da contaminao
por p.553-557,
Salmonellamai-jun,
em ovos2003
do tipo colonial atravs da reao em cadeia da polimerase.
Cincia Rural,
Santa
Maria, v.33, n.3,
553
ISSN 0103-8478
Maristela Lovato Flres 2 Vladimir Pinheiro do Nascimento 3 Ivonyr Irene Trglio Abdel Kader 4
Martha Cardoso5 Luciana Ruschel dos Santos 5 Rui Fernando Flix Lopes 6 Vera Beatriz Wald 7
Taylor Marcelo Corra Barbosa 8
RESUMO
A identificao de poedeiras comerciais infectadas
por salmonelas tem sido um dos pontos fortes da profilaxia e
conseqente reduo de surtos de salmonelose em humanos
associados ao consumo de ovos, sendo que a anlise dos ovos
pode ser mais um dos pontos de deteco da infeco, que,
muitas vezes, cursa sem sinais clnicos. A Reao em Cadeia
da Polimerase (PCR) parece ser uma estratgia til para
deteco de Salmonella, pois vrios autores tm utilizado a
PCR para verificar a presena da bactria em carnes, fezes,
tecidos, sangue, leite e ovos, com diferentes metodologias de
manipulao das amostras. Foram analisados 360 ovos,
procedentes de dez propriedades rurais, produtoras de ovos
tipo colonial, no distrito de Camobi, em Santa Maria - RS. Os
ovos foram divididos em grupos de seis, totalizando sessenta
amostras. O exame bacteriolgico foi realizado conforme
metodologia preconizada pelas normas tcnicas e a
metodologia de extrao de DNA pelo fenol-clorofrmio. A
PCR foi realizada para a amplificao de um fragmento de
DNA de 284 pb. A anlise dos resultados no demonstrou
diferena significativa entre a PCR e o bacteriolgico. Todas
as amostras positivas ao bacteriolgico foram positivas na
PCR, sendo que essa ltima detectou duas amostras a mais,
devido a sua alta sensibilidade e especificidade, especialmente
quando sabido que os ovos apresentam uma populao
microbiana mista que, muitas vezes, impede o isolamento
Parte da Tese de Doutorado do primeiro autor, no Programa de Ps-graduao em Cincias Veterinrias da Universidade Federal
do Rio Grande do Sul (UFRGS).
2
Mdico Veterinrio, Professor Adjunto, Doutor, Departamento de Medicina Veterinria Preventiva, Centro de Cincias Rurais, Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), 97105-900, Santa Maria, RS. E-mail: patoaves@ccr.ufsm.br. Autor para correspondncia.
3
Mdico Veterinrio, Professor Adjunto, PhD., CDPA/UFRGS, Orientador.
4
Farmacutico, Professora Titular, Doutor, FFFCMPA, Co-Orientador.
5
Mdico Veterinrio, CDPA/UFRGS.
6
Mdico. Veterinrio, Professor Adjunto, Doutor, DCM/ICBS/UFRGS.
7
Professor Adjunto, Faculdade de Veterinria, UFRGS.
8
Acadmico de Medicina Veterinria, UFSM, Bolsista PIBIC/CNPq/UFSM.
1
554
bacteriological exam were also positive by PCR, however the
PCR detected more two samples due to higher sensitivity and
specificity, specially when it is known that the eggs show a
mixed population of germs that many times difficult isolation
of salmonellas in the bacteriological exam because of the
competition with normal flora bacteria.
Key words: Salmonellas, free-range eggs, PCR.
INTRODUO
A aplicao da metodologia da reao em
cadeia da polimerase (PCR), na deteco de alimentos,
animais e pessoas infectadas, uma estratgia
atualmente utilizada e citada por muitos autores como
eficiente e rpida. Mtodos para deteco rpida de
Salmonella tm sido desenvolvidos, nos ltimos anos,
tais como ELISA, imunodifuso, hibridizao do DNA,
aglutinao em ltex e imunofluorescncia, porm,
muitos desses mtodos apresentam problemas de
sensibilidade e/ou especificidade, que limitam a sua
aceitao (BLACKBURN, 1993).
A Reao em Cadeia da Polimerase (PCR)
uma estratgia til para deteco de Salmonella em
carnes, fezes, tecidos, sangue e leite, com diferentes
metodologias de manipulao das amostras para
inativar possveis inibidores da reao, como sais
biliares, hemoglobina e componentes sangneos
(AABO et al.,1993; COHEN et al., 1994; FADL et al.,
1995). Os resultados de WOODWARD & KIRWAN,
(1996), MC ELROY et al. (1996) e RIJPENS et al. (1999)
demonstram que a PCR pode ser usada para deteco
de salmonelas em ovos experimentalmente infectados.
PERESI et al. (1998), estudando os fatores
epidemiolgicos envolvidos em 23 surtos de
salmoneloses ocorridos no estado de So Paulo,
observaram que o agente foi veiculado em 22 (95,7 %)
deles por alimentos contendo ovos. Nos relatrios das
enfermidades transmitidas por alimentos da Diviso
de Vigilncia Sanitria da SSMA/RS, 32,3 % das
toxinfeces alimentares envolveram, direta ou
indiretamente, os ovos. Do total de 136 surtos, em 35,3%
houve identificao de Salmonella sp. (PINTO, 1999).
Em 1.050 ovos de aves contaminadas
artificialmente com S. Enteritidis e o vrus da doena de
Gumboro, PHILLIPS & OPTIZ (1995) isolaram a bactria
em 88 (8,3 %) cascas, 5 (0,48 %) albuminas e 2 (0,16 %)
gemas. As taxas de infeco observadas por
FEHLHABER & JANETSCHKE (1995), em 5.339 ovos,
foram de 4,19% na casca e 0,20% no interior de ovos
provenientes de aves infectadas. Por outro lado, em
22.766 ovos de mercado analisados pelos mesmos
autores, 0,47% foram positivos na casca e 0,22% no
seu interior.
Flres et al.
Anlise da contaminao por Salmonella em ovos do tipo colonial atravs da reao em cadeia da polimerase.
Resultado
Positivo
Negativo
Total
AP
RV
2
58
60
3,32
96,68
100,00
3
57
60
4,98
95,02
100,00
555
556
Flres et al.
Positivo
Negativo
Total
Bacteriolgico
PCR
Prop.
Amostra
Prop.
Amostra
1
9
10
1
59
60
1,66
98,33
100,00
2
8
10
3
57
60
4,98
95,02
100,00
Bacteriolgico
Positivo
Negativo
Total
Positivo
Negativo
Total
1
2
3
0
57
57
1
59
60
p = 0,1573
Kappa = 0,487
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
AABO, S., et al. Salmonella identification by the polymerase
chain reaction. Molecular and Cellular Probes, London,
v.7, p.171-178, 1993.
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BRASIL, Portaria n.451, de 19/09/97. Ministrio da Sade,
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Anlise da contaminao por Salmonella em ovos do tipo colonial atravs da reao em cadeia da polimerase.
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