Universidad de Chile

Facultad de Ciencias
Curso de Fisiologa Vegetal

Informe Seminario:

Biocombustibles de
micro y macro algas

Nombres: Omar Barra Catricura

Ariel Pinto Marchant

Introduccin

La sociedad en el siglo 21 parece estar experimentando una transicin sin precedentes

con respecto a su fuente principal de materiales y energa. Petrleo, el combustible que
ha estado conduciendo la sociedad moderna desde hace mas de un siglo, est mostrando
signos de escasez. La demanda de petrleo est aumentando, pero los descubrimientos
de depsitos frescos estn disminuyendo, siendo el petrleo esencialmente no renovable..
Es ampliamente aceptado que la combustin de petrleo est contribuyendo fuertemente
al aumento observado de dixido de carbono en la atmsfera, con efectos del
calentamiento global. La convergencia de la presin del mercado y la preocupacin por el
medio ambiente est impulsando una huida hacia adelante a los nuevos combustibles,
como los tratados en este informe Pero son los biocombustibles realmente nuevo?
Durante milenios, las sociedades humanas han dependido de materiales biolgicos para
la energa y los materiales. El material vegetal fue quemado por el calor, que se utiliza
para materiales de construccin y de la confeccin; traccin animal fue aprovechada para
el transporte, entre otros ejemplos. Por otro lado, no toda la tecnologa es nueva; por
ejemplo, los seres humanos han estado haciendo a propsito derivados del etanol y
cidos grasos durante milenios. Pero las herramientas de biologa molecular actuales
estn abriendo nuevas oportunidades para la vieja tecnologa,
Una de las cuestiones importantes como entramos esta etapa de transicin, es decir,
Qu constituye un buen combustible para motor? La respuesta depende del motor,
pero hay ciertas reglas bsicas que abarcan muchos tipos de motores, tre ellas se
pueden sealar que sea : 1) un lquido, 2) altamente combustible, sin ser explosivo, 3)
algo con una alta energa a masa, 4) estable en el almacenamiento a largo plazo, 5)
transportable por tubera y 6) de bajo costo. Una gama de molculas de satisfacer la
mayor parte de esos criterios. Ante este panorama se puede esperar que aparezcan mas
alternativas de combustibles , en este informe se detallarn las estrategias utilizadas en
algas, debido a que su produccion de lipidos se puede utilizar para producir diveros
compuestos que pueden contrubuir a crear combustible de satisfagan la necesidad
energia a nivel mundial.

Ingenieria gentetica aplicada al uso de algas

Se han estudiado muchas vas potenciales de la ingeniera gentica que puedan llevarse
a cabo con el fin de mejorar las algas como plataforma de biocombustibles para la
produccin de biohidrgeno, alcoholes derivados del almidn, sustitutos de combustible
diesel, y / o alcanos. Se han logrado Avances significativos en la genmica, por ejemplo
en el el ambito de las microalgas, se han establecido bases de datos, tanto de genomas
nucleares, como de mitocondriales y cloroplasto de varias microalgas que se han
secuenciado, y varios ms estn siendo secuenciados. Histricamente, el alga verde
Chlamydomonas reinhardtii ha sido el foco de la mayora de investigaciones ficolgico
molecular y gentica., por lo que muchas de las herramientas para la expresin de
transgenes y delecin especficamente para esta especie.No obstante, en la actualidad
tambin se estn desarrollando tecnicas pra diatomeas y otras algas de mayor inters
comercial. A continuacin se explican dos aspectos en los que se ha avanzado en la
aplicacin de ingeniera genetica en algas: las secuencias de genomas y los mtodos
para la transformacin y expresin.
Genomas de microalgas.
La disponibilidad de secuencias del genoma de microalgas de inters para aplicaciones
acadmicas o industriales facilita en gran manera su manipulacin gentica, juento exite
una tecnologa de secuenciacin a gran escala, la cual representa una revolucin en la
investigacin de microalga. Adems, hay varios proyectos de secuenciacin terminados y
en curso, junto con esfuerzos para secuenciar plastidios y mitocondrial genomas, as
como transcriptomas dinmicas de muchas microalgas diferente.
Mtodos para la transformacin y expresin.
Entre los logros obtenidos en la transformacin gentica, se ha reportado para las algas
verdes (Chlorophyta), rojas (Rhodophyta) y marrones (Phaeophyta) , asi como
diatomeas, euglnidos y dinoflagelados. En la mayoria de los casos, la transformacin
result en la expresin estable de transgenes, ya fuera en el ncleo o plstido, sin
embargo, en algunos casos slo se observ una expresin transitoria. La eficiencia de
cada transformacin parece ser muy dependiente de la especies en cuestin,por lo que,
el mtodo de transformacin tiene que ser cuidadosamente seleccionado para cada
alga. Los mtodos de transformacin que se han utilizado para transferir ADN en las

clulas de microalgas son muy variados, poe ejemplo, se realiza agitacin en presencia
de perlas de vidrio o filamentos de carburo de silicio , tambien electroporacion,
biobalstica y transferencia de genes mediada por Agrobacterium tumefaciens.
El aislamiento de los transformantes genticos se facilita por el uso de marcadores de
seleccin, que pueden ser resistencia a los antibiticos (tales como bleomicina,
estreptomicina, cloranfenicol, entre otros), y / o marcadores fluorescentes / bioqumicos .
Pese a esto, el hecho de que muchos microalgas sean resistentes a una amplia gama de
antibiticos, el nmero real de antibiticos funcionales son limitados, por lo que se
intenta utilizar antibiticos ms eficaces en medios que contienen sal y que sean utiles a
la hora de tratar algas marinas , adems de los antibioticos hay otros marcadores como la
luciferasa , -glucuronidasa, -galactosidasa y la protena verde fluorescente (GFP).
Despus de seleccionar a las algas transformantes, es necesaria la expresin del
transgen y localizacin de protenas en el cloroplasto para el correcto funcionamiento de
muchos genes metablicos de inters para la produccin de biocombustibles.Esto se
puede lograr de diferente formas dependiedo del organismo, por ejemplo en C.reinhardtii,
se puede realizar la transformacin del cloroplasto por recombinacin homloga,
mientras que en las diatomeas se han utilizado secuencias de direccin al plstido con el
fin de trasladar protenas al cloroplasto. La transformacin nuclear de microalgas
regularmente resulta en la integracin aleatoria de genes. Aunque esto puede ser
adecuado para la expresin del transgen, cuando se desea eliminar genes diana
especficos, es imposibilitado por estas insersiones de genes . Entonces se ha recurrido a
la recombinacin pero con baja eficiencia, la otra opcin para la inactivacin de genes es
el uso de silenciamiento por ARN, ma sescofcamente, el desarrollo de tcnicas microARN artificiales (armiRNA) de alto rendimiento para C. reinhardtii que es ms especfica y
estable que el ARN de interferencia tradicional (RNAi).
Para la produccion eficiente de biocombustibles se ha buscado estudiar y modificar las
vias de sintesis de lipidos, pus a travs de la compresion de stas se podr contribuir a
la produccin final de sustitutos de combustible diesel. La biosntesis y el catabolismo de
los lpidos, as como las vas que modifican la longitud y saturacin de los cidos grasos,
no se han investigado a fondo en las algas . Sin embargo, como muchos de los genes
implicados en el metabolismo de los lpidos en las plantas terrestres tienen homlogos en
los genomas secuenciados de microalgas, es posible que algunas estrategias que se han

utilizado para modificar el contenido de lpidos en plantas superiores son tambin eficaces
con microalgas.
Biosntesis de lpidos
Las investigaciones que han realizado en plantas han consistido, entre otras cosas, en
mutar genes , en el caso de los lipidos, se han mutado muchos de los genes implicados
en la sntesis de lpidos, tanto knockout como la sobreexpresin, con fin de esclarecer su
importancia en la acumulacin de lpidos y posteriormente establecer estrategias para
aumentar el contenido lipdico de las semillas oleaginosas de plantas superiores, como
Arabidopsis thaliana , soja (Glycine max), y la colza (Brassica napus). Las estrategias de
sobreexpresin han dado como resultado el aumento de la produccin de triacilgliceroles
en las semillas y en otros tejidos de la planta, se han hecho algunos esfuerzos para
aumentar la expresin de las enzimas que intervienen en las vas de la sntesis de cidos
grasos, un ejemplo concreto de una intervencion en la sntesis de cidos grasos es la
conversin de acetil-coenzima A (CoA) a malonil-CoA, catalizada por la acetil-CoA
carboxilasa (ACCasa). Sin embargo,los resultados no hansido los esprados, tiniendo un
efecto pequeo o nulo en la produccion total de cidos grasos, Aun as el efecto de la
sobreexpresin ACCasa en tubrculos de patata, un tejido muy almidn rico y pobre en
lpidos, result en un aumento de 5 veces en el contenido de triacilglicerol,lo que indica
que puede ser que los niveles ACCasa son un paso limitante en la biosntesis de lpidos,
principalmente en las clulas que normalmente no se almacenan grandes cantidades de
lpidos.
Si bien el aumento de la expresin de genes implicados en la sntesis de cidos grasos ha
tenido pequeos xitos, en relacin con el aumento de la cantidad total de aceites de
semillas, algunos resultados interesantes se han logrado a travs de la sobreexpresin de
los genes implicados la via de triacilglicerol (TAG). Uno de los intentos de mayor xito
para aumentar la cantidad de lpido en las semillas de B. napus por sobreexpresin de
glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (G3PDH), que porviene de una levadura citoslica, la
cual cataliza la formacin de glicerol-3-fosfato, que es necesaria para la formacin de
TAG. Este resultado interesante sugiere que los genes que participan en el montaje TAG
son de importancia para la produccin total de aceite de semillas.

Otro enfoque posible para incrementar el contenido de lpidos celulares est bloqueando
las rutas metablicas que conducen a la acumulacin de compuestos de almacenamiento
ricas en energa, tales como almidn.
Adems de lo que se ha logrado con las plantas ms altas, modificaciones exitosas
tambin se han logrado con bacterias y levaduras para aumentar y / o modificar su
contenido en lpidos. Debido a la facilidad de la ingeniera gentica con Escherichia coli y
Saccharomyces cerevisiae, estas modificaciones incluyen modulaciones bastante
completa de toda las vas metablicas, con la sobreexpresin simultnea o supresin de
varias enzimas clave. Tales modificaciones son, por supuesto, mucho ms difcil de lograr
con microalgas, pero deben ser alcanzables con los organismos con los protocolos
establecidos para la transformacin gentica y marcadores seleccionables disponibles.
Catabolismo de lpidos.
Junto con intervenir en la sintesis de lipidos, para aumntar su acumulacion se disminuye
el catabolismo de lpidos, es este caso tambien se depende de los que se conoce de
estudios de plantas superiores y levaduras. Los genes implicados en la activacin de
ambos TAG y cidos grasos libres, as como genes que participan directamente en oxidacin de los cidos grasos, se han inactivado, a veces resultando en una mayor
contenido de lpidos celular. La inactivacin de genes tendra que ser lograda ya sea a
travs de mutagnesis aleatoria o mediante el uso de silenciamiento de ARN Debido a
que las clulas se basan en la -oxidacin de los cidos grasos para la energa celular
bajo ciertas condiciones fisiolgicas, podra tener efectos perjudiciales sobre el
crecimiento celular y la proliferacin. Por ejemplo, la inactivacin de la peroxisomal de
cadena larga de acil-CoA sintetasa (LACS) isoenzimas, LACS6 y LACS7, en A. thaliana
inhibe la degradacin de lpidos de semillas, lo que aument el contenido de aceite. Sin
embargo, el desarrollo de plntulas adecuada tambin se inhibi sin la adicin de una
fuente de carbono externa .Otro problema potencial con las estrategias que implican la
inhibicin del catabolismo de los lpidos es que existen enzimas con funciones
superpuestas para muchos de los pasos de -oxidacin, por lo que es difcil de eliminar
por completo estas funciones.

Modificacin de las caractersticas de lpidos.

Adems de microalgas de ingeniera para el aumento de la produccin de los lpidos,
tambin es razonable intentar aumentar la calidad de los lpidos, con respectoi al largo d
ela cadena de los cidos grasos, esto y el grado de insaturacin de los cidos grasos en
cada especies de microalgas pueden afectar a las propiedades de flujo y la estabilidad
oxidativa fras de un combustible.Tpicamente, la mayora de los cidos grasos de
microalgas tienen una longitud de cadena entre 14 y 20 C, los cidos grasos ideales para
la produccin de diesel deben ser de 12 y 14 C. Las longitudes de cadena de cidos
grasos son determinados por tioesterasas-acilo ACP, que liberan la cadena del cido
graso de la sintasa de cidos grasos. Hay varias acil-ACP tioesterasas de una variedad de
organismos que son especficos para ciertas longitudes de cadena de cidos grasos, y la
sobreexpresin transgnica de tioesterasas se pueden utilizar para cambiar de cido
graso de longitud de cadena. Existen tioesterasas especificass que son candidatos
interesantes para la sobreexpresin transgnica en microalgas ya que sus actividades
podran mejorar la idoneidad de diesel materia prima microalga derivados.
Metabolismo carbohidratos
Los hidratos de carbono pueden ser usados tambien una variedad de biocombustibles,
incluyendo el etanol, butanol, y / o metano. A continuacion mse nombarn algunjas
etrategias para aprovechar el los carbohidratos.
Estrategias genticas para aumentar el almacenamiento de glucano.
La etapa limitante de la velocidad de sntesis de almidn es la ADP-glucosa pirofosforilasa
(AGPasa) la reaccin catalizada de la glucosa 1-fosfato con ATP, lo que resulta en ADPglucosa y pirofosfato . AGPasa es tpicamente un heterotetrmero compuesto por grandes
subunidades catalticas de regulacin y pequeas y se alostricamente activa por 3fosfoglicrico cido (3-PGA), que une la sntesis de almidn a la fotosntesis.Los
polisacridos se encuentran a menudo rodea la pirenoide en microalgas, probablemente
porque es una fuente de 3-PGA.
La disminucin de la degradacin del almidn en microalgas.
Los mecanismos precisos de almidn de catabolismo en microalgas verdes son en gran
parte desconocidos, pero son ms ampliamente entendidas para A. thaliana El almidn

puede ser degradado por mecanismos hidrolticas y / o fosforoltica,la -amilasa (AMY3)

se cree que participar en la degradacin del almidn, y una protena homloga se
encuentra en C. reinhardtii . La degradacin del almidn plastidial es estimulada por la
fosforilacin de residuos de glucosa en la raz de la amilopectina por dikinasa-glucano de
agua (DAS). En A. thaliana, la interrupcin de la DAS se traduce en niveles de almidn
que son cuatro a seis veces superiores a los de las hojas de tipo silvestre , por lo que
genes como estos son excelentes objetivos knockout de genes para un fenotipo de
acumulacin de almidn en microalgas.
Estrategias de secrecin y azcares solubles.
Muchos microalgas tienen la capacidad nativa para secretar productos de carbono fijo. El
manitol, arabinosa, cido glutmico, prolina, glicerol, lisina, cido asprtico, y diversos
polisacridos se han notificado a ser secretada . Ankistrodesmus densus segrega
polisacridos cuando se expone a la luz, incluso durante la fase estacionaria. Aunque
poco se sabe actualmente sobre estos eventos de secrecin, una mayor comprensin de
su regulacin y mecanismo potencialmente podra ser aprovechada para la produccin de
biocombustibles continua desde sacridos secretadas.
Usos
Entre los variados usos de las algas esta la produccin de biocombustibles que se genera
a partir de grandes cantidades de biomasa efectiva producida por estas, los que se
separan en distintas clasificaciones segn el tip de conversin al cual hayan sido
sometidas. Los tipos de tecnologas de conversion se dividen en conversin bioqumica,
quimica o termoquimica, donde las diferencias ms grandes radican en la metodologa y
el tipo de alga que se puede ocupar.
Cada forma de conversin puede generar distintos tipos de biocombustibles, entre los
resultantes por la conversin bioquimica se puede obterner la obtencin de biogas, etanol
e hidrogeno. Por parte de la conversin qumica que es una de las que ms se ha
explotado es la produccin de biodiesel y por ltimo la conversin termoqumica donde se
obtiene bio-oil y gas de sintesis

GCBHE
aoitn
snvodae
dvr-ngsm
eioan
srBeiglT
ioslema
nueo
tQmloub
eucmt
sice
imn
si
cd
a

o
n v
e r
s

n
i e

q
q

a
a

i
i

Obtencin de Biodiesel:
El biodiesel es uno de los biocombustibles ms investigados hasta el da de hoy, comenz
su investigacin durante la segunda guerra mundial por parte de investigadores
alemanes para resolver el problemas de la crisis energtica que los abordaba.
El biodiesel es una mezcla de acidos grasos y metil esteres producidos en base a la gran
cantidad de biomasa de lpidos por kilo de masa que obtienen las membranas celulares y
diversas estructuras en la clula, por lo que se puede utilizar tanto microalgas como
macroalgas. Cuya extraccin se ve favorecida, en comparacin a plantas terrestres,
debido a la diferencia de rigidez y accesibilidad que tienen las clulas. Para tener un
parametro de la cantidad de biodiesel que se puede obtener hay algas como
Scenedesmus sp. Que pueden obtener hasta 321.06 g/kg de lipidos de biodiesel, mientras
que de plantas terrestres como Pongamia pinnata se puede obtener una cantidad de 253
g/kg de lipidos de biodiesel. Lo que muestra que el uso de algas genera una mayor
rendimiento que el uso de plantas terrestres.
Si bien se obtiene grandes cantidades de biocombustible por poca cantidad de algas
ocupadadas, puesto que se obtiene alrededor de un 80% de biomasa de la cantidad de
algas extradas el biodiesel tiene sus desventajas, como lo es una rpida oxidacin del
biocombustible, y una baja aceptacion por los parametros internacionales y
estadounidenses del combustible en cuestin, debido a la poca similitud con los
combustibles fosiles utilizados actualmente.
Otra ventaja adems de las grandes cantidades obtenidas por la poca cantidad de algas,
es que la produccin es mucho ms controlada y menos contaminante que la de los

combustibles fosiles, puesto que su produccin consta basicamente de extraccin por

secado y rompimiento de la pared celular de las algas y de la utilizacin de alcohol para la
esterificacin de los lipidos.

Conclusin

A partir de la revision que se ha hecho sobre los avances de la invetigacion y la aplicacin

de los biocombustibles a partir de algas, se puede concluir que el futuro de esta
biotecnologa seguir avanzando a pasos agigantados, principalmente porque las
herramientas de investigacin , asi como la base de datos, contribuyen a que la ejecucin
los procedimenientos, como la secuenciacin y ranformacin, de manera ms rpida, este
avance permitir encontrar una alternativa al uso de combutibles fsiles, los cuales se
estn agotando, lo que tendra un gran repercucin en la industria nivel mundial.
Los avances en la ingeniera metablica permiten no slo el aumento de la produccin de
compuestos de almacenamiento de carbono endgenos, tales como etiquetas y almidn,
sino tambin la produccin directa, y tal vez la secrecin, de hidrocarburos de diseo que
se pueden utilizar directamente como combustibles. La aplicacin de estas herramientas
de ingeniera metablica modernos en microalgas fotosinttica tiene el potencial de crear
una importante fuente de combustible renovable que no va a competir con la produccin
de alimentos o que requieren agua dulce y tierras de cultivo.

Referencias
Ridley, CE, Clark, CM, LeDuc, SD, Bierwagen, BG, Lin, BB, Mehl, A., y Tobas, DA
(2012). Biocombustibles:. Anlisis de Redes de la literatura revela Clave Ambiental y
Desconocidos Econmicos del Medio Ambiente Ciencia yTecnologa, 46 (3), desde 1.309
hasta 1.315 mil.http://doi.org/10.1021/es2023253

Wackett, LP (2008). Carburantes a base de microbianos:. La ciencia y la

tecnologa Biotecnologa Microbiana, 1 (3), 211-225.http://doi.org/10.1111/j.17517915.2007.00020.x

Radakovits, R., Jinkerson, RE, Darzins, A., y Posewitz, MC (2010). Ingeniera gentica de
algas para la Mejora de la Produccin de Biocombustibles.Eucaritica celular, 9 (4), 486501. http://doi.org/10.1128/EC.00364-09

Behera, S., Singh, R., Arora, R., Sharma, NK, Shukla, M., y Kumar, S. (2014).mbito de
algas como biocombustibles de tercera generacin. Fronteras en Bioingeniera
y Biotecnologa, 2, 90. http://doi.org/10.3389/fbioe.2014.00090
Afify, A. M. M., Shanab, S. M., and Shalaby, E. A. (2010). Enhancement of biodiesel
production from different species of algae.Grasas y Aceites 61, 416422.
doi:10.3989/gya.021610
Awolu, O. O., and Layokun, S. K. (2013). Optimization of two-step transesterification
production of biodiesel from neem (Azadirachta indica) oil. Int. J. Energy Environ. 4,
39. doi:10.1186/2251-6832-4-39
Candra, K. P., and Sarinah, S. (2011). Study on bioethanol production using red
seaweed Eucheuma cottonii from Bontang sea water. J. Coastal Dev. 15, 4550.
doi:10.4172/1410-5217.10000328
, L., Pradhan, P., Soni, N., Singh, P., and Tiwari, A. (2014). Algae as a feedstock for
bioethanol production: new entrance in biofuel world. Int. J. Chem. Technol. Res. 6,
13811389.
Rowbotham JS, Dyer PW, Greenwell HC, Selby D, Theodorou MK. 2013 Copper(II)mediated thermolysis of alginates: a model kinetic study on the influence of metal ions
in the thermochemical processing of macroalgae. Interface Focus 3: 20120046.
http://dx.doi.org/10.1098/rsfs.2012.0046
Behera S, Singh R, Arora R, Sharma NK, Shukla M and Kumar S (2015) Scope of algae as
third generation biofuels. Front. Bioeng. Biotechnol. 2:90. doi: 10.3389/fbioe.2014.00090