Y LA BIOCATLISIS EN MXICO
A. LPEZ MUNGUA CANALES
INTRODUCCIN
Si consideramos los registros de solicitud de patentes como referencia de
los inicios de la enzimologa industrial, podramos afirmar que esta actividad se inicia prcticamente con el siglo XX, antes incluso de que se desarrollara la biotecnologa industrial. No es sorprendente que los temas
que tratan estas patentes estn relacionados con lo que en pleno siglo XX
siguen siendo las aplicaciones de enzimas ms importantes en el mundo
en trminos de volumen y de costo. Se trata de las amilasas, cuya produccin patentaba en 1894 J. Takamine (1); el tratamiento de pieles con
tripsina, patentado por O. Rohm en 1908 (2); la clarificacin de cerveza
con proteasas vegetales, incluida la papana usada hasta la fecha, y patentada por L. Wallerstein en 1911 (3), y las aplicaciones de enzimas en
lavandera, la ms importante aplicacin de enzimas proteolticas hoy
en da en el mundo, y cuyo origen puede ubicarse en la patente otorgada a O. Rohm en 1915 (4) sobre el uso de pancreatina en todo tipo de
detergentes.
Este inicio de la actividad industrial avanza paralelamente con la bioqumica de enzimas y protenas, siendo en 1926 que Sumner (5) cristaliza la ureasa, ms tarde Northrop la pepsina en 1930 (6) y la tripsina
Kunitz y Northrop en 1932 (7). La serendipia haba tocado a este sector
en 1922 cuando Fleming, adelantndose al descubrimiento de la penicilina, descubri la lisozima (8) cuando pens haber descubierto el antibitico universal que buscaba y que descubrira siete aos despus. En
este caso, aprovechando padecer de un fuerte catarro, logr evitar el crecimiento de M. lysodeikticus en cultivo slido, agregando unas gotas de
secrecin nasal. Para la segunda mitad del siglo xx estaba clara la naturaleza qumica de los catalizadores biolgicos y existan ya respuestas
al problema fundamental de la enzimologa consistente en dilucidar el
mecanismo de accin de las enzimas, explicando su extremadamente
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EL MERCADO EN MXICO
Para finales de los setenta, el valor de las importaciones anuales de
enzimas en Mxico alcanzaba los 60 millones de pesos, de acuerdo con
la fraccin arancelaria que exista para el rubro (2940-A-01-999). Para
mediados de los ochenta, la importacin de enzimas alcanzaba cerca de
12 millones de dlares (1985), destacando la importacin de papana,
bromelina, pepsina, tripsina, quimotripsina, pancreatina, hialuronidasa,
lisozima, cuajo (quimosina), dentro de las enzimas de origen vegetal
y animal, y alfa amilasa, celulasas, invertasa, proteasas de diversos orgenes y pectinasas, fundamentalmente (9). La principal empresa nacional
productora era y sigue siendo Enmex, S.A. de C.V., que produca o distribua la mayor parte de las enzimas de aplicacin masiva antes referidas
(proteasa bacteriana, alfa-amilasa, glucoamilasa y sustitutos de quimosina). Conforme se sucedieron los avances en los mtodos de produccin
de enzimas y especficamente en la modificacin gentica para la optimizacin de la produccin, aunado a la adquisicin de las empresas por
los grandes consorcios (Laboratorios Miles que provea de tecnologa a
Enmex fue adquirida por la empresa Bayer y sta posteriormente por
Genencor), la produccin de enzimas en Mxico fue disminuyendo
hasta convertirse en una actividad menor, respecto al volumen de enzimas consumido. Pfizer, por ejemplo, cerr la produccin de enzimas
(proteasas y amilasas) en Mxico en 1992. Hoy en da la entrada al mercado de mltiples compaas chinas y la diversidad de estrategias para la
produccin y mejora de enzimas de la que disponen los grandes consorcios (Novozymes y Genencor), hacen muy poco viable pensar que una
compaa en nuestro pas pueda subsistir de la produccin y venta de
enzimas. Con excepcin de la produccin de Enmex, las enzimas microbianas que se distribuyen en Mxico son de importacin. Los datos de
importaciones que reporta la Secretara de Economa con informacin
del Banco de Mxico agrupados en la fraccin arancelaria 3507 muestran un mercado de 46.8 millones de dlares en el ao 2001, el 60.2%
proveniente de los Estados Unidos. Curiosamente, 71.4% de las importaciones provenientes de los EUA corresponde a la fraccin 35079008
que es la que agrupa a las amilasas y a las proteasas, el rubro ms importante en el sector (55.5% de las importaciones), seguido de lejos por las
celulasas (9.8%), las fitasas empleadas en alimentacin animal (5,7%), la
papana (1.93%), la pancreatina (0.98%), cuajo concentrado (0.82%)
y un rubro muy amplio en la fraccin 35079099 que incluye a las dems
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25 AOS
No es el objetivo de esta revisin el analizar los avances cientficos y tecnolgicos que han impactado la tecnologa enzimtica y la biocatlisis en
las ltimas dos dcadas. Una revisin reciente (10) publicada en la revista Nature, y un texto derivado del mdulo: Ingeniera Celular: Biodiversidad e Industria, impartido dentro del ciclo de conferencias: Fronteras de la Biologa en los Inicios del siglo XXI en El Colegio Nacional
(11), dan buena cuenta de ellos. nicamente sealaremos algunos de los
eventos clave en esta evolucin:
El desarrollo de la ingeniera gentica (biotecnologa moderna) permiti producir enzimas de cualquier origen en huspedes microbianos, aumentando la disponibilidad y disminuyendo el costo. Un impacto inmediato de este hecho fue la produccin microbiana de enzimas
de origen animal (quimosina de ternera), as como evitar el uso de
microorganismos no reconocidos como seguros (GRAS) en la produccin de enzimas para el sector alimentario.
El avance en el conocimiento de la relacin estructura-funcin, permiti la modificacin de enzimas para la mejora de sus propiedades industriales, ya sea cinticas o de estabilidad a diferentes condiciones de
operacin (ingeniera de protenas).
El desarrollo de la ecologa molecular permiti poner en evidencia el
escaso conocimiento que se tiene sobre el total de la poblacin micro-
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Castaeda quien funga como asesor de la empresa, y a la sazn investigador del Instituto de Investigaciones Biomdicas de la UNAM y posteriormente dedicado a la produccin industrial de formulaciones alimentarias. Tras un sinfn de propuestas que cubran mercados tanto de
la leche deslactosada como de la elaboracin de cajeta y yogurt con las
mismas, un estudio de mercado elaborado por la doctora Casas mostr
que el principal nicho de mercado podra ser la leche. En efecto, exista
en Mxico un 25% de adultos intolerantes a la lactosa y en general los
nios de entre dos y cuatro aos tenan cerca de tres cuadros de problemas gastrointestinales al ao que obligaban a suspender la leche de su
dieta, para evitar la carga digestiva que implica la digestin de la lactosa.
Estim entonces que el dficit podra ser de 300 000 L diarios de leche,
y que un objetivo de produccin razonable podra ser de unos 30 000
L/da .
Para desarrollar este proyecto, los investigadores debieron enfrentar
una gran diversidad de problemas, entre los que destacan:
Los problemas de comunicacin con los encargados de produccin en
las plantas, donde se desconocen los cuidados que requiere el manejo de enzimas.
La idea de que la leche deslactosada es un medicamento al igual que
la enzima.
La dificultad de empatar los requisitos mnimos para el suministro de
envases (~ 250 000 envases al da) con el mercado objetivo inicial.
El difcil manejo higinico de la leche.
Ante las dificultades para hacer progresar el proyecto con grupos
industriales (Boreal, Prolesa, Leche Quertaro, etc.) los investigadores
decidieron iniciar una empresa de su propiedad (Neolac, S.A. de C.V.)
va la incubadora de empresas de base tecnolgica de la UNAM, incorporando ms personal capacitado al proyecto (Pedro Castro, Gladys Hoyos
tambin con doctorado en Biotecnologa, Guillermo Ortega, entre
otros).
Despus de analizar las opciones, decidieron iniciar el proyecto a travs de una maquila con la empresa Leche Araceli de Quertaro.
Decidieron tambin no ilustrar el empaque con vacas, con el fin de
poner distancia con los productores de leche, industria poco innovadora. La lista de problemas que debieron resolverse, rebasa los objetivos de
este texto, pero destaca el hecho de que encontraron menor nmero de
barreras tcnicas que comerciales. Sin embargo, dentro de las primeras
destaca el hecho de la escasa o nula tradicin de los empleados de las
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plantas lcteas en el manejo de enzima, habiendo sido necesario capacitar a un buen nmero de empleados. Para mediados de 1995, se llevaron
a cabo pruebas exitosas de mercado en 10 tiendas de Comercial
Mexicana. La produccin en leche Araceli pronto alcanz los 45 000 L al
mes y para llegar a los 250 000 L/mes la maquila se cambi a la empresa
Leche Len, de Len, Gto. Para entonces ya era claro que la dificultad para
controlar la contaminacin, impeda el uso de la enzima inmovilizada,
abandonando este importante desarrollo experimental por problemas
prcticos de aplicacin. Para 1999 la produccin de Neolac lleg a
400 000 L/mes pero ya en una relacin comercial de mayor independencia, con la empresa Cuadritos ubicada en Celaya, ya que Neolac
adquira directamente con productores su propia leche.
Hoy en da Neolac comercializa la leche deslactosada Desly, la primera en aparecer en el mercado nacional (figura 1). Comparte el liderazgo
con Parmalat y Alpura las cuales tienen ventajas de todo tipo incluida no
slo la negociacin con tiendas por la amplia gama de productos que
manejan, sino que adems pueden castigar los precios, de tal suerte
que el consumidor encuentra el litro de leche deslactosada de otras marcas a un costo de alrededor de 3.00 pesos menos. El proceso puede efectuarse con la enzima -galactosidasa que comercializa Gist-Brocades (Genencor) o Amano.
Figura 1
DIVERSAS PRESENTACIONES DE LA LECHE DESLY
Desarrollada por la doctora Lidia Casas, inicialmente en el Instituto de Biotecnologa de
la UNAM, este producto es una leche deslactosada, pues mediante un tratamiento enzimtico se ha transformado al azcar principal de la leche, la lactosa, en sus dos componentes: la glucosa y la galactosa, de mucha ms fcil digestin. El nmero de individuos que padecen la llamada intolerancia a la lactosa es muy elevado en el mundo.
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Figura 2
ANUNCIO PUBLICITARIO DEL EDULCORANTE A BASE DE FRUCTOSA
Desarrollado por investigadores de la Universidad de Guadalajara, en las pginas de la
revista Food Technology, rgano informativo tcnico de la Organizacin de Tecnlogos en
Alimentos de los EUA.
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Figura 3
ESTRATEGIA GLOBAL DEL DESARROLLO TECNOLGICO
Esquema de la estrategia general seguida entre diversos grupos de investigacin de la
UNAM para el diseo de un proceso de produccin de penicilinas semisintticas.
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Tabla 1
PRINCIPALES APORTES DE DIVERSOS GRUPOS DE INVESTIGACIN
DE LA UNAM INVOLUCRADOS EN EL DESARROLLO DE UN
PROCESO PARA LA PRODUCCIN DE CIDO 6-AMINOPENICILNICO Y DE PENICILINAS SEMISINTTICAS
Antecedentes
El papel de las penicilino amidasas en la industria (13).
Caracterizacin de la regin regulatoria de la penicilino acilasa de Escherichia coli (14).
Produccin de la enzima y elaboracin de biocatalizadores
Caracterizacin y aplicacin de un biocatalizador de Penicilino Acilasa (15).
Simulacin de un reactor multicolumna empacado y recirculado para la
penicilino acilasa (16).
Biocatalizador de penicilino acilasa con clulas de Escherichia coli recombinantes: caracterizacin y aplicacin en la sntesis e hidrlisis de antibiticos
(17).
Estrategias en el diseo de un proceso con penicilino acilasa (18).
Proceso de reaccin
Modelamiento y simulacin de un proceso dependiente del pH: conversin
de penicilina G en 6 APA (19).
Cultivos alimentados exponencialmente como una alternativa al quemostato: el caso de la produccin de penicilino acilasa recombinante (20).
Efecto del pH en la sntesis de ampicilina con penicilino acilasa (21).
Mejoras estructurales a la enzima
Construccin de una mutante de la penicilino acilasa de Escherichia coli con
mayor estabilidad trmica en un medio alcalino (22).
Diseo de una penicilino acilasa de una sola cadena permutada circularmente, que resulta ms funcional que la enzima natural (23).
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Figura 4
EXPLOTACIN DEL CEMPASCHIL
Esquema del proceso de extraccin enzimtica de los colorantes carotenoides de la flor
de cempaschil, comparado con el proceso tradicional.
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no correspondiente. Este suero contiene entonces como principio activo a los anticuerpos contra el veneno inyectado al animal y se le conoce
como antitoxina (inmunoglobulinas). Sin embargo el suero de caballos
contiene mltiples protenas adicionales a las antitoxinas lo que oblig
dcadas despus a separarlas mediante una precipitacin con sales, lo
que elimina entre otras protenas a la albmina que es altamente alergnica. Finalmente la tercera generacin de antivenenos corresponde
a una modificacin mediante un proceso enzimtico de las antitoxinas:
en efecto, al ser hidrolizadas con la enzima pepsina, se elimina la fraccin de la protena del anticuerpo que es responsable de los efectos
secundarios de la sueroterapia, dejando intacta la fraccin que neutraliza a las toxinas y molculas de los venenos. Esta fraccin se denomina
F(ab)2 y constituyen lo ms avanzado en el tratamiento de mordeduras
de animales ponzoosos, tratamiento que se conoce como faboterapia.
La faboterapia ha eliminado prcticamente las reacciones de hipersensibilidad al suero, segn lo demuestran los ms de 250 000 pacientes hasta
ahora tratados en el IMSS y la Cruz Roja con Alacramyn y Antivipmyn. Los
conceptos faboterapia y faboteraputicos fueron propuestos por el
doctor Alejandro Alagn Cano, investigador del Instituto de Biotecnologa de la UNAM (29). Dichos conceptos sirven para distinguir claramente a estos antivenenos eficacez y de altsima seguridad de aquellos
basados en anticuerpos sin digestin enzimtica o sueros crudos de caballo que si bien neutralizan a los venenos tienen efectos secundarios indeseables. El doctor Alagn, a travs de un convenio de colaboracin con
el mayor productor de antivenenos en Mxico y el mundo, el Instituto
Bioclon S.A. de C.V., tambin estableci y valid los mtodos analticos y
de control de calidad que garantizan la seguridad de los Faboterpicos.
Es importante sealar que dichos antivenenos se encuentran actualmente en evaluacin por la FDA para ser aprobados en los EUA y que el
Instituto Bioclon tiene hecha una solicitud de patente de los faboterpicos a nivel mundial.
CONCLUSIONES
Como puede constatarse, la tecnologa enzimtica y la biocatlisis son
actividades de investigacin ubicadas dentro de la biotecnologa que en
Mxico se desarrollan en grupos que cuentan un nivel internacional,
aunque ciertamente su nmero es muy limitado considerando el poten-
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cial del rea. Algunos de los ejemplos fueron seleccionados con el fin de
poner en evidencia la capacidad de estos grupos y su repercusin e impacto a nivel nacional e internacional, pero de ninguna manera abarca
a todos los grupos existentes y es probable que existan casos igual o ms
exitosos que los descritos. stos fueron seleccionados por el conocimiento que el autor tiene de los mismos, aunado al hecho de que ilustran dificultades especficas para el desarrollo de esta rea. A las dificultades inherentes a la relacin academia-industria, debemos agregar en este caso,
la escasa experiencia que existe en la industria sobre el uso y manejo
de las enzimas, su control por parte de grandes empresas productoras
y la complejidad que estara asociada a la autosuficiencia en biocatalizador en una determinada empresa. Sin embargo, varios de los ejemplos
descritos, dan cuenta de la capacidad existente en el pas para llevar
acabo desarrollos en biocatlisis.
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