UNIVERSIDADE DE SO PAULO

INSTITUTO DE QUMICA
Programa de Ps-Graduao em Qumica

DANIELLE JUAIS

Produo de Polmeros
Derivados de Fontes
Renovveis via Catlise
Enzimtica

So Paulo
Data do Depsito na SPG:
06/03/2009

DANIELLE JUAIS

Produo de Polmeros
Derivados de Fontes Renovveis
via Catlise Enzimtica
Dissertao apresentada ao Instituto de
Qumica da Universidade de So Paulo para
obteno do Ttulo de Mestre em Qumica
(Qumica Orgnica)

Orientador: Prof. Dr. Luiz Henrique Catalani

So Paulo
2009

Danielle Juais
Produo de Polmeros Derivados de Fontes Renovveis via Catlise Enzimtica.

Dissertao apresentada ao Instituto de Qumica

da Universidade de So Paulo para obteno do
Ttulo de Mestre em
Qumica (Qumica Orgnica)

Aprovado em: _____________

Banca Examinadora

Prof. Dr.

_________________________________________________

Instituio: ________________________________________________
Assinatura: ________________________________________________

Prof. Dr.

_________________________________________________

Instituio: ________________________________________________
Assinatura: ________________________________________________

Dedico este trabalho aos meus pais, Abraho C. Juais e Maria de Ftima
Juais, pelo amor, apoio e incentivo, e ao meu namorado, Renan Ferrarini,
por ser um verdadeiro porto seguro no meio da tempestade, e por
proporcionar os melhores momentos da minha vida.

AGRADECIMENTOS

Agradeo a Deus, por sempre ser um socorro presente no meio de tantas

dificuldades.
s agncias de fomento pesquisa, CNPq, pela bolsa de estudos, e Fapesp
e Capes, pelo suporte financeiro indireto.
Ao Prof. Dr. Luiz Henrique Catalani, pela oportunidade de fazer parte do seu
grupo de pesquisa.
Aos colegas e ex-colegas do Laboratrio de Biomateriais Polimricos, Alliny,
Antnio, Fbio, Guilhermino, Janana, Mariana, Patrcia, Renata, Ricardo, Romeu,
Vnia, ao tcnico Luiz e secretria Slvia pelo companheirismo, amizade,
conselhos, discusses e inmeras risadas. Meu especial agradecimento ao Romeu,
por toda ajuda prestada, e pela pacincia ao me ensinar.
Ao Prof. Dr. Richard A. Gross, do Laboratrio do Centro NSF de Biocatlise e
Bioprocessamento de Macromolculas, da Polytechnic University, em Nova York, e
seus alunos, pela realizao das anlises de DSC e TG.
Ao Prof. Dr. Joo V. Comasseto, bem como aos seus alunos, pela realizao
das anlises de CG-MS, emprstimo de materiais, pela amizade e pacincia na
resoluo de todas as minhas dvidas com relao sntese orgnica.
Aos funcionrios do IQUSP, sobretudo da Central Analtica e da Secretaria de
Ps-Graduao, principalmente ao Milton e Cibele, pela amizade e eficincia.

 minha famlia, sobretudo aos meus pais e irmos, Jlio, Carlos, Francisco,
Dbora e Helen e minha sobrinha Letcia, que so a base que sustenta minha
vida.
dona Neide Dacunti Favorito, por ser uma verdadeira me para mim em
So Paulo.
Aos amigos do IQ-USP, Aline, Lollo, Vtor Z. e Bruno, pela amizade e bons
momentos compartilhados.
Aos meus amigos do Departamento de Qumica da UFPR, principalmente
Karen, Ju, Kimura, Carol, Samanta, Tico, Z, Marcela, Zez, Alcindo, Cida, Janjo,
Soraia, Emir, Joel, Brazuka, Beio, Flvio, Gustavo, Vtor, Alfredo e Slvia, entre
tantos outros, que com certeza contriburam para mais essa vitria.
A todos que de alguma maneira colaboraram para a execuo desse trabalho.

"Aprendi atravs da experincia amarga a suprema lio: controlar minha ira

torn-la como o calor que convertido em energia. Nossa ira controlada
pode ser convertida numa fora capaz de mover o mundo." (Ghandi)

RESUMO

Juais, D. Produo de Polmeros Derivados de Fontes Renovveis via Catlise

Enzimtica. 2009. 116p. Dissertao Programa de Ps-Graduao em Qumica.
Instituto de Qumica, Universidade de So Paulo, So Paulo.

A busca por materiais derivados de fontes renovveis e com caractersticas

como biocompatibilidade e biodegradabilidade tem crescido significativamente nos
ltimos anos. A utilizao de enzimas na polimerizao representa um grande passo
para a obteno destes, visto que possibilitam a produo de polmeros evitando a
utilizao de catalisadores txicos e, assim, melhorando sua biocompatibilidade.
O presente trabalho descreve a utilizao de monmeros funcionais derivados
de fontes renovveis na produo de polisteres hidrolisveis via catlise
enzimtica. As snteses de polmeros produzidos a partir de isosorbdeo e cidos
dicarboxlicos ou derivados - como seus steres alqulicos e vinlicos - foram feitas
utilizando a lipase de Candida antarctica Frao B como catalisador. As
polimerizaes foram realizadas por policondensaes em massa e em soluo,
utilizando-se diferentes solventes e diferentes tcnicas para remoo de
subprodutos de reao. A principal abordagem foi o estudo das diferentes condies
reacionais realizadas, variando-se o tempo de reao, tipo do monmero, solvente
utilizado (se for o caso) e tipo de tcnica para remoo de subprodutos visando o
aumento da massa molar dos polmeros.
A condio que forneceu os materiais com maiores massas molares foi a
policondensao em soluo, utilizando a mistura cicloexano:benzeno como

solvente. Tendo por objetivo investigar profundamente a condio tima obtida, e

estabelecer padres de comparao com outros sistemas, foram estudados, nessa
condio, parmetros como tempo de reao, efeito do tamanho da cadeia
carbnica do monmero, grupo de sada, solubilidade dos polmeros e diluio do
sistema.
Os materiais obtidos foram caracterizados por cromatografia por excluso de
tamanho (SEC), termogravimetria (TG), calorimetria exploratria diferencial (DSC),
espectroscopia no infravermelho, difrao de raios-X, e Ressonncia Magntica
Nuclear (RMN) de 1H e 13C.
Atravs deste trabalho foi provado que, embora apresente uma cintica de
reao lenta, a polimerizao enzimtica deste diol secundrio estericamente
impedido possvel, fornecendo polisteres com massas molares similares s
obtidas via catlise qumica. Todos os resultados obtidos neste trabalho so inditos
no que diz respeito polimerizao enzimtica de diis secundrios impedidos, mais
especificamente de isosorbdeo.

Palavras-chave:

isosorbdeo,

policondensao em soluo.

catlise

enzimtica,

diis

secundrios,

ABSTRACT

Juais, D. Production of polymers derived from renewable sources by enzyme

catalysis. 2009. 116p. Masters Thesis Graduate Program in Chemistry. Instituto
de Qumica, Universidade de So Paulo, So Paulo.

The search for materials derived from renewable sources, with characteristics
such as biocompatibility and biodegradability has grown significantly in recent years.
The use of enzymes in the polymerization is a major step for the attainment of these
materials, since it allows the production of polymers while avoiding the use of toxic
catalysts and thus improving its biocompatibility.
This paper describes the use of functional monomers derived from renewable
sources in the production of hydrolysable polyesters by enzyme catalysis The
synthesis and characterization of polymers derived from isosorbide and dicarboxilic
acids or derivatives - such as alkyl and vinyl esters - were carried out using the lipase
from Candida antarctica - Fraction B as catalyst. The polymerizations were
accomplished by polycondensations in bulk and in solution, using different solvents
and different techniques for removal of reaction byproducts. The main approach was
to study the different reaction conditions, by varying the reaction time, monomer type,
solvent used (if applicable) and the type of technique for removal of byproducts,
aiming at maximizing polymer molar mass.
The condition that provided the material with higher molecular weight was the
solution step-growth polymerization, using a mixture cyclohexane:benzene as
solvents. Aiming to thoroughly investigate the optimum condition obtained, and to

establish standards for comparison with other systems, it was studied, in this
condition, parameters such as reaction time, effect of monomer carbon chain length ,
leaving group, polymers solubility of and dilution of the reaction system.
The materials were characterized by gel permeation chromatography (SEC),
thermogravimetry

(TG),

differential

scanning

calorimetry

(DSC),

infrared

spectroscopy, X-ray diffraction and 1H and 13C Nuclear Magnetic Resonance (NMR).
Through this work it was proved that, in spite of a slow reaction kinetics, the
enzymatic polymerization of this hindered secondary diol is possible, providing
polyester with molecular weight similar to those obtained by chemical catalysis. All
results obtained in this work are unprecedented with respect to the enzymatic
polymerization of hindered secondary diols, more specifically of Isosorbide.

Key words: Enzyme catalysis, isosorbide, secondary diols, solvent-based stepgrowth polymerization

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

CAL-B: Lipase de Candida antarctica Frao B.
CDCl3: Clorofrmio deuterado
DSC: Calorimetria Exploratria Diferencial
FDA: Food and Drugs Administration
FTIR: Infravermelho com Transformada de Fourier
IBGE: Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica
ITB: Iterative Tandem Catalysis Catlise Acoplada Iterativa
MEK: 2-Butanona
MM: Lipase de Mucor miehei
: Massa molar numrica mdia
: Massa molar ponderal mdia
N-435: Lipase de Candida antarctica Frao B Novozym 435
P.E.: Ponto de ebulio
PD: ndice de polidispersividade (PD= / )
PET: Poli(tereftalato de etileno)
PF: Lipase de Pseudomonas fluorescens
PPL: Lipase de pncreas de porco
PS: Lipase de Pseudomonas sp.
PTFE: Poli(tetrafluoretileno)
RMN 1H e 13C: Ressonncia Magntica Nuclear de hidrognio e carbono
SEC: Cromatografia por excluso de tamanho
Tg: Temperatura de Transio Vtrea
TG: Termogravimetria
THF: Tetraidrofurano
Tm: Temperatura de Fuso Cristalina
TMS: Tetrametilsilano
WAXD: Difrao de raios-X de alto ngulo.

NDICE DE FIGURAS
FIGURA 1 - ESTRUTURAS DOS 1,4: 3,6 - DIANIDROEXITIS. ____________________________________ 20
FIGURA 2 - ESTRUTURA TRIDIMENSIONAL DA CAL-B (WWW.NOVOZYMES.COM) _____________________ 31
FIGURA 3 - RESULTADOS OBTIDOS ATRAVS DA POLIMERIZAO EM SOLUO COM DESTILAO AZEOTRPICA.
___________________________________________________________________________ 43
FIGURA 4 - ESTUDO COMPARATIVO ENTRE AS TCNICAS EMPREGADAS. ___________________________ 43
FIGURA 5 - ESTUDO COMPARATIVO DOS GRAUS DE POLIMERIZAO OBTIDOS EM CICLOEXANO E NA MISTURA
CICLOEXANO:BENZENO.

_________________________________________________________ 43

FIGURA 6 - VANTAGEM DO USO DA MISTURA DE CICLOEXANO E BENZENO _________________________55

FIGURA 7 - ESTUDO DO CRESCIMENTO DA MASSA MOLAR DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA) EM FUNO DO
TEMPO DE REAO. ____________________________________________________________57

FIGURA 8 - TROCA DE BENZENO POR TOLUENO NA MISTURA DE SOLVENTES. _______________________ 43

FIGURA 9 - AVALIAO DAS MASSAS MOLARES DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA) QUANTO AO LCOOL DE
SADA. ______________________________________________________________________

43

FIGURA 10 - EFEITO DA PROPORO SOLVENTE: ISOSORBDEO. ________________________________ 43

FIGURA 11- EFEITO DA CONCENTRAO DE BENZENO NA MISTURA DE SOLVENTES. __________________ 43
FIGURA 12 - CURVAS DE DSC DOS MATERIAIS OBTIDOS ______________________________________ 43
FIGURA 13 - CURVAS DE ANLISE TERMOGRAVIMTRICA DOS MATERIAIS OBTIDOS. __________________ 43
1

FIGURA 14 - ESPECTRO DE H-RMN DO POLI(SUCCINATO DE ISOSORBILA)_________________________74

13

FIGURA 15 - ESPECTRO DE C-RMN DO POLI(SUCCINATO DE ISOSORBILA). _______________________ 43

1

FIGURA 16 - ESPECTRO DE H-RMN DO POLI(GLUTARATO DE ISOSORBILA) ._______________________ 76

13

FIGURA 17- ESPECTRO DE C-RMN DO POLI(GLUTARATO DE ISOSORBILA). _______________________ 43

FIGURA 18 - ESPECTRO DE 1H-RMN DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA).__________________________ 78
13

FIGURA 19 - ESPECTRO DE C-RMN DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA). _________________________ 43

1

FIGURA 20 - ESPECTRO DE H-RMN DO POLI(SUBERATO DE ISOSORBILA). ________________________ 43

13

FIGURA 21 - ESPECTRO DE C-RMN DO POLI(SUBERATO DE ISOSORBILA). ________________________ 43

1

FIGURA 22 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE H-RMN DO POLI(SEBACATO DE ISOSORBILA). ___________ 43

13

FIGURA 23 - ESPECTRO DE C-RMN DO POLI(SEBACATO DE ISOSORBILA). ________________________ 43

1

FIGURA 24 - ESPECTRO DE H-RMN DO POLI(DODECANODIOATO DE ISOSORBILA). __________________ 43

13

FIGURA 25 - ESPECTRO DE C-RMN DO POLI(DODECANODIOATO DE ISOSORBILA). __________________ 43

FIGURA 26 - DIFRATOGRAMAS DE RAIOS-X DOS POLISTERES OBTIDOS. __________________________ 43
FIGURA 27 - ESPECTRO NO INFRAVERMELHO DO POLI(SUCCINATO DE ISOSORBILA) __________________ 43
FIGURA 28 - ESPECTRO NO INFRAVERMELHO DO POLI(GLUTARATO DE ISOSORBILA) __________________ 43
FIGURA 29 - ESPECTRO NO INFRAVERMELHO DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA) ____________________ 43
FIGURA 30 - ESPECTRO NO INFRAVERMELHO DO POLI(SUBERATO DE ISOSORBILA) ___________________ 43
FIGURA 31 - ESPECTRO NO INFRAVERMELHO DO POLI(SEBACATO DE ISOSORBILA) ___________________ 43
FIGURA 32 - ESPECTRO NO INFRAVERMELHO DO POLI(DODECANODIOATO DE ISOSORBILA) _____________ 43

NDICE DE ESQUEMAS

ESQUEMA 1 - SNTESE DO ISOSOSORBDEO A PARTIR DA D-GLICOSE. ____________________________ 19

ESQUEMA 2 - REAES DE POLIMERIZAO CATALISADAS POR LIPASES. _________________________ 29
ESQUEMA 3 - MECANISMO DO STIO CATALTICO DA CAL-B. ___________________________________ 30
ESQUEMA 4 - SNTESE DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA), ATRAVS DE POLICONDENSAO EM MASSA. AS
REAES FORAM REALIZADAS SOB VCUO E SOB PRESSO AMBIENTE.

_______________________ 43

ESQUEMA 5 - SNTESE DE POLMEROS UTILIZANDO DERIVADOS DIVINLICOS. _______________________ 43

ESQUEMA 6 SNTESE DE POLMEROS EM SOLUO COM DESTILAO AZEOTRPICA. ________________ 43

NDICE DE TABELAS
TABELA 1 - ESPECIFICAES TCNICAS DA CAL-B NOVOZYM-435 WWW.NOVOZYMES.COM _______ 31
TABELA 2 - CIDOS E LCOOIS UTILIZADOS NA SNTESE DOS DISTERES.__________________________ 22
TABELA 3 - TEMPOS UTILIZADOS NAS POLIMERIZAES EM MASSA SOB PRESSO REDUZIDA. ___________ 38
TABELA 4 - POLIMERIZAO EM SOLUO SOB PRESSO REDUZIDA. _____________________________ 25
TABELA 5 POLMEROS PRODUZIDOS A PARTIR DE POLIMERIZAO COM MISTURAS AZEOTRPICAS DE
SOLVENTES.__________________________________________________________________ 39
TABELA 6 MISTURAS AZEOTRPICAS BINRIAS. ___________________________________________ 39
TABELA 7 - MISTURAS AZEOTRPICAS TERNRIAS _ _________________________________________28
TABELA 8 - RESULTADOS OBTIDOS NAS REAES DE POLICONDENSAO EM MASSA SOB PRESSO REDUZIDA.
_________________________________________________________________________37
TABELA 9 RESULTADOS OBTIDOS PARA POLICONDENSAES REALIZADAS SOB PRESSO AMBIENTE. ____ 43
TABELA 10 - RESULTADOS OBTIDOS PARA POLICONDENSAES UTILIZANDO MONMEROS DIVINLICOS. ___ 43
TABELA 11 - VALORES DE LOG P PARA DIFERENTES SOLVENTES ________________________________46
TABELA 12 - RESULTADOS OBTIDOS PARA POLIMERIZAO EM SOLUO COM DESTILAO AZEOTRPICA. _ 43
TABELA 13 - POLIMERIZAO EM SOLUO SOB PRESSO REDUZIDA. ____________________________ 43
TABELA 14 - POLMEROS DA SRIE DE STERES DOS DICIDOS CARBOXLICOS EM CICLOEXANO__________51
TABELA 15 - POLMEROS DA SRIE DE STERES DOS DICIDOS CARBOXLICOS EM CICLOEXANO: BENZENO 6:1.
____________________________________________________ ERRO! INDICADOR NO DEFINIDO.
TABELA 16 - ESTUDO DO CRESCIMENTO DA MASSA MOLAR DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA) EM FUNO DO
TEMPO DE REAO. ____________________________________________________________ 43
TABELA 17 - RESULTADOS OBTIDOS COM A TROCA DE TOLUENO POR BENZENO NA MISTURA DE SOLVENTES. 43
TABELA 18 - MASSAS MOLARES DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA) OBTIDAS VARIANDO-SE O LCOOL DE SADA.
___________________________________________________________________________ 43
TABELA 19 - COMPOSIO DOS AZETROPOS VARIANDO-SE A CADEIA CARBNICA DO LCOOL. _________ 43
TABELA 20 - SOLUBILIDADE DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA) COM MW~30KDA. ____________________ 43
TABELA 21 - RESULTADOS OBTIDOS VARIANDO-SE A PROPORO ISOSORBDEO: SOLVENTE.____________65
TABELA 22 - RESULTADOS OBTIDOS VARIANDO-SE A CONCENTRAO DE BENZENO NA MISTURA DE
SOLVENTES.__________________________________________________________________ 43
TABELA 23 - TEMPERATURA DE TRANSIO VTREA DOS POLISTERES OBTIDOS VIA CATLISE ENZIMTICA E VIA
CATLISE QUMICA. _____________________________________________________________ 43
TABELA 24 - PERDA DE MASSA DOS MATERIAIS OBTIDOS______________________________________71
TABELA 25 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE 1H-RMN DO POLI(SUCCINATO DE ISOSORBILA).___________74
TABELA 26 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE 13C-RMN DO POLI(SUCCINATO DE ISOSORBILA). _________ 43
TABELA 27 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE 1H-RMN DO POLI(GLUTARATO DE ISOSORBILA) ___________76
13
TABELA 28- DESLOCAMENTOS QUMICOS DE C-RMN DO POLI(GLUTARATO DE ISOSORBILA). __________ 43
1
TABELA 29 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE H-RMN DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA). _____________ 43
13
TABELA 30 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE C-RMN DO POLI(ADIPATO DE ISOSORBILA). ____________ 43
1
TABELA 31 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE H-RMN DO POLI(SUBERATO DE ISOSORBILA). ___________ 43
13
TABELA 32 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE C-RMN DO POLI(SUBERATO DE ISOSORBILA). ___________ 43
1
TABELA 33 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE H-RMN DO POLI(SEBACATO DE ISOSORBILA). ___________ 43
13
TABELA 34 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE C-RMN DO POLI(SEBACATO DE ISOSORBILA). ___________ 43
1
TABELA 35 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE H-RMN DO POLI(DODECANODIOATO DE ISOSORBILA). _____ 43
13
TABELA 36 - DESLOCAMENTOS QUMICOS DE C-RMN DO POLI(DODECANODIOATO DE ISOSORBILA). _____ 43
TABELA 37 - PICOS DE ABSORO NO INFRAVERMELHO. ______________________________________ 43

SUMRIO
1 - INTRODUO. ________________________________________________________________ 17
1.1

- POLMEROS DERIVADOS DE FONTES RENOVVEIS: ___________________________________ 17

1.2

- DIANIDROEXITIS: __________________________________________________________ 18

1.2.1
1.3

Isosorbdeo: _________________________________________________________ 21

- POLIMERIZAO POR CATLISE ENZIMTICA._______________________________________ 24

1.3.1

- Lipases: ____________________________________________________________ 28

1.3.1.1 Lipase de Candida antarctica Frao B - CAL-B: ________________________________ 29

2 OBJETIVOS. _________________________________________________________________ 34
3 MATERIAIS E MTODOS. ______________________________________________________ 35
3.1 MATERIAIS: ________________________________________________________________ 35
3.2 MTODOS: ________________________________________________________________ 36
3.2.1 - Preparao e purificao de reagentes, solventes e monmeros. _________________ 36
3.2.1.1 - Purificao do acetato de etila. ____________________________________________ 36
3.2.1.2- Purificao do clorofrmio. ________________________________________________ 36
3.2.1.3- Purificao do isosorbdeo (IS). ____________________________________________ 37
3.2.1.5- Purificao do cido adpico. ______________________________________________ 37
3.2.1.6- Sntese dos steres dos cidos Dicarboxlicos _______________________________ 37
3.2.1.7- Sntese do Adipato de Divinila. _____________________________________________ 38

3.2.2 - Polimerizaes _________________________________________________________ 38

3.2.2.1- Polimerizao em massa sob presso ambiente. _____________________________ 38
3.2.2.2 - Polimerizao em massa sob presso reduzida. _____________________________ 38
3.2.2.3 - Polimerizao em soluo sob presso reduzida. ____________________________ 39
3.2.2.4 - Polimerizao em massa sob presso ambiente utilizando monmeros divinlicos. 39
3.2.2.5 - Polimerizao com solvente sob refluxo em sistema aberto utilizando monmeros
divinlicos. ______________________________________________________________________ 39
3.2.2.6 - Polimerizao com misturas azeotrpicas de solvente. _______________________ 39

3.2.3 - Purificao dos polmeros obtidos. _________________________________________ 39

3.2.4 Teste de solubilidade dos polmeros obtidos: _________________________________ 39
3.2.5 - Caracterizao dos polmeros obtidos. ______________________________________ 40
3.2.5.1 - Cromatografia por excluso de tamanho (SEC): ___________________________________ 40
3.2.5.2 Calorimetria exploratria diferencial (DSC): ______________________________________ 40
3.2.5.3 Anlise termogravimtrica (TG): _______________________________________________ 41
3.2.5.4 Espectroscopia no Infravermelho: _____________________________________________ 41
3.2.5.5 Difrao de Raios-X:________________________________________________________ 42
1

3.2.5.6 Ressonncia Magntica Nuclear de H e

13

C: ____________________________________ 42

4 RESULTADOS E DISCUSSO: __________________________________________________ 43

4.1 - POLICONDENSAO EM MASSA, SOB PRESSO AMBIENTE E SOB PRESSO REDUZIDA: __________ 43
4.1.1 Policondensao em massa sob presso reduzida: ____________________________ 43
4.1.2 - Policondensao em massa sob presso ambiente: ____________________________ 43
4.1.3 - Consideraes gerais: ___________________________________________________ 43
4.2 - POLICONDENSAO UTILIZANDO MONMEROS DIVINLICOS: _____________________________ 43
4.3 - POLICONDENSAO EM SOLUO COM DESTILAO AZEOTRPICA: _______________________ 43
4.3.1 - Polimerizao em soluo sob presso reduzida. ______________________________ 43
4.4 - INVESTIGAO DO SISTEMA CICLOEXANO:BENZENO. ___________________________________ 43
4.4.1 Estudo comparativo entre sistemas utilizando cicloexano e misturas cicloexano:benzeno
6:1. ________________________________________________________________________ 43
4.4.1.1 - Vantagem do uso da mistura de cicloexano e benzeno: _____________________________ 43

4.4.2 Estudo do crescimento da massa molar em funo do tempo de reao: ___________ 43

4.4.3 Troca de benzeno por tolueno na mistura: ___________________________________ 43
4.4.4 - Avaliao das massas molares quanto ao lcool de sada. ______________________ 43
4.4.5 - Teste de solubilidade dos materiais obtidos: __________________________________ 43
4.4.6 - Efeito da proporo monmero: solvente ____________________________________ 43
4.4.7 - Efeito da concentrao de benzeno na mistura: _______________________________ 43
4.5 - CARACTERIZAO DOS POLISTERES OBTIDOS. ______________________________________ 43
4.5.1 Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC): __________________________________ 43
4.5.2 Anlise Termogravimtrica: _______________________________________________ 43
4.5.3 Ressonncia Magntica Nuclear: __________________________________________ 43
1

Espectro de H-RMN do Poli(succinato de isosorbila). _____________________________________ 43

Espectro de

13

C-RMN do Poli(succinato de isosorbila). ____________________________________ 43

Espectro de H-RMN do Poli(glutarato de isosorbila). ______________________________________ 43

Espectro de

13

C-RMN do Poli(glutarato de isosorbila). _____________________________________ 43

Espectro de H-RMN do Poli(adipato de isosorbila). _______________________________________ 43

Espectro de

13

C-RMN do Poli(adipato de isosorbila). ______________________________________ 43

Espectro de H-RMN do Poli(suberato de isosorbila). ______________________________________ 43

Espectro de

13

C-RMN do Poli(suberato de isosorbila). _____________________________________ 43

Espectro de H-RMN do Poli(sebacato de isosorbila). _____________________________________ 43

Espectro de

13

C-RMN do Poli(sebacato de isosorbila). _____________________________________ 43

Espectro de H-RMN do Poli(dodecanodioato de isosorbila). ________________________________ 43

Espectro de

13

C-RMN do Poli(dodecanodioato de isosorbila). _______________________________ 43

4.5.4 Difrao de Raios-X: ____________________________________________________ 43

4.5.5 Espectroscopia no Infravermelho: __________________________________________ 43
5 - CONCLUSES: _______________________________________________________________ 43
6 - REFERNCIAS: _______________________________________________________________ 45

17

1 - INTRODUO
1.1 - POLMEROS DERIVADOS DE FONTES RENOVVEIS

A biomassa constitui em uma fonte renovvel de matrias-primas que do

origem a novos compostos menos poluentes, capazes de substituir os derivados do
petrleo. A utilizao efetiva da biomassa um alvo de investigao atraente e
desafiador.
O uso de fontes renovveis como uma alternativa para produtos derivados de
combustveis fsseis vem ganhando preferncia, principalmente devido sua
disponibilidade inesgotvel e s consideraes ambientais, como por exemplo, o
potencial sequestro de carbono (van Dam, et al., 2005). A utilizao de derivados
de fontes renovveis em detrimento do uso de produtos de fontes no-renovveis
um dos 12 princpios da qumica verde (Lenardo, et al., 2003). Muitos governos
esto desenvolvendo polticas que visam o desenvolvimento de uma sociedade
sustentvel atravs da explorao de produtos renovveis (Clinton, 2000). Em 1998,
o Departamento de Energia dos Estados Unidos estabeleceu uma meta para que,
at 2020, haja um aumento de 10% na produo e no uso de produtos qumicos
bsicos derivados de plantas, e que at 2050, o aumento seja de 50%. A
substituio do uso do petrleo pelo uso de fontes renovveis para a produo
desses produtos pode gerar uma reduo de at 17% da utilizao do petrleo e,
consequentemente, diminuir a dependncia mundial desse combustvel (Executive
Steering Comittee, 1999).

18

O desenvolvimento de polmeros derivados de biomassa um dos mais

importantes e urgentes assuntos do ponto de vista da preservao ambiental,
considerando-se o fato de que a grande maioria dos polmeros utilizados para fins
comerciais origina-se de monmeros derivados do petrleo. A poluio ambiental
causada pela produo e o descarte de polmeros derivados do petrleo tem
levantado um crescente interesse nas indstrias qumicas. Assim, polmeros
derivados do amido ou outros carboidratos so de grande interesse, por serem
provenientes de fontes inteiramente renovveis. Consequentemente, no
surpreendente o grande aumento das atividades de pesquisa nesse campo nos
ltimos anos (Kricheldorf, 1997; Chatti, et al., 2006).

1.2 - DIANIDROEXITIS:

O milho uma fonte de amido, matria-prima natural, renovvel, verstil e

biodegradvel, e vem substituindo o petrleo em muitas aplicaes industriais,
desde plsticos at para produo de etanol. No Brasil, a safra de milho em 2007 foi
de 38,3 milhes de toneladas (IBGE, 2007). Os Estados Unidos so responsveis
por 44% da produo mundial de milho, com lavouras ocupando 77 milhes de
acres. Entre todas as lavouras, o milho a principal fonte de amido, devido ao seu
amplo suprimento e baixo custo relativo a outras fontes de amido ou acar, e
tambm

porque

existem

sistemas

bem

estabelecidos

de

transporte

armazenamento (Busche, et al., 1983).

Os carboidratos utilizados na obteno de polmeros biodegradveis so em
grande parte provenientes do amido. No entanto, o uso direto de derivados

19

monomricos de carboidratos extremamente difcil devido ao nmero de

funcionalidades hidroxila nestes compostos. Esse problema pode ser contornado
utilizando-se 1,4:3,6-dianidroexitis.
Dianidroexitis so conhecidos produtos da indstria do milho, obtidos atravs
da hidrogenao seguida de dupla desidratao de acares como a D-glicose
(Esquema 1) (Stross, et al., 1992). So produzidos mundialmente 650 mil toneladas
por ano desses compostos (Sheldon, 1993), e seu potencial tem sido explorado para
a sntese de diversos polmeros como politeres (Kricheldorf, et al., 1995) (Chatti, et
al., 2002), poliuretanos (Bachmann, et al., 1998), policarbonatos (Kricheldorf, et al.,
1997) e polisteres (Kricheldorf, et al., 2003).

1
CH2OH

CHO
H
HO
H
H

2
3
4
5

OH
H
OH
OH

cat.
hidrogenao

HO

E SQUEMA 1 - S NTESE

OH

OH
OH

HO
dupla
desidratao

5 4
6

H+

O
1
3 2

OH

CH2OH
6

CH2OH
6

D-Glicose

Sorbitol

DO I SOSOSORBDEO A PARTIR DA

Isosorbdeo

D-G LICOSE .

Estes compostos quirais so obtidos a partir do amido como trs ismeros de

acordo com as configuraes relativas das duas funes hidroxila (Flche, et al.,
1986) (Hopton, et al., 1969): isosorbdeo, isomandeo, e isoiddeo, respectivamente
derivados do D-glucitol, D-manitol e L-iditol (Figura 1). Analisando-se as estruturas
tridimensionais destes compostos, pode-se observar que os dianidroexitis tm dois
anis de cinco membros aproximadamente planares, fundidos em cis, em forma de
V, com os grupos hidroxila nas posies C-2 e C-5, que podem ser endo ou exo,

20

dependendo de sua posio, dentro ou fora da cunha. No isosorbdeo, uma das

hidroxilas est na configurao endo (C-5) e a outra exo (C-2), no isomandeo,
ambas esto na configurao endo e no isoiddeo, ambas esto na configurao
exo. A reatividade relativa destes compostos pode ser explicada atravs do
impedimento estrico que ocorre devido s posies dos grupos hidroxilas nas
molculas.

F IGURA 1 - E STRUTURAS

DOS

1,4: 3,6 - D IANIDROEXITIS .

O interesse nesse tipo de compostos como monmeros para a sntese de

vrios policondensados tem aumentado muito nos ltimos tempos. Essa tendncia
se deve a vrios motivos (Kricheldorf, 1997):

Podem ser preparados a partir de sacardeos e so, portanto, monmeros

derivados de fontes renovveis;

21

So substncias atxicas e seus polisteres derivados de cidos

dicarboxlicos alifticos so sensveis hidrlise, degradam-se em
questo de meses em contato com a gua, e por isso so considerados
materiais biodegradveis muito teis;

So compostos quirais e pertencem ao grupo de monmeros quirais de

menor custo (particularmente o isosorbdeo). As aplicaes potenciais de
polmeros quirais so rentveis e incluem membranas, fases estacionrias
para cromatografia, entre outras.

1.2.1 ISOSORBDEO:

O isosorbdeo o dianidroexitol mais abundante, visto que derivado da

glicose via sorbitol. biodegradvel e recomendado pelo FDA1 como um material
seguro. quimicamente e termicamente estvel. Polisteres derivados de
isosorbdeo no racemizam ou decompem quando aquecidos por poucos minutos
acima de 350C. Em princpio, o isosorbdeo pode ser diretamente incorporado em
polisteres comerciais como o poli(tereftalato de etileno) (PET), que um polmero
amplamente usado na fabricao de embalagens para alimentos e bebidas. Devido
sua rgida estrutura molecular, o isosorbdeo enrijece as cadeias de PET e
aumenta a temperatura de transio vtrea do PET para 85 a 90C, dependendo do
grau de incorporao, o que permite que frascos feitos com esses copolmeros
possam ser envasados quente, com produtos que necessitam ser pasteurizados,
ou que so to viscosos que necessitam calor para reduzir o tempo de envase.

FDA: Food and Drug Administration - agncia americana reguladora de alimentos, medicamentos,
vacinas e cosmticos para usos em seres humanos.

22

Frascos normais de PET simplesmente se distorcem quando so envasados

quente. (Adelman, et al., 2003).
Os custos preliminares estimados mostram que o isosorbdeo tem um preo
competitivo com monmeros derivados de petrleo, usados para sntese de
plsticos (Kricheldorf, et al., 1997; Adelman, et al., 2003). Assim como no PET
modificado, h muitas aplicaes potenciais para o isosorbdeo na indstria de
polmeros. O uso do isosorbdeo derivado do milho ir reduzir potencialmente a
quantidade de petrleo necessria para a produo de plsticos. Algumas
aplicaes potenciais para os materiais polimricos derivados do isosorbdeo so
(Malhotra, et al., 2007):

Resinas de isosorbdeo biglicidil ter para substituir resinas epxis de

bisfenol-A, usadas como rtulos em latas de alimentos e bebidas. O bisfenolA suspeito de ser xenoestrgeno e sua substituio por um diol derivado de
fontes naturais tem grandes vantagens;

Resinas de policarbonatos de isosorbdeo como plsticos moldveis, com

altos valores de temperatura de transio vtrea, transparncia e boa
resistncia aos raios UV, podem ser potenciais candidatos para substituio
de policarbonatos nas embalagens de CD;

Poliuretanos amorfos insolveis baseados em isosorbdeo como resinas de

separao quiral, de grande valor potencial no mercado de frmacos e
qumica fina, para resoluo de molculas enantiomricas, explorando a
quiralidade desse composto;

Copolisteres de isosorbdeo de estereoqumica controlada como potenciais

fibras de alto desempenho e resinas de engenharia, podendo-se criar novas

23

classes de polisteres de performance controlada, atravs do controle da

quiralidade do polmero ao longo da cadeia;

Resinas de polisteres de isosorbdeo com cidos tereftlico e isoftlico, e

copolmeros com monmeros como L-lactdeo, caprolactona, etc. para usos
em

aplicaes

biomdicas.

Essas

aplicaes

variam

de

resinas

ambientalmente corretas para liberao de frmacos at novos materiais de

sutura degradveis.
O primeiro registro da sntese do isosorbdeo data do ano 1946 (Montgomery, et
al., 1946), e o uso do isosorbdeo como monmero para sntese de polisteres
insaturados foi publicado primeiramente por Jenkins e colaboradores (Jenkins, et al.,
1963). Um dos primeiros trabalhos relevantes utilizando isosorbdeo como
monmero foi feito por Thiem e Lders (Thiem, 1984), que utilizaram um cloreto de
cido dicarboxlico aromtico para a sntese de politereftalatos. Storbeck e
colaboradores (Storbeck, et al., 1993) aperfeioaram as condies de reao usadas
por Thiem e Lders, utilizando piridina como aceptor de HCl (subproduto da
policondensao). Braun and Bergmann (Braun, et al., 1992) sintetizaram
polisteres a partir de isosorbdeo e de cloretos de cidos dicarboxlicos aromticos
e alifticos. Okada e colaboradores (Okada, et al., 1995; Okada, 1996) tambm
sintetizaram polisteres alifticos utilizando isosorbdeo e cloretos de cidos
dicarboxlicos alifticos. Brandenburg e colaboradores (Brandenburg, et al., 2004)
sintetizaram uma srie grande de polisteres alifticos e aromticos a partir de
cidos dicarboxlicos com uma srie de diis primrios e isosorbdeo. Por
transesterificao, sintetizaram copolmeros de um polister com isosorbdeo
incorporado sua estrutura qumica, com outro, sem conter isosorbdeo.

24

A variedade de trabalhos que vem sendo publicados comprova que a

incorporao de isosorbdeo na cadeia polimrica de polisteres tem provado ser
uma abordagem interessante para obter produtos biodegradveis com diferentes
propriedades.

1.3 - POLIMERIZAO POR CATLISE ENZIMTICA

Organismos vivos produzem diferentes macromolculas (polissacardeos,

polinucleotdeos, protenas, polisteres) para suas necessidades metablicas. A
sntese dessas substncias geralmente envolve reaes de polimerizao via
catlise enzimtica in vivo. Uma atividade que tem crescido nos ltimos anos o
uso de enzimas isoladas. Essas enzimas, originadas de organismos vivos, tm
encontrado diversas aplicaes como catalisadores para a sntese de polmeros in
vitro.
Devido

suas

caractersticas

como

diversidade,

especificidade

biodegradabilidade, polmeros de origem enzimtica tm recebido cada vez mais

ateno como candidatos a aplicaes industriais (Dalla Vecchia, et al., 2004). Em
muitos casos, enzimas levam sntese de polmeros que eram impraticveis ou
impossveis de serem obtidos atravs da qumica convencional (Gross, et al., 2001).
Alm disso, os polmeros so sintetizados a partir de fontes renovveis e de
matrias-primas de baixo custo, e as polimerizaes ocorrem sob condies brandas
com mnimo impacto ambiental.
Outras vantagens do uso de enzimas na polimerizao:

25

Alta eficincia na converso de substratos devido sua alta seletividade

para uma dada transformao orgnica;

Alta enantio e regiosseletividade;

Possibilidade de reciclagem do catalisador;

Enzimas tm a habilidade de serem usadas na maioria dos meios

reacionais;

Evitam o uso de catalisadores potencialmente txicos.

Avanos

recentes

na

enzimologia

no-aquosa

tm

expandido

significativamente as condies potenciais nas quais as reaes de polimerizao

via catlise enzimtica podem ser executadas. Exemplos de meios reacionais
alternativos incluem vrios solventes orgnicos, misturas bifsicas de solventes
orgnicos com misturas aquosas, misturas azeotrpicas, sistemas de micelas
reversas, e fluidos supercrticos. Meios de reao no tradicionais tm oferecido
novas opes para o controle do peso molecular, assim como da morfologia e
arquitetura dos produtos polimricos. Devido ao fato de que esterificaes e
transesterificaes enzimticas tm se mostrado efetivas em solventes orgnicos,
muitas reaes enzimticas em meios no-aquosos tm sido reportadas (Klibanov,
1990). Algumas enzimas hidrolticas so estveis mesmo em solventes orgnicos, e
podem ser empregadas em certas condensaes difceis de serem realizadas em
meio aquoso. Por isso, a indstria qumica e os qumicos orgnicos vm mudando
sua percepo quanto ao uso de enzimas em sntese, utilizando solventes
orgnicos. A viso tradicional era baseada no conhecimento convencional de que o
uso de enzimas era restrito a meios aquosos e temperaturas prximas ambiente,
que as enzimas eram muito caras e frgeis como catalisadores, e que eram

26

extremamente especficas (baseados no paradigma uma enzima/ uma reao/ um

substrato).
Os estudos pioneiros de Klibanov e colaboradores, desde 1984 (Zaks, 1984;
Klibanov, 1986), utilizando enzimas em solventes orgnicos contendo pouca gua
ou em meios completamente anidros constituem numa mudana no ponto de vista
anterior dos qumicos orgnicos. Hoje, j muito bem aceito que as enzimas no s
so capazes de funcionar perfeitamente em solventes orgnicos, como j se provou
que as enzimas so mais estveis termicamente em meio orgnico do que em gua.
Como a maioria dos compostos orgnicos solvel em solventes orgnicos e muito
pouco solveis em gua, os qumicos orgnicos rapidamente reconheceram o
potencial das enzimas como catalisadores. O uso de enzimas em meios no
aquosos oferece diversas vantagens (Dordick, 1991):

Aumento da solubilidade de substratos apolares;

Aumento da termoestabilidade;

Fcil recuperao dos produtos atravs de solventes de baixos pontos

de ebulio;

A imobilizao frequentemente desnecessria, pois a enzima

insolvel;

Fcil recuperao da enzima por filtrao ou centrifugao;

Se a imobilizao for necessria para melhor desempenho, a simples

adsoro em superfcies no porosas suficiente;

Supresso de reaes laterais gua-dependentes;

27

Deslocamento do equilbrio termodinmico favorecendo a sntese em

detrimento da hidrlise em reaes como a esterificao;

A possibilidade de realizar reaes com outros nuclefilos que no

seriam praticveis em gua, como por exemplo, transesterificao;

Fcil integrao de passos enzimticos com passos qumicos

convencionais em snteses multietapas.

A polimerizao por catlise enzimtica vem se desenvolvendo rapidamente,

principalmente nas duas ltimas dcadas, atravs do trabalho de autores como
Gross e colaboradores (Gross, et al., 2001) e Kobayashi e colaboradores
(Kobayashi, et al., 2001), entre outros. A sntese de polisteres alifticos por
processos enzimticos tem sido amplamente estudada do ponto de vista da cincia
de materiais biodegradveis (Albertsson, et al., 1995).
Certamente, ainda existem muitos desafios tcnicos para o desenvolvimento
de processos comerciais que envolvem polimerizaes por catlise enzimtica. A
identificao de uma enzima com as capacidades sintticas especficas requer uma
intensa pesquisa. Comparando com catalisadores qumicos, reaes com enzimas
geralmente ocorrem com baixa cintica de reao. Alm disso, o isolamento e a
purificao dos produtos polimricos por processos de baixo custo tambm so um
desafio. Um melhor entendimento dos mecanismos de reao pode identificar
barreiras e limitaes dos processos. Contudo, existem muitas razes para o
otimismo que existe no que diz respeito a uma revoluo que est comeando, onde
a catlise enzimtica in vitro ser incorporada em numerosos processos
relacionados a polmeros.

28

1.3.1 - LIPASES:

As lipases so enzimas pertencentes ao grupo das hidrolases, que catalisam

a hidrlise de steres de cidos graxos, normalmente em ambientes aquosos de
organismos vivos. So encontradas em tecidos de vrios animais e plantas e podem
ser produzidas por fermentao de diversas espcies de microrganismos, tais como
fungos, leveduras e bactrias. Tm sido amplamente utilizadas em sntese orgnica
devido sua alta disponibilidade e baixo custo, e tm sido extensivamente
investigadas com relao s suas propriedades bioqumicas, fisiolgicas e, mais
recentemente, para aplicaes industriais (Pandey, et al., 1999).
Algumas lipases so estveis em solventes orgnicos e podem ser usadas
como catalisadores para esterificaes e transesterificaes. Essa catlise
possibilita a produo de polisteres e policarbonatos atravs de vrios mtodos de
polimerizao. Reaes tpicas de polimerizaes catalisadas por lipases esto
resumidas no Esquema 2 (Kobayashi, et al., 2001). Biotransformaes de vrias
combinaes de derivados de cidos dicarboxlicos e glicis para obteno de
polisteres foram publicadas nos ltimos 20 anos (Bornschauer, et al., 2002). cidos
dicarboxlicos e seus derivados, steres ativados e desativados, anidridos cclicos e
polianidridos foram reportados como monmeros para a sntese de polisteres sob
condies reacionais brandas.

29

Polimerizao de Lactonas por Abertura de Anel

O
C

Lipase

*
n

ORC

Policondensao de cidos Carboxlicos ou Derivados com Glicis

O O
XO2CRCO2X + HOR'OH

Lipase
-XOH

CRC

OR' *
n

X= H, Alquil, Alquil halogenado, Vinil, etc.

Policondensao de Oxicidos e seus steres

HORCO2X

Lipase
-XOH

O
* ORC *
n

X= H, Alquil, Alquil halogenado, Vinil, etc.

E SQUEMA 2 - R EAES

1.3.1.1

DE

P OLIMERIZAO C ATALISADAS

POR

L IPASES .

Lipase de Candida antarctica Frao B - CAL-B:

Muito

tem

sido publicado

sobre

o uso

de

lipases para

catalisar

biotransformaes, muitas dessas reaes so realizadas em meios no aquosos.

Certamente, a CAL-B, que a lipase de Candida antarctica - frao B, tem sido a
lipase mais amplamente utilizada

(Anderson, et al., 1998).

Com sua estrutura

completamente elucidada (Uppenberg, et al., 1994) e mecanismo do stio cataltico

bem conhecido (Faber, 1997; Kwon, et al., 2007) - Esquema 3, essa enzima tem
sido amplamente usada nas pesquisas e na indstria, principalmente por possuir
uma caracterstica chamada promiscuidade cataltica (Copley, 2003), que a
habilidade do stio ativo da enzima em catalisar diferentes transformaes qumicas.

30

Asp

His

Ser
O

Passo 1
O

H N

Asp

Passo 2

O
H

His

Ser

OH

Intermedirio acil-enzima

O H

N H

R
OH
R2

R3

R2

R
R3

Nuclefilo
E SQUEMA 3 - M ECANISMO

DO

S TIO C ATALTICO

DA

CAL-B.

Nos trabalhos de Uppenberg (Uppenberg, et al., 1994), e Cygler e Shrag

(Cygler, et al., 1997), foi mostrado que o stio ativo de uma lipase dividido em um
lado ligante-acila e outro lado ligante-lcool, o lado lcool sendo substratoespecfico, e o lado acila descrito como sendo relativamente no-especfico. Um
nmero

considervel

de

trabalhos

vem

sendo

publicado

sobre

estereoespecificidade do lado lcool do stio ativo das lipases. Como um exemplo, a

CAL-B altamente especfica para alcois secundrios, devido cavidade oxinion,
que estabiliza o intermedirio tetradrico lcool-acil-enzima (Uppenberg, et al.,
1995). As lipases, no geral, so capazes de hidrolisar triglicerdeos em uma interface
leo-gua, onde sua atividade drasticamente aumentada. A CAL-B, apesar de no
ser to eficiente como as outras lipases na hidrlise de triglicerdeos, de particular
interesse porque demonstra alta estereoespecificidade em substratos quirais durante
a hidrlise ou a sntese orgnica.

31

F IGURA 2 - E STRUTURA

TRIDIMENSIONAL DA

CAL-B ( WWW . NOVOZYMES . COM )

Neste trabalho, a CAL-B utilizada foi a NOVOZYM-435, que a lipase de

Candida antarctica imobilizada em matriz de poliacrilato, que confere uma maior
termoestabilidade enzima. As propriedades da NOVOZYM-435 esto resumidas
na Tabela 1.

T ABELA 1 - E SPECIFICAES

TCNIC AS DA

CAL-B NOVOZYM-435

Densidade

430 kg/m3

Dimetro das partculas

0,3-0,9 mm

Quantidade de gua

1-2% m/m

Peso Molecular

33 kDa

pH timo

7,0

Estabilidade ao pH

7,0 10,0

Temperatura tima

~70C

Atividade declaradaa

10000 PLU/g

WWW . NOVOZYMES . COM

A atividade dada pela sntese de laureato de propila (PLU=Propyl Laurate Units). 1 PLU
corresponde formao de 1 mol de ster por minuto.

32

Muitos trabalhos vm sendo publicados abordando a sntese de polisteres

de glicis e dicidos e seus derivados via catlise enzimtica utilizando lipases. No
entanto, at o presente momento no h registros de polimerizaes de diis
secundrios via catlise enzimtica propriamente dita. Inclusive, quando se realiza a
polimerizao enzimtica de poliis como os alditis (Hu, et al., 2006), que possuem
em sua estrutura tanto hidroxilas primrias quanto secundrias, a enzima realiza a
polimerizao atravs das hidroxilas primrias e, como em se tratando de hidroxilas
secundrias, at ento s era conhecida a seletividade da CAL-B por configuraes
(R) , somente as hidroxilas (R) secundrias reagiram, aumentando a massa molar do
polmero atravs de ramificaes na cadeia, em concordncia com os estudos de
Hult e colaboradores (Rotticci, et al., 1998).
Estudos recentes realizados por Palmans e colaboradores (Kanca, et al.,
2008; van As, et al., 2007), mostram a polimerizao de misturas racmicas de
monmeros contendo hidroxilas secundrias atravs de Catlise Acoplada Iterativa
(Iterative Tandem Catalysis ITC), mais especificamente resoluo cintica
dinmica, que a converso qumica na qual dois ou mais catalisadores trabalham
juntos para obter a reao qumica desejada. A resoluo cintica dinmica tem sido
amplamente utilizada para obteno de compostos enantiomericamente puros.
Nesses trabalhos de polimerizao, os autores utilizaram simultaneamente, CAL-B e
um catalisador de rutnio. Assim, a enzima desempenhava o papel de esterificar os
alcois com configurao (R), enquanto o catalisador basicamente convertia as
hidroxilas (S) em (R), originando uma reao em cascata, obtendo polmeros com
massas molares de 15 kDa.
Nesse trabalho, reportamos a utilizao de isosorbdeo [(1R,4R,5R, 8S)-2,6dioxabiciclo[3.3.0]octan-4,8-diol], um diol com hidroxilas nas configuraes (R) e (S)

33

na mesma molcula, com cidos dicarboxlicos e seus derivados, via catlise

enzimtica propriamente dita, utilizando como catalisador apenas a lipase de
Candida Antarctica, frao B (CAL-B), para a obteno de polisteres.

34

2 OBJETIVOS

Tendo em vista as recentes polticas de incentivo explorao da biomassa

para obteno de materiais ambientalmente corretos, visando reduo do uso de
compostos derivados do petrleo, e considerando ampla disponibilidade e as
potencialidades qumicas e econmicas do isosorbdeo descritas anteriormente,
aliadas s mltiplas vantagens que a catlise enzimtica pode proporcionar na
obteno de polmeros biodegradveis e biocompatveis, o objetivo principal desse
trabalho foi desenvolver metodologias de preparo de polisteres de isosorbdeo via
catlise enzimtica.
Dentro deste escopo, tendo por finalidade a obteno de materiais com altos
valores de massas molares, exploramos diferentes parmetros como: tcnicas de
policondensao, solventes, tempo de reao, grupo de sada, solubilidade e
diluio dos sistemas e tipos de monmeros, para a produo de polmeros com
diferentes caractersticas.
A grande importncia do trabalho, e o grande desafio proposto, nesse caso,
consistem no fato de que, at o presente momento, no existem registros de xito
em polimerizaes de diis secundrios impedidos estericamente, como o caso do
isosorbdeo, atravs de catlise enzimtica, o que possibilitaria uma infinidade de
aplicaes dos polmeros, principalmente porque os materiais obtidos so livres de
quaisquer

resduos

convencionais.

de

metais

pesados,

provenientes

dos

catalisadores

35

3 MATERIAIS E MTODOS
3.1 MATERIAIS:

Cicloexano, benzeno, tolueno, n-heptano, MEK (Merck), acetona, n-hexano,

clorofrmio, metanol (Synth e Vetec), acetato de etila (Synth), foram secos e
destilados previamente. O ter difenlico (Aldrich) foi previamente destilado.
Pentxido de fsforo anidro (Sigma-Aldrich e Vetec), sulfato de magnsio
anidro (J. T. Baker), cloreto de clcio anidro (Synth e Casa Americana) e bicarbonato
de sdio (Synth), foram utilizados para secar e purificar os solventes e monmeros.
O acetato de vinila (Aldrich), acetato cprico (Malinckrodt), acetato mercrico
(Merck) e acetato de sdio (Synth) foram utilizados na sntese dos monmeros
divinlicos sem purificao prvia.
Os cidos succnico, adpico, glutrico, subrico, sebcico (Aldrich) e
dodecanodiico (Merck), foram utilizados conforme recebido, nas snteses dos seus
respectivos disteres. Nas polimerizaes onde se utilizou o cido propriamente dito,
este foi purificado por recristalizao conforme descrito abaixo.
O isosorbdeo (Cerestar e Aldrich) foi previamente recristalizado em acetato
de etila e seco antes de ser utilizado.
A enzima CAL-B (Novozym-435) foi gentilmente cedida pela Novozymes do
Brasil, e utilizada conforme recebido.
As peneiras moleculares de 3 e 4 (Aldrich) foram previamente ativadas em
mufla por 6 horas a 300C.
Na sntese e purificao dos monmeros, a pureza dos compostos foi
determinada por CG e CG-MS, no Laboratrio de Compostos de Selnio e Telrio,

36

no IQ-USP. As anlises por cromatografia a gs (CG) foram efetuadas nos

cromatgrafos SHIMADZU GC-2010, equipado com um detector de ionizao de
chama, e os espectros de massa de baixa resoluo foram obtidos em um
instrumento Shimadzu CG-MS-17A/QP5050A. Os gases de arraste foram nitrognio
para CG, e hlio para CG-MS e a coluna empregada foi de slica fundida revestida
com goma de poli SPB-35 (35% difenil / 65% dimetilsilicone) . A rampa de
aquecimento foi: temperatura inicial 100C, gradiente de 10C/min, temperatura final:
250C.

3.2 MTODOS:

3.2.1 -

PREPARAO E PURIFICAO DE REAGENTES , SOLVENTES E

MONMEROS .

3.2.1.1 - Purificao do acetato de etila.

O acetato de etila foi seco em CaCl2, refluxado, duplamente destilado de
P2O5 e guardado sob peneira molecular de 3 ativada.

3.2.1.2- Purificao do clorofrmio.

O Clorofrmio (Synth) utilizado para as anlises de SEC foi tratado com
NaHCO3, seco com CaCl2 anidro e filtrado em membrana de PTFE modificado de
0,45 m de poro.

37

3.2.1.3- Purificao do isosorbdeo (IS).

O isosorbdeo foi purificado por recristalizao em acetato de etila
previamente tratado, seco sob vcuo em dessecador com pentxido de fsforo por
72h (at massa constante). O rendimento da recristalizao foi, em mdia, 85%. A
verificao da pureza do material obtido foi feita atravs de cromatografia gasosa
(pureza >99,8%).
Antes de ser utilizado nas polimerizaes, o isosorbdeo recristalizado foi,
ainda, seco sob vcuo por 48h, em dessecador com pentxido de fsforo at peso
constante.

3.2.1.5- Purificao do cido adpico.

O cido adpico foi recristalizado em soluo de etanol: gua 2:1 e seco em
dessecador sob vcuo por 24 h.

3.2.1.6- Sntese dos steres dos cidos dicarboxlicos.

Os steres dos cidos dicarboxlicos foram sintetizados de acordo com
Klostergaard (Klostergaard, 1958) (dados na Tabela 2).
A uma mistura de 70 mmol do dicido de interesse em 700 mmol do lcool
anidro, adicionou-se cido sulfrico at solubilizao do cido, e 50 mL de hexano,
refuxou-se por 30 minutos. Ao fim da reao, a mistura foi lavada com soluo
saturada NaHCO3. Aps a separao de fases, lavou-se a fase aquosa com hexano
(3X30 mL). As fases orgnicas combinadas foram secas com Na2SO4 e a mistura foi
concentrada em rotoevaporador. Os produtos foram purificados por destilao a
vcuo, e a pureza foi determinada por cromatografia gasosa (em todos os casos,
maior que 99,5%).

38

T ABELA 2 - CIDOS

E LCOOIS UTILIZADOS NA SNTESE DO S DISTERES .

Rendimento aps
cido

lcool

purificao

Succnico

Etanol

62%

Succnico

Metanol

55%

Glutrico

Etanol

63%

Adpico

Metanol

65%

Adpico

Etanol

78%

Adpico

n-Propanol

56%

Adpico

n-Butanol

51%

Subrico

Etanol

72%

Sebcico

Etanol

70%

Dodecanodiico

Etanol

67%

3.2.1.7- Sntese do adipato de divinila e succinato de divinila.

Os steres divinlicos foram preparados atravs de uma adaptao do

procedimento descrito por Kikukawa e colaboradores. (Kikukawa, et al., 1972).
Em um balo de 125 mL, foram adicionados 68 mmol de cido adpico (ou
cido succnico), 330 mg de acetato mercrico, 20 mg de acetato cprico e 70 mL de
acetato de vinila. A mistura foi aquecida sob refluxo por 15 minutos. Adicionou-se
ento, gota a gota, 70L de cido sulfrico concentrado. A mistura foi deixada sob
refluxo por 16h. Adicionou-se cerca de 5 g de acetato de sdio e a soluo foi
filtrada. Lavou-se com soluo saturada de NaHCO3 at cessar a efervescncia.
Extraiu-se com 3 X 40 mL de hexano, as fases orgnicas foram combinadas,
lavadas com gua, secas com Na2SO4 e concentradas. O rendimento foi de
aproximadamente 40%. O produto foi purificado por destilao a vcuo (destilado
duas vezes).

39

3.2.2 - PURIFICAO DOS POLMEROS OBTIDOS .

Os materiais obtidos foram purificados por dissoluo e precipitao,

conforme descrito abaixo: (Uyama, et al., 1999)
Em um bquer, o material impuro foi dissolvido na menor quantidade possvel
de clorofrmio, e, em seguida, adicionado gota a gota em uma grande quantidade de
metanol (dez vezes o volume de clorofrmio utilizado), sob agitao vigorosa. O
polmero permanece ento aderido s paredes do bquer. O sobrenadante foi ento
eliminado e os materiais foram secos, primeiramente em dessecador sob vcuo por
1 h, e posteriormente em estufa sob vcuo a 45C por 48 h.

3.2.3 TESTE DE SOLUBILIDADE DOS POLMEROS OBTIDOS:

Com o objetivo de se determinar a solubilidade de uma amostra padro de

poli(adipato de isosorbila) com ~30000 Da, uma grande quantidade de polmero
foi adicionada a 2 mL de diferentes solventes de forma que o polmero formasse
uma soluo supersaturada com o solvente em questo, e a soluo foi mantida sob
agitao magntica por 48h. Decorrido este tempo, uma alquota de 1,00 mL foi
retirada e colocada em um bquer previamente pesado em balana analtica. O
solvente foi ento evaporado sob vcuo por 12 h, e o bquer foi novamente pesado.
A diferena entre as massas obtidas a solubilidade do material em 1 mL de
solvente.

40

3.2.4 - CARACTERIZAO DOS POLMEROS OBTIDOS .

3.2.4.1 - Cromatografia por excluso de tamanho (SEC):

As massas molares mdias e , bem como a razo / que o

ndice de polidispersividade (PD), foram determinados por cromatografia por
excluso de tamanho, realizadas em um cromatgrafo Shimadzu modelo Class-VP
10A, equipado com um detector de ndice de refrao RID-10A com a cela a 35C,
forno CTO-10A a 35C, loop de 20 L, bomba LC-10AD, com fluxo de 1 mL por
minuto. Foram utilizadas quatro colunas Waters tipo Styragel HR6 (WAT054468),
HR4 (WAT044225), HR3 (WAT044222), e HR1 (WAT04234). A fase mvel utilizada
foi clorofrmio. Os valores de massas molares foram reportados com relao a
padres de poliestireno (com = 820, 2460, 5120, 13200, 29300, 47500 e 216000),
que foram utilizados na construo de curvas de calibrao. A concentrao das
amostras (injetadas) foi de aproximadamente 20 mg mL-1.

3.2.4.2 Calorimetria exploratria diferencial (DSC):

Os ensaios de DSC foram realizados no Laboratrio do Centro NSF de

Biocatlise e Bioprocessamento de Macromolculas, na Polytechnic University, em
Nova York, em um calormetro TA Instruments DSC2920, calibrado com padro de
ndio.

A taxa de aquecimento foi de 10C/min, sob proteo de atmosfera de

nitrognio sob fluxo de 50mL/min, e a varredura foi feita de -70 a 200C.

41

Primeiramente, a amostra foi resfriada a -70C e ento aquecida a 10C/min at

200C, mantida a 200C por 3 minutos e, em seguida, resfriada a -70C a 10C/min.
Assim que a amostra foi resfriada, esta foi aquecida novamente at 200C. O
software TA Advantage Control foi usado para controlar as condies
experimentais e o software TA Universal Analysis para analisar os resultados.

3.2.4.3 Anlise termogravimtrica (TG):

As anlises termogravimtricas foram realizadas no Laboratrio do Centro

NSF de Biocatlise e Bioprocessamento de Macromolculas, na Polytechnic
University, em Nova York, no equipamento TA Instruments TGA2950. Cada amostra
(10 mg) foi aquecida de 40 a 750C, a uma taxa de aquecimento de 10C por minuto
sob proteo de atmosfera de nitrognio com fluxo de 50 mL/min. Os dados foram
analisados utilizando o software TA Universal Analysis.

3.2.4.4 Espectroscopia no Infravermelho:

Os ensaios de espectroscopia no infravermelho foram realizados no

equipamento FTIR Bomem MB 100 (faixa de operao de 350 4000 cm-1,
resoluo de 2 cm-1). As amostras foram analisadas em filmes preparados em
clorofrmio e secos em estufa a vcuo.

42

3.2.5.5 Difrao de Raios-X:

Os ensaios de difrao de raios-X de alto ngulo (WAXD) foram obtidos no

equipamento X-Ray Difratometer Miniflex da Rigaku. Os ensaios foram realizados
usando um feixe monocromtico () de raios X de 0,194 nm (FeK) ou 0,154 nm
(CuK), voltagem de 30 kV, corrente de 15 mA, intervalo de ngulo 2 tipicamente de
3 a 60 e leitura de 2 de 0,02 em 0,02. As amostras na forma de p sofreram
tratamento trmico prvio (recozimento; annealing) em estufa a vcuo por 48 h a
90C.

3.2.5.6 Ressonncia Magntica Nuclear de 1H e

13

C:

Para fins de determinao estrutural, as anlises de ressonncia magntica

nuclear (RMN) de 1H e

13

C foram realizadas em um equipamento Bruker DPX 300

(300 e 75 MHz, respectivamente). As amostras (20-60 mg e 20-150 mg para 1H e

13

C NMR, respectivamente) foram dissolvidas em CDCl3 (0,5-0,7 mL), que continha

tetrametilsilano (TMS) como referncia interna, e em alguns casos, os espectros

foram calibrados pelo deslocamento qumico do CDCl3, no caso do13C, ou CHCl3 no
caso do hidrognio. Os deslocamentos qumicos () so dados em ppm.

43

5 - CONCLUSES:

Atualmente, existe uma enorme demanda por polmeros derivados de fontes

renovveis, devido aos benefcios oferecidos pelo uso desses materiais, que
substituem com vantagens os polmeros derivados do petrleo, principalmente por
terem custos de produo semelhantes aos materiais provenientes de combustveis
fsseis. Esse trabalho representa um grande avano na rea, por possibilitar a
sntese via enzimtica de polmeros de isosorbdeo, um diol secundrio e
estericamente impedido, obtendo materiais com caractersticas muito interessantes,
de massas molares similares s obtidas via catlise qumica, sendo a catlise
enzimtica uma alternativa limpa de sntese de polmeros.
Esses materiais foram produzidos com sucesso em altos rendimentos,
utilizando lipase de Candida antarctica Frao B como catalisador, atravs de
diversas metodologias: policondensao em massa sob presso ambiente e sob
presso reduzida; policondensao em massa e em soluo utilizando monmeros
divinlicos e policondensao em soluo com destilao azeotrpica.
Ao contrrio do que previam todas as expectativas iniciais, a tcnica que se
mostrou mais eficiente de polimerizao enzimtica do isosorbdeo foi a
polimerizao em soluo com destilao azeotrpica fornecendo materiais com
massas molares maiores. Diz-se contrrio s expectativas, pelo fato de que, dentro
da varredura de condies realizadas, misturas de cicloexano e benzeno, onde os
polmeros so praticamente insolveis, mostraram-se mais eficientes do que
solventes onde a solubilidade dos polmeros maior. Ainda sero necessrios
outros estudos para elucidar o funcionamento desse sistema, onde os polmeros

44

continuam tendo suas massas molares aumentadas, mesmo quando o sistema

polmero:solvente passa a ser heterogneo. Dentro dessa investigao, alguns
avanos j foram feitos, como a determinao da importncia da diluio do sistema,
a solubilidade dos polmeros nos solventes em questo, e a concentrao de
benzeno ideal para a obteno de massas molares maiores. Com isso, alguns
pontos foram esclarecidos, mas ainda devemos aprofundar os conhecimentos nesse
assunto.
Embora tenham apresentado uma cintica de reao lenta, provou-se que
polimerizaes de diis secundrios, como o isosorbdeo, so possveis de serem
realizadas via catlise enzimtica, com resultados muito promissores. Todos os
resultados obtidos so inditos para polmeros derivados de isosorbdeo, abrindo,
assim, uma nova linha de pesquisas nessa rea, ampliando ainda mais a variedade
de potenciais aplicaes desse diol.

45

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