ARTIGOS

RESSONNCIA MAGNTICA NUCLEAR FERRAMENTA VERSTIL EM QUMICA

FARMACUTICA E IMAGIOLOGIA MDICA
KONSTATIN LUZYANIN E MARTA ABRANTES*

Ressonncia Magntica Nuclear uma tcnica analtica verstil que pode ser utilizada
desde a anlise de compostos qumicos simples elucidao estrutural e investigao da
dinmica de protenas e imagiologia de rgos de seres vivos de um modo no invasivo e
no destrutivo. O presente artigo pretende fornecer aos leitores uma breve introduo terica sobre esta tcnica e apresentar algumas aplicaes da mesma nas reas da Qumica
Farmacutica e Imagiologia Mdica.

O QUE A RESSONNCIA MAGNTICA

NUCLEAR?
A Ressonncia Magntica Nuclear
(RMN) uma tcnica analtica que
permite obter informao estrutural e
dinmica sobre a matria, e que se
baseia na deteco das propriedades
magnticas dos ncleos (Figura 1)
[13].

Figura 1 Espectrmetro de RMN (500 MHz) no

Instituto Superior Tcnico (IST/UTL) pertencente
Rede Nacional de Ressonncia Magntica
Nuclear (PTNMR). Para mais informaes sobre
a rede consultar o site http://cqe.ist.utl.pt/
networks/nmr/index_nmr.php

Foi descoberta em 1945 por Bloch e

Purcell (Prmios Nobel da Fsica em
1952) na sequncia dos trabalhos de
Isidor I. Rabi (Prmio Nobel da Fsica
em 1944). Ao longo do tempo, muitos
outros investigadores contriburam de
forma decisiva para o desenvolvimento e para a aplicao desta tcnica,

Centro de Qumica Estrutural, Instituto Superior Tcnico, Universidade Tcnica de Lisboa

Av. Rovisco Pais, 1, 1049-001 Lisboa, Portugal
E-mail: marta.abrantes@ist.utl.pt

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como se pode constatar pela lista de

investigadores que foram laureados
com o Prmio Nobel por contribuies
para a RMN (Tabela 1) [4].

Apesar de existirem ncleos que no

exibem qualquer campo magntico
(por exemplo, o 12C), a maior parte dos ncleos comportam-se como

Tabela 1 Prmios Nobel relacionados com a Ressonncia Magntica Nuclear

1943

Otto Stern, EUA

Prmio Nobel da Fsica "pelas suas contribuies na

descoberta do momento magntico do proto.

1944

Isidor I. Rabi, EUA

Prmio Nobel da Fsica "pelo seu mtodo de ressonncia

para registar as propriedades magnticas de ncleos
atmicos.

1952

Felix Bloch, EUA

Edward M. Purcell, EUA

Prmio Nobel da Fsica pela descoberta de novos mtodos

para medies magnticas nucleares precisas e pelas
respectivas descobertas associadas.

1991

Richard R. Ernst, Suia

Prmio Nobel da Qumica pelas suas contribuies para

o desenvolvimento da metodologia da espectroscopia de
RMN de alta resoluo.

2002

Kurt Wthrich, Suia

Prmio Nobel da Qumica "pelos seus desenvolvimentos da

espectroscopia de RMN para a determinao tridimensional
da estrutura de macromolculas biolgicas em soluo.

2003

Paul C. Lauterbur, EUA

Peter Mansfield, UK

Prmio Nobel da Fisiologia ou Medicina "pelas descobertas

relativas a imagiologia de ressonncia magntica.

A RMN explora as propriedades magnticas dos ncleos dos tomos. Os

ncleos dos tomos podem ser vistos
como pequenos pies com carga que
rodopiam em torno do seu eixo, gerando o seu prprio pequeno campo
magntico (Figura 2).

pequenos magnetes (por exemplo, o

H ou o 13C).

Normalmente, estes ncleos esto

dispostos de forma aleatria (Figura
3).
No entanto, quando colocados sob a
influncia de um forte campo magntico externo, so obrigados a alinhar-se
em orientaes especficas.

Figura 2 Representao de um ncleo a

rodopiar como um pio ( esquerda), que se
comporta como um magnete tendo um plo sul
e um plo norte ( direita)

Estas orientaes alinhadas com o

campo magntico caracterizam-se por
terem diferentes nveis energticos.

25

um sinal elctrico. Aps tratamento

matemtico (transformao de Fourier - FT) possvel traar um grfico
da intensidade do sinal em funo da
frequncia aplicada a que chamamos
espectro de RMN.

Figura 3 Os ncleos esto normalmente dispostos de forma aleatria ( esquerda). Quando sujeitos
a um intenso campo magntico (aqui representado pela seta a cheio), so obrigados a alinhar-se em
orientaes especficas que podem ser paralelas ou anti-paralelas ao campo magntico aplicado. Estas
orientaes so determinadas pelo estado energtico do ncleo

Quando expostos a uma radiao

electromagntica na frequncia rdio,
os ncleos recebem energia e so
obrigados a saltar para uma outra
orientao (de nvel energtico superior) (Figura 4). Ao retomarem a sua
orientao original os ncleos libertam energia, emitindo uma radiao
caracterstica. Este fenmeno designa-se por ressonncia magntica nuclear e d o nome a esta tcnica de
caracterizao. Diz-se tambm que a
RMN uma tcnica espectroscpica,
uma vez que faz uso de radiao electromagntica (neste caso na frequncia rdio).

Com base neste fenmeno, numa

experincia de RMN sujeita-se uma
amostra a um intenso campo magntico (Figura 5). Seguidamente,
expe-se a amostra a um varrimento de radiao electromagntica na
frequncia rdio. No momento em
que a frequncia do aparelho corresponde exactamente frequncia de
ressonncia caracterstica do ncleo
(que se designa por frequncia de
Larmor), os ncleos mudam para outra orientao. Desligando a fonte de
radiao electromagntica, os ncleos retomam a sua orientao original
emitindo uma radiao que origina

As frequncias de ressonncia dos

ncleos dependem, no s da natureza do ncleo em estudo, mas tambm
do ambiente qumico, aparecendo em
stios diferentes do espectro de RMN.
As frequncias de ressonncia so
expressas numa unidade que se designa por desvio qumico (e expressa em ppm). Este desvio qumico indica a localizao de um sinal de RMN
em relao a um padro, que por conveno tem um desvio qumico igual
a 0 ppm.
Assim sendo, a RMN permite determinar o nmero e o tipo de grupos
qumicos num composto, sendo desta forma uma tcnica valiosa para a
obteno de informao sobre a estrutura de molculas. Nas figuras 6 e
7 so apresentados, a ttulo de exemplo, espectros de RMN de 1H e de 13C
do etanol.

Figura 4 O fenmeno da ressonncia magntica nuclear. Quando ncleos expostos a um campo magntico intenso (seta a cheio) so tambm expostos
a radiao electromagntica na frequncia rdio (seta ondulada) ( esquerda), os ncleos saltam para outra orientao (ao centro). Ao retomarem a sua
orientao original emitem uma radiao caracterstica

Figura 5 A amostra a analisar colocada no interior do aparelho dentro de um tubo e diluda com solvente deuterado (a utilizao de um solvente
deuterado permite minimizar os sinais que provm deste mesmo solvente). A amostra contm ncleos activos, dispostos de forma aleatria. Aps aplicao
de um campo magntico (esttico), os ncleos alinham-se na direco do campo magntico. Um emissor de radiaes electromagnticas na frequncia
rdio emite uma sequncia de ondas com diferentes frequncias. Quando a frequncia de ressonncia do ncleo (tambm designada por frequncia de
Larmor) atingida, os ncleos saltam para outra orientao. Ao retornarem a sua orientao original emitem uma radiao que detectada originando
um sinal elctrico (designado por sinal FID). O tratamento matemtico deste sinal, aplicando a transformada de Fourier (FT), origina um espectro de sinal em
funo da frequncia aplicada com os sinais correspondentes aos ncleos em estudo, que se designa por espectro de RMN

26

QUMICA 117

Figura 6 Espectro de RMN de 1H de etanol (CH3CH2OH) (diludo em clorofrmio deuterado) que permite detectar os ncleos de 1H. So visveis trs sinais.
Dois destes sinais (um quadrupleto a cerca de 3.7 ppm e um tripleto a 1.3 ppm) correspondem a grupos protes que tm um mesmo ambiente qumico
(protes dos grupos CH2 e CH3). O sinal a 1.6 ppm corresponde aos protes da gua presente no clorofrmio deuterado. O proto do grupo OH do etanol
no visvel porque est sujeito a uma troca com os protes da gua. O sinal relativo ao solvente deuterado aparece fora da escala apresentada

Figura 7 Espectro de RMN de 13C de etanol (CH3CH2OH) (diludo em clorofrmio deuterado) que permite detectar os ncleos de 13C. So visveis trs
conjuntos de sinais. Dois destes (a cerca de 18.5 e 58.6 ppm) correspondem aos dois carbonos presentes no etanol. O conjunto de sinais a 77 ppm provm
do solvente deuterado

PARA QUE SE USA A RMN?

A espectroscopia de RMN hoje usada de forma generalizada por todos
os que se dedicam a estudar directa
ou indirectamente compostos ou fenmenos qumicos. A espectroscopia
de RMN uma tcnica analtica sofisticada e poderosa que tem aplicaes
em diferentes reas. A diversidade
de aplicaes s foi possvel devido
ao contnuo desenvolvimento de diferentes tcnicas que se baseiam no
fenmeno de RMN. Este desenvolvimento permitiu que ao longo dos
tempos cada tcnica fosse optimizada
de acordo com as necessidades da

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respectiva aplicao. A RMN pode ser

utilizada tanto para a anlise qualitativa como quantitativa e as suas aplicaes vo desde a anlise de compostos qumicos simples a seres vivos
intactos, de um modo no invasivo e
no destrutivo.
Os campos mais comuns de aplicao da RMN incluem:
1) Anlise estrutural aplicada qumica e biologia;
2) Imagiologia mdica: tomografia de
ressonncia magntica nuclear ou
imagiologia de ressonncia magntica nuclear (maior rea de aplicao);

3) Prospeco geofsica (por exemplo, de petrleo): geotomografia de

ressonncia magntica nuclear.
O presente artigo vai focar-se sobre
as duas primeiras aplicaes.

ANLISE ESTRUTURAL APLICADA QUMICA E BIOLOGIA

A utilizao da espectroscopia de
RMN est muito associada determinao da estrutura molecular em soluo mas os estudos efectuados em
estado slido so tambm frequentes.
A RMN pode ser aplicada no s na
elucidao estrutural de pequenas e

27

mdias molculas, como tambm no

estudo de macromolculas, como protenas ou cidos nucleicos. Para alm
de ser muito til na elucidao da
estrutura molecular, a RMN pode ser
tambm usada para estudar processos dinmicos de molculas e para
estudar interaces/reaces entre
molculas.
As experincias mais comuns de espectroscopia de RMN baseiam-se na
observao directa de ncleos de 1H
em soluo. As caractersticas favorveis deste ncleo (elevada abundncia natural, elevada razo giromagntica) possibilitam medies de alta
sensibilidade e baixo tempo de aquisio para este ncleo e so responsveis pelo vasto nmero de aplicaes
desta tcnica que vai desde compostos muito simples com baixo peso molecular at protenas.
Por exemplo, no espectro de 1H do
etanol (Figura 6) so obtidos trs
sinais com 3 desvios qumicos diferentes: um para o grupo CH3, o outro
para o grupo CH2 e um ltimo para o
grupo OH. Um grupo CH3 tem tipicamente um desvio qumico por volta
de 1 ppm, um grupo CH2 ligado a um
grupo OH tem um desvio qumico por
volta de 4 ppm e um grupo OH tem
um desvio qumico entre os 2 e os 3
ppm dependendo do solvente utilizado na experincia. O formato do sinal
e a sua rea do mais informao
sobre a estrutura qumica. A rea do
sinal est relacionada com o nmero
de protes relativos a um sinal. No
exemplo em questo, o sinal do grupo
CH2 tem uma rea de integrao que
equivale a 2/3 do tamanho do sinal do
grupo CH3. O formato dos sinais (singuletos, dupletos, tripletos, etc.) est
essencialmente relacionado com a vizinhana de ncleos do mesmo tipo.
O mesmo tipo de raciocnio pode ser
aplicado para os outros tipos de ncleos que so frequentemente estudados
por RMN, tais como, por exemplo, 13C,
15
N, 31P, 19F, 195Pt. No entanto, importante mencionar que a relao entre
a rea de um sinal e o nmero de ncleos a que corresponde s possvel
para espectros de RMN de 1H.
Uma aplicao interessante da espectroscopia de RMN consiste em

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estabelecer a pureza isomrica de espcies farmacologicamente activas.

Por exemplo, a cisplatina, frmaco
antitumoral (Figura 8A), um complexo metlico que contm platina como
centro metlico. Um dos principais
problemas associados aplicao
biolgica destes complexos metlicos
est associado ao facto de estes complexos poderem existir sob forma de
vrios ismeros, por exemplo, cis- e
transplatina (Figura 8A e B, respectivamente).

A presena do ismero trans (transplatina) e/ou de outros complexos de Pt

origina picos com diferentes desvios
qumicos, podendo desta forma ser
claramente distinguidos da cisplatina.
As tcnicas de RMN que mencionmos at agora so tcnicas unidimensionais (1D). Estas tcnicas revelam
informao sobre o tipo e proporo
de ncleos sob observao, mas nem
sempre do informao sobre a forma
como os ncleos esto ligados uns
aos outros, ou seja nem sempre pro-

Figura 8 Complexos de platina caracterizados por RMN de 195Pt

Para aplicaes farmacolgicas os

compostos devem ser utilizados em
formas isomericamente puras j que
diferentes ismeros podem ter efeitos
teraputicos/txicos muito diversos.
Por essa razo, existe a necessidade
de utilizar mtodos simples e fidedignos para confirmar a pureza destes
compostos. No caso das espcies baseadas em platina pode ser utilizada
a espectroscopia de RMN de 195Pt. O
desvio qumico da 195Pt sensvel
natureza dos tomos doadores ligados platina e ao isomerismo geomtrico. Os desvios qumico da RMN
de 195Pt surgem numa larga escala de
12000 ppm (Tabela 2), o que permite
uma distino clara entre sinais sem
sobreposio dos mesmos.

videnciam informao suficiente sobre as ligaes intramoleculares. Esta

informao pode ser obtida usando a
tcnicas de espectroscopia de RMN
multidimensional, tais como, 1H,1HCOSY, 1H,13C-HMBC, 1H,15N-HSQC.
Na Figura 9 exemplifica-se uma destas tcnicas aplicada identificao
da molcula ciclosporina (representada na Figura 10).
A espectroscopia de RMN tem vindo
a enfatizar a aplicao em sistemas
biomoleculares e tem um papel muito
importante na biologia estrutural. Com
os desenvolvimentos, tanto na metodologia, como na instrumentao nas
ltimas duas dcadas, a RMN tornouse numa das mais poderosas tcni-

Tabela 2 Desvio qumico de 195Pt RMN dos compostos seleccionados

Composto
Na2PtCl6

Desvio qumico, ppm

Referncia

[5]

cis-PtCl2(NH3)2 (cisplatina) (A)

2149

[6]

trans-[PtCl2(NH3)2] (transplatina) (B)

2145

[6]

36

[7]

2492

[8]

trans-[PtCl4{NH=C(OH)Et}2] (C)
[PtCl2{HOHNCMe2CMe2NHOH}] (D)

O espectro de RMN de 195Pt da cisplatina isomericamente pura origina

um sinal a -2149 ppm relativamente a
Na2PtCl6 (que usado como padro).

cas espectroscpicas para a anlise

de biomacromolculas, permitindo a
caracterizao de biomacromolculas e seus complexos at 100 kDa.

QUMICA 117

Em conjunto com a cristalografia de

raios X, a espectroscopia de RMN
uma das duas tecnologias de ponta
para a determinao da estrutura de
biomacromolculas a nvel atmico.
No entanto, a espectroscopia de RMN
o nico mtodo com resoluo atmica para a elucidao estrutural de
biomolculas em soluo aquosa em
condies prximas das condies
fisiolgicas. Adicionalmente, a RMN
providencia perfis de dinmica e interaces moleculares que contm
informao preciosa sobre o funcionamento de biomacromolculas, informao determinante no desenvolvimento de novos frmacos.

IMAGIOLOGIA MDICA: IMAGIOLOGIA DE

RESSONNCIA MAGNTICA (IMR)
NUCLEAR

A imagiologia de ressonncia magntica (IRM) uma potente tcnica

de imagiologia mdica que se baseia
essencialmente na espectroscopia de
RMN de 1H.
Como descrevemos anteriormente, a
RMN de 1H detecta a presena de ncleos de protes.
Assim sendo, o que a IRM permite a
visualizao da concentrao de protes distribudos nos tecidos.

Muitos dos protes visualizados so

os protes da gua, por isso, a IRM
particularmente adequada para a
imagiologia de tecidos moles, tais
como o crebro ou a medula ssea
(Figura 11).
Os ossos, no possuindo tanta gua
e, por isso, protes, emitem um sinal
muito mais fraco aparecendo muito
mais escuros.
Apesar da resoluo espacial da IRM
no ser to boa como a do raio-X convencional, a sua resoluo de contraste bastante melhor.

Figura 9 Espectro de RMN de 1H,13C-HMBC da ciclosporina. As linhas de interseco (que aparecem como pequenos crculos) correspondem
a carbonos e protes que esto a duas ou trs ligaes uns dos outros mas no directamente ligados entre si

Figura 10 Estrutura de ciclosporina

QUMICA 117 - ABR/JUN 10

Figura 11 Exemplo de uma IRM da cabea.

Imagem preparada pelos autores a partir de
imagem animada de Dwayne Reed (licena
Creative Commons Attribution-Share Alike 3.0
Unported)

29

Figura 12 Em relao a uma experincia de RMN de 1H convencional a IRM permite obter informao sobre a localizao
espacial de protes em tecidos. A aplicao de um campo magntico em gradiente origina um sinal que contm informao
no s sobre a existncia de protes mas tambm sobre a sua localizao

A figura 12 ajuda a visualizar o fenmeno por detrs da IRM [9]. Na RMN

de 1H sujeita-se uma amostra (e desta
forma os seus protes) a um intenso
campo magntico homogneo e, de
seguida, a uma radiao com frequncia rdio (tal como descrevemos anteriormente). Como aplicamos um campo magntico igual a toda a amostra
(esttico) e a frequncia do sinal dos
protes depende deste campo magntico, todos os protes com as mesmas
caractersticas (ou ambiente qumico)
originam espectros com um s sinal.
Este sinal revela a presena de protes mas no d informao sobre
a sua localizao. Na IRM aplica-se
a um tecido um campo magntico
com um gradiente calibrado. Com o
aumento do campo magntico (da
esquerda para a direita) a frequncia
emitida pelos ncleos (aps exposio
rdio frequncia) aumenta tambm
da esquerda para a direita na amostra. Ou seja, para duas zonas com o
mesmo tipo de protes so emitidos
dois sinais a diferentes frequncias.

Este o princpio para a localizao

dos protes. Na figura 12 s est esquematizada a localizao ao longo
de um eixo horizontal. No entanto,
se for utilizado um campo magntico
rotativo, recolhe-se informao sobre
os vrios eixos, que se for combinada
com o auxlio de informtica, produz
um mapa tridimensional da densidade
de protes (que pode ser visualizada
em cortes).

[3]

[4]
[5]

[6]

Uma vez que, como mencionmos

antes, a densidade de protes varia
com o tipo de tecido (por causa dos
diferentes contedos de gua dos
mesmos), diferentes sinais so tambm obtidos para diferentes tipos de
tecidos.

[7]

[8]

REFERNCIAS
Recomendamos as referncias [1-3]
para os que pretendem aprofundar os
conhecimentos na rea de RMN.
[1]

Timothy D.W. Claridge, High-resolution NMR Techniques in Organic

Chemistry, Elsevier, 1999.

Sociedade Portuguesa de Qumica

Avenida da Repblica, n45 - 3 Esq.
1050-187 Lisboa - Portugal
30

[2]

[9]

J.N.S. Evans, Biomolecular NMR

Spectroscopy, Oxford University
Press, Oxford, 1995.
R. Abraham, J. Fisher, P. Loftus, Introduction to NMR Spectroscopy, Wiley,
Chichester, 1988.
(http://nobelprize.org)
R.K. Harris, E.D. Becker, S.M. Cabral
de Menezes, R. Goodfellow, P.
Granger. Pure Appl. Chem. 2001, 73,
17951818.
D.P. Bancroft, C.A. Lepre, S.J. Lippard, J. Am. Chem. Soc. 1990, 112,
68606871.
K.V. Luzyanin, M. Haukka, N.A.
Bokach, M.L. Kuznetsov, V.Yu. Kukushkin, A.J.L. Pombeiro, J. Chem. Soc.,
Dalton Trans., 2002, 18821887.
K.V. Luzyanin, P.V. Gushchin, A.J.L.
Pombeiro, M. Haukka, V.I. Ovcharenko, V.Yu. Kukushkin, Inorg. Chem.
2008, 47, 69196930.
Para explicar a tcnica de IRM a um
pblico mais jovem recomendamos
vivamente o jogo didctico sobre este
tema que est alojado no site do Prmio Nobel em (http://nobelprize.org/
educational_games/medicine/mri/).

URL: www.spq.pt
E-mail: sede@spq.pt

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