AULA PRTICA 10/11/2015

Principais etapas de um processo industrial genrico:

1) Cultura pura:
Obteno do m.o: coleo, conservado por liofilizao
Preparo do meio de cultivo: (Relao 1:5)
ativao do mo.o: meio, pH, temperatura C, agitao 150 rpm, tempo
24 h.
crescimento do m.o: meio, pH, temperatura C, agitao 150 rpm,
tempo.
conservao do mo.o: meio, pH, temperatura C, agitao 150 rpm,
tempo 12 h.
PROCEDIMENTO:
1. Transferir 1mL do cultivo para tubo de polipropileno estril de 1,5 mL de
capacidade
2. centrifugar 300 rpm por 2 minutos.
3. Descartar o sobrenadante.
4. Colocar no tubo de polipropileno contendo somente as clulas 800 uL de
meio GYPA (meio da turma), pH 7,4 e 200 uL de glicerol.
5. Resuspender as clulas e congelar (-20C)
2) Desenvolvimento do inoculo:
INOCULO: um volume de suspenso de m.o de concentrao adequada
capaz de garantir, em condies econmicas, a fermentao de um dado
volume.
FINALIDADE: multiplicao celular e adaptao do m.o ao substrato
REQUISITOS FUNDAMENTAIS DE UM INOCULO:
1. Conter um nmero suficiente de clulas vegetativas ou esporos, sadios
ou ativos, para promover fermentao rpida e pura.
- fator econmico fermentao rpida: diminui risco de contaminao
economia: energia, gua, mo-de-obra e equipamentos.
2. Reter a capacidade produtiva de cultura
3. Iseno de contaminantes
4. Devem estar numa forma adequada (fungos)

Filamentosos ou pellets: o crescimento varia de forma

A forma de crescimento do fungo determinada por: composio do meio e o
nmero de esporos inoculados
INCONVENINCIAS:
Queda da produo devido ao consumo do substrato
Baixa qualidade do produto
Consumo de nutrientes por m.o contaminantes
FASES DE DESENVOLVIMENTO:
Quantidade de inoculo normalmente usada: 3-10% do volume do meio de
produo empregado
***mais importante do que o volume do inoculo sua concentrao adequada
(transformar em produto em um curto perodo de tempo) - A concentrao
expressa em nmero de clulas viveis, nmero de esporos, massa seca)
Exemplo:
Vol do tanque: 100.000L
Vol do tanque til: 80.000L
10% do inoculo 800 inoculo
FASE LABORATRIO e FASE INDUSTRIAL
Na fase de laboratrio:
2-3 etapas
problemas: volume do frasco
Tcnica: transferncia peridica em frasco
Frascos de Erlenmeyer colocados em mquinas
Agitadores e incubadoras
Na fase industrial:
1-3 etapas
Germinadores, semeadores ou pr-fermentadores, aparelhos de cultura pura.
FATORES QUE DEVEM SER CONSIDERADOS:
Composio do meio de cultura: promover o crescimento rpido e no
pode ocorrer a formao de produto.
- adaptao:
aumentar a concentrao da fonte de carbono
quantificar o quanto de produto foi formado
Quando ocorre uma diminuio no perodo de adaptao: diminuio da fase
lag no reator voltar na fase de laboratrio (problema na adaptao).

 pH do meio e temperatura:
MANTER: depende unicamente do m.o promove o melhor crescimento do
m.o
Nmero de etapas (estgios)
Depende unicamente do volume do inoculo que se deseja produzir.
Tempo de cada etapa:
Permitir o crescimento das clulas at o final da fase exponencial ( necessrio
clulas viveis)
- at diminuir em 50% a fonte de carbono: para clulas viveis da fase
industrial
- valor de pH.
Condies na mquina agitadora incubada: agitao e aerao
As condies afetam o coeficiente de absoro de oxignio
CA=

Oxignio ap roveitado
Oxignio forncecido

Natureza do tampo do frasco:

Relao entre volume de meio e volume total do frasco
- forma de movimento na mquina agitadora incubadora: rotativa e recproco
Na mquina rotativa o ngulo de inclinao do frasco em relao ao plano de
rotao do movimento (quanto maior a amplitude, maior a agitao), existncia
de chicanas (anteparos dentro dos frascos)
AULA TERICA 08 - Condies fsico-qumicas durante o processo:
16/11/2015
Fatores crticos para a atividade do m.o: pH, temperatura, aerao, presso e
disponibilidade de gua.
pH:
responsvel pela ruptura da membrana e inativao de enzimas e
transportadores de membrana.
Temperatura:
Crescimento geralmente 25C e 37C
Alta temperatura: inativao irreversvel de protenas

 Disponibilidade de gua:
o efeito da gua geralmente descrito pela atividade de gua:
Aw =

Ps
Pw

Aerao
Mantm as concentraes de oxignio, contribui na agitao, arrasta produtos
volteis do m.o, mantm a presso positiva nos tanques, aerbios obrigatrios,
facultativos e microaerfilos.
Presso:
Influencia a captao de nutrientes pelo m.o
barofilicos: crescimento com aumento da presso hidrosttica.