms detalle el compostaje urbano de las hojas de rboles. Este
material se produce slo durante un periodo concreto del ao (dos meses en otoo) lo que permite
disponer de nueve meses para su procesado y, por consiguiente, un compostaje lento. El diseo de la
pila ha de hacerse en funcin de los requerimientos del proceso y de las condiciones ambientales: (a) al
inicio es necesario una buena aireacin del material para que se inicie el proceso de incremento de la
temperatura evitando la anoxia; al mismo tiempo, es necesario evitar un excesivo incremento de la
temperatura en esta primera etapa que conduzca a una autoesterilizacin del material antes de que sea
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biolgicamente estable. Por consiguiente, esta primera pila ser de dimensiones reducidas. (b) En
invierno, el descenso acusado de la temperatura ambiental hace de este el factor limitante que hay que
prevenir, y esto se logra combinando dos pilas de compostaje de otoo en una mayor de invierno. (c) En
primavera es necesario, de nuevo, prevenir la anoxia por lo que el cultivo es agitado mecnicamente al
principio de la estacin permitiendo su evolucin espontnea a continuacin.
(2) Agitacin mecnica.
Si se agita peridicamente el material conpostando para obtener un control de la temperatura y un
aumento del nivel interno de oxgeno puede comprobarse que el proceso mecnico no supone una
reduccin de la temperatura significativa (45C-55C-79C a las 0, 10 y 35 horas tras la agitacin)
mientras que los niveles de oxgeno no se hacen limitantes durante un periodo en el que la temperatura
lo es (20%, 2,5%, 10% durante el mismo periodo, indicando el ltimo incremento el resultado de la
autoesterilizacin del cultivo). Por consiguiente, la agitacin mecnica no es un procedimiento realista
de control de la temperatura durante el proceso de compostaje, y no tiene un efecto significativo sobre la
disponibilidad de oxgeno.
Tiempo
Temperatura
Oxgeno
45C
20%
10 h
55C
2.5%
35h
79C
10%
La tabla indica la variacin de la temperatura y del porcentaje de oxgeno en la masa en fermentacin a

diferentes tiempos (medidos en horas) despus de un volteo mecnico. El aumento de la cantidad de
oxgeno a las 35h se debe al proceso de autoesterilizacin por alta temperatura que detiene su consumo
por los microorganismos presentes en la mezcla.
(3) Ventilacin.
La ventilacin forzada de la pila de compostaje permite proporcionar oxgeno, eliminar CO 2 y descender
la temperatura del proceso. La mayor parte del calor que se genera procede de la respiracin aerobia de
los microorganismos, y este calor se emplea, en su mayor parte (80%), en la vaporizacin del agua, de
forma que es necesario mucho ms aire para eliminar el calor generado que para proporcionar el O 2
necesario (relacin 9:1). El calor eliminado por ventilacin puede calcularse como Q v=m(hsalida-hentrada)
donde m es el flujo de aire (masa por unidad de tiempo), h entrada es la entalpa del aire de entrada
(energa por unidad de masa de aire), h salida la del aire de salida y Q v la energa por unidad de tiempo
eliminada. Los valores de h dependen de la humedad relativa del aire que en salida es del orden del
100%. Los valores de Qv vienen limitados por las condiciones biolgicas de los microorganismos.
Procesos basados en el flujo libre de aire
Cuando la ventilacin se disea para proporcionar O 2 se hace pasar aire a travs de la pila controlando
el flujo con un programador de tiempo que est activo durante poco tiempo y es capaz de mover
decenas de metros cbicos de aire seco por tonelada y hora de material. En estas condiciones, para
mantener una concentracin de O2 del orden del 10-15% el flujo de aire necesario (m) es demasiado
pequeo para evitar que se produzca el suicidio por elevacin de la temperatura de la poblacin
microbiana. Esto enlentece excesivamente la duracin del compostaje.
El mayor inconveniente de este sistema es que se produce un gradiente de temperatura muy acusado
entre la parte inferior y la superior de la pila de compostaje, lo que genera diferencias en la velocidad del
proceso y, finalmente, una desecacin del material que puede comprometer la velocidad de crecimiento
de los microorganismos. De hecho, como la humedad generada deriva nicamente del calor producido
por la actividad biolgica, una manera de seguir el proceso de compostaje es el seguimiento de la
humedad del aire de salida.
Procesos basados en la recirculacin de aire.
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El proceso denominado de tnel holands se utiliza para producir compost destinado a la produccin
de champin. Consiste en la construccin de pilas de 3x3x33m cerradas en salas especiales. El suelo
es falso y permite que se insufle el aire desde la parte inferior del compost, este aire sale por la parte
superior y es recogido en la bveda de la cmara. El aire se hace recircular pasando bien por un
compresor que lo refrigera y descarga de humedad o bien directamente a la parte inferior de la cmara; la
eleccin de uno u otro circuito depende de la necesidad de humedad de la mezcla. Se permite la entrada
de aire nuevo del exterior dependiendo de la necesidad de oxgeno para el proceso, el volumen de aire
del exterior que entra es compensado por liberacin al exterior de aire del circuito.
Con este sistema se puede lograr, mediante un control computerizado del proceso, que no se genere un
gran gradiente de temperatura en la cmara de fermentacin, lo que hace que el proceso, y el producto
final, sean ms homogneos. As mismo, permite un control muy fino de la temperatura y de la humedad.
El sistema requiere menos consumo de aire ambiental y un aislamiento de una zona ms pequea que en
los casos anteriores, lo que facilita la ventilacin de las instalaciones y el manejo de los gases de salida.
TAREAS DEL DIFs:
El equipo de trabajo revisar la literatura existente y realizar los siguientes trabajos:
1.- Investigue que tipo de tratamiento y defina cada una de las etapas, por las que atraviesas los RSU de la
Ciudad de Santa Cruz. y cuales son las instituciones involucradas
2.- Analice los problemas administrativos y operacionales del manejo del Vertedero Municipal.
3.- Proponga soluciones para el tratamiento de los RSU, que comiencen desde nuestras propias casas.

DIFs # 3.
UNIDAD O TEMA: MIICROBIOLOGA APLICADA
TITULO: CICLOS BIOGEOQUMICOS
FECHA DE ENTREGA:
La integracin de las actividades metablicas de todos los microorganismos de un ecosistema es la
causa de una gran parte de los cambios que se producen tanto en sus componentes biticos como en
los abiticos.
Definiciones
Ecologa microbiana: examen de las interacciones dinmicas de los microorganismos con su ambiente,
tanto con el vivo (bitico) como con el abitico.
Las interacciones son dinmicas porque cambian con el tiempo mientras las diferentes poblaciones se
van adaptando al ambiente (en sentido amplio) para lograr un equilibrio en el conjunto.
Ecosistema: unidad ecolgica bsica, funcionalmente autosuficiente, autorregulable y estructurada, en
la que cada poblacin ocupa un nicho ecolgico.
Nicho: papel que desempea una comunidad de organismos (poblacin) en un ecosistema.
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Hbitat: lugar ocupado por un ecosistema

Biosfera: porcin de la tierra ocupada por los seres vivos. En ella se integran todos los ecosistemas en
los que los microorganismos desempean funciones diversas.
Ciclo biogeoqumico: movimientos de materiales a travs de reacciones qumicas en toda la biosfera.
Supone un cambio de materiales entre las partes biticas y abiticas de la biosfera. Los
microorganismos, a travs de sus actividades metablicas, desempean un papel importante en el
intercambio de materiales entre los diversos apartados de la biosfera.
Los principales elementos integrantes de la materia viva son los ms intensamente ciclados por los
microorganismos: el carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno, fsforo y azufre.
La actividad humana que origina una liberacin de elementos alterando los equilibrios de las etapas de
los ciclos biogeoqumicos puede tener gran importancia en el desarrollo de las poblaciones microbianas,
de plantas y de animales y en la productividad de los ecosistemas particulares.
Ciclos biogeoqumicos representativos
Ciclo del carbono
El ciclo comprende la transferencia del bixido de carbono y el carbono orgnico entre la atmsfera,
donde est principalmente en forma de CO2, y la hidrosfera y litosfera donde est en forma de carbono
orgnico e inorgnico. El proceso de fijacin del carbono atmosfrico se produce por microorganismos
fotolitotrofos y quimiolitotrofos. El carbono fijado (reducido) vuelve a la atmsfera como resultado de la
respiracin.
La formacin de metano (CH 4) por bacterias metangenas es una desviacin del ciclo llevada a cabo
por arqueobacterias. El metano no es utilizable por otros organismos. La principal fuente de metano
atmosfrico es la bigena y, dentro de ella, la produccin de este gas durante el proceso de
fermentacin que tiene lugar en el rumen de los herbvoros.
Relaciones trficas
El carbono fijado por los productores primarios (produccin primaria bruta) comienza a se consumida
por los propios productores primarios y mineralizado por ellos a CO2. Slo una parte de la produccin
primaria (produccin primaria neta) sirve de alimento para los productores secundarios y as se forman
las cadenas trficas.
La mayor parte del carbono se pierde de forma en forma de CO 2 por lo que conforme se asciende en la
cadena trfica la cantidad de biomasa es menor. Por otra parte, el balance entre el carbono fijado por la
fotosntesis y el consumido durante la respiracin da lugar a una acumulacin o reduccin de la biomasa
total del ecosistema. Normalmente, entre el 85% y el 90% de la energa acumulada en forma de carbono
orgnico en un nivel trfico es consumida por la respiracin durante la transferencia al siguiente nivel.
Por esto, la cantidad de biomasa en niveles trficos superiores es cada vez menor.
Se pueden establecer cadenas trficas de materia viva (organismos depredadores) y cadenas trficas
de materia muerta (detritus) en la que la actividad de los microorganismos conduce a la mineralizacin
(produccin de CO2) o la reinsercin en el ciclo (formacin de biomasa por los microorganismos
consumidores de detritus) biolgico del material inutilizable.
Los microorganismos son los principales responsables de la mineralizacin de la materia orgnica de los
detritus. Los distintos productos orgnicos tienen diferentes tasas de mineralizacin por los
microorganismos. As mismo, en la velocidad de mineralizacin microbiana tiene una gran influencia el
pH, temperatura, humedad y grado de aireacin del suelo; factores que influyen tambin el los tipos de
poblaciones microbianas que van a desarrollar los respectivos procesos.
Movilizacin e inmovilizacin microbiana del carbono
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La actividad microbiana puede hacer el carbono inaccesible a los consumidores mediante

transformaciones que lleven a la formacin de humus (restos de material vegetal difcilmente
metabolizable) o a la produccin de metano. As mismo, la conversin de formas de carbono no
digestibles (celulosa, materia fecal) en biomasa utilizable es resultado de la actividad microbiana.
Ciclo del hidrgeno y del oxgeno
Son ciclos ntimamente relacionados con el del carbono.
El sitio de reserva principal de ambos elementos es el agua y el ciclo comprende reacciones de
oxidorreduccin componentes de los procesos respiratorios y de fotolisis del agua.
Actividades microbianas y oxgeno
El metabolismo microbiano est condicionado por la disponibilidad y tolerancia al oxgeno. El nivel de
oxgeno en un ambiente puede medirse por el potencial de oxidorreduccin del mismo. La actividad
microbiana (excepto en el caso de la fotosntesis oxignica) tiende a reducir el potencial redox y a
dificultar la vida aerobia. Muchos microorganismos pueden continuar su actividad en condiciones
anaerobias; pero esto no es posible en el caso de animales.
pH y actividades microbianas.
La actividad microbiana causa cambios en el pH del suelo o agua en la que se produzca. Estos cambios
en el pH pueden tener efectos selectivos fuertes sobre otras bacterias (no suficientemente acidfilas
para tolerar ambientes extremos cuando stos se produzcan) y tiene efectos qumicos sobre la
solubilidad de gases en el agua, la disponibilidad de nutrientes cuya solubilidad vara y la concentracin
de metales pesados en los ecosistemas.
Ciclo del nitrgeno
- Fijacin del nitrgeno
Proceso de reduccin del N2 atmosfrico, no asimilable, a NH4+ asimilable por las plantas y, a travs de
ellas, por toda la cadena trfica.
La fijacin de nitrgeno se produce nicamente por bacterias en condiciones anaerobias y requiere el
consumo de una gran cantidad de energa.
La fijacin de nitrgeno supone unos 2x10 8Tm al ao (unas 8 veces la produccin anual de abonos
nitrogenados).
- Amonificacin
Consiste en la liberacin del NH4+ de las molculas inorgnicas. Es un proceso microbiano producido
por microorganismos ureolticos y por especies que posean desaminasas.
- Nitrificacin
Proceso en el que ciertos quimiolitotrofos utilizan la energa liberada en la oxidacin del NH 4+ para sus
reacciones metablicas. Este proceso es muy poco eficiente, por lo que es necesaria la oxidacin de
una gran cantidad de substrato para que pueda producirse un crecimiento apreciable de este tipo de
microorganismos. Por otra parte, el proceso es obligadamente aerobio.
La nitrificacin produce un cambio notable en el estado de oxidacin del nitrgeno fijado al pasar de
forma catinica (NH4+) a aninica (NO3-). En suelos arcillosos de gran carga negativa, el NH 4+ queda
retenido con ms facilidad, mientras que el NO 3- no se retiene y pasa a aguas subterrneas con lo que
sale del sistema. Un efecto colateral negativo de la nitrificacin es que los nitratos son txicos para
animales ya que pueden dar lugar, entre otros efectos indeseables, a la produccin de nitrosaminas y de
otros agentes cancergenos. En ciertas ocasiones, se han utilizado inhibidores de la nitrificacin para
reducir estos efectos en el suelo.
- Desnitrificacin
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Se produce por la actividad de microorganismos que, en condiciones de anaerobiosis, son capaces de

utilizar NO3- y NO2- como aceptores finales de electrones en procesos de respiracin anaerobia. Los
productos finales son diferentes estados de oxidacin del nitrgeno (NO, N 2O, N2) dependiendo de la
disponibilidad de materia orgnica, de la concentracin de nitratos y del pH del suelo.
Este proceso cierra el ciclo del nitrgeno: es una reduccin desasimiladora.
Ciclo del azufre
El ciclo comprende varios tipos de reacciones redox desarrolladas por microorganismos:
1.- Ciertos tipos de bacterias son capaces de extraer el azufre de compuestos orgnicos (proceso de
desulfuracin) que rinde SO4= en condiciones aerobias y H2S en condiciones anaerobias.
2.- Bacterias anaerobias respiradoras de SO 4= que producen la acumulacin de H2S hasta alcanzar
concentraciones txicas.
3.- Bacterias fotosintticas anaerobias pueden usar el H 2S como donador de electrones en sus procesos
metablicos dando lugar a depsitos de azufre elemental (S).
4.- Bacterias quimiolitotrofas que utilizan el H2S como fuente de energa para la produccin de ATP.
En muchos casos se producen asociaciones entre bacterias formadoras y consumidores de H 2S en un
sistema balanceado. En todos los caos, el S es la forma no asimilable y slo puede entrar en el ciclo
por la accin de algunas bacterias que son capaces de oxidarlo a SO 4=.
Drenaje cido de las minas
En minas de carbn en muchas ocasiones hay una contaminacin con pirita (Fe 2S) que se oxida
rpidamente en contacto con el aire y por accin microbiana. La oxidacin de estos sulfuros puede dar
lugar a la produccin de grandes cantidades de SO 4H2 que acidifica el suelo impidiendo todo crecimiento
posterior de plantas o de bacterias no acidfilas extremas. Este cido puede alcanzar el agua de los ros
al escurrir de las pilas de carbn que estn sufriendo el proceso.
Otros ciclos
Fsforo
Este ciclo no est sometido a procesos redox porque la forma esencial del fsforo (tanto orgnico como
inorgnico) es el fosfato. La actividad microbiana reside en la capacidad de produccin de otros cidos
orgnicos que aumenten o disminuyan la solubilidad de los fosfatos en el ecosistema hacindolos ms o
menos accesibles a otros organismos.
El fosfato suele ser limitante del crecimiento. Una entrada masiva de fosfatos en el sistema (como
ocurre debido al empleo masivo de detergentes fosfatados) aumenta la productividad del ecosistema
con lo que la materia orgnica aumenta considerablemente. Cuando esta materia orgnica comienza a
descomponerse, se incrementan los procesos de respiracin y, por consiguiente, el consumo de
oxgeno, lo que genera un incremento de anaerobiosis conocido como proceso de eutrofizacin.
Hierro
El ciclo de este elemento est asociado a la conversin entre sus formas Fe 2+ ms soluble que las Fe3+.
Los microorganismos que oxidan hierro (quimiolitotrofos) producen cambios en la accesibilizacin del
elemento a otros miembros del ecosistema.
Calcio
El ciclo biogeoqumico del calcio consiste en variaciones de su solubilidad debido a la formacin de
compuestos carbonatados ms (Ca(CO 3H)2) o menos (CaCO3) como consecuencia de la liberacin por
microorganismos de cidos orgnicos que desplacen el equilibrio entre ambas formas.
Metales pesados
Los microorganismos pueden cambiar el estado de oxidacin o de modificacin (metilacin,. por
ejemplo) de metales pesados de manera que aumenten o disminuyan su toxicidad o su adsorcin a las
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membranas y estructuras biolgicas, lo que influye determinantemente en su acumulacin a lo largo de

la cadena trfica.
TAREAS DEL DIFs:
El equipo de trabajo complementar el presente trabajo con otra literatura al respecto y luego de la
discusin grupal elaborar un informe donde se demuestre que determinaron y evaluaron, cuales son
los gneros bacterianos que interviene en cada uno de los ciclos mencionados. Mostrando su
importancia.

DIFs # 4.
UNIDAD O TEMA: MORFOLOGA BACTERIANA
TITULO: BACILOS ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES
FECHA DE ENTREGA:
Los microorganismos pertenecientes al gnero Mycobacterium se caracterizan por tener una pared
celular completamente diferente a las restantes eubacterias. La pared de las Mycobacterias posee un
alto contenido de lpidos que la hace impermeable a los agentes hidroflicos, por lo tanto estos
microorganismos no se tien adecuadamente con los reactivos utilizados en la coloracin de Gram y no
pueden ser clasificados como Gram positivos o negativos. Las Mycobacterias son teidas
adecuadamente por el mtodo de Ziehl-Neelsen (Tincin Acido-Rpida o Acid-Fast Stain) que utiliza
como solucin decolorante una mezcla de etanol y cido clorhdrico. Estos microorganismos una vez
coloreados son resistentes a la decoloracin cido-alcohlica y por eso se denominan Bacilos cido
Alcohol Resistentes (BAAR).
Los microorganismos del gnero Mycobacterium contienen una membrana citoplasmtica formada por
una bicapa lipdica similar a las restantes eubacterias. Por encima de esta membrana se encuentra el
rgido peptidoglicano que contiene N-glucolilmurmico en lugar de N-acetilglucosamina. Por medio de
una unin fosfodister, el peptidoglicano se halla unido covalentemente al arabinogalactano, un polmero
de arabinosa y galactosa. En la porcin ms distal y externa de los arabinogalactanos se hallan fijados
los cidos miclicos que tienen cadenas carbonadas largas (C60 a C90).
Los glucolpidos son un grupo de compuestos (micolatos de trealosa, sulfolpidos, micsidos, etc) que se
encuentran asociados no covalentemente a los cidos miclicos y se ubican perifricamente en la
pared. Los micolatos de trealosa (llamados factores de cordn porque su presencia produce cultivos que
tienen forma de cordones serpenteantes) y sulfolpidos se encuentran principalmente en las cepas de
Mycobacterias ms virulentas.
El lipoarabinomanano (LAM) es un compuesto que se halla anclado en la membrana citoplasmtica. El
LAM es considerado como el equivalente mycobacteriano del lipopolisacrido de las Gram negativas
debido a que provoca una importante respuesta antimicrobiana en macrfagos. En las cepas de
Mycobacterias ms virulentas la arabinosa terminal del LAM est recubierta con residuos de manosa
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(manLAM) a diferencia de las cepas no virulentas no estn recubiertas (AraLAM). Adems, el LAM
tambin podra servir como poro para el paso de los nutrientes a travs de la pared celular. En la pared
celular tambin se encuentran protenas inmunoreactivas que son utilizadas con fines diagnsticos
(PPD).
El Mycobacterium tuberculosis es el agente etiolgico de la tuberculosis, una enfermedad que
primariamente produce lesiones en los pulmones y que puede causar la muerte si nos es tratada en
forma adecuada. Existen otras Mycobacterias capaces de producir infecciones en el hombre. El M.
bovis tambin causa tuberculosis, mientras que las infecciones producidas por M. avium, M. kansakii, M.
fortuitum y M. chelonei son consideradas oportunistas y no tuberculosas. La lepra es una infeccin
causada por el Mycobacterium leprae que es un parsito intracelular obligado que se multiplica
lentamente en clulas fagocitarias mononucleares como los histiocitos de la piel y en las clulas de
Shwan de los nervios.
La tuberculosis es una enfermedad de distribucin mundial pero con consecuencias devastadoras en los
pases en desarrollo. En el ao 1993 la Organizacin Mundial de la Salud (OMS-WHO World Health
Organization) declar a la tuberculosis una "Emergencia Global". Se estima que un tercio de la
poblacin mundial est infectada con el M. tuberculosis, y que en la prxima dcada sern infectadas
ms de 300 millones de personas de las cuales 90 millones desarrollarn la enfermedad y 30 millones
morirn por ella.
TAREA DEL DIFs:
El equipo de trabajo, en base al presente resumen y por medio de la revisin bibliogrfica y la discusin
grupal determinar los siguientes cuestionamientos:
1.- Cules son las diferencias bsicas de este gnero bacteriano con respecto a las bacterias No Alcohol
cido Resistentes?
2.- Qu beneficios otorgara esta diferencia estructural a las bacterias del gnero Mycobacterium?
IX. PRCTICAS DE LABORATORIO.
Normas generales de uso del laboratorio
Para el desarrollo de las prcticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que
deben ser observadas con toda escrupulosidad.
1. Se debe llevar siempre puesto el mandil para proteger la ropa.
2. Las sesiones se iniciaran con una explicacin detallada e instrucciones del trabajo a realizar, debe
leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. No empiece a
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trabajar antes de haber recibida la explicacin. Los resultados deben ser siempre anotados
cuidadosamente apenas se conozcan.
3. Lvese las manos al inicio y fin de cada sesin.
4. No ingiera alimentos, ni fume en los laboratorios.
5. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al
terminar cada prctica se proceder a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado.
6. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material.
7. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se
necesita y de los posibles riesgos de su manipulacin.
8. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con
el profesor.
9. No tocar con las manos y menos con la boca los productos qumicos.
10. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben
manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos.
11. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de
los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se har al bao Mara,
nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de
cerrar las llaves de paso al apagar la llama.
12. Cuando se manejan productos corrosivos (cidos, lcalis, etc.) deber hacerse con cuidado para
evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se vertern bruscamente en los tubos de
ensayo, sino que se dejarn resbalar suavemente por su pared.
13. Cuando se quiera diluir un cido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: cido
sobre agua.
14. Cuando se vierta un producto lquido, el frasco que lo contiene se inclinar de forma que la etiqueta
quede en la parte superior para evitar que si escurre lquido se deteriore dicha etiqueta y no se
pueda identificar el contenido del frasco.
15. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se
disponga en el laboratorio.
16. Las pipetas se cogern de forma que sea el dedo ndice el que tape su extremo superior para regular
la cada de lquido.
17. Al enrasar un lquido con una determinada divisin de escala graduada debe evitarse el error de
paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea
horizontal.
18. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen lquidos debe evitarse la ebullicin
violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo se acercar a la llama
inclinada y procurando que sta acte sobre la mitad superior del contenido y, cuando se observe
que se inicia la ebullicin rpida, se retirar, acercndolo nuevamente a los pocos segundos y
retirndolo otra vez al producirse una nueva ebullicin, realizando as un calentamiento intermitente.
En cualquier caso, se evitar dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona.
19. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despus de haberlos calentado con
el fin de evitar roturas.
20. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen.
El Microscopio ptico compuesto

PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO
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Sistema ptico
o
OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo.
o
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta.
o
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin.
o
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
o
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecnico
o
SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
o
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.
o
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, ..
o
REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.
o
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue
el enfoque correcto.
MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO
1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el
microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10 aumentos
(10x) si la preparacin es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico.
Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de
incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin
con el macromtrico y, cuando se observe algo ntido la muestra, girar el micromtrico hasta
obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con
mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por
completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin
desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil
que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones
anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con
el objetivo de inmersin.
6. Empleo del objetivo de inmersin:
a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que
se va a visualizar y donde habr que echar el aceite.
c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de x40.
d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin.
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f.
Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de
aceite.
En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de
accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar
el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro
campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3.
i. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de
menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la
platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin.
j. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para ptica.
Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de
observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma
y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar
que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su
caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un
papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con
pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se
pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y
pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que
abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar
las lentes y su sujecin.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver
y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin
para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el
tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con
un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el
curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.
PRCTICA DE LABORATORIO 1
Examen microscpico de las bacterias
PREPARACIONES FRESCAS O HMEDAS PARA BACTERIAS VIVAS.
En este preparado las bacterias vivas suspendidas en un medio lquido se muestran refringentes o
transparentes, por lo que se debe cerrar el diafragma del microscopio. A travs de esta tcnica se
observa si las bacterias tiene movimiento o no, es decir las que poseen flagelos se desplazaran a todas
partes y las que no se dejaran arrastrar por las molculas de agua en una sola direccin, a este
fenmeno se la conoce como movimiento Browniano. Tambin es posible observarla forma de las
bacterias o algn cambio citolgico como ser la divisin binaria o, la presencia de bacterias en el
citoplasma de las clulas vivas.
PASOS
1.
Tomar un portaobjetos limpio y desprovisto de grasa.
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2.
3.
A partir del medio lquido utilizando una pipeta Pasteur y vlvulas para absorber, se colococan de 13 gotas del medio y sobre estas un cubreobjetos.
Observar al microscopio con la ayuda de los objetivos: 4X, 10X o 40X.
PREPARACIN DEL FROTIS PARA BACTERIAS MUERTAS

Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con
objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparacin
es muy difcil obtener una imagen clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del
portaobjetos para poder aplicar los mtodos habituales de tincin que permiten la observacin al
microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijacin de
una extensin bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo
menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que pudiera haber.
PASOS
1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca
cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su
filamento queda retenida una mnima gota de agua, que resulta suficiente.
2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo
bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra
hasta formar una suspensin homognea que quede bastante extendida para facilitar su secado.
Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos
ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa
de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el porta a la llama del
mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado el porta pues las
clulas pueden deformarse o romperse.
FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS
4. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar enfriar el porta
entre los pases.
5. Con metanol (para bacterias procedentes de medio lquido). Aadir unas gotas de metanol sobre la
extensin completamente seca. Golpear el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de
trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. Esperar a que el metanol se evapore
completamente.
Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al
microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el proceso de tincin.
TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO
6. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el protocolo
de cada tincin concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. En ocasiones el colorante tie slo en
caliente, por lo que el tiempo que dure su actuacin se deber sostener el portaobjetos con unas
pinzas sobre la llama del mechero para que humee el colorante, pero teniendo mucho cuidado de
que no llegue a hervir ya que se producira la destruccin de las clulas.
7. Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza inclinando el
portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el
frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis consigo.
Eliminar la mxima cantidad de agua de los portaobjetos golpendolos por su canto con cuidado
contra la superficie de la mesa de trabajo.
8. Secar el porta presionando entre dos papeles de filtro, pero en ningn caso se debe frotar el porta.
9. Observar la preparacin al microscopio llegando hasta el mximo aumento. Si se quiere montar de
forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de inmersin.
MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN
La tcnica siguiente es de aplicacin para cualquier preparacin microscpica que se desee montar de
forma definitiva. Se anotar en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparacin, la fecha y, en
su caso, el nombre del alumno.
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10. Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones mantenindolos un mnimo de 5
minutos en cada bao. La serie de alcoholes puede modificarse en funcin de la disponibilidad de los
reactivos, pero el objetivo es que la preparacin quede totalmente deshidratada. Escurrir bien el
reactivo antes de introducirlo en el siguiente bao.
a. Alcohol de 70
b. Alcohol de 95
c. Acetona pura
d. Acetona-xilol (1:1)
e. Xilol
Montar la preparacin. Emplear blsamo de Canad, euparal o algn medio de montaje sinttico. Utilizar
preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm.
Observacin de bacterias
En microbiologa se utilizan diferentes tcnicas de coloracin para una mejor observacin de las
bacterias, en casi todas las coloraciones se utilizan productos o colorantes. En aquellos casos que en
colorante tienen carga +, se colorean las estructuras con carga y, con los de carga -, las estructuras +.
Dentro de las coloraciones tenemos:
a) las simples o primarias, caracterizadas por la utilizacin de un solo colorante, y
b) las especiales o estructurales, en las que intervienen dos o mas colorantes.
OBJETIVOS
1. Realizar una tincin simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales.
2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qu casos se recomienda una u otra.
3. Observar la morfologa bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que
existen.
4. Practicar con el microscopio al mximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersin.
MATERIAL
Mechero Bunsen o de alcohol
Asa de siembra o aguja enmangada
Pinzas
Portaobjetos
Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, suelo, etc.
Colorantes para tincin:

a)
Solucin de cristal violeta al 1%
b)
Solucin de safranina al 0,5%
c)
Azul de metileno al 1%
Microscopio y aceite de inmersin

BACTERIAS DEL YOGUR
El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la leche. A escala industrial se
realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociacin de dos cepas bacterianas:
el Streptococcus termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus,
muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas
distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas).
Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque no se tenga
mucha prctica con el enfoque del microscopio.
1. Realizar el frotis disolviendo una mnima porcin de yogur en una pequea gota de agua.
2. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa.
3. Teir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos.
4. Observar al mximo aumento del microscopio.
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BACTERIAS DEL VINAGRE

El vinagre es una solucin acuosa rica en cido actico resultante de la fermentacin espontnea del
vino o de bebidas alcohlicas de baja graduacin. La acetificacin del vino es producida por bacterias
aerbicas del cido actico, principalmente Acetobacter aceti, aunque tambin Gluconobacter. Se trata
de bacilos rectos con flagelos polares.
1. Tomar con una aguja enmangada una pequea porcin de madre de vinagre natural o de la telilla que
se forma sobre la superficie de los vinos agriado.
2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis.
3. Dejar secar y fijar con calor.
4. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
El sarro dental es un depsito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Est
constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos
metablicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones
que se den en el momento de hacer la preparacin, pero suelen abundar bacterias saprfitas,
pudindose observar gran variedad de morfologas: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
1. Con una aguja enmangada tomar una pequea porcin de sarro dental y disolverla en una gota de
agua sobre el portaobjetos.
2. Dejar secar y fijar con calor.
3. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SUELO
La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prcticamente infinita,
muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas, incluso, desconocidas para los
microbilogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en
vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardn. Despus de varios das, las bacterias
se habrn adherido al vidrio y slo habr que fijarlas por calor y teirlas con un colorante cualquiera.
Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos, as como la parte que no se va a teir.
Tincin Gram
La coloracin de Gram es una coloracin de tipo especial en la que interviene el cristal violeta y la
safranina o fuscina bsica, fue descubierta hace ms de 100 aos por el mdico Christian Gram y hoy en
da es la coloracin ms utilizada en los laboratorios de bacteriologa. Pero su principal caracterstica es
la de dividir a las bacterias en dos grandes grupos taxonmicos:
- Gram positivas (azules)
- Gram negativas (rojas)
Con este tipo de coloracin se da inicio a la identificacin de cada una de las bacterias.
Durante muchos aos no se pudo explicar y fue totalmente desconocido, el hecho de porque utilizando la
misma cronologa, los mismos colorantes algunas bacterias se tean con el cristal violeta y otras con la
safranina. Hasta hace muy pocos aos y con la ayuda del microscopio electrnico y los trabajos en
Ingeniera Gentica Bacteriana se pudo dar un respuesta tcnica a lo que sucede con esta coloracin y,
se estableci que las diferentes coloraciones que presentan los distintos gneros bacterianos se deben a
la presencia del cido teicoico en las estructuras de la pared de las bacterias. As, en fundamento tcnico
radica en la presencia de ese compuesto en la capa de polipptidos o peptidoglicanos, de las Gram
positivas.
MATERIAL
1.
Microscopio
2.
Portaobjetos
3.
Asa de siembra
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4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Cubeta de tincin
Cultivo bacteriano
Pinzas
Frasco lavador
Mechero de alcohol
Papel de filtro
Colorantes y reactivos:
i.
Cristal violeta
ii.
Lugol
iii.
Alcohol-acetona
iv.
Safranina.
REALIZACIN
1. Preparar los frotis bacterianos.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
Teir con cristal violeta 1min.

Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
Cubrir con Lugol 1.
Lavar con agua el exceso de Lugol.
Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparacin deje de perder
color (3)
Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
Teir con safranina 1min.
Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
Secar la preparacin.
Examinar al microscopio con objetivo 100X, fijndose sobre todo en el color de cada preparacin.
Los tiempos de exposicin a los colorantes son orientativos. Cada vez que se prepara la batera de
colorantes para realizar la tincin Gram presentan algunas diferencias respecto a los preparados en otro
momento, por lo que puede ser necesario ajustar los tiempos.
En un laboratorio de Microbiologa, cada vez que se preparan los colorantes, se suelen hacer pruebas
con cultivos patrn de los dos tipos (Gram+ y Gram-) para ajustar as los tiempos y tener la certeza de
que el resultado de todas las tinciones que se hagan mientras duren esos colorantes son fiables.
Otra posibilidad es adquirir el equipo completo de colorantes ya preparados, pero es mucho ms caro.
Tincin cido-alcohol resistente
Es una coloracin compuesta o estructural, pues en ella intervienen dos colorantes: fucsina fenicada y
azul de metileno y, adems permite descubrir algunos componente presentes en la pared celular de las
llamadas bacterias alcohol- cido resistentes.
Esta coloracin diferencia a las bacterias en dos grupos taxonmicos:
alcohol-cido resistentes
no alcohol cido resistentes
En este tipo de coloracin tienen importancia las bacterias de los gneros Mycobacterium y Nocardia,
dentro del primer gnero se encuentran bacterias tan importantes como las responsables de la
tuberculosis en animales y el hombre, la de la lepra en los humanos y, muchas otras saprofitas
habitantes del suelo.
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Las bacterias del gnero Mycobacterium, tiene la particularidad de presentar en su pared una capa muy
gruesa de lpidos, lo que impide que puedan colorearse utilizando cualquier otro mtodo, por lo que se
utiliza esta coloracin de Zhiel Neelsen, en la cual intervienen colorantes y medios fsicos como el calor
para permitir la penetracin del colorante en esta gruesa capa. Y es tan fuerte la reaccin que las
bacterias no se decoloran ni an utilizando el agente decolorante ms fuerte como el alcohol-cido.
La explicacin tcnica, se debe a la presencia del cido miclico en la capa lipdica de la pared de este
grupo de bacterias, el cual les otorga la condicin de bacterias alcohol- cido resistentes.
MATERIALES
Microscopio
Portaobjetos
Asa de siembra
Cubeta de tincin
Cultivo bacteriano
Pinzas Frasco lavador
Mechero de alcohol
Papel de filtro
Colorantes y reactivos:
a) Azul de metileno
b) Fucsina-fenol
c)Mezcla de cido y alcohol
REALIZACIN
1. Prepara un frotis bacteriano.
2. Cubrir la preparacin con carbofucsina.
3. Calentar la preparacin en un mechero Bunsen durante 5. No debe hervir. Si se evapora, se aade
ms carbofuxina para que no se seque en ningn momento.
4. Lavar con agua el resto de colorante.
5. Decolorar con la mezcla cido-alcohol.
6. Lavar con agua para que no prosiga la decoloracin.
7. Teir con azul de metileno 1.
9. Secar la preparacin.
10. Examinar al microscopio.
Tincin de esporas
Es una coloracin especial o estructural en la cual interviene dos colorantes: verde malaquita y solucin
acuosa de safranina o fuscina bsica, desde luego permite observar con exclusividad la presencia de
estructuras como las esporas, presentes en slo dos gnero bacterianos: Bacillus y Clostridium.
Como sabemos la espora es una fase de resistencia bacteriana cuya funcin principal es la de envolver
el genoma o paquete gentico de la clula vegetativa o clula madre. De esta manera, una vez formada
la espora es liberada al medio, donde resiste condiciones adversas, como las altas temperaturas,
humedad y, tambin bajo ciertas condiciones stas germinan y se convierten en clulas vegetativas.
MATERIALES
Microscopio
Portaobjetos
Asa de siembra
Cubeta de tincin
Cultivo bacteriano
Pinzas
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Frasco lavador
Mechero de alcohol
Papel de filtro
Colorantes:
a) Verde Malaquita
b) Safranina
REALIZACIN
1. Preparar los frotis bacterianos indicados.
2. Teir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la llama del
mechero para que el colorante humee, pero sin que hierva, durante 5 min. Aadir ms colorante si la
muestra se seca.
4. Teir con safranina 1.
6. Secar la preparacin.
7. Observar la preparacin al microscopio.
Tincin de cpsulas bacterianas
MATERIALES
Microscopio
Portaobjetos
Asa de siembra
Cubeta de tincin
Cultivo bacteriano
Pinzas
Frasco lavador
Mechero de alcohol
Colorantes:
a) Solucin de fuscina alcohlica saturada o solucin A
b) Solucin de sulfato de cobre al 20% o solucin B
REALIZACIN
1. Con el cultivo a estudiar, preparar un frotis lo mas delgado posible.
2. Fijar.
3. Colorear con solucin A.
4. Calentar hasta que se emitan vapores por 30
5. Lavar el frotis con la solucin B.
6. Dejar secar y observar.
Coloracin de flagelos
MATERIALES
Microscopio
Portaobjetos
Asa de siembra
Cubeta de tincin
Pinzas
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Frasco lavador
Mechero de alcohol
Lpiz graso
Colorante de Leifson
Agar inclinado de 6-8 hrs. de incubacin.
REALIZACIN
1. Calentar una de las caras del portaobjetos al mechero, trazar con el papel graso un margen sobre su
superficie.
2. Colocar la muestra de bacterias en el centro del rea limitada, inclinar para que se extienda.
3. Secar a temperatura ambiente.
4. Colorear con 0,8-1 ml de colorante la preparacin por 10.
5. Lavar y dejar secar al aire.
Coloracin del citoplasma bacteriano
MATERIALES
Microscopio
Portaobjetos
Asa de siembra
Cubeta de tincin
Cultivo bacteriano
Pinzas
Frasco lavador
Mechero de alcohol
Colorantes:
a) Solucin de Albert I
b) Solucin de Albert II
REALIZACIN
1. Preparar un frotis
2. Teir con solucin Albert I durante 3-5.
3. Lavar y secar.
4. Teir con solucin Albert II por 1.
5. Lavar y secar con papel filtro.
6. Observar.
Preparacin y esterilizacin del material de laboratorio
En microbiologa donde se utilizan cultivos microbianos, medios, aparatos y materiales debemos
procurar que stos, no se encuentren contaminados y procurar que se hallen bacteriolgicamente limpios
antes de ser utilizados. El mtodo aplicado para la limpieza de nuestro material ser la esterilizacin
mediante la exposicin a sustancias qumicas y el empleo de temperaturas elevadas durante cierto
periodo.
Todo esto con el fin de no tener resultados errneos en cuento a la lectura en interpretacin de nuestros
anlisis, debido a la presencias de microorganismos inocuos o patgenos.
MATERIAL
Horno
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Autoclave
Agua destilada
Solucin de lisol al 3%
REALIZACIN
1. Lavar el material (cristales) con abundante detergente, enjuague con agua corriente y, por ltimo con
agua destilada.
2. Colocar el material en una solucin crmica (lisol al 3%), enjuague con agua del grifo y luego con
agua destilada.
3. Sacar en el horno
4. Esterilizar:
Cajas Petri, envolver en papel, colocar en el horno a 160C./1 hr, enfriar lentamente.
Pipetas, introducir una mota de algodn en el cuello de la pipeta y envolver con tiras de papel de 3
cm de ancho desde la base hacia la punta, colocar a 160C./1 hr.
Tubos de ensayo, colocar algodn en la boca del tubo a 1/5 parte de longitud del mismo, depositar
en un recipiente adecuado, tapar con papel y atar, 150-300C./1-1 hrs.
Matraces, tapar del cuello con algodn, colocar un gorro de papel y de papel aluminio. Esterilizar
en el horno a 150-200C./1-1 hrs o, en autoclave a 121C/20
El material metlico (asa de platino, tijeras, bistur, material quirrgico en general) debe ser
esterilizado a la llama directa o por ebullicin, no debe incluirse en la mezcla crmica.
Medios de cultivo, debe estar el los recipientes perfectamente tapados, esterilizar en el autoclave a
121C./20-30.
Preparacin de medios de cultivo
La preparacin de medios de cultivo tiene como finalidad ofrecer a los microorganismos los factores
fsicos y qumicos ideales para su desarrollo y multiplicacin y, de esta forma poder identificarlos
obteniendo cultivos puros de las muestras.
MATERIALES
Balanza
Colormetro
Matraces
Mechero
Pipetas
Buretas
Soporte
PASOS
1. Mezcla de los ingredientes:
a) Pesar el polvo del medio a preparar, segn las indicaciones sealadas en la etiqueta.
b) Colocar en el matraz Erlenmayer
c) Colocar un poco de agua y diluir
d) Agregar el resto del agua
e) Mezclar, homogenizando con agua del calor.
2. Esterilizacin, colocar en el autoclave a 121C./15lb/15.
3. Reparto o envasado, colocar en las placas Petri, dejando reposar y enfriar a temperatura ambiente
para que se solidifique. Si se utilizan tubos, se inclinarn a 15 o completamente vertical,
dependiendo de su futura aplicacin.
4. Chequeo, colocar en la estufa por 24-48 hrs. a 37C. Si se observara alguna contaminacin despus
de este periodo, manifestada con presencia de colonias bacterianas en los medios slidos (placas) o
enturbamiento de los medios lquidos (tubos), se procede al descarte de los mismos.
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5. Conservacin, refrigerara entre4-15C. hasta su utilizacin, que no deber pasar de los 2 meses.
Siembra y aislamiento de bacterias
La siembra de las bacterias en diferentes medios con mtodos especiales para obtener cultivos puros y
de fcil identificacin, se realizan con el objeto de lograr la perpetuacin de la especie bacteriana en
estudio, diagnosticar la enfermedad y establecer investigaciones sobre la clula como tal, su actividad
bioqumica y fisiologa.
CAJA PETRI
Siembra por estras simple. Cerca del mechero tomar una mezcla de microorganismos y realizar
una estra de manera vertical sobre el dimetro de la caja Petri (con medio de cultivo slido),
difundir o difuminar con estras transversales continuas.
b) Siembra por agotamiento. Se utiliza para efectuar transplante de bacterias. Consiste en tomar con
el asa de platino esterilizada una muestra de las bacterias deseadas, realizar en 1/3 de la placa
estras transversales sin levantar el asa, luego rotar 45 y realizar otra estra continua en el otro
tercio (previa esterilizacin del asa), rotar nuevamente repitiendo la maniobra y el espacio claro
efectuar una estra simple.
a)
EN PICADURA
Cerca del mechero, sembrar en los tubos con medio slido, por medio de una puncin directa con el asa
de platino desdoblada.
MEDIO SLIDO INCLINADO
Igual que el anterior, slo que al sacar el asa realizar un estra sobre la superficie inclinada del medio.
CALDO
Tomar una muestra con el asa de platino, depositar en el tubo con caldo, agitar e incubar por 24-48
hr/37C.
Determinacin de la sensibilidad a los agentes antimicrobianos
Es una prueba laboratorial para establecer las acciones de ciertos antibiticos sobre una bacteria
determinada. Como sabemos la forma de destruir estos microorganismos dentro del animal es a travs
de la accin de los macrfagos y de otras clulas fagocitarias. Pero cuando los antgenos sobrepasan las
capacidades del organismo provocando infecciones y enfermedades, se recurren a los antibiticos que,
son sustancias derivadas de bacterias y hongos saprofitos de accin bactericida o bacteriosttica.
Es bueno recordar que muy pocos antibiticos actan nicamente sobre el microorganismo y sus
estructuras y, que la gran mayora a la vez tiene accin daina sobre las clulas y tejidos de los animales
jvenes y dbiles, por esto es indispensable seleccionar el antimicrobiano ms adecuado para eliminar la
bacteria responsable de provocar la enfermedad y, esto slo es posible a travs del antibiograma que, no
es otra cosa ms que enfrentar a la cepa en estudio con un conjunto de antibiticos en un medio
apropiado, por medio de las pruebas in vitro. De esta forma evitaremos el uso indiscriminado de estas
sustancias y nos permitir en primer lugar, seleccionar un buen antibitico y en segundo lugar eliminar la
presencia de bacterias antibiticos resistentes.
METODO DEL DISCO (HENDERSON Y BAUER-KREBY)
1. Aislar la cepa responsable
2. Sembrar la bacteria en un medio slido (Meller- Hinton) caja Petri. Para el grupo de las coliformes y
Proteus spp, en agar desoxicolato o eosina azul de metileno.
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3. Colocar los discos de antibiticos sobre la superficie. Estos se encuentra en diferentes

concentraciones, recomendando el uso de las ms bajas, simulando los niveles que se pueden
encontrar en sangre.
4. Incubar a 37C./24-48 hrs. y leer inmediatamente.
Determinacin de la calidad del agua
El agua es un importante vehculo transmisor de enfermedades sobre todo de tipo gastrointestinale, por
esta razn y para establecer la potabilidad del agua, se realizan anlisis fsicos, qumicos Y
microbiolgicos. En Medicina Veterinaria otorgamos mayor importancia al anlisis microbiolgico del
agua, por su relacin con las patologas que produce. De ah que est destinado a conocer el estado
sanitario de las muestras de agua, buscando contaminantes fecales, entre los que se encuentran:
-
Grupo coliformes: E. Coli, Enterobacter aergenes y Enterobacter cloacae.
Enterococcus S. feacalis
Clostridium perfringens
Todos ellos presentes comnmente en el contenido intestinal de los animales y el hombre.

Se prefiere al grupo de los coliformes porque presentan un nmero mayor, un periodo de vida muy
conocido (el cual permite establecer contaminaciones recientes) y su cultivo y aislamiento es muy
sencillo.
Segn la OPS, dependiente de la OMS, para considerarse potable el agua debe reunir las ss.
condiciones:
a)
b)
c)
No debe presentar mas de 20 coliformes por litro

No debe desarrolla ms de 200 colonias bacterianas por ml
El agua no debe contener bacterias que produzcan pigmentos, que despidan mal olor, ni que
destruyan las protenas.
MATERIAL
Tubos de ensayo de 30 ml con tapa rosca

Tubos Durhang
Placas petri
Gradillas
Pipetas
Mechero
Matraz
Asa de platino
Agares:
a) MacConkey
b) Agar nutritivo
c) Gelatina nutritiva
d) Caldo lactosado
Agua destilada
Agua del grifo
ANLISIS CUALITATIVO
1. Prueba presuntiva: En 5 tubos de 30 ml con tubo invertido de Durhang, colocar 10ml de caldo
lactosado y 10 ml de la muestra de agua para analizar. Llevar a la estufa por 24 hr/37C.
2. Prueba confirmativa: En una placa de agar MacConkey sembrar 0,1 cc de agua, incubar a
37C./24hr.
3. Prueba complementaria: En un tubo de 30 ml con tubo invertido de Durhang, con caldo lactosado
sembrar 0,1 cc del agua. Llevar a la estufa por 24 hr/37C.
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ANLISIS CUANTITATIVO
4. En dos cajas Petri vacas y estriles, colocar 1ml del agua a estudiar, luego agregar en una placa
agar nutritivo y en la otra gelatina nutritiva. Llevar a la estufa por 24 hr/37C.
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS
Reunir los resultados de las pruebas y comparar con los estndares aceptados por los organismos
especializados, en caso de presentarse las pruebas presuntiva y confirmativa positivas se procede a la
complementaria.
1. Prueba presuntiva: Determinacin el % de gas en cada tubo, se considera positivo con ms de 1/3
del tubo con aire.
o
1 tubo con gas en el tubo Durhang = 20 coliformes/l
o
2 tubos con gas en el tubo Durhang = 40 coliformes/l
o
o
o
5 tubos con gas en el tubo Durhang = mas de 160 coliformes/l
Prueba confirmativa: Crecimiento de colonias de color rosado.
2. Prueba complementaria: Presencia de gas, en el tubo de la siembra realizada con bacterias del agar
McConkey.
3. Anlisis cuantitativo:
o
Agar nutritivo, recuento de las colonias bacterianas/l y presencia de olor y color en el medio.
o
Gelatina nutritiva, reconocimiento de reas con protelisis.
Observacin microscpica de hongos
Los hongos a diferencia de las bacterias tienen muy pocos requerimientos en cuanto a medios de cultivo,
pues ello necesitan escasos nutrientes y particularmente requieren condiciones ambientales como ser
temperatura y humedad para desarrollase. De ah que el cultivo del hongo es sencillo, pero la
identificacin no slo es larga y difcil, sino que puede convertirse en peligrosa por la liberacin de
esporas. stas pueden ser inhaladas por las personas que trabajan en este proceso.
En lugar de utilizar el asa bacteriolgica, se utilizan unas pequeas estiletes de punta ms aguda, de un
material mas grueso y duro, con las que se realiza un hueco en el medio (tubo con tapa rosca, para
evitar la liberacin de esporas al ambiente y contaminar al operador) y, dentro de ste se coloca las
muestras sospechosas.
OBJETIVOS
1. Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de mohos.
2. Observar la morfologa de los hongos y distinguir entre hifas septadas y no septadas y entre distintos
tipos de esporas y las estructuras que las originan
MATERIAL
Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y desengrasados con alcohol
Aguja enmangada o lanceta
Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongos
Solucin de lactofenol al azul algodn
Cinta adhesiva transparente
PREPARACIN EN FRESCO DE MOHOS
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TCNICA
1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar
que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. Realizar la misma operacin en
otro portaobjetos que se usar para lavar la muestra.
2. Tomar el material a observar en una mnima cantidad con agujas finas o lancetas procurando
arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno de los portaobjetos. Con
esta especie de lavado se consigue desprender el exceso de conidios que casi siempre llenan estas
preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa, los conidiforos.
3. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que ser ya el definitivo. Si
se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior por los conidiforos),
se aplastarn stos ligeramente sobre la gota o se seccionarn con un bistur.
4. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado.
5. Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas
entre los dos vidrios.
PREPARACIN EN CINTA ADHESIVA
TCNICA
1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar
que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa.
2. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.
3. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de
una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva
concentracin de esporas.
4. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.
5. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.
Gemacin de levaduras
MATERIAL
Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Levadura
Agua azucarada
Aguja enmangada
Lactofenol-safranina
TCNICA
1. Disolver con ayuda de una aguja enmangada un poco de levadura sobre un porta que contenga 2 o 3
gotas de agua ligeramente azucarada.
2. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio.
Repetir los pasos anteriores mezclando sobre el portaobjetos la suspensin acuosa de la levadura con
una gota de lactofenol-safranina. Con este procedimiento se consigue una doble finalidad:
1. Ver mejor las clulas de las levaduras, teidas por la safranina.
2. Retrasar un poco el desprendimiento de las clulas hijas gracias a la accin desfavorable del fenol
para la vida normal de las levaduras.
Preparacin de colorantes
1. Acido-Alcohol: (decolorante para tincin Ziehl-Neelsen)
o cido clorhdrico concentrado ..................................................................................3 ml
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2.
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3.
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4.
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6.
o
7.
o
Etanol 95% ..............................................................................................................97 ml

Albert I: Para observar citopalsma.
Azul de toluidina ....................................................................................................0,15 g
Verde malaquita ........................................................................................................0,2 g
Alcohol etlico (95%) .................................................................................................2 cc
Acido actico glacial ..................................................................................................1 cc
Agua destilada ........................................................................................................100 cc
Albert II
Yodo .............................................................................................................................2 g
Yoduro de potasio ........................................................................................................3 g
Agua destilada ...........................................................................................................300g
Azul de metileno: Colorante de contraste para tincin de flagelos.
Azul de metileno...........................................................................................................1 g
Agua destilada........................................................................................................100 ml
Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples.
Solucin de hidrxido potsico al 1%........................................................................1 ml
Azul de metileno, sol. saturada en etanol al 95%.....................................................30 ml
Agua destilada........................................................................................................100 ml
Colorante para esporas:
Solucin acuosa saturada de verde malaquita
Colorante para flagelos de Leifson:
Solucin A
Fucsina bsica ..............................................................................................1,2 g
Etanol 95%................................................................................................100 ml
Solucin B
cido tnico.....................................................................................................3 g
Agua destilada...........................................................................................100 ml
Solucin C
Cloruro sdico..............................................................................................1,5 g
Agua destilada...........................................................................................100 ml
Para preparar la solucin de uso, se mezclan cantidades iguales de las soluciones A, B y C y se guarda
en frasco cerrado hermticamente en la nevera donde es estable durante varias semanas.
8. Cristal violeta: Para tincin Gram y tincin simple.
o Cristal violeta (violeta de genciana)..........................................................................0,5 g
o Agua destilada........................................................................................................100 ml
9. Eosina: Para observacin de clulas sanguneas.
o Eosina........................................................................................................................0,3 g
o cido actico glacial...........................................................................................0,025 ml
10. Fucsina diluida: Para tincin Gram y tincin simple.
o Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen...........................................................................10 ml
o Agua destilada .......................................................................................................100 ml
11. Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tincin cido-alcohol resistente.
o Fucsina bsica...............................................................................................................1 g
o Etanol 95%...............................................................................................................10 ml
o Fenol 5% en solucin acuosa.................................................................................100 ml
12. Hematoxilina: Para observacin de clulas sanguneas.
o Hematoxilina................................................................................................................2 g
o Agua destilada...............................................................................................................1 l
13. Lactofenol: Para preparaciones microscpicas en fresco de mohos.
o cido lctico..........................................................................................................100 ml
o Fenol.........................................................................................................................100 g
o Glicerol...............................................................................................................200 ml
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o Agua.......................................................................................................................100 ml
14. Lactofenol al Azul Algodn: Para preparaciones en fresco y tinciones de mohos.
o Solucin de azul algodn
Sol. saturada de azul algodn (azul anilina soluble)...................................10 ml
Glicerol........................................................................................................10 ml
Agua............................................................................................................80 ml
Mezclar esta solucin con lactofenol a partes iguales
15. Lugol: Solucin de yodo para tincin Gram.
o Yodo.............................................................................................................................1 g
o Yoduro potsico...........................................................................................................2 g
16. Orcena A: Tincin de cromosomas.
o Orcena.........................................................................................................................2 g
o cido actico.........................................................................................................45,8 ml
o cido clorhdrico 1 mol/l........................................................................................8,3 ml
o Agua......................................................................................................................45,8 ml
17. Orcena B: Tincin de cromosomas.
o Orcena.........................................................................................................................2 g
o cido actico............................................................................................................55 ml
o Agua.........................................................................................................................55 ml
18. Safranina: Colorante de contraste para tincin Gram (preferible a la fucsina) y esporas.
o Safranina..................................................................................................................0,25 g
19. Solucin A: Coloracin de cpsula mtodo de Hiss.
o Solucin alcohlica saturada de fucsina bsica ..............................................................1 vol
o Agua destilada ...............................................................................................................19 vol
20. Solucin B:
o Sulfato de cobre ...............................................................................................................20 g
o Agua destilada ..............................................................................................................100 cc
Disolver al momento de usar.
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RED NACIONAL UNIVERSITARIA

UNIDAD ACADMICA DE SANTA CRUZ

FACULTAD DE CIENCIAS AGRCOLAS Y PECUARIAS

Elaborado por: Lic. Shirley Ortiz Saucedo

FACULTAD DE CIENCIAS AGRCOLAS Y PECUARIAS

Fecha: Marzo de 2013

FACULTAD DE CIENCIAS AGRCOLAS Y PECUARIAS

I. OBJETIVOS GENERALES DE LA ASIGNATURA.

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4.6. Anaerobios aerotolerantes

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9.5 Cocobacilos aerobios Gram negativos

III. EVALUACIN DE LA ASIGNATURA.

A lo largo del semestre se realizarn 2 tipos de actividades formativas:

DE RESULTADOS DE LOS PROCESOS DE APRENDIZAJE O SUMATIVA (examen

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4.10 - 4.11 - 4.12 - 4.13 - 4.14 - 4.15

UNIDAD V: 5.1 - 5.2 - 5.3 - 5.4 - 5.5

5.11 - 5.12 - 5.13 - 5.14

UNIDAD VII: 7.1 - 7.2 - 7.3 - 7.4 - 7.5

7.9 - 7.10 - 7.11 - 7.12

9.7 - 9.8 - 9.9 - 9.10

10.4 - 10.5 - 10.6

9.3 - 9.4 - 9.5 - 9.6

UNIDAD X: 10.1 - 10.2 - 10.3 - 10.3

Actividad del proyecto

4.3 - 4.4 - 4.5 - 4.6 - 4.7 - 4.8 - 4.9

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Elaboracin de productos (Queso, vino,

Entrega de Notas y Cierre de Gestipn

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