PROYECTO DE TESIS
NDICE
I.
METODOLOGA DE LA INVESTIGACIN.............40
mal uso de las letrinas, la falta de una cultura de buenas prcticas de higiene, inadecuado
manejo de basuras y excretas, entre otros. Lo anterior se refuerza con la evaluacin de la
OMS segn la cual el 90% de las infecciones intestinales agudas se deben a la ingesta de
agua de mala calidad y al inadecuado saneamiento bsico (Salvador y Guzman, 2009). Es
importante sealar que 5.5 millones de personas se enferman de infecciones
intestinales cada ao en el Per. La gran mayora de estos padecimientos se debe a
infecciones con bacterias fecales como la Escherichia coli, Campylobacter jejuni,
Yersinia
enterocolitica
Clostridium
difficile
(Conagua,
2010).
Entonces,
para
evaluar la calidad higinica y sanitaria del agua (Allen, 1996) y que el distrito de
Tamburco es deficiente en el abastecimiento de agua para consumo humano y no posee un
sistema de control de la calidad y sanitario, nos hacemos la siguiente interrogante:
Existe presencia de coliformes totales y termotolerantes en el agua de consumo humano y
esto ocasiona disenteras en el distrito de Tamburco?
I.2 Justificacin de la investigacin
Los pases en vas de desarrollo como es el caso del Per, enfrentan cotidianamente los
efectos de problemas relacionados con la salud pblica, los cuales ameritan integrar para
su solucin la participacin multidisciplinaria de diversos profesionales. Segn las
estadsticas que el MINSA maneja se han elaborado programas de salud (PAI, CRED,
PANFAR, PANTBC, etc.) con la finalidad de prevenir y controlar las enfermedades en las
poblaciones ms vulnerables, principalmente la infantil. El gasto que afronta el estado
peruano para controlar las enfermedades de curso gastroentrico es elevado y requiere que
se planteen estrategias para poder controlar su expansin. Sin embargo, la informacin
tcnico cientfica es insuficiente para que se puedan tomar decisiones oportunas y
adecuadas a cada regin o comunidad, sobre temas sanitarios, lo que nos conduce a
priorizar la realizacin de investigaciones en lo que concierne a las enfermedades
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diarreicas agudas, dada su alta frecuencia e impacto econmico. Cabe indicar que las
enfermedades diarreicas agudas (EDA) mundialmente causan un promedio 4.6 millones de
muertes infantiles anuales, de los cuales el 70% ocurre por deshidratacin, complicacin
ms frecuente y grave de la enfermedad (MINSA, 2014). En todo caso existen varias
razones que justifican para que desde una ptica del saneamiento ambiental se realicen
investigaciones respecto a la contaminacin del agua y su relacin con la presentacin de
enfermedades.
1.2. OBJETIVOS
1.3.1. Objetivo general
Determinar la prevalencia de disenteras debido a la contaminacin del agua por
coliformes totales y termotolerantes en el distrito de Tamburco, Abancay, Apurmac, 2016.
1.3.1. Objetivos especficos
de
Por
lo
que
2.2.
MARCO TERICO
2.2.1. El agua
Es un elemento natural indispensable para el desarrollo de la vida y de todas las actividades
del ser humano. En nuestro planeta cubre el 75% de la superficie, pero toda esta cantidad de
agua no se encuentra en condiciones aptas para el consumo humano. El 97.5% es agua
salada, el 2.5% es agua dulce que se encuentra en lagos, ros arroyos, vertientes, embalses,
esta mnima proporcin es la que podemos utilizar con ms facilidad (Van Pelt, 2010).
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Agua potable
Se llama agua potable al agua dulce que tras ser sometida a un proceso de potabilizacin se
convierte en agua apta para el consumo humano, pudiendo consumirla sin ningn tipo de
restricciones, debiendo pasar primero por un control de calidad y aprobando las rigurosas
normas establecidas a nivel nacional e internacional, Para
asegurar
an
ms
la
potabilidad del agua, se le agrega cloro que elimina el exceso de bacterias y lo que es
muy importante,su desarrollo en el recorrido hasta las viviendas (Emapa, 2011).
Calidad del agua
El concepto de calidad del agua, encierra un conjunto de caractersticas fsicas, qumicas y
biolgicas que hacen que el agua sea apropiada para el consumo humano y se relaciona con
los procesos de abastecimiento, disponibilidad y sistemas de purificacin aplicados
(Emapa, 2011).
Parmetros que determinan la calidad del agua
Existen gran cantidad de parmetros que son de utilidad para medir el grado de
contaminacin y calidad del agua, y son categorizados dentro de los siguientes grupos:
caractersticas fsicas, qumicas, biolgicas y radiolgicas.
Cloro residual
El cloro es el agente ms utilizado en el mundo como desinfectante en el agua de consumo
humano, debido principalmente a:
responsable
La cloracin del agua para suministro y residual sirve principalmente para destruir o
desactivar los microorganismos causantes de enfermedades. Una segunda ventaja
10
la
OMS
(2010), el
composicin se haya alterado de modo que no rena las condiciones necesarias para ser
utilizada beneficiosamente en el consumo del hombre y de los animales. La contaminacin
del agua, es la presencia de cualquier agente fsico, qumico o biolgico, como tambin de
11
por
flagelos pertricos carentes de motilidad; crecen sobre peptona o medios con extractos de
carne sin adicin de cloruro de sodio (Na Cl) ni otros suplementos; crecen bien en agar Mac
Conkey, en condiciones aerobias y anaerobias (son anaerobios facultativos), fermentan la
glucosa en vez de oxidarla y con frecuencia producen gas; son catalasa positivos; oxidasa
negativos y reducen el nitrato a nitrito (Murray, 2006).
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Estructura antignica
Las enterobacterias poseen una compleja estructura antignica. Se han clasificado ms de
150 diferentes antgenos somticos O (lipopolisacridos) termoestables, ms de 100
antgenos K (capsulares) termolbiles, y ms de 50 antgenos H (flagelares) (Murray,
2006). Los antgenos O son la parte ms externa de la pared lipopolisacarida de la clula y
constan de unidades repetidas de polisacaridos. Algunos polisacridos O contienen azcares
nicos. Aunque cada gnero de enterobacterias se asocia con grupos especficos O, un solo
microrganismo puede ser portador de varios antgenos O. Los antgenos K son antgenos O
externos sobre algunas, pero no todas, las enterobacterias. Algunos son polisacridos,
incluso los antgenos K de la E. coli; otros son protenas. Los antgenos K pueden interferir
con la aglutinacin por antisuero O, y a veces se asocian con la virulencia (Murray, 2006).
Los antgenos H se localizan sobre los flagelos y se desnaturalizan o retiran mediante calor
o alcohol. En las variedades de bacterias dotadas de motilidad se les puede conservar
mediante tratamiento con formalina. Estos antgenos H son una funcin de la secuencia de
aminocidos en la protena flagelar (flagelina). La mayor parte de las bacterias gram
negativas poseen lipopolisacridos complejos en su pared celular. Estas sustancias,
endotoxinas, muestran varios efectos fisiopatolgicos. Muchas bacterias entricas gram
negativas tambin producen exotoxinas de importancia clnica (Murray, 2006).
Bacilos entricos
Los coliformes son bacterias que tiene forma de bastoncillos, que no forman esporas,
y son Gram negativos aerobias y anaerobias facultativas, su caracterstica principal es que
fermenta la lactosa con formacin de gases al cabo de 48 horas a una temperatura de 35C a
37C, donde los coliformes fecales se diferencian de estas por ser termo tolerantes y
resistentes a temperaturas de 44C a 46C. Los coliformes, son pequeos, tienen forma de
bastoncillos (0.5 um por 3 um), no forman esporas, pueden ser mviles y formar cadenas
(Murray, 2006).
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2.2.5. Coliformes
La clasificacin taxonmica de los coliformes es la siguiente:
Reino: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gamma proteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Gneros:
Escherichia
Klebsiella
Enterobacter
Citrobacter
Coliformes totales
Estas bacterias se definen como el grupo de organismos coliformes que pueden fermentar
la lactosa entre 44 y 45 C, comprende especies del gnero Escherichia y en menos grado,
especies de los gneros Proteus, Klebsiela, Enterobacter y Citrobacter. Los coliformes
fecales son microorganismos con una estructura parecida a la de una bacteria comn que se
llama Escherichia coli y se transmiten por medio de los excrementos. La Escherichia es
una bacteria que se encuentra normalmente en la flora intestinal del hombre y en el de
otros animales de sangre caliente. Hay diversas cepas de Escherichia; algunos no causan
dao en condiciones normales y otros pueden incluso ocasionar la muerte (OMS, 1996).
La prueba ms relevante utilizada para la identificacin del grupo Coliformes, es la
hidrlisis de la lactosa. El rompimiento de este disacrido es catalizado por la enzima B D
- Galactosidasa. Ambos monosacridos (la galactosa despus es transformada en glucosa
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por reacciones bioqumicas) posteriormente son metabolizados a travs del ciclo glicoltico
y ciclo del citrato. Los productos metablicos de estos ciclos son cidos y/o CO2. Para la
determinacin de la B - Galactosidasa se utilizan medios
Escherichia coli
Originalmente llamada Bacterium comune, fue aislada por primera vez en 1985 a partir de
heces de nios; son bacilos estrechos de 1.1 a 1.5 m de dimetro y de 2 a 6 m de
longitud, se encuentran solos o en parejas, Gram negativos, mviles por flagelos pertricos
o inmviles, anoxignicos facultativos, poseen metabolismo respiratorio y fermentativo.
Perteneciente a la familia Enterobariaceae, son coliformes capaces de producir indol a
partir de triptfano, en 21 +/- 3 horas a 44 +/- 0.5C. Tambin poseen la enzima B
-Galactosidasa, que reacciona positivamente en el ensayo del rojo de metilo y pueden
descarboxilar el cido L glutmico, pero no son capaces de utilizar citrato como nica
fuente de carbono o de crecer en un caldo con cianuro de potasio. E. coli es la nica especie
dentro de las Enterobacterias que presenta la enzima B D Glucoronidasa, que degrada el
sustrato 4 metilumberiferil D - glucornico (MUG), formando 4 metilumbeliferona, este producto tiene la propiedad de emitir fluorescencia azul/verde
cuando se ilumina con luz ultravioleta. La multitud de cepas capaces de producir
enfermedad se encuentra reflejada en la diversidad antignica de esta especie. Se ha
descrito un gran nmero de antgenos O, H y K, los cuales se utilizan para clasificar a las
cepas con fines epidemiolgicos. Algunos sero grupos antignicos especficos se asocian a
mayor virulencia (Murray, 2006).
Patogenia e inmunidad
Adems de los factores generales que comparten todos los miembros de la familia
Enterobacteriaceae, las cepas de Escherichia responsables de enfermedades como las IAU y
las gastroenteritis poseen unos factores de virulencia especializados. Estas dos categoras
generales son las adhesinas y las exotoxinas.
Adhesinas
E. coli es capaz de permanecer en el aparato urinario o en el aparato digestivo como
consecuencia de su capacidad de adherencia a las clulas en estas localizaciones para evitar
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ser eliminado por el efecto de arrastre de la orina que se expulsa con la miccin o por la
motilidad intestinal. Las cepas de E. coli poseen numerosas adhesinas muy especializadas.
Estas incluyen factores antgenos del factor de colonizacin (CFA/I, CFA/II, CFA/lll),
fimbrias de adherencia y agregacin (AAF/I, AAF/III), pili que forman haces (Bfp),
intimina, pili P (que tambin se une a los antgenos del grupo sanguneo P), protena Ipa
(antgeno del plsmido de invasin) y fimbrias Dr (que se unen a los antgenos del grupo
sanguneo (Murray, 2006).
Exotoxinas
E. coli produce tambin un espectro variado de exotoxinas. Estas incluyen las toxinas Shiga
(Stx-1, Stx-2), las toxinas termoestables (STa, STb) y las toxinas termolbiles (LT-I y LTII). Por otra parte, las hemolisinas (HlyA) se consideran importantes en la patogenia de la
enfermedad producida por E. coli uropatgeno (Murray, 2006).
Las cepas de E. coli que provocan gastroenteritis se subdividen en los cinco principales
grupos siguientes: E. coli enteropatgena (ECEP), E. coli enterotoxgena (ECET), E. coli
enterohemorrgica (ECEH), E. coli enteroinvasiva (ECEI) y E. coli enteroagregativa
(ECEA) (Murray, 2006).
E. coli enteropatgena (ECEP)
Las cepas enteropatgenas de E. coli fueron las primeras en asociarse a la enfermedad
diarreica y continan siendo la principal causa de diarrea infantil en los pases pobres.
La enfermedad es rara en nios mayores y en adultos, tal vez debido al desarrollo de
inmunidad protectora. Aunque se han asociado algunos sero grupos especficos O a brotes
de diarrea por ECEP en las guarderas, no se recomienda estudiar el serotipo de una cepa E.
coli aislada en una infeccin espordica o endmica, salvo en caso de estudios
epidemiolgicos. La infeccin se caracteriza por la adhesin bacteriana a las clulas
epiteliales del intestino delgado con la destruccin posterior de las microvellosidades. Las
cepas ECEP forman micro colonias en la superficie de las clulas epiteliales en las que las
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bacterias se unen a las clulas del organismo anfitrin a travs de unas estructuras en forma
de copa. Inicialmente se establece una unin laxa medida por los pili que forman haces,
seguida de una secrecin activa de protenas por el sistema de secrecin bacteriano de tipo
III hacia la clula epitelial anfitriona. Una protena, el receptor de la intimina translocada
(Tir), se inserta en la membrana epitelial (este proceso est mediado por otras dos protenas
secretadas) y acta como receptor de una adhesina bacteriana de la membrana externa, la
intimina. La diarrea acuosa tpica de esta entidad se debe a la absorcin inadecuada
derivada de la destruccin de las microvellosidades (Murray, 2006).
E. coli enterotoxgena (ECET)
La enfermedad producida por E. coli enterotoxgena se observa con mayor frecuencia en
los pases en vas de desarrollo (se ha estimado que se registran unos 650 millones de casos
al ao), aunque se calcula que casi 80 000 casos se producen anualmente en viajeros
procedentes de EE.UU. Las infecciones afectan a nios pequeos de los pases en vas de
desarrollo o a los que viajan a estas zonas. El inoculo para esta enfermedad ha de ser
grande, por lo que las infecciones se adquieren fundamentalmente a travs del consumo de
alimentos o de agua contaminada con restos fecales. No se produce transmisin de una
persona a otra. ECET sintetiza dos clases de enterotoxinas: toxinas termolbiles (LT-1, LTII) y toxinas termoestables (STa y STb). Mientras que la LT-II no se asocia a enfermedad en
el ser humano, LT-I es funcional y estructuralmente semejante a la toxina del clera y se
asocia a enfermedad en el ser humano. La diarrea secretora producida por ECET se
manifiesta tras un perodo de incubacin de 1 a 2 das, y se prolonga a lo largo de un
perodo medio comprendido entre 3 y 4 das. Los sntomas, espasmos abdominales,
nuseas, vmitos (raro) y diarrea acuosa son semejantes a los del clera, pero ms leves
(Murray ,2006).
E. coli enterohemorrgica (ECEH)
Las cepas de E. coli enterohemorrgica son las cepas que causan con mayor frecuencia
enfermedad en los pases desarrollados. Se estima que estas bacterias producen 73 000
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y destruir el epitelio colnico para producir una enfermedad que se caracteriza inicialmente
por diarrea acuosa. Una minora de pacientes evoluciona a la forma disentrica de la
enfermedad, la cual debuta con fiebre, espasmos abdominales y presencia de sangre y
leucocitos en las heces. Este proceso de destruccin de las clulas epiteliales con
infiltracin inflamatoria puede dar lugar a una ulceracin colnica (Murray, 2006).
E. coli enteroagregativa (ECEA)
Las cepas de E. coli enteroagregativo se han visto implicadas en una diarrea acuosa,
persistente y con deshidratacin en nios de los pases en vas de desarrollo y en personas
que han viajado a estos pases. La persistencia de estas bacterias se asocia a la presencia de
diarrea crnica y a un retraso del desarrollo de los nios afectados.
Las bacterias se caracterizan por su capacidad de aglutinarse entre s en una organizacin
de ladrillos apilados. Este proceso est mediado por unas fimbrias formadoras de haces
(fimbrias de adherencia agregativa I y II), las cuales son codificadas por un plsmido
(Murray, 2006).
Salmonella
Por una parte, los estudios de homologa del
demostrado que este gnero est formado por dos especies: Salmonella entrica y Shige
bongori. S. entrica se subdivide, a su vez, en seis subespecies, y la mayor parte de los
patgenos del ser humano se incluye en la primera subespecie, S. entrica sub
entrica. Lamentablemente, las dos especies se han subdivido en ms de 2 500 serotipos
diferentes; tradicionalmente se han llamado especies a los numerosos serotipos (p.ej. S.
typhi, Salmonella typhymurium, Salmonella enteritidis) (Murray, 2006).
Patogenia e inmunidad
20
Despus de ser ingeridas y de pasar a travs del estmago, las salmonelas son capaces de
invadir y de replicarse en las clulas M (micropliegues) que se localizan en las placas de
Peyer de la regin terminal del intestino delgado. Tpicamente estas clulas transportan
antgenos de cuerpos extraos hasta los macrfagos subyacentes para su eliminacin. Dos
sistemas separados de secrecin de tipo III intervienen en la invasin inicial de la mucosa
intestinal (isla de patogenicidad 1 de Salmonella [SPI-1]) y la enfermedad sistmica
posterior (SPI-2). Las especies de Salmonella se protegen tambin de los cidos del
estmago y del pH cido del fagosoma mediante un gen de respuesta de tolerancia a los
cidos (ATR). La catalasa y la superxido dismutasa son otros factores que protegen a las
bacterias frente a la destruccin intracelular. La
mayora
de
las
infecciones
son
Patogenia e inmunidad
Shigella causa la enfermedad al invadir y replicarse en las clulas que tapizan la mucosa
colnica. Las protenas de los genes estructurales intervienen en la adherencia de los
microorganismos a las clulas, as como en su invasin, replicacin intracelular y
diseminacin de una clula a otra. Las especies de Shigella parecen incapaces de unirse a
las clulas mucosas diferenciadas; en lugar de ello, parece que se unen en primer
lugar e invaden a las clulas M de las placas de Peyer. El sistema de secrecin de tipo III
interviene en la secrecin de cuatro protenas (IpaA, IpaB, IpaC, IpaD) hacia las clulas
epiteliales y en los macrfagos. Estas protenas hacen que se ondulen las membranas de las
clulas diana, lo que permite que las bacterias sean engullidas. Las shigelas sobreviven a la
fagocitosis al inducir la muerte celular programada (apoptosis). Este proceso comporta,
igualmente, la liberacin de IL-lb, lo que atrae a los leucocitos polimorfonucleares hacia los
tejidos infectados, desestabiliza la integridad de la pared intestinal y permite que las
bacterias lleguen hasta las clulas epiteliales ms profundas. Los brotes epidmicos de la
enfermedad ocurren en las
guarderas,
shigelosis se transmite por va feco- oral, principalmente por personas con las manos
contaminadas, y con menor frecuencia por el agua y los alimentos. Debido a que un inoculo
menor de 200 bacterias
la shigelosis se extiende
rpidamente en comunidades en las que las condiciones sanitarias y la higiene personal son
deficientes. La shigelosis se caracteriza por la presencia de espasmos abdominales, diarrea,
fiebre y heces sanguinolentas. Los signos y sntomas clnicos de la enfermedad aparecen
entre 1 y 3 das tras la ingestin de los bacilos. Las shigelas colonizan inicialmente el
intestino delgado y comienzan a multiplicarse en las primeras 12 horas. El primer signo de
infeccin (una profusa diarrea acuosa sin indicios histolgicos de invasin mucosa) se
relaciona con la accin de una enterotoxina. Sin embargo, la caracterstica fundamental
de la shigelosis son los espasmos abdominales y el tenesmo, con abundante pus y sangre
en las heces. Es consecuencia de la invasin de la mucosa colnica por las bacterias. En las
heces se observan numerosos neutrfilos, hemates y mucosidad. La infeccin suele
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aumenta durante las primeras 3 semanas de vida para alcanzar los niveles del adulto a los
30 o 40 das de edad. La baja actividad de la toxina enlazada puede explicar la falta de
respuesta de la enfermedad en nios colonizados por Clostridium difficile. Despus de
enlazarse con el receptor existente en el "borde en cepillo" del enterocito, la toxina A es
internalizada y despus de un perodo de latencia de 1 a 2 horas ocurren alteraciones en la
estructura del citoplasma, con inclusin de la despolimerizacin de actinas filamentosas, se
abren en las clulas intestinales las uniones hermticas y aumentan la permeabilidad
transepitelial. La accin principal de la toxina A en el intestino es su habilidad para producir
una respuesta inflamatoria aguda con activacin de macrfagos, mastocitos y movilizacin
de neutrfilos. Estos mecanismos que envuelven
complejos
la
respuesta
inflamatoria
son
moco, peristaltismo y flora saprofita supresora) de las mucosas digestivas del hospedador.
La diarrea aguda es la emisin de heces de consistencia lquida debido a inflamacin y/o
disfuncin del intestino producida por un microrganismo o sus toxinas, que se puede
acompaar de sangre o moco en las heces, fiebre, vmitos y/o dolor abdominal. Dura
menos de 4 semanas. La diarrea suele basarse en criterios cuantitativos: tres o ms
deposiciones por da y un peso de las heces por encima del lmite normal (200 g/da en el
adulto sano) (Harrison, 2005).
Patologa
La diarrea es una consecuencia de la disfuncin en el transporte de agua y electrlitos a
nivel del intestino. Como resultado de esta alteracin se produce un aumento de la
frecuencia, cantidad y volumen de las heces, as como un cambio en su consistencia por el
incremento de agua y electrlitos contenidos en ellas. Los mecanismos patognicos que
ocasionan diarrea estn en dependencia de los agentes causales que la producen (Nelson,
2004).
Clasificacin clnica de la diarrea
Diarrea aguda.- Se manifiesta por la prdida diaria de tres o ms evacuaciones intestinales
lquidas o semilquidas sin sangre visible, que pueden acompaarse de vmitos, fiebre baja,
disminucin del apetito e irritabilidad; el cuadro se inicia agudamente y tarda menos de
catorce das, aunque la mayora se resuelve en menos de siete (Nelson, 2004).
Diarrea persistente.- Este tipo de enfermedad diarreica se inicia como un episodio agudo
de diarrea lquida, pero persiste por ms de 14 o ms das.
Disentera.- Diarrea con presencia de sangre, moco y/o pus en heces, independientemente
de su duracin. Entre los efectos que produce incluye anorexia, prdida de peso rpida y
dao a la mucosa intestinal causado por agentes invasores (Nelson, 2004).
Clasificacin funcional de la diarrea
En funcin de las alteraciones fisiolgicas que provocan en el organismo, las diarreas se
clasifican en cuatro grupos:
Diarrea osmtica.- Se presentan cuando existen solutos en la luz intestinal, las cuales
tienen actividad osmtica e inducen el movimiento de lquidos y electrlitos del enterocito
hacia la luz intestinal, superando la capacidad de absorcin de la mucosa. En proporcin, se
pierde una cantidad mayor de agua que de sodio, lo que incrementa las concentraciones de
este ion en la sangre, aunque el colon intenta conservar agua y sodio no retiene potasio,
que se pierde en las heces. El efecto final es un agotamiento de agua y potasio. Las
evacuaciones son cidas y las causas ms comunes son la deficiencia de enzimas
disacaridasas como lactasa y sacarasa, la ingestin de laxantes polivalentes, la desnutricin
tipo Kwashiorkor, el esprue tropical y la gastroenteritis, entre otras (Nelson, 2004).
Diarrea secretora.- Se presentan como consecuencia de un aumento importante del
movimiento de agua y electrlitos hacia la luz intestinal. Este efecto se produce por el
incremento en la secrecin, por la disminucin en la absorcin o por la combinacin de
ambas situaciones. La afluencia de lquido a la luz intestinal supera la capacidad de
absorcin del colon, lo que ocasiona la diarrea. Las heces son isotnicas en relacin con el
plasma; sin embargo, a pesar de existir Una composicin inica similar, se fuerza al
mximo la absorcin de sodio y cloro, lo que condiciona la prdida de potasio y
bicarbonato hacia la luz intestinal. Debido a que las diarreas secretoras no son provocadas
por factores dietticos, habitualmente no mejoran con el ayuno. Una excepcin es la
diarrea secretora secundaria a una mala absorcin de cidos grasos, en la que el efecto de la
microbiota bacteriana sobre stos produce cido 10- hidroxi-esterico, que es un potente
secretagogo (Nelson, 2004).
26
produce deshidratacin
con
trastornos
del
equilibrio
Escherichia coli enterotoxignica (ECET), aunque otras bacterias como la Shigella spp, la
Yersinia enterocoltica y las Aeromonas tambin pueden producirla (Nelson, 2004).
Diarrea osmtica
La diarrea osmtica es aqulla que se produce por un incremento de carbohidratos en el
lumen intestinal, como consecuencia de lesiones en forma de parches en las vellosidades
intestinales y por la invasin de los enterocitos de la vellosidad y la posterior aglutinacin
de las vellosidades afectadas. La necrosis de la porcin superior (pex) de las vellosidades
da lugar a que en un perodo de 12 a 40 horas, los enterocitos de las criptas, que son
enterocitos secretores, cubran totalmente la vellosidad y den lugar a reas donde hay
secrecin de lquidos y la absorcin est disminuida o ausente. En la medida que las
lesiones se hacen ms extensas tendr lugar una menor absorcin y se aumentar la
secrecin. Este mecanismo de produccin de diarrea osmtica es el que provocan los
agentes virales, principalmente los rotavirus. Otro mecanismo de produccin de diarrea
osmtica es el que ocurre por la adhesin de algunos protozoos al "borde en cepillo" del
enterocito que bloquean la entrada de agua, electrlitos y micronutrientes lo que produce un
exceso de carbohidratos a nivel del lumen intestinal, que son atacados por las bacterias con
produccin de cido lctico, lo cual da lugar a una diarrea cida que se traduce
clnicamente por un marcado eritema perianal. Los parsitos que con mayor frecuencia
presentan este tipo de diarrea con acentuada mal absorcin a los carbohidratos son la
Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Ciclospora cayetanensis y los Microsporidios,
aunque los pacientes inmunosuprimidos presentan un componente de hipersecrecin.
Tambin puede producirse una diarrea osmtica cuando se ingiere una sustancia
osmticamente activa de pobre absorcin, esto puede suceder cuando se administran
purgantes como el sulfato de magnesio. Si la sustancia es ingerida con una solucin
isotnica, el agua y los solutos pasan por el intestino sin adsorberse, y esto da lugar a la
diarrea osmtica. Este tipo de diarrea se puede observar en los pacientes con mal absorcin
a los disacridos (lactosa) y en lactantes alimentados con el seno materno (exceso de
28
el
sndrome
hemoltico
urmico,
caracterizado
por
anemia
microangioptica,
y/o
urgencia
defecatoria, claro est que esto puede variar de acuerdo al tipo de germen causante
(Rodrguez, 2010).
30
31
o de actividades
32
II.
HIPTESIS Y VARIABLES
3.1. Formulacin de hiptesis
3.1.1. Hiptesis general
Existe una moderada prevalencia de disenteras debido a la contaminacin del agua por
coliformes totales y termotolerantes en el distrito de Tamburco, Abancay, Apurmac, 2016.
3.1.2. Hiptesis especficas
Los casos de disenteras son ocasionados por contaminacin del agua con coliformes
3.2.
Indicadores
Coliformes /100 ml
Coliformes /100 ml
mg/l
33
Dependiente
Casos de disenteras
correspondientes a las regiones quechua, suni y Puna entre 2 581 y 4 800 msnm. Latitud Sur
133705 y Latitud oeste 7252'18".
: Huanipaca.
: San Pedro Cachora.
: Curahuasi.
: Abancay.
: Abancay.
tubos de CLVBB.
Con el asa de siembra estril, se transferir una o ms asadas de un cultivo positivo
de CLT a un tubo con CLVBB. Repetir el procedimiento para todos los tubos
presuntivos.
Se incubar los tubos inoculados a 35 0.5 C por 24 3 horas.
Despus de 24 3 horas de incubacin, se retirar los tubos, agitndolos y
resultados.
Con las lecturas obtenidas a las 24 y 48 horas se calcular el NMP de
microorganismos de acuerdo a una frmula establecida (anexo).
Coliformes termotolerantes
presuntivos.
Luego se tiene que incubar los tubos inoculados a 44.5 0.2 C en Bao Mara por
24 2 horas.
38
resultados.
Con las lecturas obtenidas se calcular el NMP de microorganismos de acuerdo a
las porciones y combinaciones empleadas.
Escherichia coli
Se incubar los tubos inoculados a 44.5 0.2 C en Bao Mara por 24 2 horas.
Los tubos positivos (que presenten gas y turbiedad), se expondrn a una lmpara de
luz UV de 365 nm, la presencia de una fluorescencia azul se considera como una
reaccin positiva para E. coli. Se anotar los resultados.
Paralelo a los anlisis de las muestras, se analizar los controles positivos de la cepa
de E. coli (MUG positiva), un control negativo cepa termotolerante de Klebsiella
pneumoniae (MUG negativa) y un medio de cultivo sin inocular.
Equipos y Materiales.
Incubadora a 35 0,5 C.
Bao Mara a 44,5 0,2 C.
Frascos de dilucin, capacidad de 100 ml autoclavables.
Pipetas serolgicas de 10 ml, tolerancia de 2.5%.
Tubos de ensayos, resistentes al autoclavado, con dimensiones de 16 18 x 150
mm (para medios de concentracin simple) y 20 x 150 mm (para concentracin
doble).
Tubos (campanas) Durham.
Probetas, matraces, esptulas, vasos de precipitacin, magnetos.
Asas de siembra de nquel-cromo o platino de 3,0 a 3,5 mm de dimetro.
diluciones mayores. Cuando todas las reglas de seleccin dadas hayan dejado sin
seleccionar cualquier dilucin mayor con resultados positivos, se aadir el resultado de
aquellas diluciones mayores con resultados positivos al resultado de la dilucin anterior.
4.3.7
Tryptosa
Lactosa
Dipotasio hidrgeno fosfato K2HPO4
Potasio dihidrgeno fosfato, KH2PO4
Cloruro de sodio
Lauril sulfato de sodio
Agua destilada
20.0 g
5.0 g
2,75 g
2,75 g
5,0 g
0,1 g
1L
Preparacin:
Disolver 35.6 g del medio deshidratado por litro de agua destilada (caldo simple). Ajustar
el pH a 6.8 0.2 y distribuir 10 ml del medio en tubos de ensayo de 16 18 x 150 mm
provisto en su interior con un tubo de fermentacin invertido (Durham), tapar y esterilizar
a 121C durante 15 minutos. Para caldo de doble concentracin, disolver 71.2 g del medio
deshidratado por litro de agua destilada. Ajustar el pH a 6.8 0.2. Distribuir 10 ml del
medio en tubos de ensayo de 20 x 150 mm provistos tambin en su interior con tubos
Durham y proceder como en el caso anterior.
Tabla 5. Concentracin de caldo lauril triptosa en funcin al volumen de muestra
adecuado
41
Volumen de
Concentracin del
(ml)
10
muestra (ml)
0.1 a 1.0
10
10
medio
1 x (simple)
2
x (doble)
CLT g/L
35.6
71.2
Peptona
10,0 g
Lactosa
10,0 g
Oxgall
20,0 g
Verde brillante 1 L.
Preparacin:
Disolver 40 g de medio CLVBB en un litro de agua destilada. Distribuir 10 ml. En tubos de
ensayo provisto con tubos Durham invertidos. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a
121 C.
Caldo EC
Composicin
Triptosa o tripticasa
Lactosa
Mezcla de sales biliares N 3
Dipotasio hidrogeno fosfato K2HPO4
Potasio dihidrogeno fosfato, KH2PO4
Cloruro de sodio
Agua destilada
20,0 g
5,0 g
1,5 g
2,75 g
2,75g
5,0 g
1L
42
Preparacin:
Disolver 37 g de medio EC - MUG en un litro de agua destilada. Distribuir 10 ml. En
tubos de ensayo provisto con tubos Durham invertidos. Esterilizar en autoclave durante 15
minutos a 121 C.
Caldo EC MUG
Composicin:
Triptosa o tripticasa
20,0 g
Lactosa
5,0 g
1,5 g
2,75 g
2,75g
Cloruro de sodio
5,0 g
1L
Preparacin:
Disolver 37 g de medio EC - MUG en un litro de agua destilada. Distribuir 10 ml. En
tubos de ensayo provisto con tubos Durham invertidos. Esterilizar en autoclave durante 15
minutos a 121 C.
Agua de dilucin
Para el agua de dilucin, es necesaria la preparacin de soluciones Stock A y B. Solucin
Stock A: Disolver 34 g de fosfato monopotsico (KH2PO4) en 500 ml. De agua destilada,
al ajustar el pH a 7.2 0.5 con hidrxido de sodio (NaOH 1N), y completar el volumen a
43
un litro con agua destilada. Autoclavar por 15 minutos a 121C. Solucin Stock B: Disolver
81.1 g de cloruro de magnesio (MgCl26H2O) en un litro de agua destilada. Autoclavar por
15 minutos a 121C. Agregar 1.25 ml. De la dilucin Stock A y 5 ml de la solucin Stock
B a un litro de agua destilada. Distribuir en frascos en cantidades que aseguren, luego de
llevarlo a la autoclave por 15 minutos a 121C, un volumen de 90 2 ml
Tiosulfato de sodio
Disolver 3 g de tiosulfato de sodio en 100 ml de agua destilada para obtener una
concentracin del 3%. Para agua potable, agua clorada, colocar en los frascos de muestreo
0,1 ml de esta solucin (antes de su esterilizacin), por cada 100 ml de capacidad del
frasco.
4.5 Anlisis estadstico
4.5.1 Anlisis del estadstico Chi-cuadrado ( x
(Oij - Eij)2
x =
i=1 j=1
donde Oij es el valor observado en la celda. Sea Oi. la suma de los valores observados en el
rengln
j , y sea O.. la
suma de los valores observados en todas las celdas. Se denota Eij el valor esperado que es
44
j , multiplicado por
-------------------------------------------------------------------------------------------------------
45
X 100
V.
2015
JulActividad
Nov-
Ene-
Mar-
May-
Jul-
Dic
Feb
Abr
Jun
Ago
Set-Oct
Ago
Elaboracin
2016
del
X
proyecto
Aprobacin
del
X
proyecto
Coordinaciones en
X
46
campo
Ejecucin
del
X
proyecto
Anlisis estadstico
Redaccin
Presentacin
de
X
informe
Publicacin
47
5.2 Presupuesto
RECURSOS
CANTIDAD
P.
TOTAL
UNITARIO
Recursos materiales
S/.
02 millares
S/. 26.00
52.00
Fichas.
02 cientos
S/. 8.00
16.00
Impresin
------------
S/. 0.10
300.00
Pasajes.
Gastos diversos.
01 Aprox.
01 Aprox.
-------------------
1000.00
500.00
Bibliografa
-------------
------------
500.00
Internet
20
10
200.00
tiles de escritorio
---------
---------
100.00
Empastado
Fotografas.
Reportera digital
Cmara fotografa digital
Cmara firmadora digital
CDs
Recursos humanos
Digitador
Encuestador
5 Unidades
Aproximados
01 Unidad
01 Unidad
01 Unidad
01 Ciento
S/. 16.00
S/. 0.60
S/. 200.00
S/. 800.00
S/. 2,000.00
S/. 80.00
01
01
TOTAL
-----------------
VI. BIBLIOGRAFA
48
80.00
100.00
200.00
800.00
2,000.00
80.00
100.00
400.00
S/. 8,438.00
1. Allen, M. (1996). Importancia para la salud publica de los indicadores bacterianos que
se encuentran en agua potable. cepis , 22-16.
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49
50
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24. 53. Murray Microbiologa Mdica. (2006). (P. Murray K. Rosenthal), 5, Pags. 7-473
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26. 1644-1658Madrid-Espaa: GrawHill.
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INTE INEN 108 (2011). Norma tcnica Ecuatoriana de Agua Potable
52
VI.
ANEXOS
ANEXO 1
CADENA DE CUSTODIA
COD
N
LAB
LO
CA
DIS
TRI
TO
ORIGE
N DE
FUENT
E
NOMBRE
DEL
PUN
TO
DE
MUE
CLORO
53
FECHA Y HORA DE
ENTREGA
TIPO DE ANALISIS
LID
AD
SISTEMA
A.S
METALES
QUIMICO
RESIDUAL
A.S.
T.
FISICO
STR
EO
SAP.
Hora:
/
SAP.
Hora:
/
SAP.
Hora:
Hora:
/
Hora:
/
Hora:
MUESTRA RECIBIDA
A.- Condicin de recipiente
Bueno ( )
Malo ( )
OBSERVACIONES:
Leyenda: (AS) agua superficial (AST) agua subterrnea (AR) agua rio (AL) agua de lago
(ARC) agua de canal de riego (AT) aguas termales.
Entregado por
Recibido por
VB Jefe
Inmediato
54
BACTERIAS
RESPONSABLE :___________________________
__________
FECH
A
HO
RA
NOMBR
E DEL
SISTEM
A
PUNTO
DE
MUESTR
EO
NOMBRE
DE
USUARI
O
POBLACIN USUARIA:________________
DIRECCI
N
Prueba de cloro
residual
5.00
ppm/l
it
5.00
ppm/l
it
Mues
tra
micro
b N
MES:
Continuid Firma y
ad
DNI del
hora/das usuario
1
2
5
6
OBSERVACIONES: llenar esta ficha en forma mensual por cada sistema de agua y
remitirlo a DESA punto de muestreo: desde el reservorio hasta las conexiones domiciliarias
(Pileta Domiciliaria)
FERMENTACIN
EN
TUBOS
55
MLTIPLES
(APHA,
10 ml
10 ml
10 ml
Gas
(-)
24
ho
ra
s
Reincubar 24
Horas
Gas
(+)
24
hor
as
Gas (+) 48
horas:
Prueba
positiva
para
Coliformes
totales
56
Gas (-) 48
horas:
Prueba
negativa
Gas (+)
24
horas
Prueba confirmativa
positiva para
Coliforme
Termotolerante
Gas (-)
24
hora
s
Prueba negativa
Filtro de
celulosa
estril de 45
m
Agua
destilada
estril
+ 0,5 g
de TTC
Solucin TTC
al 0,5 %
estril
Agar Cuenta
Colonias PCA +
TTC 0,5%
1 ml
9 ml de H2o
Peptonada
1 ml
1 ml
Agar Cuenta
colonias PCA
+ TTC al 0,5
% 1520 ml
1 ml
10
-1
1
ml
1 ml
10
2
-3
10
(volumen de 10 mL c/u)
0
ndice de NMP/100
mL
< 1,1
Bajo
Alto
----
3,4
1,1
0,051
5,9
2,2
0,37
8,2
3,6
0,91
9,7
5,1
1,6
13
6,9
2,5
15
9,2
3,3
19
12
4,8
24
16
5,8
34
23
8,1
53
10
> 23
13
----
1.8
1.8
3.6
3.7
5.5
5.6
2
4
6
4
6.1
Lmite de
Confiabilidad
Bajo
Alto
0.09
0.09
0.7
0.7
1.8
1.8
0.1
0.7
1.8
0.71
1.8
Combinaci NMP /
n de
100
positivos
mL
6.8
403
6.8
6.9
10
10
15
15
10
10
15
12
15
410
411
412
413
420
421
422
423
430
431
432
25
17
21
26
31
22
26
32
38
27
33
39
Lmite de Confiabilidad
Bajo
Alto
9.8
6
70
40
6.8
9.8
10
6.8
9.8
10
14
9.9
10
14
42
70
70
50
70
70
100
70
70
100
1
1
1
1
1
1
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
4
1
2
2
3
3
4
0
0
0
1
1
1
2
2
2
3
3
4
0
0
0
1
1
1
2
2
2
3
3
3
4
4
5
0
2
0
1
0
1
0
0
1
2
0
1
2
0
1
2
0
1
0
0
1
2
0
1
2
0
1
2
0
1
2
0
1
0
0
8.1
6.1
8.2
8.3
10
10
4.5
6.8
9.1
6.8
9.2
12
9.3
12
14
12
14
15
7.8
11
13
11
14
17
14
17
20
17
21
24
21
24
25
13
3.4
1.8
3.4
3.4
3.5
3.5
0.79
1.8
3.4
1.8
3.4
4.1
3.4
4.1
5.9
4.1
5.9
5.9
2.1
3.5
5.6
3.5
5.6
6
5.7
6.8
6.8
6.8
6.8
9.8
6.8
9.8
9.8
4.1
22
15
22
22
22
22
15
15
22
17
22
26
22
26
36
26
36
36
22
23
35
26
36
36
36
40
40
40
40
70
40
70
70
35
440
441
442
450
451
500
501
502
503
510
511
512
513
520
521
522
523
524
530
531
532
533
534
540
541
542
543
544
545
550
551
552
553
554
401
17
5.9
36
555
402
21
6.8
40
34
40
47
41
48
23
31
43
58
33
46
63
84
49
70
94
120
150
79
110
140
170
210
130
170
220
280
350
430
240
350
540
920
160
0
>160
0
14
14
15
14
15
6.8
10
14
22
10
14
22
34
15
22
34
36
58
22
34
52
70
70
36
58
70
100
100
150
70
100
150
220
400
700
100
100
120
100
120
70
70
100
150
100
120
150
220
150
170
230
250
400
220
250
400
400
400
400
400
440
710
710
1100
710
1100
1700
2600
4600
Unidad de medida
UFC/100 mL a 35C
Lmite mximo
permisible
0 (*)
2. E. Coli
UFC/100 mL a 44,5C
0 (*)
3. Bactrias Coliformes
UFC/100 mL a 44,5C
0 (*)
UFC/100 mL
Termotolerantes o Fecales.
4. Bactrias Heterotrficas
UFC/mL a 35C
5. Huevos y larvas de Helmintos, N org/L
quistes
ooquistes
500
0
de
protozoarios patgenos.
6. Vrus
7. Organismos de vida libre,
como algas, protozoarios,
coppodos, rotferos, nemtodos
UFC / mL
0
N org/L
EMUSAP (Potable)
JASS.
Municipio.
Otro.
No sabe.
Tubera
Tanquero
Tubera y tanquero
Otro
Ninguno
Clora el agua
Hierve el agua
F iltra el agua
Expone al sol el agua
Ninguna
6) Alguna vez le han capacitado sobre cmo tratar el agua de manera casera:
Si / No
7) En los ltimos 6 meses, cuantas veces se ha enfermado con diarrea
a) 1 a 4 veces
b) 4 a 6 veces
c) 6 a 9 veces
d) +10 veces
8) Cuantos das ha durado con la diarrea
a) Menos de 4 semanas
b) Ms de 4 semanas
9) Toma directamente el agua del grifo en el distrito de Tamburco, esto sucede:
a) Siempre
b) A veces
c) Nunca
10) Se lava las manos antes de ingerir los alimentos.
a) Siempre
b) A veces
c) Nunca
11) Tuvo un proceso diarreico despus de ingerir agua.
a) Siempre
b) A veces
c) Nunca