UNIVERSIDAD DE SUCRE

PROGRAMA DE MEDICINA
INMUNOLOGA
PRCTICA # 4

REACCIONES Y TCNICAS DE
INMUNOAGLUTINACIN
Autores: Martinez Prez Jose1, Oviedo Cali Claudia1, Parra
Tangarife Danny Daniel1.
Estudiantes de IV semestre de Medicina de la Universidad de Sucre
Sincelejo Colombia
RESUMEN: Gran parte de los progresos alcanzados por la biologa moderna se
deben al perfeccionamiento de los mtodos analticos de medida. La introduccin
de los procedimientos basados en las reacciones inmunolgicas ha representado
un importante avance en el anlisis de sustancias de inters en biologa animal y
vegetal difciles de medir empleando los mtodos bioqumicos habituales. Dentro
de los procedimientos inmunolgicos, los ms tiles y prcticos son aquellos que
se basan en la especificidad de la unin Ag-Ac. la propiedad que tienen la Igs de
unirse a un Ag, la especificidad de esta unin y el hecho de que pueda ser
visualizable por los fenmenos de precipitacin, aglutinacin y otros mecanismos
indirectos. Nosotros utilizamos principalmente la inmunoaglutinacin.
La inmunoaglutinacin es una reaccin que tiene lugar cuando se combinan
antgenos particulados (aglutingenos) con sus anticuerpos especficos
(aglutininas). Esta reaccin se ha usado ampliamente debido a la facilidad con que
se lleva a cabo y su alto nivel de detectabilidad. Aunque no permite la
cuantificacin exacta de anticuerpos, los resultados pueden expresarse
semicuantitativamente en funcin de la dilucin mayor del suero que permite aun
observar aglutinado (titulo). En la aglutinacin, las partculas quedan asociadas en
retculo por anticuerpos bivalentes (IgG) o pentavalentes (IgM), y se combina cada
extremidad de la molcula anticuerpo (regin fab) con un sitio antignico idntico
portado por partculas distintas. Las reacciones de inmunoaglutinacin necesitan
poco antgeno y aun menos anticuerpo para manifestarse. Los sitios antignicos
son dependientes de una estructura relativamente voluminosa, de ah que una
ligera modificacin del estado de dispersin de las partculas sea suficiente para
exteriorizar la reaccin serolgica. En el laboratorio pudimos observar la
inmunoaglutinacin realizando diferentes procesos para lograr esto para que este
nos d un resultado.1
Palabras Claves: Inmunoaglutinacin indirecta, I. directa Rh, precipitado.
INTRODUCCIN

Gran parte de los progresos

alcanzados por la biologa moderna
se deben al perfeccionamiento de los
mtodos analticos de medida. La

Reacciones y tcnicas de inmunoaglutinacin 2

Prctica #4

introduccin de los procedimientos

basados
en
las
reacciones
inmunolgicas ha representado un
importante avance en el anlisis de
sustancias de inters en biologa
animal y vegetal difciles de medir
empleando los mtodos bioqumicos
habituales.
Dentro
de
los
procedimientos
inmunolgicos, los ms tiles y
prcticos son aquellos que se basan
en la especificidad de la unin Ag-Ac.
Por tanto la propiedad que tienen las
Igs de unirse a un Ag junto la
especificidad de esta unin y el hecho
de que pueda ser visualizable por los
fenmenos
de
precipitacin,
aglutinacin y otros mecanismos
indirectos (marcaje con fluorescena,
con radioistopos o con enzimas)
hacen que estos mtodos se empleen
abundantemente.
De estos diversos mtodos basados
en procedimientos distintos para
visualizar
la
unin Ag-Ac
la
aglutinacin es la de nuestro inters
en este momento
A este aglutinado hacen parte
tcnicas
de
inmunoaglutinacin.
(Hemaglutinacin directa e indirecta y
otras tcnicas con ltex, etc.)

anticuerpos cuando el Ag forma parte

o se ha unido artificialmente a la
superficie
de
glbulos
rojos,
plaquetas, leucocitos, partculas de
ltex, etc. Normalmente se utilizan
glbulos rojos (hemaglutinacin) o
partculas de ltex.
Hemaglutinacin Directa
La presencia de antgenos en la
superficie de los glbulos rojos se
puede
detectar
por
la
hemaglutinacin producida cuando se
aade un antisuero con anticuerpos
frente a dichos antgenos. Esta
tcnica se emplea habitualmente para
la identificacin de los grupos
sanguneos y Rh, para lo cual a la
sangre heparinizada se le aaden los
antisueros correspondientes: anti- A,
anti- B o anti-AB (todos ellos anti-Rh
negativos).
Habr
aglutinacin
cuando los glbulos rojos posean la
especificidad del antisuero aadido
(Tabla 1). De igual manera se
procede con antisueros anti-Rh para
la determinacin de los distintos
grupos Rh.

Tcnicas de aglutinacin
En estas tcnicas se hacen visibles
los
complejos
Ag-Ac
por
la
aglutinacin
que producen los

Laboratorio de Inmunologa

Reacciones y tcnicas de inmunoaglutinacin 3

Prctica #4

Esta tcnica se emplea habitualmente para la

identificacin de los grupos sanguneos y Rh,
para lo cual a la sangre heparinizada se le
aaden los antisueros correspondientes: antiA, anti- B o anti-AB (todos ellos anti-Rh
negativos). Habr aglutinacin

frente a dicha sustancia se producir

su aglutinacin. Por el contrario,
cuando se aade un suero problema
que contiene la sustancia a
cuantificar entonces los anticuerpos
se unirn a dicha sustancia y no a los
glbulos rojos. En este caso no se
producir la hemaglutinacin. Por
tanto, aglutinacin (+) indica ausencia
de la sustancia a estudiar, y
aglutinacin (-) indica presencia de la
misma. La medida de gonadotrofina
corinica (HCG) para el diagnstico
de embarazo puede realizarse por
esta tcnica.
Hemaglutinacin indirecta es un
procedimiento mdico utilizados para
diagnsticos tales como: parsitos
intestinales, amebiasis intestinal y
Tripanosomiasis americana.2
MATERIALES Y MTODOS

Tabla.1.determinacion
sanguneo.

del

grupo

Hemaglutinacin indirecta
Se basa en el principio de la
inhibicin de la hemaglutinacin. Para
su realizacin se precisan glbulos
rojos a los cuales se les ha unido la
misma sustancia que se desea
detectar o cuantificar. Si estos
glbulos rojos son puestos en
presencia de anticuerpos preparados

Para
realizar
la
prctica
correspondiente de reacciones y
tcnicas de inmunoaglutinacin fue
necessrio el uso de:

Sueros hemoclasificadores anti

A, anti B y anti D
Suero problema

Sangres humanas de los tipos A y

B citrada o heparinizada
Placa takatsi

Tubos de centrfuga

Tubos de ensayo

Pipetas

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Reacciones y tcnicas de inmunoaglutinacin 4

Prctica #4

Guantes

Centrfuga

ambiente durante una hora, despus

de trascurrido este tiempo se observ
los resultados.

Microtcnica
para
titular
anticuerpos anti A y anti B en
suero humano.
Se Centrifug las sangres a 2500
r.p.m durante 10 minutos, se retir el
plasma con pipeta pasteur, no se
decant; se prepar suspensiones de
eritrocitos A y B al 2 %, se hizo por
duplicado dos series de diluciones
dobles del suero problema, para ello
se aadi 50 uL de suero fisiolgico
(SF) a partir del segundo pozo en
todos los pozos de 4 hileras, luego
se desech 50 uL del ltimo pozo,
posteriormente se prepar por
duplicado dos controles con 50 uL de
SF y 50 uL de cada una de las
suspensiones (control de eritrocitos
del grupo A y control de eritrocito del
grupo B), se aadi a todos los pozos
de dos hileras (A y B) 50 uL de la
suspensin de eritrocitos del grupo A
y a todos los pozos de las otras dos
hileras (C y D), 50 uL de la
suspensin de eritrocitos del grupo B,
se Mezcl los inmunoreactantes
dndole unos golpes laterales a la
placa varias veces, se Cubri y se
dej en reposo a temperatura

Observacin: No se puede utilizar

sangre ni suero si no se les realiza
las pruebas para hepatitis B y SIDA.
Debe tenerse el cuidado de
homogeneizar las suspensiones de
eritrocitos en el momento de
aadirlas a los pozos, pues las
clulas sedimentan rpidamente. Los
tubos, pipetas y puntas que se
utilicen para la sangre deben estar
bien secos o endulzados con SF para
prevenir la hemlisis, as como
enjuagarse inmediatamente despus
de ser usados con agua corriente
abundante. Hacer lo mismo con la
placa de micro titulacin al concluir la
prctica.
RESULTADOS
1

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Reacciones y tcnicas de inmunoaglutinacin 5

Prctica #4

not aglutinacin por lo tanto el tipo

de sangre es A.

Imagen. (1) Reaccin de Ag-Ac, en proceso

de aglutinacin. (2) presencia de
hemaglutinacin (flecha).

La
presencia
del
precipitado,
determina la capacidad de reaccin
de los antgenos encontrados en la
superficie del eritrocito con los
anticuerpos, hecho que permite
formar la malla caracterstica de los
procesos de hemaglutinacin.
DISCUSIN
Partiendo de los resultados, la
reaccin de hemaglutinacin fue muy
escasa, sin embargo este es un
proceso que se presenta por la
capacidad de los anticuerpos de
ligarse o asociarse con los antgenos
que se encuentran en la superficie de
los eritrocitos. La escasa reaccin de
hemaglutinacin se di por que al
momento observar el desarrollo de la
reaccin se perturbaba por medio de
movimiento, lo cual destrua la
aglutinacin ya creada en el
desplazamiento de la muestra de un
mesn a otro; sin embargo tanto en el
control para la muestra B y en los
pozos C y D, especialmente C se

Gran parte de los progresos

alcanzados por la biologa moderna
se deben al perfeccionamiento de los
mtodos analticos de medida. La
introduccin de los procedimientos
basados
en
las
reacciones
inmunolgicas ha representado un
importante avance en el anlisis de
sustancias de inters en biologa
animal y vegetal difciles de medir
empleando los mtodos bioqumicos
habituales.
Dentro
de
los
procedimientos
inmunolgicos, los ms tiles y
prcticos son aquellos que se basan
en la especificidad de la unin Ag-Ac.
La propiedad que tienen las Igs de
unirse a un Ag, la especificidad de
esta unin y el hecho de que pueda
ser visualizable por los fenmenos de
precipitacin, aglutinacin y otros
mecanismos indirectos (marcaje con
fluorescena, con radioistopos o con
enzimas) hace que estos mtodos se
empleen ampliamente.
Una de las tcnicas usadas es la
aglutinacin en la que se hacen
visibles los complejos Ag-Ac por la
aglutinacin que
producen
los
anticuerpos cuando el Ag forma parte
o se ha unido artificialmente a la
superficie
de
glbulos
rojos,

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Prctica #4

plaquetas, leucocitos, partculas de

ltex, etc.
Normalmente se utilizan glbulos
rojos (hemaglutinacin) o partculas
de ltex.
La inmunoaglutinacin indirecta se
basa en el principio de la inhibicin de
la
hemaglutinacin.
Para
su
realizacin se precisan glbulos rojos
a los cuales se les ha unido la misma
sustancia que se desea detectar o
cuantificar. Si estos glbulos rojos
son puestos en presencia de
anticuerpos preparados frente a dicha
sustancia
se
producir
su
aglutinacin. Por el contrario, cuando
se aade un suero problema que
contiene la sustancia a cuantificar
entonces los anticuerpos se unirn a
dicha sustancia y no a los glbulos
rojos. En este caso no se producir la

hemaglutinacin.
Por
tanto,
aglutinacin (+) indica ausencia de la
sustancia a estudiar, y aglutinacin (-)
indica presencia de la misma. La
medida de gonadotrofina corinica
(HCG) para el diagnstico de
embarazo puede realizarse por esta
tcnica.3

Fig. 1. Inhibicin de aglutinacin de

glbulos indica gonadotropina corinica
(HCG) presente en suero.
BIBLIOGRAFIA
(1 ) Murphy, K. - Travers, P. - Walport, M. Inmunobiologa de janeway. 7 edicin.
Mac Graw Hill. Mexico DF. 2008. 913pp.
(2) (3) Abul, k. Abbas et-al. inmunologa Celular y molecular. Sexta edicin. Ultima
reimpresin: 2009 576 pgs. Editado por: ELSEVIER.

Laboratorio de Inmunologa

Las consultas correspondientes fueron llevadas a cabo en la biblioteca universitaria de la Facultad

de Ciencias de la salud, y a travs de la web.