BROMATOLOGIA
USP
PRACTICA N1
DETERMINACION DEL NUMERO TOTAL DE BACTERIAS DE UNA MUESTRA
FUNDAMENTO
Se trata de conocer el nmero total de microorganismos presentes en la muestra . Este nmero
no guarda relacin con el de microorganismos patgenos por lo que no puede usarse como
ndice de su presencia y slo debe considerarse un indicador de las caractersticas higinicas
generales del alimento.
Para observar las bacterias teidas, hay que proceder previamente a su fijacin. Puesto que la inmensa
mayora de las bacterias son incoloras, la nica forma de observarlas bien en el microscopio ptico
consiste en incrementar su contraste. Esto se consigue mediante su teido con colorantes o mediante la
disposicin de una ptica especial de contraste.
OBJETIVOS
Emplear las tcnicas para la determinacin del nmero total de bacterias en una
muestra.
Realizar la lectura microscpica correspondiente.
Realizar los clculos matemticos respectivos para la determinacin.
Emplear la tcnica correspondiente para la tincin utilizada en la observacin
microscpica.
INFORME N1
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MATERIALES Y EQUIPO
Chaqueta
Guantes
Laminas
Marcador
Papel toalla
Regla
Asa bacteriolgica milimetrada
Aceite de inmersin
Microscopio
REACTIVO
Tincin Gram
MUESTRA
Cebada
PROCEDIMIENTO O TECNICA
1. Limpiamos y ordenamos nuestra mesa de trabajo.
2. Procedemos con un marcador dibujar un cuadrado (1cm)en medio de la lamina
3. Se realiz el extendido con el asa bacteriolgica colocamos una gota en el cuadrado
que habamos dibujado dejamos secar , para su coloracin
4. La coloracin que utilizamos fue tincin Gram.
5. Luego de coloreada se observ en el microscopio utilizando objetivo de 100x
RESULTADOS
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Bac/ml = FM . X . V
FM = Factor microscpico
FM = AE (rea de extensin)
ACM (rea de concentracin de la muestra)
AE = 1 cm2 = 100 mm2
2
ACM = r
ACM = 3.1416 x 0.09
= 0.025434
FM =
100
0.025434.----trabaje con 0.025
FM = 4000mm2
X = media del nmero de bacterias contadas
X = # cel contadas
10 campos
Mi nmero de colonias fue 0.2 colonias /campo
V = volumen de la muestra por asa bacteriolgica
El volumen fue de 0.001
N Bact/ml = FM . X . V
= 4000 x0.2 x 0.001
= 0.8 bact/ml
DISCUSIONES
No hubo , un buen conteo de bacterias en la muestra , por lo que se barri al hacer
los lavados / no penetro muy bien
muestra estaba limpia . y esto pudo deberse a que el extendido no tuvo un secado
correcto.
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CONCLUSIONES
Esta prctica
BIBLIOGRAFIA
http://bagginis.blogspot.pe/2014/07/guia-practica-del-laboratorio.html
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12-metodos
%20de%20recuento.htm
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ANEXOS
INFORME N1
BROMATOLOGIA
A1 :CHAQUETA
USP
A2:GUANTES
A4: MICROSCOPIO
A5 : ASAS CALIBRADAS
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A6: MARCADOR
USP
A8: LAMINAS
A8 : CEBADA
PRACTICA N2
INFORME N1
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se decolore al pasar de la forma oxidada a la forma reducida. La rapidez con que cambia de
color est en funcin de la poblacin bacteriana y, por ello, puede ser un ndice del grado de
contaminacin de la leche. El colorante ms empleado es el azul de metileno, pero tambin se
pueden utilizar la resazurina y el cloruro de 2, 3, 5, trifenil-tetrazolium, ya que son colorantes
fcilmente absorbibles por las clulas vivas.
La reduccin del azul de metileno es un mtodo indirecto de estimar el contenido bacteriano
y se relacione con la calidad ,se observa nicamente con qu rapidez el colorante aadido a la
leche , se transforma con el hidrogeno de las sustancias nutritivas y por las enzimas
bacterianas en leucobase incolora .
En general se admite que la decoloracin es ms rpida cuanto mayor es el nmero de
microorganismos en la leche. Sin embargo, las bacterias presentan distinta habilidad para reducir
el azul de metileno, as el Streptococcus liquefaciens, los grmenes del grupo coliaergenos y
los de la putrefaccin (Bacillus subtilis) se muestran muy activos. Las clulas somticas
presentes en la leche tambin influye mucho en la velocidad de decoloracin, sobretodo los
leucocitos.
La reduccin del azul de metileno es un mtodo indirecto de estimar el contenido bacteriano
y se relacione con la calidad ,se observa nicamente con qu rapidez el colorante aadido a la
leche , se transforma con el hidrogeno de las sustancias nutritivas y por las enzimas
bacterianas en leucobase incolora .
Cuando ms bacterias reductoras haya en la leche, tanto ms rpidamente se realiza el
cambio de color.
El tiempo de reduccin se expresa en horas desde el inicio de la incubacin hasta la
decoloracin completa.
CALIFICACION DE L A LECHE:
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OBJETIVOS
Determinar la calidad de una muestra de leche , midiendo el intervalo de tiempo
requerido para decoloracin de una mezcla colorante leche color azul , hasta el
blanco
MATERIALES Y EQUIPOS
Guantes
Chaqueta
Tubos 16x 150 tapa rosca
Gradilla
Mechero
REACTVO
Azul de metileno
Solucin fisiolgica 0.02%
MUESTRA
Leche del mercado modelo
PROCEDMIENTO O TECNICA
1) Colocamos nuestro material de trabajo en la mesa
2) Procedemos a rotular los tubos con (P) problema (+) control positivo (-) control
negativo.
3) Los tubos ya rotulados los colocamos en la gradilla.
4) A los cada uno de los tubos le pipeteamos la cantidad de 10 militros de leche. al tubo
del control negativo se le coloca 1ml de agua destilada; tubo problema y tubo
positivo se le agrega 1 ml de azul de metileno . luego de haber colocado
rpidamente taparlos.
5) Lo colocamos en el mechero a los dos tubos (tubo problema y tubo positivo ) hasta
6)
RESULTADOS
TUBO PROBLEMA
Despus de 10 minutos de reposo se observ que cambio de Solucin azul a blanco
OLAYA ORTIZ TRICSY DAYAN
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DISCUSIONES
CONCLUSIONES
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BIBLIOGRAFIA
o http://ocw.um.es/cc.-de-la-salud/higiene-inspeccion-y-controlalimentario/practicas-1/practica-2-determinacion-de-la-calidad-higienica
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ANEXOS
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A1: chaqueta
A2: Guantes
A3: Gradilla
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USP
A8: Marcador
A9: Mechero
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