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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS


UNIDAD DE INMUNOLOGA Y MICROBIOLOGA MDICA

PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO A LOS ANTIMICROBIANOS


ANTIBIOGRAMA
De Bauer & Kirby
Dra. Carmen De Tercero
Dra. Sindy Suchini
Dra. Paola Lee
Dra. Miuril Lpez
Lic. Su Quan
INTRODUCCION:
La seleccin de un antimicrobiano para el tratamiento del paciente depende de numerosos
factores, entre estos se puede mencionar:
1. Localizacin de la infeccin
2. Factores de respuesta del hospedero:
a. Estado inmunolgico
b. Estado de la funcin renal y/o heptica
c. Historia de reacciones alrgicas
d. Enfermedades concomitantes
3. Caractersticas de absorcin del antimicrobiano y su va de excrecin
4. Propiedades farmacocinticas y la posologa del antimicrobiano
5. La sensibilidad local y los patrones de resistencia
6. Los costos de adquisicin y la administracin del antimicrobiano
7. La susceptibilidad del microorganismo frente al antimicrobiano
Debe tomarse en cuenta que en algunas especies de microorganismos,
antimicrobiana es una propiedad innata y en otras la pueden adquirir.

la resistencia

GENERALIDADES:
Existen diversas categoras de pruebas utilizadas para determinar la actividad antimicrobiana:
1) Prueba de dilucin y prueba de difusin en disco: valora la actividad inhibidora frente a un
microorganismo determinado.

2) Pruebas que determinan la actividad letal de un antimicrobiano frente a un


microorganismo.
3) Pruebas que determinan la actividad -lactamasa en un determinado microorganismo,
como elemento pronstico de su susceptibilidad frente a algunos antibiticos lactmicos.
4) Pruebas para determinar directa o indirectamente la cantidad de antimicrobiano en un
lquido biolgico, habitualmente suero.
La conducta del mdico ante las bacterias en las pruebas antimicrobianas, suelen interpretarse
como:
SUSCEPTIBLES: La infeccin producida por un microorganismo puede tratarse
adecuadamente con la dosis del antimicrobiano recomendado para este tipo de infeccin
y de microorganismo infectante, excepto en aquellos casos en los que este
contraindicado por otras razones.

DE SUSCEPTIBILIDAD INTERMEDIA: La infeccin debida a un microorganismo puede ser


tratada mediante concentraciones alcanzables de determinados antimicrobianos cuando
se administran estos en dosis ms altas o cuando las infecciones se encuentran en
regiones del organismo donde se concentran los antimicrobianos (ej. La orina).

RESISTENTES: Supone que la infeccin producida por un microorganismos no responder


adecuadamente al antimicrobiano. No utilizando el mismo.

Muchos han sido los factores que han contribuido al incremento de cepas multiresistentes a
antimicrobianos y antibiticos, como su uso inadecuado, migracin nacional e internacional que
facilita la diseminacin, aglomeraciones de personas, entre otros. Las bacterias pueden ser
resistentes intrnsecamente a uno o ms agentes antimicrobianos y pueden adquirir la resistencia
por mutaciones, intercambio gentico horizontal (conjugacin, transduccin) por genes de
resistencia de otros organismos, as como por adaptaciones metablicas al frmaco.
SELECCIN DE ANTIMICROBIANOS:
La seleccin final de los antimicrobianos a utilizar para cada tipo de microorganismo, depender
del Laboratorio de Microbiologa conjuntamente con el Comit de Infecciosas de cada hospital.
Cuando hay un brote hospitalario de algn microorganismo que usualmente es susceptible al
antimicrobiano ideal y se muestra actualmente resistente. Se enva una notificacin al Centro de
referencia en Guatemala es el Laboratorio Nacional de Microbiologa (Barcenas, Guatemala)
quienes son los responsables de investigar la nueva cepa e indicar, segn caractersticas del
mismo, que antimicrobianos utilizar, los cuales deben cumplir los estndares que establece la El
Instituto de Estndares Clnicos y de Laboratorios (Clinical and Laboratory Standard Institute/CLSI/,
radicado en Pennsylvania, EUA).

Los antimicrobianos recomendados por la CLSI, se agrupan en cuatro grupos:

GRUPO A: Se encuentran aquellos antimicrobianos que se han de ensayar y que deben


ser informados de forma rutinaria.

GRUPO B: Est constituido por antimicrobianos que pueden ser valorados de forma
rutinaria, solamente se informarn si los del grupo A no son activos, no son apropiados
para un lugar determinado de la infeccin, o si se constata un fallo teraputico con el
grupo A.

GRUPO C: Estn incluidos los antimicrobianos que sern estudiados cuando aparezcan
problemas especficos de resistencia, por ejemplo, brotes epidmicos, en pacientes con
alergia a otros antibiticos o en infecciones inusuales.

GRUPO D: Antimicrobianos utilizados en infecciones del tracto urinario.

Dentro de estos grupos y para un determinado microorganismo existe una batera de antibiticos
a probar. Por ejemplo, las enterobacterias

Dependiendo del mecanismo de accin se resume en dos grandes grupos de antimicrobianos (ver
fig. No. 1):

Bactericidas:
Ejercen una accin letal e irreversible sobre el microorganismo.
Fosfomicina, Vancomicina, B-Lactmicos, Aminoglucsidos, Rifampicina, Acido
Nalidxico, Quinolonas, Nitrofurantoinas.

Bacteriostticos: Inhiben el crecimiento pero no matan al microorganismo, permitiendo


que las propias defensas del hospedero pueden eliminar a las bacterias. Tetraciclina,
Cloranfenicol, Sulfonamidas, Trimetoprim, Lincomicina, Clindamicina, Macrlidos.

Fig. No. 1: Sitios de accin de los antimicrobianos en los microorganismos

ANTIBIOGRAMA:
El Instituto de Estndares Clnicos y de Laboratorios, define el antibiograma como: un perfil
general de los resultados de la susceptibilidad antimicrobiana de una especie microbiana frente a
una batera de agentes antimicrobianos.
En general, se entiende por antibiograma el resultado de las pruebas de susceptibilidad in
vitro llevadas a cabo para conocer el comportamiento de un microorganismo frente a
determinados antimicrobianos, cuyos resultados se expresan en trminos de "sensibilidad" y
"resistencia".
Las formas bsicas de medir cuantitativamente la actividad in vitro de los antimicrobianos son:

Concentracin mnima inhibitoria (MIC):


Es la base de la medida de la susceptibilidad de una bacteria a un determinado
antimicrobiano.
Se define como la menor concentracin de una gama de diluciones del antimicrobiano
que provoca una inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano visible.
Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una escala de actividad
del antimicrobiano frente a diferentes especies bacterianas.

Concentracin mnima bactericida (MBC):


Es la concentracin ms baja del antimicrobiano que es capaz de matar el 99.9% del
inculo original en un periodo de tiempo determinado.

MTODOS DE ANLISIS DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA


Podemos distinguir diferentes tipos de mtodos en funcin de la tcnica utilizada y de la
informacin que dan (Tabla No. 2).
CUALITATIVO

METODO

TECNICA
ANTIBIOGRAMA DIFUSION DE MICRODISCOS (KIRBY-BAUER)

SEMICUANTITATIVO

GRADIENTE ANTIBIOTICO (E-TEST)

CUANTITATIVO

1.

2.
3.

DILUCION DE CALDO:

MACRODILUCION EN TUBO

MICRODILUCION EN PLACA
DILUCION EN AGAR
SISTEMA DE AUTOMATIZADOS (Vitek:::)

Tabla No. 2: MTODOS DE ANLISIS DE LA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA.

INFORMACIN
RESISTENCIA
VALOR INTERMEDIO
SENSIBILIDAD
APROXIMACION
A
LA
CONCENTRACION
MINIMA
INHIBITORIA (CMI)
DETERMINACION DE LA CMI

Tabla tomada del Instructivo de Laboratorio de Resistencia Bacteriana, de la


Dra. Dbora Esmaralda Aldana MD, PhD
METODO DE DIFUSION EN AGAR:
Consiste en el mtodo de difusin con discos descrito por Bauer y Kirby, al que se le han realizado
sustanciales modificaciones posteriores segn criterios del CLSI, estos resultados obedecen a un
proceso de simple interpretacin por medio de puntos de corte de los halos de inhibicin
aparecidos en el medio de cultivo.
En dcadas pasadas la interpretacin de estos resultados resultaba muy fcil, ya que solo bastaba
utilizar el antimicrobiano al cual el antibiograma sealaba como sensible.
En la actualidad este proceso se ha complejizado sobremanera debido al incremento de la
resistencia bacteriana, a punto de partida de un sinnmero de mecanismos creados por los
microorganismos para eludir el efecto de los antimicrobianos y su diseminacin entre la poblacin
microbiana, que hacen que no siempre se puedan tomar en cuenta los resultados del
antibiograma sin un previo anlisis.
Fundamentos tericos de la prueba de difusin en discos de Kirby-Bauer
La prueba de difusin en disco se basa en la capacidad de muchos agentes antimicrobianos de
difundir en el agar creando un gradiente continuo de concentracin. Si el disco que contiene el
antibitico se deposita sobre una placa recin inoculada, se producir la inhibicin del
crecimiento. Esta rea, al ser proporcional a la CMI (concentracin inhibitoria minima) permitir
la distincin de cepas susceptibles, resistentes o intermedias.
Puntos de control:
a) Concentracin del inculo. La concentracin ideal del inoculo se espera que se encuentre
idealmente a una concentracin de 108 de microorganismos. Esto se realiza segn los
estndares de Mc Farfland; donde la concentracin ideal del inculo corresponde a una
dilucin de turbidez que puede ir de 0.5 a 10, (estos estndares son creados al mezclar
soluciones de cloruro de bario al 1% con cido sulfrico al 1% en volmenes
especficos), para asegurar la densidad correcta (ver fig. No. 2).
Fig. No. 2: Estndares de Mc Farfland

b) Medio. El medio adecuado para realizar la prueba es el Agar de Mueller-Hinton (MH) (ver
fig. No. 3). Para determinadas bacterias con requerimientos nutricionales especficos se
puede utilizar el MH-sangre o el MH-chocolate. Se incuban las placas durante 16-24 horas
a 35C y al cabo de este tiempo se estudia el crecimiento en ellas.
Fig. No. 3: Agar de Mueller-Hinton

c) Concentracin de los discos de antibitico. Para cada antimicrobiano hay fijadas unas
concentraciones estndar, segn los estndares de CLSI (Instituto de Estndares Clnicos y
de Laboratorio). La variacin de estas concentraciones implica variar los criterios de
interpretacin. (Ver fig. No. 4)

Figura No. 4: Concentracin de los Discos de Antibiticos

Figura No. 5: Tabla de susceptibilidad y resistencia antimicrobianos en Agar de Muller-Hinton

Realizacin de la Prueba:
Cuando se han aislado las colonias de un organismo que ha sido identificado como patgeno
potencial, debe de realizarse lo siguiente:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Seleccionar las colonias


Preparar una suspensin del inculo
Estandarizar las suspensin del inculo
Inocular la placa
Colocar discos de antimicrobianos
Incubar la placa
Medir las zonas halo- de inhibicin
Interpretar los resultados

NOTA: VER VIDEO PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO A LOS ANTIMICROBIANOS

BIBLIOGRAFIA

1. Instructivo de Laboratorio de Resistencia Bacteriana (Mtodo de Bauer y Kirby). Aldana


Dbora Esmeralda. Unidad Didctica de Inmunologa y Microbiologa. Universidad de San
Carlos de Guatemala.
2. Mecanismo de resistencia a antimicrobianos en bacterias. Gerardo Becerra, Arturo
Plascencia, Antonio Luvanos, Miguel Domnguez, Ivn Hernndez. Enfermedades
Infecciosas y Microbiologa, vol. 29, nm. 2, abril-junio 2009
3. Manual de Laboratorio para la Identificacin y Prueba de Susceptibilidad a los
Antimicrobianos de Patgenos Bacterianos de Importancia para la Salud Pblica en el
Mundo en Desarrollo. Perilla Mindy J., Ajello Gloria et al. Organizacin Mundial de la
Salud 2004
4. Actualizacin En Resistencia Bacteriana Y Normas CLSI.
(Instituto de Estndares Clnicos y de Laboratorio). 2010

Ovalle Mara Victoria. CLSI

5. Pruebas de sensibilidad in vitro a los antimicrobianos. Henry Bernand John.


Laboratorio en el Diagnstico Clnico. Editorial Marban. 2007

El