en cepas de
Candida albicans aisladas de pacientes con VIH
M en O Edwar Chuc Ucn, Dr. Florencio Rueda-Gordillo, M en C Sandra Elena Hernndez-Sols. - Departamento
de Investigacin en Microbiologa Oral y Biologa Molecular, Facultad de Odontologa, Universidad Autnoma de
Yucatn, Mxico.
Resumen
Abstract
Objetivo:
Establecer el comportamiento de cepas de Candida albicans aisladas de la mucosa bucal de pacientes con VIH ante diferentes extractos de Capraria biflora L.
Background:
The biologically active natural products contained
in plant tissues have been gaining strength as medicinal treatments. The infusion of the leaves ofCapraria biflora L has been used as a diuretic and
for different disorders found among dysentery and
gastroenteritis. This plant is found in tropical sites
in Yucatan, Mexico.
Antecedentes:
Los productos naturales biolgicamente activos
contenidos en los tejidos vegetales han tomado
auge como tratamientos medicinales. La infusin
de la hoja de la Capraria biflora L, se ha utilizado
como diurtico y para distintos trastornos como la
disentera y la gastroenteritis. Esta planta se encuentra en sitios tropicales como Yucatn, Mxico.
Methods:
The design was experimental, Methods. We performed the following processes: 1. Selected strains
of Candida albicans, 2. Collected plant material
(plants Capraria biflora L.), 3. Extracts were obtained from stems, leaves and roots, 4. The bioassay was performed on the effect of extracts of
Capraria biflora L. on strains of Candida albicans,
5. It was performed disk diffusion testing of the extracts, 6. And disk diffusion tests with fluconazole,
7. Based on the results of the disk diffusion testing
was carried out with the macrodilution method root
extract, following the method proposed by the CLSI,
formerly NCCLS 8. Suspension was prepared from
Material y Mtodo:
El diseo fue: experimental, transversal y prospectivo. Se realizaron los siguientes procesos: 1.
Se seleccionaron cepas de Candida albicans, 2.
Se coleccion el material vegetal (plantas de Capraria biflora L) 3. Se obtuvieron los extractos de
tallo, hojas y races, 4. Se realiz el bioensayo del
efecto de los extractos de Capraria biflora L sobre
las cepas de Candida albicans, 5. Se efectuaron
pruebas de difusin en disco de los extractos, 6.
Se realiz difusin en disco con Fluconazol, 7. Con
base en los resultados de las pruebas de difusin
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Resultados:
Existe la posibilidad de que la Capraria biflora L,
pueda tener metabolitos activos que tengan efecto
antifngico sobre Candida albicans.
Conclusions:
Only the root extract of Capraria biflora L. has inhibitory effects on strains of Candida albicans.
Conclusiones:
Solo el extracto de la raz de Capraria biflora L.
tiene efectos inhibitorios sobre cepas de Candida
albicans.
Introduccin
Con base en lo anterior, el objetivo del presente trabajo, fue determinar el efecto de los extractos obtenidos
de Capraria biflora L, sobre cepas de Candida albicans
aisladas de la mucosa oral de pacientes portadores
de VIH.
Material y mtodos
Tipo de diseo:
Experimental, transversal y prospectivo.
Las cepas se seleccionaron del cepario del Departamento de Investigacin en Microbiologa Oral de la
Facultad de Odontologa, de la Universidad Autnoma
de Yucatn, Mxico, encontrndose identificadas y en
congelacin a -80 C en medio nutritivo con 30% de
glicerol. Las cepas, haban sido identificadas hasta la
confirmacin de especie, por mtodos tradicionales.
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Se realiz el secado al vaco del EC de tallo, raz y hojas. Este producto final se llev al Departamento de
Investigacin en Microbiologa Oral de la Facultad de
Odontologa de la UADY para los bioensayos respectivos.
Las plantas de Capraria biflora L. (Fig. 1 y 2) fueron colectadas en la ciudad de Ticul, Yucatn. Se conservaron a temperatura ambiente y fueron transportadas a
la ciudad de Mrida, Yucatn, Mxico para su estudio.
Para el bioensayo del efecto de los extractos de Capraria biflora L sobre las cepas de Candida albicans, se
realiz segn el proceso descrito por el CLSI (Clinical
and Laboratory Standards Institute)(10). Como prueba
de control, se utiliz el antifngico Fluconazol.
Cada uno de los extractos fue disuelto en agua destilada estril, obteniendo una solucin al 8% (P/V) utilizada como solucin madre. A partir de esto se hicieron
alcuotas de 4.0, 2.0, 1.0, 0.5, 0.25 y 0.12%. De cada
uno de los extractos y concentraciones, se tomaron 10
l los cuales fueron inoculados sobre discos de papel
filtro y secados a temperatura de condiciones de esterilidad, obtenindose concentraciones finales en los
discos de 800, 400, 200, 100, 50, 25 y 12.5 g/ml.
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Para realizar la prueba de control, se obtuvo una concentracin final de 30 mg/ml de solucin madre de los
cuales se obtuvieron discos con las siguientes concentraciones finales 256, 128, 64, 32, 16, 8, 4 y 2 g/ml.
El procedimiento fue realizado de la misma manera
que los extractos.
Recoleccin de la informacin
Cada una de las cepas fueron ajustadas a una turbidez equivalente al tubo 0.5 del nefelmetro de Mac
Farland (concentracin aproximada de 1x 108 UFC/
ml) en solucin salina fisiolgica estril (0.85%). 10 l
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Resultados
El estudio se realiz con 5 cepas obtenidas del cepario del Departamento de Investigacin en Microbiologa Oral de la Facultad de Odontologa de la UADY, las
cuales fueron seleccionadas para este estudio, debido a que en investigaciones previas estas haban sido
identificadas con niveles intermedio y resistente al
Fluconazol con el kit Fungitest, que fue el antifngico
utilizado como prueba estndar de comparacin.
Las cepas provinieron de pacientes portadores del
Virus de la Inmunodeficiencia Humana originarios del
estado de Yucatn, Mxico y fueron identificadas con
las siguientes claves y nivel de resistencia: Cepas 49,
50, 51 y 83 con nivel Intermedio y 131A con nivel alto
de resistencia (Tabla 1).
Concentraciones (g/ml)
Cepa
64
32
16
49
256 128
M
NI
NI
NI
NI
NI
NI
50
NI
NI
NI
NI
NI
NI
NI
51
NI
NI
NI
NI
NI
NI
83
131A
NI
NI
NI
NI
NI
NI
Cepas
Nivel
49
Intermedio
50
Intermedio
51
Intermedio
83
Intermedio
131A
Resistente
Al realizar las pruebas con los diferentes tipos de extractos, no se encontr inhibicin por el mtodo de
difusin en disco de los extractos obtenidos de las hojas y tallo, las mediciones obtenidas fueron de 6 mm
para todas las concentraciones del extracto probadas,
coincidentes a los valores obtenidos por la prueba
donde se prob el antifngico de comparacin que
fue el Fluconazol.
Con respecto al extracto obtenido de la raz, se encontr que este si caus efecto antifngico sobre las cepas de Candida albicans analizadas, encontrndose
este efecto a partir de una concentracin de 500 g/
ml de extracto crudo (P/V) para las cepas 50, 51,
83 y 131A, y a partir de 1000 g/ml para la cepa
49.
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Concentraciones (g/ml)
Cepa
256
128
64
32
16
49
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
50
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
51
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
83
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
131A
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
6 mm
Fuente: Directa
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Discusin
Concentraciones (g/ml)
Cepa
4000
2000
1000
500
256-2
49
13mm
11mm
10mm
6mm
6mm
50
14mm
12mm
11mm
11mm
6mm
51
20mm
18mm
16mm
12mm
6mm
83
20mm
17mm
16mm
12mm
6mm
131A
20mm
15mm
15mm
13mm
6mm
Se pone en evidencia la posibilidad de que la Capraria biflora L, pueda tener metabolitos activos que tengan efecto antifngico sobre Candida albicans. Los
principios activos con propiedades antimicrobianas
se encuentran en la raz de la planta. Estos resultados, concuerdan con lo publicado por Flores [9], quien
encontr efectos de la raz de C. biflora, sobre otros
microorganismos como S. aureus, B. subtilis y C. albicans.
Otros estudios, han reportado actividades farmacuticas de Capraria biflora L, tal es el caso de Prez
(1984) citado por Flores (9), donde se reporta actividad hipoglucemiante del extracto orgnico crudo de
las hojas. Asimismo, este mismo autor, menciona que
han sido reportadas actividades antibacterianas de la
planta sobre microorganismos Gram positivos y negativos y tambin contra micobacterias.
Al comparar los resultados de las cepas con las concentraciones propuestas por el CLSI en el patrn de
Fluconazol, no se encontraron diferencias estadsticamente significativas en los halos de inhibicin, al realizarlas por la prueba T de Student, con una p>0.05,
aunque si pudo observarse que a partir de concentraciones mayores, los halos varan considerablemente.
Las concentraciones del extracto no pueden compararse con las de Fluconazol, ya que estas fueron extractos crudos, a diferencia del antifngico donde el
patrn es una sal pura.
Por ltimo, con el fin de establecer de una manera
cuantitativa el efecto del extracto de la raz sobre las
cepas de Candida albicans, se llev a cabo el procedimiento por el mtodo de macrodilucin, encontrndose inhibicin de las cepas 51 y 83 a partir de 500 g/
ml. En lo referente a las cepas 49, 50 y 131A, no se
encontr inhibicin del crecimiento de la levadura, hecho que pone nuevamente en evidencia la diferencia
en el comportamiento de los microorganismos a las
sustancias qumicas (Tabla 5).
Concentraciones (g/ml)
Cepa
256 128
64
32
16
49
NI
NI
NI
NI
NI
NI
50
NI
NI
NI
NI
NI
NI
NI
51
NI
NI
NI
NI
NI
NI
83
131A
NI
NI
NI
NI
NI
NI
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Conclusiones
En base a los hallazgos anteriores, se puede llegar a
las siguientes conclusiones del estudio:
1.
2. Las concentraciones del extracto de raz que inhibieron a las cepas de Candida albicans in vitro, son
mayores a las recomendadas para el Fluconazol.
5. Este estudio, pone de manifiesto que Capraria biflora L, puede ser una planta donde puedan obtenerse metabolitos para el control de Candida albicans y
sobre todo porque es producida en la regin y forma
parte de la medicina tradicional de la Pennsula de Yucatn, Mxico, para el control de infecciones orales.
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Agradecimiento
Al Departamento de Qumica Orgnica del Centro de
Investigacin de Yucatn, A. C.
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