31

2.4.2 Avaliao de gentipos

Os gentipos estudados apresentaram diferentes respostas de resistncia
quando inoculados com ambas as estirpes de R. solanacearum (Tab. 4). A estirpe
CNPH152 provocou a perda de massa seca da parte area (AMS negativo) para
todos os gentipos, enquanto a estirpe CNPH19 provocou perda ou aumento de
massa seca da parte area (AMS negativo ou positivo), destacando-se a reao do
gentipo CNPH785 que alcanou 74% de aumento mdio de AMS.
A

anlise

considerando-se

de
50%

agrupamento
de

multivariada

dissimilaridade

da

(IMB10,
distncia

IMB21
de

AMS),

Mahalanobis

(ALBUQUERQUE, 2005; ARAMENDIZ-TATIS et al., 2011; CARGNELUTTI FILHO et

al., 2008), separou trs grupos de reao de resistncia estirpe CNPH19, que
tiveram uma classificao de resistncia apontada neste trabalho por esta
separao: Grupo 1 (suscetveis) - PROVS75, CIA, CNPH777, CNPH006,
CNPH130, CNPH658, CNPH779, CNPH780, CNPH783, CNPH784, CNPH786,
CNPH781, CNPH782, CNPH171 e CNPH407; Grupo 2 (medianamente resistentes) CNPH788, CNPH778, CNPH787, CNPH785 e PROVTS3; Grupo 3 (resistentes) CNPH776, e dois grupos para a estirpe CNPH152: Grupo 1 (suscetveis) CNPH658, CNPH777 e PROVS75; Grupo 2 (resistentes) - CNPH407, CNPH171,
CNPH781, CNPH784, CNPH785, CNPH006, PROVTS3, CNPH779, CNPH788,
CNPH783, CNPH782, CNPH778, CNPH780, CNPH786, CNPH776 e CNPH787
(Fig. 1). A classificao de resistncia dos grupos separados para as duas estirpes
bacterianas no so correspondentes, uma vez que as respostas obtidas para a
estirpe CNPH19 permitiu a separao de maior nmero de grupos do que aquelas
obtidas para a estirpe CNPH152. As faixas de variao de IMB10, IMB21 e AMS dos
grupos separados para as estirpes CNPH19 e CNPH152 so apresentadas na
Tab. 5.
O gentipo CNPH7776, que apresentou resistncia muito destacada em
relao estirpe CNPH19, foi tambm resistente estirpe CNPH152, podendo ser
considerado o mais resistente entre os gentipos testados. Os gentipos CNPH788,
CNPH778, CNPH787, CNPH785 e PROVTS3 tambm apresentaram bom nvel de
resistncia, uma vez que no apresentaram perda de AMS.

32
Tabela 4 Severidade de murcha bacteriana em plantas de 21 gentipos de
berinjela, expressa pelo ndice de murcha bacteriana aos 10 e 21 dias
aps a inoculao (IMB10 e IMB21, respectivamente) com as estirpes
CNPH19 e CNPH152 de Ralstonia solanacearum (raa 1, biovar I) e
alterao de massa seca na parte area em relao testemunha no
inoculada (AMS) aos 21 dias aps a inoculao
Estirpes
CNPH19

Gentipos

CNPH152

IMB10*

IMB21*

AMS*+c

CIA

4,7 a

4,9 a

946,3 b

ND

ND

CNPH006

4,9 a

5,0 a

934,9 b

2,3 c

2,5 c

CNPH130

4,4 a

4,8 a

964,6 b

ND

ND

CNPH171

3,9 b

4,2 b

948,3 b

2,0 c

2,7 c

965,3 a

CNPH407

3,7 b

4,1 b

969,1 b

2,4 b

2,1 b

919,1 b

CNPH658

4,6 a

4,2 b

945,9 b

4,5 a

4,6 a

915,7 b

CNPH776

2,8 c

1,6 e

1024,2 a

1,5 d

1,6 d

995,3 a

CNPH777

4,9 a

5,0 a

950,0 b

4,5 a

4,7 a

912,0 b

CNPH778

2,2 d

2,2 d

1024,4 a

1,1 d

1,1 d

995,5 a

CNPH779

3,8 b

3,6 c

979,4 b

1,4 d

1,4 d

976,5 a

CNPH780

3,0 c

3,2 c

1023,9 a

1,3 d

1,3 d

990,8 a

CNPH781

3,9 b

4,3 b

990,2 b

2,0 c

2,5 c

968,3 a

CNPH782

3,6 b

3,9 b

993,1 b

1,0 d

1,2 d

988,5 a

CNPH783

3,3 c

3,3 c

1025,1 a

1,0 d

1,0 d

967,6 a

CNPH784

3,4 c

3,6 c

1010,3 a

2,1 c

2,3 c

957,3 a

CNPH785

1,3 e

1,3 e

1074,0 a

2,5 c

2,6 c

959,7 a

CNPH786

3,2 c

3,6 c

1025,2 a

1,4 d

1,3 d

996,8 a

CNPH787

2,8 c

2,6 d

1032,3 a

1,8 c

1,9 d

993,1 a

CNPH788

2,2 d

2,1 d

1050,1 a

1,5 d

1,9 d

978,0 a

PROVTS3

2,8 c

2,6 d

971,1 b

1,2 d

1,3 d

975,0 a

PROVS75

4,7 a

4,9 a

957,1 b

4,5 a

4,3 a

924,8 b

Mdia

3,51

3,55

992,35

2,11

2,21

966,5

CV(%)

16,46

17,47

3,15

33,10

31,31

1,86

IMB10**

IMB21**

AMS**+c
ND
984,3 a
ND

Mdias de cinco repeties para a estirpe CNPH19.

Mdias de trs repeties para a estirpe CNPH152.
Valores seguidos de mesma letra na coluna no se diferenciam entre si, segundo o teste de
agrupamento de Scott-Knott (P<0,05).
ND: no determinado.
+c Valores adicionados da constante 1000.
CV: coeficiente de variao.
**

33
PROVS75
CIA
CNPH777
CNPH006
CNPH130
CNPH658
CNPH779
CNPH780
CNPH783
CNPH784
CNPH786
CNPH781
CNPH782
CNPH171
CNPH407
CNPH788
CNPH778
CNPH787
CNPH785
PROVTS3
CNPH776 0
0
CNPH658
CNPH777
PROVS75
CNPH407
PROVTS3
CNPH779
CNPH780
CNPH778
CNPH782
CNPH786
CNPH783
CNPH171
CNPH781
CNPH788
CNPH784
CNPH785
CNPH776
CNPH787
CNPH006 0
0

Grupo 1

Grupo 2

Grupo 3

10
1,63

20
3,26

30
4,89

40
6,52

50
8,15

60
9,78

70
11,41

80
13,04

Grupo 1

90
14,67

100
16,31

Grupo 2

10
3,16

20
6,33

30
9,5

40
50
60
12,67 15,84 19,01
Distncia de Mahalanobis

70
22,18

80
25,34

90
28,51

100
31,68

Figura 1 Dendrogramas de dissimilaridade das distncias de Malahanobis das

reaes de gentipos de berinjela inoculados com as estirpes CNPH19
(A) e CNPH152 (B) de Ralstonia solanacearum, expressas pelo ndice de
murcha bacteriana aos 10 e 21 dias aps a inoculao (DAI) e alterao
de massa seca na parte area em relao testemunha no inoculada
aos 21dias aps a inoculao.

34
Tabela 5 Grupos de classificao de gentipos de berinjela obtidos por anlise de
agrupamento multivariada para as estirpes CNPH19 e CNPH152 e suas
respectivas faixas de ndice de murcha bacteriana aos 10 e 21 dias aps
a inoculao (IMB10 e IMB21) e alterao de massa seca na parte area
em relao testemunha no inoculada (AMS)
Classificao
Estirpe
Grupo
IMB10
IMB21
AMS

CNPH19

CNPH152

Suscetvel

4,9 a 3,0

5,0 a 3,2

-65,1 a 25,2

Medianamente
resistente

2,8 a 1,3

2,6 a 1,3

-28,9 a 24,4

Resistente

2,8

1,6

24,2

Suscetvel

4,5 a 2,4

4,7 a 2,1

-88 a -75,2

Resistente

2,5 a 1,0

2,7 a 1,0

-42,7 a - 3,2

35
2.4.3 Estudo da interao entre gentipos e estirpes
Houve interao entre estirpes de R. solanacearum e gentipos de S. melongena
para os ndices de murcha bacteriana aos 10 e 21 DAI (P0,05) e para a alterao
de massa seca da parte area (P0,01) (Tab. 6).
Apesar de haver sido observada interao entre estirpes e gentipos, o
gentipo CNPH778 foi o que apresentou maior resistncia s distintas estirpes.
Observou-se que para este gentipo as estirpes testadas tiveram o mesmo
comportamento de virulncia.
A estirpe CNPH19 apresentou-se como a mais virulenta para quatro dos
gentipos estudados (CNPH006, CNPH171, CNPH407 e CNPH658). Observou-se
que esta estirpe provocou baixa severidade de murcha bacteriana para as plantas
do gentipo CNPH785, tendo permitido aumento na massa seca da parte area
(AMS) para os gentipos CNPH785 e CNPH778. Esta estirpe proporcionou maior
distino entre os gentipos estudados.
Como j ocorrido nos ensaios anteriores, alm do sintoma tpico de murcha,
foram

observados:

menor

crescimento

de

plantas,

amarelecimento,

encarquilhamento (Apndice 1) e queda prematura de folhas.

Os resultados observados neste ensaio tambm so apresentados no
Apndice 2. Os valores de ndice de murcha bacteriana (IMB) em todos os gentipos
(com exceo do gentipo CNPH658, aos 10 e 21 DAI, e o gentipo CNPH006, aos
21 DAI) foram abaixo de 2,0 para cinco das seis estirpes estudadas (CNPH13,
CANPH47, CNPH56, CNPH71 e CNPH152). Para os gentipos CNPH785 e
CNPH778 para todas as estirpes inoculadas o IMB10 e IMB21, inclusive para a
estirpe CNPH19.
A anlise de agrupamento multivariada, considerando-se como linha de
corte 50% da distncia de Mahalanobis (Fig. 2), separou dois grupos: Grupo 1
(resistentes) CNPH782, CNPH783, CNPH785, CNPH778, CNPH171, CNPH407 e
CNPH006; e Grupo 2 (suscetveis): CNPH658. Se fosse considerada a linha de corte
em 40% haveria a separao de trs grupos: Grupo 1 (resistentes) CNPH782,
CNPH783, CNPH785 e CNPH778; Grupo 2 (medianamente resistentes) CNPH171,
CNPH407 e CNPH006; e Grupo 3: CNPH658 (suscetveis).

36
Foi feito tambm o agrupamento por anlise multivariada da virulncia das
estirpes de Ralstonia solanacearum, com a separao de dois grupos com linha de corte
de 50% de dissimilaridade e trs grupos, se fosse considerada a dissimilaridade de
40% (Fig. 3). A estirpe CNPH19 ficaria classificada como componente nico em
qualquer das duas situaes, dado o elevado nvel de virulncia apresentado por
esta estirpe, enquanto as outras cinco estirpes seriam agrupadas em um nico
grupo (50% de dissimilaridade) ou haveria a separao das estirpes CNPH13 e
CNPH152, com nvel de virulncia inferior estirpe CNPH19, porm mais elevado
que as estirpes CNPH47, CNPH71 e CNPH56 (40% de dissimilaridade).

37
Tabela 6 Virulncia de seis estirpes de Ralstonia solanacearum, raa 1, em oito
gentipos de berinjela, expressa em logaritmo do ndice de murcha
bacteriana aos 10 e 21 dias aps a inoculao (IMB10 e 21), e
alterao de massa seca na parte area em relao testemunha no
inoculada (AMS) aos 21 dias aps a inoculao
*

Estirpe CNPH71

Estirpe CNPH56

Estirpe CNPH47

Estirpe CNPH19

Estirpe CNPH13

Log(IMB10)
Gentipo
Log(IMB21)
Gentipo
AMS +c
0,164 b c
CNPH006
0,243 b
CNPH006
989,4 a b
0,156 b c d CNPH171
0,180 b c
CNPH171
984,2 a b
0,130 b c d CNPH407
0,117 b c
CNPH407
1000,3 a
0,372 a
CNPH658
0,454 a
CNPH658
965,2 b
0,030
c d CNPH778
0,058
c
CNPH778
999,3 a
0,093 b c d CNPH782
0,083
c
CNPH782
979,5 a b
0,049
c d CNPH783
0,083
c
CNPH783
988,6 a b
0,180 b
CNPH785
0,136 b c
CNPH785
988,5 a b
0,642 a
CNPH006
0,698 a
CNPH006
907,8
c
0,587 a
CNPH171
0,661 a
CNPH171
917,5
c
0,604 a
CNPH407
0,617 a
CNPH407
910,6
c
0,589 a
CNPH658
0,670 a
CNPH658
918,3
c
0,121
c
CNPH778
0,161
c
CNPH778
1002,1 a
0,345 b
CNPH782
0,371 b
CNPH782
966,2 b
0,483 b
CNPH783
0,463 b
CNPH783
960,4 b
0,097
c
CNPH785
0,091
c
CNPH785
1005,3 a
0,175 b
CNPH006
0,247 b
CNPH006
992,3 a
0,060 b c
CNPH171
0,089
c
CNPH171
994,4 a
0,050 b c
CNPH407
0,042
c
CNPH407
994,6 a
0,410 a
CNPH658
0,571 a
CNPH658
948,4 b
0,019
c
CNPH778
0,067
c
CNPH778
999,8 a
0,019
c
CNPH782
0,090
c
CNPH782
980,7 a
0,053 b c
CNPH783
0,012
c
CNPH783
986,6 a
0,048 b c
CNPH785
0,063
c
CNPH785
988,0 a
0,291 b
CNPH006
0,379 b
CNPH006
964,9 a b
0,163 b c
CNPH171
0,169
c d CNPH171
989,6 a
0,146
c d CNPH407
0,180
c
CNPH407
993,6 a
0,556 a
CNPH658
0,644 a
CNPH658
930,6 b
0,030
d CNPH778
0,050
d CNPH778
995,2 a
0,077
c d CNPH782
0,091
c d CNPH782
993,5 a
0,096
c d CNPH783
0,111
c d CNPH783
986,6 a
0,127
c d CNPH785
0,127
c d CNPH785
973,7 a
0,287 b
CNPH006
0,398 b
CNPH006
975,3 a b
0,076
c d CNPH171
0,051
c d CNPH171
992,6 a
0,160
c
CNPH407
0,149
c
CNPH407
986,7 a
0,443 a
CNPH658
0,561 a
CNPH658
948,7 b
0,013
d CNPH778
0,019
d CNPH778
1001,3 a
0,012
d CNPH782
0,029
c d CNPH782
1000,0 a
0,029
d CNPH783
0,031
c d CNPH783
993,3 a
0,037
c d CNPH785
0,044
c d CNPH785
997,7 a
0,266 b
CNPH006
0,327 b
CNPH006
981,4 a b
0,222 b c
CNPH171
0,223 b c
CNPH171
985,4 a b
0,169 b c d CNPH407
0,159
c d CNPH407
1002,8 a
0,472 a
CNPH658
0,504 a
CNPH658
959,8 b
0,092
d CNPH778
0,069
d CNPH778
994,3 a
0,123
c d CNPH782
0,111
c d CNPH782
977,8 a b
0,104
c d CNPH783
0,105
c d CNPH783
998,4 a
0,210 b c d CNPH785
0,194
c d CNPH785
977,1 a b
Mdia
0,20
0,23
978,51
CV(%)
28,89
25,36
1,47
* Mdias de quatro repeties. Valores seguidos de mesma letra em cada combinao
estirpe-gentipo no diferem entre si, pelo teste Tukey (P<0,05).
+c Valores adicionados da constante 1000. CV: coeficiente de variao.
Estirpe CNPH152

Gentipo
CNPH006
CNPH171
CNPH407
CNPH658
CNPH778
CNPH782
CNPH783
CNPH785
CNPH006
CNPH171
CNPH407
CNPH658
CNPH778
CNPH782
CNPH783
CNPH785
CNPH006
CNPH171
CNPH407
CNPH658
CNPH778
CNPH782
CNPH783
CNPH785
CNPH006
CNPH171
CNPH407
CNPH658
CNPH778
CNPH782
CNPH783
CNPH785
CNPH006
CNPH171
CNPH407
CNPH658
CNPH778
CNPH782
CNPH783
CNPH785
CNPH006
CNPH171
CNPH407
CNPH658
CNPH778
CNPH782
CNPH783
CNPH785

38
CNPH782
CNPH783
CNPH785
CNPH778
CNPH171
CNPH407
CNPH006
CNPH658

Grupo 1

Grupo 2

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

.23

.47

.3

.94

1.17

1.41

1.64

1.91

2.15

2.38

Distncia de Mahalanobis
Figura 2 Dendrograma de dissimilaridade das distncias de Mahalanobis das
reaes de oito gentipos de berinjela causadas pela inoculao de seis
estirpes de Ralstonia solanacearum (CNPH13, CNPH19, CNPH47,
CNPH56, CNPH71 e CNPH152) e expressas pelo ndice de murcha
bacteriana aos 10 e 21 dias aps a inoculao e alterao de massa
seca na parte area em relao testemunha no inoculada aos 21
dias aps a inoculao.
CNPH47
CNPH71
CNPH56
CNPH13
CNPH152
CNPH19

Grupo 1

Grupo 2
0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

.22

.43

.64

.86

1.07

1.29

1.51

1.72

1.94

2.15

Distncia de Malahanobis

Figura 3 Dendrograma de dissimilaridade das distncias de Mahalanobis da

severidade de murcha bacteriana causada por seis estirpes de Ralstonia
solanacearum em oito gentipos de berinjela (CNPH006, CNPH171,
CNPH407, CNPH658, CNPH778, CNPH782, CNPH783 e CNPH785),
expressa pelo ndice de murcha bacteriana aos 10 e 21 dias aps a
inoculao e alterao de massa seca na parte area em relao
testemunha no inoculada.

39
2.5 Discusso
A diversidade de virulncia das estirpes estudadas neste trabalho
concordante com os dados observados em quase a totalidade de estudos com R.
solanacearum.

Foi possvel verificar que estirpes de biovares I, II e III, procedentes de

diferentes hospedeiros em diferentes regies do Brasil, foram capazes de causar

murcha bacteriana em berinjela, no sendo apresentada relao entre virulncia e a
procedncia de local ou hospedeiro, ou ainda, com a biovar, em concordncia com
os dados de Morgado; Lopes; Takatsu (1992b). Pode-se observar perda de
virulncia para as estirpes CNPH104 e CNPH105, associada capacidade de
aumento de AMS. Alguns trabalhos relatam a possibilidade de estirpes avirulentas
de R. solanacearum serem utilizados para controle biolgico da murcha bacteriana
(TRIGALET; TRIGALET-DEMERY, 1990; FREY et al.,1994;

ETCHEBAR et al.,

1998; TRIGALET; TRIGALET-DEMERY; FEUILLADE, 1998). As estirpes CNPH104

e CNPH105 poderiam ser mais estudadas para avaliar sua capacidade de
colonizao, variao de AMS e estabilidade quanto s suas caractersticas de
avirulncia em outras variedades de berinjela e tambm em outras espcies
vegetais.
importante observar que na avaliao de resistncia dos gentipos
tambm houve resposta de aumento de AMS em plantas dos gentipos CNPH776,
CNPH778, CNPH780, CNPH783, CNPH784, CNPH785, CNPH786, CNPH787 e
CNPH788 quando inoculados com a estirpe CNPH19, porm, com a apresentao
de sintoma de murcha em todos os gentipos avaliados, o que descarta qualquer
possibilidade de estudo para a finalidade de controle biolgico.
A informao dada pela avaliao de alterao de massa seca da parte
area em relao testemunha no inoculada (AMS) foi til para complementar a
comparao feita entre estirpes e gentipos quando no ocorreram diferenas nas
notas de murcha (IMB).
Na avaliao de resistncia, os resultados foram diferentes daqueles
descritos anteriormente (CHEN; LI; WANG, 1997; MORGADO, 1991), evidenciando
que a grande variabilidade do patgeno sempre um dos fatores que dificultaro a
eficincia de resistncia de variedades desenvolvidas para este fim em diferentes
locais (regionais ou mesmo em termos de propriedade). Isto refora a necessidade
de serem utilizadas diferentes estirpes no desenvolvimento de novas variedades que

40
visem resistncia murcha bacteriana, principalmente aquelas prevalecentes em
locais especficos para utilizao das variedades a serem desenvolvidas (LOPES;
GIORDANO, 1983; LOPES; BOITEUX, 2004). Os resultados de Morgado; Lopes;
Takatsu (1992a) indicaram os gentipos CNPH171 e CNPH407, como resistentes
segundo a severidade de murcha alcanada, e de fato, estes gentipos apresentam
maior resistncia quando comparados ao padro suscetvel (CNPH658), porm, no
presente trabalho estes gentipos se equipararam ao gentipo CNPH006, que se
apresentou com um nvel de suscetibilidade prximo ao do padro suscetvel
(CNPH658). Neste trabalho, estes gentipos tiveram classificao de resistncia
mediana ou baixa, e isso se deve comparao com gentipos provenientes do
AVRDC Taiwan, que apresentam resistncia muito elevada e tambm utilizao
da avaliao de AMS. Com base nos dados apresentados no Apndice 2, houve um
padro onde poderia se reconhecer comportamento de resistncia quantitativa ou
no especfica (horizontal), segundo Vanderplank (1963, 1982), para os gentipos
CNPH778 e CNPH785. Os gentipos CNPH171, CNPH407, CNPH782 e CNPH783
tambm teriam apresentado padro de resistncia horizontal, se no fosse a reao
estirpe CNPH19, que poderia ser reconhecida como deficincia da resistncia a
uma variante do patgeno especfica, evidenciando instabilidade na resistncia.
Portanto, mais estudos so necessrios para concluir sobre o comportamento de
resistncia dos gentipos estudados neste trabalho.
Entre os gentipos estudados neste trabalho foi possvel observar que
CNPH776, CNPH778, CNPH787, CNPH788, CNPH785 e PROVTS3, provenientes
do AVRDC apresentaram nvel de resistncia elevado, com potencial para sua
utilizao para um programa de melhoramento. Uma caracterstica negativa
apresentadas por gentipos o fato de produzirem frutos claros (Apndice 3),
caracterstica diferente daquela desejada no mercado brasileiro, que a de frutos
escuros (RIBEIRO; BRUNE; REIFSCHNEIDER, 1998), porm, esta uma
caracterstica que poderia ser incorporada em um trabalho de melhoramento para
obteno de material comercial resistente murcha bacteriana, que viesse a utilizar
estes gentipos.

41
2.6 Concluses
As estirpes CNPH152 e CNPH19 so as mais virulentas para os gentipos
CNPH110 (suscetvel) e CNPH171 (resistente), respectivamente.
Entre as estirpes estudadas existe elevada diversidade de virulncia, que
no se correlaciona com a origem ou biovar da estirpe.
Os gentipos provenientes do AVRDC - Taiwan (Asian Vegetable Research
and Development Center) apresentam elevado nvel de resistncia murcha
bacteriana,

destacando-se

os

gentipos

CNPH776,

CNPH778,

CNPH787,

CNPH788, CNPH785 e PROVTS3.

Existe interao entre estirpes e gentipos, o que dificulta a seleo de uma
nica estirpe para trabalhos de resistncia e a discriminao de gentipos como
resistentes ou suscetveis.

42

3 Captulo II
Produo de frutos e sintomas em gentipos de berinjela cultivados em solo
infestado por Ralstonia solanacearum

3.1 Resumo
A produo de frutos de berinjela e sintomas apresentados em plantas dos
gentipos CNPH006, CNPH171, CNPH658, CNPH778, CNPH783 e CNPH785 foram
observados em solo naturalmente infestado por Ralstonia solanacearum, raa 1, biovar
III, para quantificao de perdas causadas pela infeco bacteriana. Com exceo
do gentipo CNPH778, todos apresentaram ao menos uma planta com murcha
tpica da doena. Alm de murcha, foram observados os sintomas de seca e morte
de plantas, nos gentipos CNPH006 e CNPH658, amarelecimento de folhas, no
gentipo CNPH785; e menor crescimento de plantas, em todos os gentipos. A
ocorrncia de fluxo bacteriano foi constatada em todas as plantas cultivadas nos
canteiros infestados inclusive as que no apresentaram sintomas. Simultaneamente,
outro ensaio foi instalado em canteiros prximos, porm no infestados, com as
mesmas caractersticas de solo e dimenses, para obteno de dados de produo
sem ocorrncia de murcha. Foi calculada a perda percentual de produo de cada
gentipo conduzido em solo infestado em relao produo da rea sem
ocorrncia de murcha. Os gentipos foram agrupados (Scott-Knott P0,05) quanto
sua capacidade de manter a produo de frutos em uma rea infestada com R.
solanacearum. O gentipo CNPH785 foi o mais resistente, no apresentando perda na
produo em relao mdia obtida na rea livre do patgeno, seguido dos
gentipos CNPH783, CNPH778 e CNPH171, com perdas mdias em relao
mdia obtida na rea livre do patgeno de 19,3%; 11,4%; e 10,1%, respectivamente.
Os gentipos CNPH658 e CNPH006 foram os mais suscetveis, com perdas mdias
de 99,53 e 99,32%, respectivamente.
Palavras-chave: murcha bacteriana, Solanum melongena, perdas

43
3.2 Introduo
A ocorrncia de murcha bacteriana, causada por Ralstonia solanacearum
(Smith) Yabuuchi et al., um dos fatores limitantes para produo de berinjela
(Solanum melongena L.) em regies de clima quente e mido. Na regio Amaznica a
doena um srio problema para o cultivo de solanceas, ficando a produo local
quase restrita a pequenas hortas caseiras (COELHO NETTO et al., 2004). Nos
plantios de berinjela no estado do Amazonas, constataram-se perdas de at 40%
(COELHO NETTO et al., 2004). A doena tambm tem grande importncia nas
regies baixas do Nordeste e do Centro-Oeste (TAKATSU; LOPES, 1997). No
agreste pernambucano foram observados 60% de plantios de tomate infectados com
a doena, com incidncia mdia de 13% (SILVEIRA; MICHEREFF; MARIANO,
1997).
O sintoma tpico da doena a murcha da planta de cima para baixo,
resultante da interrupo parcial ou total do fluxo de gua desde as razes at o topo
da planta (LOPES, 2009). Pode ocorrer ainda epinastia foliar e formao de razes
adventcias devido ao desequilbrio nos nveis de auxina e etileno (BUDDENHAGEN;
KELMAN, 1964). O patgeno penetra na planta atravs de ferimentos causados pelo
crescimento de razes secundrias, colonizando as clulas do crtex e do
parnquima vascular, de forma intercelular, com rompimento de paredes celulares
que facilitam a invaso dos vasos do xilema do hospedeiro (VASSE; FREY;
TRIGALET, 1995). Vasos xilemticos podem abrigar concentrao superior a 1010
clulas por centmetro em tecidos de tomate, que juntamente com polissacardeos
extracelulares produzidos pelo patgeno aumentam a viscosidade do fluido do
xilema, dificultando seu fluxo na direo das folhas provocando a murcha e morte da
planta (GENIN; BOUCHER, 2002). H formao de tiloses e aumento nos nveis de
etileno e cido abscsico, que completam o quadro sintomtico complexo da murcha
(KELMAN, 1953). Da planta morta, a bactria retorna ao solo onde sobrevive
saprofiticamente at infectar uma nova planta.
A diagnose de murcha bacteriana feita cortando-se uma seo longitudinal
contendo tecido vascular, geralmente escurecido, de plantas suspeitas de
apresentarem infeco por R. solanacearum e colocando-a em um recipiente
transparente contendo gua em repouso. Em poucos minutos, finos fios

44
esbranquiados fluem das margens do tecido, sendo esta a resposta positiva para R.
solanacearum

(LOPES; QUEZADO-SOARES, 1997).

Em ensaios em casa de vegetao, gentipos de berinjela foram relatados

como resistentes murcha bacteriana (MORGADO et al. 1992a; OLIVEIRANAPOLEO et al., 1998; OLIVEIRA-NAPOLEO et al., 1999). Nestes gentipos
foram observados sintomas diferentes de murcha, entre eles, subcrescimento de
mudas (OLIVEIRA-NAPOLEO et al., 1998). Esta reduo do crescimento de
plantas em casa de vegetao leva suposio de perdas de produtividade no
campo. Neste trabalho o objetivo foi observar em campo o crescimento de plantas e
o aparecimento de murcha ou outros sintomas em gentipos classificados como
resistentes em casa de vegetao e tambm avaliar a capacidade produtiva, quando
cultivados em solo naturalmente infestado com R. solanacearum.

3.3 Material e Mtodos

3.3.1 rea dos ensaios e gentipos avaliados
Os ensaios foram conduzidos em solo na Embrapa Hortalias, localizada no
ncleo rural de Ponte Alta, Braslia-DF, sob precipitao mensal mdia de 154,7 mm
e temperatura mensal mdia de 23,9C. Foram utilizados 10 canteiros delimitados
com alvenaria de 1 m de largura por 10 m de comprimento, com solo naturalmente
infestado com R. solanacearum, raa 1, biovar 3, em cinco destes canteiros e os outros
cinco, livres do patgeno. Para verificar a uniformidade de infestao bacteriana do
solo, foram transplantadas em cada canteiro trs linhas de mudas de tomateiro da
cultivar Ponderosa, muito suscetvel murcha, com espaamento de 25 x 25 cm.
Antes do plantio das mudas de tomate foram feitas anlises do solo dos canteiros,
correo com calcrio dolomtico e adubao com NPK (10-10-10) e composto de
esterco bovino, conforme a recomendao para tomate da 4 aproximao da
CFSEMG (1989). No momento do transplantio das mudas, foi aplicado ao redor de
cada muda 5 g de aldicarbe granulado (Temik 150) para controle de insetos e
caros. Aps 30 dias do transplantio, todas as plantas de tomateiro apresentavam
sintomas de murcha e foram incorporadas ao solo do canteiro.

45
Mudas de berinjela com 30 dias aps o semeio foram transplantadas, com
50 cm entre linhas e 80 cm entre plantas. Em cada canteiro foram colocadas quatro
plantas (parcela experimental) de seis gentipos (Tab. 7).

Tabela 7 Gentipos de Solanum melongena avaliados em campo: procedncia e

reaes1 a trs estirpes de Ralstonia solanacearum, raa 1
Estirpe
Gentipo
Procedncia
2
CNPH56
CNPH193
CNPH1523
CNPH006 Agroflora (Brasil/SP)
MR
S
MR
CNPH171
INRA (Frana)
R
S
MR
CNPH658
Topseed (EUA)
S
S
S
CNPH778
AVRDC (ndia)
R
R
CNPH783 AVRDC (Indonsia)
MS
R
CNPH785
AVRDC (ndia)
R
MR
1

R: resistente; MR: medianamente resistente; MS: medianamente suscetvel ; S: suscetvel

Biovar III. Fonte: MORGADO, 1991
3
Biovar I. Fonte: OLIVEIRA-NAPOLEO et al. (1998); OLIVEIRA-NAPOLEO et al. (1999)
2

3.3.2 Registro de plantas sintomticas, fluxo bacteriano e produo de frutos

Foram observados o sintoma de murcha e a morte de plantas aos 10, 50, 90
e 130 dias aps o transplantio. A produo de frutos (kg/planta) de cada parcela foi
avaliada em cinco colheitas, iniciadas 70 dias aps o transplantio das mudas e com
intervalo de 15 dias entre elas. Ao final da ltima colheita todas as plantas das duas
reas foram cortadas e fragmentos do caule de cada planta retirados a 5 cm acima
do colo para observao de fluxo bacteriano em copo (LOPES; QUEZADOSOARES, 1997).
3.3.3 Procedimento estatstico
O delineamento utilizado foi o de blocos casualizados, com cinco repeties
(cada canteiro constituiu um bloco). As anlises de varincia foram feitas utilizando o
programa estatstico Winstat 1.0 (MACHADO; CONCEIO, 2002), sendo feita
neste mesmo aplicativo a anlise de resduos para verificao das pressuposies
da anlise de varincia: grfico de caixa, distribuio normal e disperso do erro. As
mdias de produo dos gentipos foram comparadas pelo teste de Tukey (p0,05).
Foi calculada a reduo percentual da produo dos gentipos estudados em

46
relao mdia de produo dos respectivos gentipos nos cinco canteiros livres do
patgeno e feito testes de agrupamento de Scott-Knott (p0,05), com auxlio do
programa GENES (CRUZ, 2006).

3.4 Resultados
3.4.1 Descrio sintomatolgica e diagnose
Os primeiros sintomas de murcha foram observados 10 dias aps a
transplantio, em plantas dos gentipos CNPH006 e CNPH658. No decorrer do
perodo de avaliao foi observado sintoma de murcha em pelo menos uma planta
em todos os gentipos, com exceo de CNPH778 (Tab. 8). Alm de murcha,
observou-se: seca e morte de plantas, nos gentipos CNPH006, CNPH171,
CNPH783 e CNPH658, amarelecimento de folhas, em CNPH785, e menor
crescimento de plantas em todos os gentipos estudados (Apndice 2).
O teste de exsudao em copo permitiu constatar a presena de
R. solanacearum

em todas as plantas restantes dos canteiros infestados, sem exceo,

embora algumas delas no tenham apresentado murcha ou outros sintomas. De

fragmentos de plantas que apresentaram exsudao, foram feitos isolamentos de
R. solanacearum,

dos quais um isolado ficou depositado na coleo da Embrapa

Hortalias com a identificao CNPH182.

Na rea livre do patgeno, nenhuma planta apresentou sintoma de murcha
ou fluxo bacteriano em copo, o que confirmou a ausncia de R. solanacearum nestas
plantas.

47
Tabela 8 Incidncia de sintoma de murcha (S) e morte (M) em plantas de
gentipos de berinjela, em percentagem, aos 10, 50, 90 e 130 dias
aps transplantio em rea infestada naturalmente com Ralstonia
solanacearum, raa 1, biovar 3.
Dias aps transplantio
Gentipos

10

50

90
S

130

CNPH658

55

100 90

100 100

CNPH006

10

85

100 90

100 95

CNPH171

15

CNPH778

CNPH783

15

10

10

10

CNPH785

10

10

10

3.4.2 Produo de frutos

Os gentipos CNPH006 e CNPH778 foram o mais produtivos na rea com
solo livre de R. solanacearum. Na rea com solo infestado pela bactria o gentipo
mais produtivo foi CNPH778 (Tab. 9), porm o gentipo CNPH785 foi o que
apresentou a menor reduo de produo entre a rea livre da bactria e aquela
infestada (Fig.4). Foi possvel agrupar os seis gentipos em trs grupos: suscetveis
(CNPH 006 e CNPH 658), medianamente resistentes (CNPH 171, CNPH783 e
CNPH778) e resistentes (CNPH785), segundo o teste de Scott-Knott (Fig. 4).
Tabela 9 - Produo (kg de frutos/planta sobrevivente) de seis gentipos de berinjela
em rea livre e em rea infestada por Ralstonia solanacearum, raa 1,
biovar 3
Produo1
Gentipos
rea livre
rea infestada
CNPH658

3,66 b c

0,17

CNPH006

6,16 a

0,41

CNPH171

3,14

CNPH778

5,28 a b

CNPH783

2,70

2,18

CNPH785

1,98

2,08

2,82
4,68

b
a

CV(%)
22,12
15,80
Mdias de 5 repeties. Valores na coluna seguidos pelas mesmas letras no
diferem pelo teste de Tukey (P 0,05). CV: coeficiente de variao.
1

48

Figura 4 Manuteno na produo (peso) de frutos por gentipos de berinjela em

plantas cultivadas em solo naturalmente infestado por Ralstonia
solanacearum, raa 1, biovar 3, em relao mdia de produo em uma
rea livre do patgeno. Os valores das colunas com mesmas letras
formam grupos que no se diferenciam entre si, segundo o teste de
agrupamento de Scott-Knott (P 0,05).

49
3.5 Discusso
O resultado de baixa perda na produo de frutos apresentado pelo gentipo
CNPH171 foram concordantes com aqueles observados em casa de vegetao por
Morgado (1991), onde este gentipo foi apontado como o mais promissor entre os
avaliados, ainda que a estirpe encontrada no solo dos canteiros fosse da biovar 3,
enquanto que aquelas utilizadas na casa de vegetao eram da biovar 1. Entretanto,
este gentipo apresentou-se suscetvel em ensaio em casa de vegetao quando
inoculado com a estirpe CNPH19, pertencente ao biovar I (OLIVEIRA-NAPOLEO
et al., 1998). Este comportamento justificado em funo de interao j observada
entre gentipos e estirpes de berinjela (OLIVEIRA-NAPOLEO et al., 1999). Este
fato reforado por trabalhos onde foi avaliada a resistncia de tomate murcha
bacteriana que tambm relatam as reaes de resistncia alteradas em funo da
variabilidade do patgeno (GRIMAULT; PRIOR, 1994).
O gentipo CNPH658 (Flrida Market) confirmou-se um bom padro de
suscetibilidade murcha bacteriana (MORGADO et al., 1991). O gentipo CNPH006
que nos ensaios de casa de vegetao (MORGADO et al., 1991; OLIVEIRANAPOLEO et al., 1998; 1999), teve resposta varivel, dependendo da estirpe, no
presente ensaio apresentou-se to suscetvel quanto o gentipo CNPH658. Porm,
sua caracterstica de alta produtividade e caracterstica de cor (escuro) e formato de
fruto (alongado), que so as caractersticas demandadas pelo mercado brasileiro,
pode levar a consider-lo como um progenitor recorrente em um futuro trabalho de
melhoramento.
O gentipo CNPH778, que em casa de vegetao foi o mais resistente,
apresentou pouca reduo na produo em relao rea livre de murcha e por ser
um dos gentipos mais produtivos nestes ensaios, foi aquele que alcanou produo
mais elevada que os demais (Tab. 8).
O gentipo CNPH785, apesar de apresentar diversos sintomas de
colonizao pelo patgeno (murcha, amarelecimento de folhas e menor crescimento
das plantas), conseguiu manter a mesma mdia de produtividade que na rea livre
da bactria, o que indica alta tolerncia colonizao do patgeno. Este mesmo
gentipo apresentou aumento de massa seca da parte area quando inoculado com
a estirpe CNPH19 (OLIVEIRA-NAPOLEO et al., 1998). Estes dados podem levar a
considerar que este gentipo tenha alguma reao de estmulo de crescimento

50
quando em contato com algumas estirpes de R. solanacearum, semelhante resposta
de promoo de crescimento proporcionada por rizobactrias, como a observada em
tomate em resposta a inoculao de rizobactrias do gnero Serratia, Pseudomonas e
Bacillus (GAO

et al., 2004).

Dois aspectos foram observados na resistncia dos gentipos CNPH778 e

CNPH785: o nmero de plantas sobreviventes e manuteno da produo de frutos
por planta. O gentipo CNPH778 no apresentou perda de plantas, mas teve a
produo por planta reduzida na rea infestada. Apesar desta reduo, ainda foi o
gentipo mais produtivo na rea com solo infestado. J o gentipo CNPH785
apresentou perda no nmero de plantas, mas manteve na rea infestada a produo
apresentada na rea livre do patgeno.
Estas caractersticas dos gentipos CNPH778 e CNPH785 evidenciaram
diferenas na resistncia que poderiam contribuir de forma distinta em um trabalho
de melhoramento de berinjela visando resistncia murcha bacteriana.

3.6 Concluses
Os gentipos CNPH171, CNPH778, CNPH783 e CNPH785 apresentaram
diferenas na manifestao de sintomas entre si, porm, a reduo de crescimento
das plantas, foi um sintoma apresentado por todos;
Houve diferenas quanto produo de frutos entre os gentipos estudados
sem murcha bacteriana, assim como na manuteno do nvel de produo de frutos
quando em solo infestado por R. solanacearum;
O gentipo CNPH778 no apresentou sintomas de murcha bacteriana
quando cultivado em solo naturalmente infestado pelo patgeno, mesmo
apresentando colonizao pela bactria;
O gentipo CNPH785 apesar de ter apresentado colonizao pelo patgeno e
morte de plantas ocasionada pela murcha, foi capaz de manter sua mdia de
produo de frutos por planta, comparado produo mdia em solo no infestado.

51

4 Captulo III
Titulao de resistncia e colonizao de tecidos por duas estirpes de
Ralstonia solanacearum em gentipos de berinjela com diferentes nveis de
resistncia

4.1 Resumo
A murcha bacteriana, causada por Ralstonia solanacearum, considerada a principal
doena vascular de etiologia bacteriana no mundo, sendo patognica a centenas de
espcies vegetais, incluindo berinjela. O melhoramento incorporando resistncia
gentica s cultivares tem sido a medida que tem apresentado resultados mais
satisfatrios como componente no manejo integrado desta doena. Porm, a
resistncia apresenta variaes em diferentes regies de cultivo. Titulao de
resistncia e estudo da colonizao de tecidos em tomateiro, berinjela e pimento
indicam que a resistncia no apenas devida restrio da penetrao da
bactria na raiz, mas tambm tolerncia dos tecidos vasculares a altas
populaes do patgeno. Para adicionar informaes a caracterizao de
resistncia dos gentipos CNPH778 e CNPH785, foram avaliadas curvas de
titulao de resistncia utilizando-se suspenses bacterianas das estirpes CNPH19
e CNPH182, com concentraes de 104 a 109. Foi avaliada tambm a capacidade
de colonizao do patgeno dos tecidos destes gentipos com as mesmas estirpes
bacterianas, em perodo de 0 a 48h. O gentipo CNPH778 foi o mais resistente
estirpe CNPH182, mas no manteve sua posio como gentipo resistente estirpe
CNPH19, previamente observada, quando avaliado pela titulao de resistncia. O
gentipo CNPH785 apresentou menor resistncia quando comparado ao gentipo
CNPH778, destacando-se em relao estirpe CNPH19. Os gentipos CNPH778 e
CNPH785 apresentaram o mesmo desempenho quanto colonizao de tecidos do
caule, alcanando valores de log(ufc/g) de 7,83 e 7,95, respectivamente, segundo
anlise de regresso, e valores de 8,63 e 8,36 para os gentipos CNPH171 e
CNPH658, respectivamente, para o perodo estudado.
Palavras-chave: murcha bacteriana, Solanum melongena.

52
4.2 Introduo
A

murcha

bacteriana,

causada

por

Ralstonia

solanacearum

(Smith)

Yabuuchi et al., considerada a principal doena vascular de etiologia bacteriana no

mundo, sendo patognica a centenas de espcies vegetais, incluindo berinjela,
tomate, batata, fumo, pimenta, banana, gengibre, caupi e amendoim, sendo mais
grave em regies quentes e midas (HAYWARD, 1991). Esta doena considerada
grave para a maioria das culturas hospedeiras pela dificuldade do seu controle.
A berinjela, Solanum melongena L., por ser nativa dos trpicos requer
temperaturas elevadas para seu crescimento e maturao de frutos, mesmas
condies que so favorveis bactria, o que limita mais ainda o seu controle
nesta espcie hospedeira. A utilizao de estratgias de manejo como rotao de
culturas, ajuste da poca de plantio e tratamento do solo, que so eficientes para
controle da murcha em batata (FRENCH, 1994) so inviveis no cultivo de berinjela.
O uso de cultivares resistentes para produo ou para porta enxerto so as
estratgias

mais

bem

sucedidas

em

relao

cultura

da

berinjela

(BI-HAO et al., 2009). O melhoramento incorporando resistncia gentica s

cultivares tem sido a medida que tem apresentado resultados mais satisfatrios,
sendo considerado um dos componentes mais importantes dentro do manejo
integrado dessa doena (PRIOR; GRIMAULT; SCHMIT., 1994). No estado do
Amazonas, onde o controle da murcha difcil por suas caractersticas climticas, a
utilizao de hbridos de tomate com resistncia murcha bacteriana, resultaram em
apresentao de poucas plantas com sintomas da doena (REIS; MADEIRA, 2009).
Embora muitas cultivares resistentes tenham sido desenvolvidas, a resistncia
frequentemente tem sido quebrada em diferentes regies de cultivo. Isto acontece
devido variabilidade do patgeno e, ou, inadequao da resistncia sob
condies ambientais favorveis ao patgeno (HAYWARD, 1991; PRIOR;
GRIMAULT; SCHMIT, 1994). Por estas razes, a identificao de fontes de
resistncia murcha-bacteriana tem sido efetuada utilizando-se estirpes do
patgeno presentes nas regies onde a doena fator limitante, levando-se em
considerao as condies ambientais, especialmente a temperatura e a umidade.
Observaes de infeces latentes em tomateiro, berinjela e pimento
indicam que a resistncia no apenas devida restrio da penetrao da bactria
na raiz, mas tambm tolerncia dos tecidos vasculares a altas populaes do

53
patgeno (GRIMAULT; PRIOR, 1994). Em tomate, a colonizao do caule pela
bactria foi considerada mais rpida em cultivares suscetveis do que em resistentes
(GRIMAULT; PRIOR, 1993; GRIMAULT; ANAIS; PRIOR, 1994; GRIMAULT et al.
1994), levando Prior et al. (1996) a sugerirem um ndice de colonizao que refletiria
a tolerncia das plantas a R. solanacearum. Em experimentos com tomateiro entre
cultivares resistentes e suscetveis de tomate foi observado que a resistncia
correlacionou-se com a limitao da propagao bacteriana na parte inferior da
haste (GRIMAULT; PRIOR, 1994). Por outro lado, foi verificado por OliveiraNapoleo et al. (1999) que gentipos resistentes de berinjela mantiveram seu nvel
de produo, apesar de apresentar colonizao vascular.
Dentre os mtodos j descritos para avaliao de resistncia encontra-se a
titulao de resistncia (ERCOLANI, 1984; KNOCHE; CLAYTON; FULTON, 1987,
1987). realizada com concentraes crescentes de suspenses bacterianas, para
elaborao de uma curva de resposta que posteriormente linearizada, com o uso
de transformao do tipo probit. A transformao probit utilizada para linearizar
curvas dose-resposta que podem ento ser analisadas por regresso. Este
procedimento, em geral, utilizado para variveis de resposta binomial, porm
Ercolani (1984) relata a possibilidade de sua utilizao com variveis contnuas.
Alguns exemplos do uso da titulao de infectividade foram apresentados em
avaliaes de resistncia (VUDHIVANICH, 1997; LOPES et al., 2001), em estudo de
resposta de diferentes hospedeiros a um patgeno (ROBINSON, et al., 2006) e em
comparao de virulncia de isolados (YOSSEN et al., 1998).
A concentrao de inculo utilizada para testar a resistncia em berinjela
varia, normalmente, entre 106 a 109 unidades formadoras de colnias (ufc) por
mililitro de suspenso bacteriana (AKIBA et al., 1972; MORGADO et al., 1994).
importante se determinar uma concentrao correta de inculo nas avaliaes de
resistncia murcha bacteriana por j ter sido evidenciado por Bowman e Sequeira
(1982) e Ercolani (1984) que concentraes abaixo do ideal podem permitir escapes
de plantas suscetveis, ao passo que concentraes muito altas podem subestimar a
resistncia (WINSTED; KELMAN, 1952). Deste modo, a titulao de infectividade
uma ferramenta que pode ser usada para verificar a adequao de concentraes
de inculo para diversas finalidades.
O objetivo deste trabalho foi avaliar curvas de titulao de resistncia para
caracterizao de gentipos de berinjela e verificar se existem diferenas na

54
capacidade de colonizao de duas estirpes de R. solanacearum dos tecidos de
gentipos de berinjela com diferentes nveis de resistncia.

4.3 Material e Mtodos

Os ensaios foram conduzidos em casa de vegetao sob temperaturas sob
temperaturas mdias dirias de 30,8 a 33,2C. Foi utilizado aquecimento noturno
para garantir temperatura mnima de 20C nos perodos noturnos.
4.3.1 Titulao de resistncia
4.3.1.1 Gentipos de berinjela e estirpes do patgeno
Foram utilizados seis gentipos de S. melongena, previamente selecionados
por suas respostas diferenciadas de resistncia murcha bacteriana para duas
estirpes em ensaios em casa de vegetao e em campo (Tab. 10), e duas estirpes
de R. solanacearum da coleo da Embrapa Hortalias: CNPH19, biovar I, e CNPH182,
biovar III, ambas pertencentes raa 1. Foram escolhidas estas duas estirpes por
apresentarem alto nvel de virulncia, ser de biovares diferentes e induzirem
respostas diferenciadas de resistncia em gentipos de berinjela (OLIVEIRANAPOLEO et al., 1998; 1999). O gentipo CNPH658 (seleo da variedade
comercial Florida Market) foi utilizado como padro de suscetibilidade.
Tabela 10 - Gentipos de Solanum melongena avaliados em casa de vegetao e a
campo: procedncia e reaes1 a duas estirpes de Ralstonia
solanacearum, raa 1
Estirpe
Gentipo
Procedncia
2
CNPH19
CNPH1522
Campo3
S
CNPH006
Agroflora (Brasil)
S
R
MR
CNPH171
INRA (Frana)
S
MR
ND
CNPH407
China
S
R
S
CNPH658
Topseed (EUA)
S
S
MR
CNPH778
AVRDC (ndia)
R
R
R
CNPH785
AVRDC (ndia)
R
MR
1

R: resistente; MR: medianamente resistente ; S: suscetvel; ND: no determinado

Biovar I. em casa de vegetao. Fonte: OLIVEIRA-NAPOLEO et al. (1998)
3
Estirpe CNPH182 da biovar III. Fonte: OLIVEIRA-NAPOLEO et al. (1999)
2

55
4.3.1.2 Inoculao
Para este estudo, plantas no estdio de trs pares de folhas dos gentipos
CNPH171, CNPH658, CNPH785 e CNPH778 foram inoculadas de duas formas: a)
por ferimento no caule, colocando-se uma gota de 10 L da suspenso bacteriana
na axila da primeira folha e traspassando-se a gota e o caule com um alfinete
entomolgico n. 3 (MORGADO et al., 1994); b) por ferimentos nas razes. O solo de
vasos (capacidade de 0,5 L) foi infestado por deposio de 75 mL de suspenso
bacteriana, aps 18h foi realizado o transplantio de plantas com as razes cortadas
(Apndice 4), a fim de garantir ferimentos que facilitassem a entrada do patgeno.
Para as inoculaes foram utilizadas suspenses bacterianas de cada um
das estirpes, separadamente. No caule as concentraes foram: 104, 106, 108, 109 e
1010 ufc/mL e para as razes: 105, 106, 107, 108 e 109 ufc/mL. O ajuste da
concentrao foi feito por espectrofotometria (A600) e diluies proporcionais.
4.3.1.3 Avaliao
Aos 3, 18, 24 e 30 (inoculao no caule) ou 3, 18, 24 e 50 (inoculao pelas
razes) dias aps a inoculao (DAI) foram feitas leituras utilizando-se uma escala
de notas de 1 a 5, de acordo com as seguintes classes de sintomas: 1 ausncia de
sintoma; 2 planta com um tero das folhas murchas; 3 planta com dois teros
das folhas murchas; 4 planta totalmente murcha; 5 planta morta (adaptado de
NIELSEN; HAYNES, 1960). As leituras foram transformadas em ndice de murcha
bacteriana, utilizando-se a equao:

IMB =

(C P)
N

onde IMB o ndice de murcha bacteriana; C a nota atribuda a cada classe de

sintoma; P o nmero de plantas em cada classe de sintoma e N o nmero total
de plantas infectadas (EMPIG et al., 1962).
A avaliao da reduo de peso seco aos 30 ou 50 DAI em relao s
testemunhas no inoculadas. Para tanto, cortou-se a parte area de todas as
plantas rente ao solo, levando-as estufa a 60C por 72 h e fazendo as medidas de
massa, em gramas, em balana digital com trs casas decimais, das quais foram

56
registradas duas. A alterao percentual de massa seca da parte area (AMS) foi
calculada segundo a equao:

AMS =

PI PT
100
PT

onde: AMS: alterao percentual de massa seca da parte area na parcela

inoculada em relao testemunha no inoculada; PI: massa seca da parte area
na parcela inoculada; e PT: massa seca da parte area na parcela no inoculada.
Ao final das avaliaes de severidade e antes do corte da parte area foi
feita a contagem de plantas mortas (NPM) em cada parcela.

4.3.1.4 Procedimentos estatsticos

O delineamento utilizado foi o de blocos inteiramente casualizados, com trs
repeties. O transplantio das mudas foi feito em blocos para garantir maior
uniformidade das mudas em cada um deles. A ordem da inoculao em gota seguiu
aos blocos j constitudos no transplantio para manter o mais uniforme possvel o
tempo decorrido aps a preparao da suspenso bacteriana em cada bloco. As
parcelas foram constitudas de 12 plantas em seis vasos de 0,5 litros. O controle foi
constitudo de uma parcela de 12 plantas no inoculadas de cada gentipo em cada
bloco experimental.
As anlises de varincia foram feitas utilizando o programa estatstico
Winstat 1.0 (Machado; Conceio, 2002), sendo feita neste mesmo aplicativo a
anlise de resduos para verificao das pressuposies da anlise de varincia:
grfico de caixa, distribuio normal e disperso do erro.
Com os resultados de IMB obtidos das reaes aos 3, 18, 24 e 30
(inoculao por ferimento) ou 50 (inoculao pelas razes) dias aps a inoculao
(DAI) foi calculada a rea abaixo da curva de progresso da doena (AACPD),
utilizando-se o programa GBASIC (MAFFIA, 1986).
Curvas de resposta de AACPD, AMS e nmero de plantas mortas foram
construdas em funo do logaritmo da concentrao bacteriana inoculada em
ufc/mL. Estas curvas foram linearizadas por transformao probit, utilizando-se o

57
programa R, verso 2.9.0 (R DEVELOPMENT CORE TEAM, 2009). A comparao
entre elas foi realizada pelo programa estatstico Winstat 1.0.

4.3.2 Estudo da colonizao de tecidos

4.3.2.1 Gentipos de berinjela e estirpes do patgeno
Para este estudo, plantas de gentipos CNPH006, CNPH171, CNPH407,
CNPH658, CNPH778 e CNPH785 foram inoculadas individualmente com isolados
mutantes espontneos de R. solanacearum selecionados das estirpes CNPH19 e
CNPH182, raa 1, biovares I e III, respectivamente, com resistncia a estreptomicina
(200 g/mL) e rifampicina (50 g/mL), denominados de R19 e R182. O uso de
mutantes espontneos resistentes a antibiticos visaram diminuir a possibilidade de
contagem de contaminantes (GRIMAULT; PRIOR, 1993).
4.3.2.2 Inoculao
A inoculao das plantas para este estudo foi feita por ferimento de caule
como descrito no item 4.3.1.2, sendo utilizada suspenso bacteriana com 108
ufc/mL, ajustada por espectrofotometria (A600=0,5).
4.3.2.3 Avaliao
Aps intervalos de 0, 6, 24, 48 h da inoculao das plantas pelos isolados
bacterianos, foi cortado um fragmento de 2 cm de cada planta (a partir de 1 cm de
distncia acima do ponto de insero da primeira folha) e determinada sua massa
fresca, em gramas, com balana de trs casas decimais. Logo aps a pesagem, os
fragmentos foram macerados, individualmente, e feitas diluies seqenciais (10,
102, 103, 104 e 105, at o tempo 24 h, e 102, 103, 104, 105 e 106, no tempo 48 h).
Alquotas de 10 L dos macerados foram plaqueadas em meio de Kelman (1954)
adicionado de estreptomicina (200 g/mL) e rifampicina (50 g/mL). As contagens
das colnias obtidas foram feitas aps 24h de crescimento, a 28C, em observao
sob lupa estereoscpica. Os valores estimados de unidades formadoras de colnias
(ufc) nos tecidos foram divididos pela massa fresca do fragmento retirado da planta
avaliada.

58
4.3.2.4 Procedimentos estatsticos
Um delineamento fatorial 2 (isolados) x 4 (gentipos) x 4 (tempo aps a
inoculao) totalmente casualizado, com trs repeties, foi utilizado. Cada
repetio foi constituda da mdia de colnias obtidas em quatro microgotas do
macerado.
As anlises de varincia e anlises de regresso foram feitas utilizando o
programa estatstico Winstat 1.0 (Machado; Conceio, 2002), sendo feita neste
mesmo aplicativo a anlise de resduos para verificao das pressuposies da
anlise de varincia: grfico de caixa, distribuio normal e disperso do erro. Foi
necessria transformao logartmica decimal dos dados para atendimento das
pressuposies da anlise.

4.4 Resultados
4.4.1 Titulao de resistncia
Diferenas de resistncia entre os gentipos estudados foram possveis
caracterizar pela observao das curvas de respostas das trs variveis estudadas:
AACPD, AMS e NPM aos 30 DAI (inoculao no caule) ou 50 DAI (inoculao pelo
sistema radicular). As reaes dos gentipos s duas formas de inoculao e s
duas estirpes estudadas foram apresentadas na Fig. 5 e nas tab. 11, 12 e 13, onde
foram listados: o valor de interseco, inclinao e coeficiente de determinao das
retas obtidas com a linearizao das curvas de resposta pela transformao probit.
Tambm foi apresentado o valor de DL50, que corresponde concentrao estimada
para que ocorresse a morte de 50% das plantas inoculadas.
O gentipo CNPH778 foi o mais resistente estirpe CNPH182 para todas as
variveis avaliadas nas duas formas de inoculao, quando foi observado o
coeficiente de inclinao da reta transformada, com exceo da varivel AMS por
inoculao no caule na qual o coeficiente do gentipo CNPH778 foi o mais
resistente, mas juntamente com o gentipo CNPH171.
O gentipo CNPH785 apresentou-se mais resistente estirpe CNPH19 na
inoculao feita pelo caule para a varivel AACPD e para NPM quando a inoculao
foi feita pelas razes. Com a inoculao desta estirpe, as variveis observadas neste

59
gentipo quase sempre apresentaram valores mais elevados do que nos outros
gentipos, porm a diferena entre estes valores no foi significativa.
O gentipo CNPH171 no apresentou resistncia destacada para nenhuma
das estirpes ou formas de inoculao estudadas.
Observou-se que a inoculao com a estirpe CNPH182 ocasionou maior
diferenciao entre os gentipos estudados (Tab. 11, 12 e 13) e tambm nveis mais
altos de agressividade, observados pelos valores alcanados de AACPD, AMS e
NPM (Fig. 5).
A varivel AACPD foi a que apresentou coeficientes de variao
relativamente mais baixos em comparao s outras variveis e permitiu a
diferenciao entre gentipos previamente considerados resistentes (CNPH778 e
785) do padro suscetvel (CNPH658). A varivel AMS foi a que apresentou os
coeficientes de variao mais elevados, o que dificultou a diferenciao entre os
gentipos, mas ainda assim permitindo a discriminao do gentipo CNPH778 como
mais resistente que CNPH658 (suscetvel).
Os coeficientes de variao foram maiores para a inoculao pelas razes do
que pelo caule, com exceo daqueles apresentados pela varivel NPM, onde o
coeficiente foi maior para a inoculao do caule.

60
Inoculao no caule

Inoculao pelas razes

140.000

240.000

120.000

200.000
160.000

AACPD

AACPD

100.000
80.000
60.000

120.000
80.000

20.000

40.000

0.000

0.000

100

80

80

60

60

AMS (%)

100

40

40

20

20

-20

-20

14

14

12
10
8
6
4
2
0
0

Log (concentrao em ufc/mL)

10

12

12
10

NPM

Nmero de plantas mortas

Nmero de
plantas mortas
NPM

AMS (%)

40.000

8
6
4
2
0
0

Log (concentrao em ufc/mL)

10

Figura 5 - Reaes dos gentipos CNPH171, CNPH658, CNPH778 e CNPH785 de

berinjela inoculao no caule e nas razes com as estirpes CNPH19 e
CNPH182 de Ralstonia solanacearum, expressas na forma de rea abaixo da
curva de progresso da doena (AACPD), alterao percentual de massa
seca da parte area em relao testemunha no inoculada (AMS) e
nmero de plantas mortas (NPM) aos 30 (inoculao no caule) e 50
(inoculao nas razes) dias aps a inoculao com concentraes
crescentes de suspenses bacterianas.