Un mtodo basado en imgenes digitales para la determinacin de

la acidez total en vinos tintos mediante valoracin cido-base sin

indicador
RESUMEN:

Este trabajo se propone el uso del mtodo basado en imgenes digitales para
la determinacin de la acidez total en vinos tintos mediante titulacin cidobase sin necesidad de utilizar un indicador externo o ningn tratamiento previo
de la muestra. Imgenes digitales presentan el color de la radiacin emergente
que es complementaria a la radiacin absorbida por antocianinas presentes en
los vinos. Antocianinas cambian de color dependiendo del pH del medio, y de la
variacin del color en las imgenes obtenidas durante la titulacin, el punto final
se pueden localizar con exactitud y precisin. Se emplearon los valores
basados en RGB (es la composicin del color en trminos de la intensidad de
los colores primarios de la luz. ) para construir curvas de valoracin, y los puntos
se localizaron mediante curvas de segunda derivadas. El mtodo oficial
recomienda valoracin potenciomtrica con una solucin estndar de NaOH, y
dilucin de la muestra hasta que el pH alcanza 8.2- 8.4. Con el fin de ilustrar la
viabilidad del mtodo propuesto, las titulaciones de diez vinos tintos se llevaron
a cabo. El resultado se compara con el mtodo de referencia, y no se observ
ninguna diferencia estadsticamente significativa entre los resultados mediante
la aplicacin de la prueba t pareada en el nivel de confianza del 95%. El
mtodo propuesto arroj resultados ms precisos que el mtodo oficial. Esto es
debido a la naturaleza trivariate de las mediciones (RGB) asociados con
imgenes digitales.
INTRODUCCIN:
Entre las propiedades relevantes de vino, el pH o la acidez contribuyen a la
fermentacin y participa en las caractersticas sensoriales del vino que influye
en la estabilidad y el color. Las caractersticas cidas del mosto(jugo de uva) o
el vino se determinan por los cidos orgnicos relativamente dbiles. Por lo
tanto. Cuando el mosto(jugo de uva) y vinos se titulan contra una base fuerte
del punto de equivalencia ser a un pH superior a 7, por lo general entre 7,8 y
8,3.
Los vinos contienen una mezcla compleja de cidos orgnicos que incluyen
tartrico, mlico, succnico, actico, ctrico y lctico, cido tartrico es el ms
fuerte, e influye en el pH y las caractersticas sensoriales del vino
proporcionalmente. Por esta razn, la acidez total del vino se expresa en gL-1
de cido tartrico.
El anlisis de la muestra de color es problemtica. Los indicadores comunes
muchas veces dan resultados insatisfactorios debido a dificultades en la
determinacin del punto final de la valoracin. Esto es particularmente cierto

para las determinaciones de acidez total de vino tinto. Varias metodologas han
sido desarrolladas para la solucin de este problema, Runyan, cardwell et al.
Rangel y Toht. Honorato et al, el elemento comn en todos estos enfoques es
la adicin de un indicador externo y, a veces la combinacin de la eleccin del
indicador con la ventana espectral si la fuente de luz o siendo vinos utilizados
LED absorben la radiacin electromagntica en una amplia gama de los
espectros visible debido a antocianinas presentes en las uvas.
Las Antocianinas (del griego: anthos-flor y kianos-azul) son pigmentos de la
clase de flavonoides (Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los
vegetales y que protegen al organismo de los daos producidos por sustancias o elementos
oxidantes como los rayos ultravioleta, la contaminacin ambiental y de sustancias nocivas
presentes en los alimentos. Los flavonoides fueron descubiertos por el premio Novel Sent
Gyrgy cuando en 1930 aisl de la cscara del limn una sustancia, la citrina que regulaba la
permeabilidad de las pequeas arterias. A partir de all se han identificado ms de
5000flavonoides, ampliamente distribuidos en plantas, frutas y verduras y en diversas
bebidas como el vino, la cerveza el t negro y el t verde.
El organismo humano no puede producir estas sustancias, por lo cual debemos obtenerlos de
la alimentacin o en forma de suplementos farmacolgicos. En nuestra cultura nutricional
contamos con alimentos ricos en flavonoides tales como: la fresa, naranja cida, uvas
negras, toronjas, espinacas, remolacha, pimientos, cebolla, aguacate, berenjena, pltano,
brcoli y coliflor, entre una lista bastante extensa.

) y son responsables de la mayor parte de los azules, morados y todos los

tonos de rojo que se encuentran en las flores, las frutas, algunas hojas, tallos y
races de plantas. De acuerdo con Bordignon et al. Las antocianinas presentan
diferentes estructuras que tienen diferentes colores. El cambio de color
depende de varios factores, incluyendo la temperatura, el pH y la unin
copigmento
(http://es.wikipedia.org/wiki/Copigmentaci%C3%B3n)
Sin
embargo, los cambios de color dependen principalmente de la acidez o
alcalinidad del medio (pH) .Gaiao et al. Explotado el potencial de la imagen
digital para llevar a cabo el anlisis cuantitativo, y ha desarrollado una imagen
digital basado (DIB) mtodo de titulacin, que se aplic con xito para la
determinacin de la alcalinidad total en las aguas minerales y toque (con
naranja de Metilo como indicador). El presente trabajo se propone una
metodologa basada en imgenes digitales para la determinacin de la acidez
total en vinos tintos mediante valoracin cido-base sin el uso de un indicador.
Con el fin de mostrar la viabilidad del mtodo propuesto, se analizaron diez
muestras de vinos tintos y los resultados se compararon estadsticamente con
los obtenidos por mtodos de referencia.
Experimental.
Reactivos, muestras y soluciones

Se utiliz Acerca 100,0 mmol L-1 de NaOH preparada a partir de qumica

analtica de grado en agua recin destilada-des ionizada para la valoracin total
de la acidez de los vinos tintos. Esta solucin de valoracin fue estandarizada
por la metodologa convencional.
Diez marcas de vinos tintos fueron adquiridas de los supermercados locales.
Todas las muestras se analizaron directamente sin ningn tratamiento
adicional.
APARATO
Un diagrama esquemtico y la fotografa del sistema propuesto para la
titulacin acidez digital de la imagen basada en total de los vinos tintos se
presentan en la figura 1. Este sistema comprende un modelo comn CMOS
11090-CL Clone WebCam (WC), que se coloca en frente del flujo de celular
(FC) con el fin de capturar la imgenes- digital de la FC se compone de un tubo
de vidrio con 4,5 cm de longitud y 4 mm de dimetro interior, que se utiliz para
transportar los productos de titulacin cido-base de los vinos tintos. estos
productos de reaccin fueron iluminadas por una luz de una lmpara
fluorescente avante 5 W (L).
Con el fin de evitar interferencias de la luz ambiental, la WebCam, el flujo de
clulas y del sistema analtico se pusieron en una caja de madera que mide 32
cm x 54 cm x 36 cm. las paredes de la caja tambin se cubrieron con papel
blanco con el fin de proporcionar una iluminacin uniforme y para reducir el
deslumbramiento.
La WebCam se conecta al puerto USB de un porttil Core2Duo intel 2
Gigabytes (PC) y configurado para capturar imgenes digitales de 24 bits (16,7
millones de colores) a una velocidad de 30 fotogramas s-1 y 640 pxeles x 480
pxeles de resolucin espacial . las imgenes fueron capturados y almacenados
como archivos comprimidos "jpeg" utilizando el software proporcionado por el
fabricante de la WebCam.
Un modelo 8453 de Hewlett-Packard (HP) de diodo array espectrofotmetro
UV-Vis, equipado con un QS 178.010 celda de flujo Hellma modelo (volumen
interior 100? L y ptico ruta 1,0 cm) se utiliz para las mediciones
espectrofotomtricas.
Un modelo de 713 metros de pH Metrohm se utiliz para obtener los valores de
referencia (titulacin potenciomtrica) para la acidez total de las muestras de
los vinos tintos.
Un modelo blanco IKA LabDisc agitador magntico (MS) conducir una barra de
agitacin (SB) en el interior del Erlenmeyer se utiliz para uniforme las
soluciones.

Un canal 8-12 rollos Ismatec, bomba peristltica (pp), modelo de IPC, el

empleo de tubos de Tygon de bombeo de 1,14 mm de dimetro interior, y los
tubos de tefln de lnea de 0,8 mm de dimetro interior se utilizaron para
propulsar las soluciones.
Tres vlvulas solenoud de tres vas (V1, V2 y V3) modelo LHDA0531415ha
Lee, con 77 microlitros volmenes interiores, se utilizaron para agregar
incrementos de la solucin de valoracin.
Un USB-6008 de interfaz de control de National Instruments NI (CI) se utiliza
para controlar la vlvula de solenoide.
El software de control del sistema de valoracin basado en imgenes digitales
se desarroll en Labview 5.1.
El software de tratamiento de imagen fue desarrollado en Borland Core Gear
Rad Estudio de 2007. El procedimiento para el clculo valor basado en RGB
era el mismo que el descrito por Gaio et al. pero la regin delimitada era de
unos 30 pxeles x 180 pxeles.
El mtodo de referencia
la determinacin de la acidez total en vinos tintos se lleva a cabo segn los
protocolos establecidos por los rganos oficiales como la Asociacin de
qumicos Analitycal Oficial (AOAC), Oficina Internacional de la Via y el Vino
(OIV), luuz adolfo instituto (IAL), as como el Ministerio de Agricultura de Brasil.
Para todos estos rganos, los mtodos recomendados se basan en la
valoracin de neutralizacin de los cidos contra una solucin estndar de
base utilizando fenolftalena como indicador para soluciones claras de vinos o
utilizando un medidor de pH para soluciones oscuras.
Sus procedimientos consisten en la titulacin de una alcuota de la muestra
descarbonada contra una solucin patrn de hidrxido de sodio hasta un pH de
entre 8,2 y 8,4.
Fig. 1. Diagrama esquemtico (a) y fotografa (b) del sistema propuesto para la
determinacin de la acidez total en vinos tintos mediante el uso de las
valoraciones basadas en imgenes digitales. WC, WebCam; V1, V2 y V3,
vlvulas de solenoide; CI, interfaz de control; PP, bomba peristltica; SB, barra
de agitacin; MS, agitador magntico; S, muestra; Tit, valorante; PC, ordenador
personal; FC, el flujo de clulas; L, lmpara; VA, el actuador de la vlvula. hasta
alcanzar un color verdoso para la muestra (el parmetro utilizado para terminar
la carrera de titulacin). El punto final es aproximada comparando el color
relativa para cada uno de la secuencia de imgenes digitales, y cambiando el
volumen incremento del titulante a 0,2 ml entre el ltimo incremento de
volumen (Que corresponde a un color rojizo) y el primer volumen incrementar

(que corresponde a un color azulado). Las titulaciones espectrofotomtricas y

potenciomtricos eran llevado a cabo simultneamente usando el
espectrofotmetro y pH metros respectivamente con una alcuota de 10 ml de
la muestra se diluye con 100 ml de agua destilada. Los espectros obtenidos
durante la valoracin espectrofotomtrica se registraron a partir 400 a 700 nm.
3. Resultados y discusin 3.1. Estudio de los incrementos de volumen del
titulante En cido dbil titulaciones el valor del pH en el punto de equivalencia
depende de la concentracin del analito (cido). Para tartrico cido (Ka1 9.20
10-4 y Ka2 4.31 10-5) el ionizable hidrgenos no pueden determinarse por
separado en solucin por titulacin hasta que sus respectivos puntos de
equivalencia, ya que la relacin Ka1 / Ka2 es mucho menor que 104 [14]. Esto
requiere, en la prctica, una valoracin potenciomtrica hasta un valor de pH
fijo (8.2 a 8.4) para ser realizado [19]. Una titulacin que tiene curvas con
inflexiones sutiles, requiere una qumico con experiencia para llevar a cabo
adecuadamente las adiciones reactivo de valoracin. Ella por lo general hace
necesario pre-clculo, as [20] .Por otra parte, instrumental tcnicas de anlisis
que emplean las medidas basadas en el punto de inflexin, puede verse
comprometida debido a la necesidad de la seal diferenciacin, que es muy
sensible a ruido instrumental [21]. Studiesmadeby Presteni et al. [22]
showedthat los varios compuestos en el vino aumentar el efecto amortiguador
de la matriz y una titulacin cido base muestra un punto de inflexin en torno a
pH = 7,5 (Una valoracin cido dbil). Para evitar problemas de punto de
localizacin finales causadas por el buffering efecto, se estudi el incremento
valorante usando la segunda derivada mtodo. Fig. La figura 2 muestra la
curva de valoracin (a) y su respectivo segunda curva derivada (b). Las
adiciones de 0,2 ml de titulante cerca de la punto final fue el incremento
valorante ms pequeo que asegur precisa localizacin del punto final, y el
color detectable variaciones por Cmara web. 3.2. Las imgenes digitales,
espectros de absorcin y el pH a lo largo del DIB valoracin Fig. 3 muestra las
imgenes digitales y pH de valor (a) obtiene despus cada adicin valorante y
los espectros de grabado con las mismas adiciones, pero en un 1:10 (v / v) de
dilucin antes de (b1) y despus (b2) al final apunte para una muestra de color
rojo vino. Antocianinas presentes en los vinos son capaces de absorber
electromagntico radiacin en la regin visible produciendo varios colores,
Como puede verse en la Fig. 3 (a), dependiendo del medio. La mayora factor
importante que afecta el color de las antocianinas es pH, y dependiendo de la
acidez o alcalinidad, antocianinas exposicin diferentes estructuras qumicas
en medio acuoso [23]. Esto puede ser observado en los espectros grabada de
la titulacin en la Fig. 3b1 y b2 que revelan varias caractersticas espectrales
en funcin de pH, debido a la predominio de diferentes estructuras qumicas
para cada medio [24]. Mediante la observacin de las imgenes, se observa
que en un medio cido el color rojo predomina y la absorbancia disminuye
suavemente. Tras el final apuntar el color cambia a azul verdoso y el
absorbancia aumenta en el medio alcalino [25]. En soluciones acuosas, cuatro

especies de antocianinas molculas existir en equilibrio: catin flavinic (AH +),

base quinoidal (A), carbinol (B) y chalcona (C) [24]. Las estructuras se
muestran en la Fig. 4 y corresponden a las diferentes estructuras qumicas de
antocianinas cuando el pH del medio vara. Ellos son responsables de el
cambio de color y los espectros presentado por la muestra de vino tinto a lo
largo de la titulacin. Un aumento en el pH desplaza el equilibrio entre muchos
cromforos y en consecuencia, las cantidades relativas de todos estos
estructuras varan en funcin de los equilibrios qumicos. A un pH> 9,0 la
antocianinas ocurrir principalmente en formas ionizadas de la base quinoidal
(A) y chalcona (C). El factor principal de la degradacin de los colores de
antocianinas es el catin flavinic altamente reactivo frente nuclefila reactivos
tales como H2O y OH- [26]. 3.3. Las curvas de valoracin y la localizacin del
punto final Con el fin de localizar el punto final de titulacin, curvas de
valoracin y DIB sus respectivos segundos derivados se construyeron como se
muestra en la Fig. 2. Las ecuaciones de las primera y segunda derivadas de la
obtenida curvas se describen en la literatura [27]
Figura 3. (a) Digitales imgenes de una muestra original de vino tinto y
espectros de absorcin (b) visibles del mismo diluyeron muestra 1:10 (v/v)
obtenidos durante la valoracin antes de (b1) y despus (b2) punto final.
Analizando la figura 2 se percibe que la mayora modulacin pronunci color en
la titulacin de DIB es debido al aporte del 2 componentes (verde y azul), justo
antes del punto final, porque el componente rojo permanece constante. Esto
permite ver el color rojo de las imgenes. Despus del punto final de la
valoracin de DIB, las variaciones de los tres componentes en diferentes
combinaciones y intensidades conducen a los colores mostrados por muestras
de vino rojas en un medio alcalino.
En la figura 2 (b) el paso por cero, indicado por una flecha en la segunda
derivada de la curva de vinos tintos proporciona el volumen (VEP) de punto
final. En la Valoracin potenciomtrica del mismo, (Fig. 2) el volumen extremo
tambin fue 8,1 mL, mostrando buen acuerdo entre propuestas y mtodos de
referencia.
3.4. determinacioens analticas y validacin estadstica de resultados.
El mtodo propuesto fue aplicado a la determinacin de cido total en diez
muestras de vino (secas y dulces) y los resultados fueron comparados con los
obtenidos por el mtodo de referencia. La tabla 1 muestra los resultados en
trminos de g cido tartrico de L1 para ambos mtodos.
TABLA1

Promedio de resultados (en trminos de g L1 cido tartrico) de tres

determinaciones de cido total en los tintos, obtenidos mediante el uso de DIB
propuesta y valoraciones potenciomtricas.
PAG 5
Fig.4. Estructuras moleculares de antocianinas en solucin acuosa
Los resultados muestran buena concordancia. La aplicacin de la prueba t
pareada, basada en la prueba de hiptesis, no revel ninguna diferencia
estadsticamente significativa entre los resultados a un nivel de confianza del
95%. Esta inferencia es corroborada por la prueba de t pareada basada en un
intervalo de confianza construido para la verdadera diferencia promedio (). En
el 95% de confianza, los lmites de este intervalo son: = [0.4038, 0.3638]. El
valor "cero" est incluido en el intervalo. As que ah hace que no exista una
diferencia estadsticamente significativa entre los resultados en el nivel de
confianza adoptado. En consecuencia, la hiptesis nula tiende a 0 y no puede
ser rechazado [28]. En trminos de rendimiento analtico, el mtodo propuesto
presenta un mejor rendimiento que el mtodo de referencia, segn lo revelado
por el RSD general valor.
4. conclusiones
Este papel demuestra que el uso de imgenes digitales obtenidos con una
simple WebCam puede apoyar una nueva estrategia de valoracin cido
base para la determinacin de acidez total en vinos tintos sin el uso de un
indicador externo. La metodologa propuesta se basa en la absorcin de
propiedades inherentes de la matriz de vino tinto. De hecho, las antocianinas
visualizan diferentes colores segn el pH del medio, y de los valores de RGBbasado en la imagen de titulacin, el punto final fue localizado con precisin sin
el uso de una dilucin, indicador o muestra. El mtodo propuesto rindi
resultados ms precisos que el mtodo de referencia, que podra atribuirse a la
naturaleza de tres variables de las medidas asociadas con imgenes digitales.
Otro punto importante que debe tenerse en cuenta no es hay ningn contacto
detector/simple sobre electrodos de vidrio de pH una gran ventaja, porque ni
siquiera con todo cuidado, tienen una limitada tiempo de vida and necesitan ser
reemplazados. Adems, como la metodologa ha propuesto una WebCam
barata como el detector, ofrece una alternativa viable econmicamente a
valoraciones de electrodo de vidrio. De hecho, el costo de un electrodo de
vidrio pH es caro en comparacin con el costo de la WebCam.
Acknowledgements
Los autores gracias a la Agencia brasilea CNPq para becas y Marcelo Fabian
Pistonesi (Universidad Nacional del Sur Argentina) por sus importantes
sugerencias y discusiones. Autores gracias tambin a David Harding, nativo

californiano Y farmacologa estudiante aqu en Paraba, Brasil, para la revisin

de los ingleses en este artculo.