Chromatographie sur colonne dun sirop de menthe

La technique de chromatographie sur colonne repose sur le mme principe que la chromatographie sur couche
mince : les espces chimiques sparer sont plus ou moins entranes par un luant sur une phase fixe :
- La phase fixe est un solide, le plus souvent de la silice ou de lalumine remplissant une colonne ;
- Lchantillon est dpos en haut de la colonne. La sparation des espces chimiques est obtenue par lcoulement
continu dune phase mobile (lluant) travers la colonne ;
La sparation est base sur une diffrence de vitesses dentranement des espces chimiques vers le bas de la
colonne. Lobjectif de ce TP est donc de sparer les constituants colors dun
sirop de menthe
(colorants alimentaires : le E102 et le E131) puis de montrer lintrt de la chromatographie sur colonne vis vis de
la chromatographie sur couche mince.
I.

Sparation des colorants alimentaires dun sirop de menthe

Prparation de la colonne (phase fixe)

Lopration de remplissage de la colonne conditionne lefficacit de la sparation. Il ne faut pas quil y ait de bulles
ou de zone sans phase stationnaire car on aurait alors des chemins prfrentiels nuisant une bonne sparation des
composs. Pendant la phase dlution avec le solvant on veillera galement ne pas asscher la partie suprieure de
la phase fixe.

Fixer verticalement la colonne laide dune pince ;

Dposer un petit morceau de coton dans le bas de la colonne ;

Peser environ 10 g de silice ;

Introduire la silice dans la colonne ;

Tapoter la colonne afin dobtenir une surface plane de silice ;

Placer un bcher sous la colonne ;

Introduire doucement de leau distille ( laide dune pipette plastique par

coulement de long de la paroi de la colonne). Ajouter une quantit deau
suffisante pour tre environ 2 cm au dessus de la surface plane de la silice.

silice

coton

Dpt de lchantillon sparer

Dposer trs doucement laide dune pipette, sans toucher les parois de la colonne, lchantillon de sirop
de menthe : attention ne pas dformer la surface de la phase stationnaire pendant cette opration ;
Lorsque le sirop de menthe a pntr la surface de la phase stationnaire, luer avec leau en remplissant la
colonne ;
Lorsque le premier colorant arrive en bas de la colonne le rcuprer dans une premire cuve ;

Eluer ensuite avec un autre luant : un mlange dthanol + eau sale ;

Lorsque le second colorant parvient en bas de la colonne, le rcuprer dans une seconde cuve.

Quel est lintrt de ce type de chromatographie par rapport celle sur couche mince ?
II.

Analyse spectrophotomtrique des colorants

A laide dun spectrophotomtre, on souhaite tracer les spectres dabsorption A=f() du sirop de menthe et des 2
colorants issus de la sparation prcdente.
Raliser ce spectre en tenant comptes des remarques suivantes :
Faire varier la longueur donde entre 400 et 720 nm

Une dilution des solutions sera ventuellement ncessaire si la valeur maximale mesurable par le
spectrophotomtre est atteinte (balayer rapidement la gamme de longueur donde puis observer la valeur
maximale de labsorbance)
Le rglage du zro se fera sur de leau distille. Il est indispensable de le faire pour toutes les longueurs
dondes.
Tracer laide de synchronie les 3 courbes sur une mme fentre (fentre 1). On crera pour cela les variables
lambda , Av , Aj et Ab puis on rentrera au clavier les valeurs mesures.

 Interprter les courbes obtenues. Sont-elles conformes ce que lon pouvait prvoir ? Interprter chacune delle.
Chromatographie sur colonne - Matriel
Elves :
Un support avec noix

Une pince en bois

Une tulipe sans robinet

Une petite coupelle en plastique

Spatule

Spectrophotomtre

3 cuves spectro

3 bchers

3 pipettes plastiques

Au bureau :
Coton

Silice broye laide du mixer (tamiser ensuite la poudre obtenue)

Sirop de menthe Sport

Un bcher

Ethanol 95