UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES

FACULTAD DE INGENIERIA

CROMATOGRAFIA

LA PAZ BOLIVIA

CROMATOGRAFIA
1. Objetivos:
-

Objetivos
generales.
Nuestros objetivos generales sobre la cromatografa es observar el arrastre
de las sustancias, igualmente obtener los colores primarios de estas, ya que
en el arrastre podemos observar distintas reacciones ya que los disolventes
tienen diferentes acciones, pues como sabemos no todos tienen la misma
densidad y por lo consiguiente no pueden obtener los mismos resultados.
Tambin fue observar las diferentes caractersticas de la placa en la
cromatografa que en este caso fue el papel filtro que fue nuestro apoyo
para poder tener resultados satisfactorios y tener un arrastre exitoso.
Objetivos
especficos.
Como primer punto fue Conocer la cromatografa como una tcnica de
separacin de mezclas de sustancias, sus caractersticas y los factores que
en
ella
intervienen.
Otro de nuestros objetivos especficos fue dar a conocer como obtuvimos
los colores naturales de las sustancias, igualmente ensear a cmo obtener
los arrastres y por lo consiguiente y en un proceso ms detallado mostrar
que con instrumentos ms sofisticados puedan obtener lo que contiene
cada una de las sustancias o mezclas que comnmente solemos hacer a
diario.

2. Fundamento Terico:
La cromatografa es un mtodo muy utilizado en todas las ramas de la ciencia y
que permite la separacin, identificacin y determinacin de los componentes
qumicos en mezclas complejas. Ningn otro mtodo de separacin es tan
potente y de aplicacin tan general como la cromatografa.
Es difcil definir rigurosamente el trmino de cromatografa, ya que se ha
aplicado ese nombre a varios sistemas y tcnicas. Sin embargo, todos esos
mtodos tienen en comn el uso de una fase estacionaria y una fase mvil.
En todas las separaciones cromatogrficas, la muestra se desplaza con una fase
mvil, que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil
se hace pasar a travs de una fase estacionaria con la que es inmiscible, y que
se fija a una columna o a una superficie slida. Las dos fases se eligen de tal
forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto
entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son
fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el
flujo de la fase mvil; por el contrario, los componentes que se unen
dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia

de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o

zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
Conceptos bsicos
Cromatograma:
Si colocamos un detector al final de la columna que responde a la
concentracin del soluto y se registra su seal en funcin del tiempo (o del
volumen de fase mvil aadido) se obtiene una serie de picos que representan
un grafico denominado cromatograma. Este grafico es til tanto para el anlisis
cualitativo como cuantitativo. La posicin de los picos en el eje del tiempo
puede servir para identificar los componentes de la muestra; las reas bajo los
picos proporcionan una medida cuantitativa de la cantidad de cada
componente.
Tiempo de retencin tR:
Es el tiempo que transcurre despus de la inyeccin de la muestra hasta que el
pico de concentracin del analito alcanza el detector; es el tiempo que tarda un
compuesto en salir de la columna; es el tiempo que tarda en aparecer el
mximo de un pico.
Se representa con el smbolo tR.
La velocidad lineal promedio de migracin del soluto v es:
v=

L
Tr

Donde L es la longitud de la columna que esta rellena.

Cromatograma caracterstico de una mezcla de dos componentes. El pico

pequeo de la izquierda representa una especie que no se retiene en la
columna, y de esta forma alcanza el detector casi inmediatamente despus del
inicio de la elucin. Por tanto, su tiempo de retencin tM es aproximadamente
igual al tiempo que emplea una molcula de la fase mvil para pasar a travs de
la columna.

Tiempo muerto tM:

Es el tiempo necesario para que la especie no retenida alcance el detector; es el
tiempo de migracin de la especie no retenida; es el tiempo necesario para que,
por termino medio, una molcula de la fase mvil pase a travs de la columna,
De manera semejante la velocidad lineal promedio u del movimiento de las
molculas de la fase mvil es
u=

L
Tm

Constante de distribucin:
En general, los equilibrios de distribucin implicados en cromatografa se
describen por ecuaciones sencillas que suponen la transferencia de una analito
entre las fases estacionaria y la mvil. As, para el soluto A, se puede escribir:
AA
La constante de equilibrio K para este proceso se denomina constante de
distribucin, la razn de distribucin o coeficiente de distribucin, y mide la
distribucin del analito entre la fase estacionaria y la fase mvil. Se define
como:
K=

Cs
Cm

Donde CS es la concentracin molar del soluto en la fase estacionaria y CM es la

Concentracin molar en la fase mvil.
CS = moles/Litro de analito en la fase estacionaria.
CM = moles/Litro de analito en la fase mvil.
Factor de retencin o factor de capacidad:
Es un parmetro que describe la velocidad de migracin de los solutos
(analitos) en la columna. Para una especie A, el factor de capacidad kA se
define como:

Donde KB es el coeficiente de distribucin para la especie ms fuertemente

retenida B, y KA es el coeficiente de distribucin para la menos retenida, o que
eluye con ms rapidez, la especie A. Segn esta definicin siempre es mayor

que la unidad, porque B es el compuesto ms retenido (de > tR). Donde kB y

kB son los factores de capacidad de B y de A, respectivamente.
Resolucin cromatogrfica:
La resolucin cromatogrfica RS de una columna es una medida cuantitativa de
su capacidad para separar dos analitos. La resolucin de una columna se define
como:

Donde WA y WB son la anchura de los picos A y B.

A partir de la Figura 1-2 se deduce que si R> 1,5 la separacin de los
componentes es completa, no ser as si R<1,5. Por lo que para una fase
estacionaria dada, la resolucin puede mejorarse alargando la columna,
aumentando as el nmero de platos. Aunque una consecuencia negativa del
aumento de platos es el incremento del tiempo requerido para la separacin.

Eficiencia en cromatografa:
La eficiencia se define en base a dos trminos, que son medidas cuantitativas
de la eficiencia de una columna: 1 la altura del plato H y 2 el nmero de
platos N. Los dos estn relacionados por la ecuacin:

Donde L es la longitud (normalmente en centmetros) del relleno de 1a

columna. De la ecuacin se deduce que la altura del plato H es:

La eficacia de la columna cromatogrfica aumenta cuanto mayor es el nmero

de platos, y cuanto menor es la altura de plato. Existen diferencias en las
eficacias por diferencias en el tipo de columna y/o el tipo de fases mvil y
estacionaria. Las eficacias en trminos de nmero de platos varan de cientos a
miles, y las alturas de plato de unas pocas dcimas a milsima de centmetro o
menos. Existe otra ecuacin para calcular el nmero de platos N:

En este caso N se puede calcular a partir de dos medidas de tiempo, tR y W

(anchura del pico); para calcular H, se hade conocer tambin la longitud del
relleno de la columna L.

En general se asume que las bandas cromatogrficas tienen una forma

gaussiana, por ello resulta conveniente definir la eficacia de una columna en los
trminos de varianza por unidad de longitud de la columna. De esta forma, la
altura de plato H viene dada por:

Esta definicin de la altura de plato se ilustra en la Figura 1-4, donde se

muestra una columna con un relleno de L cm. de longitud. En esta figura se
muestra una grfica que representa la distribucin de las molculas del analito
a lo largo de la columna en el momento en que el pico del analito alcanza el
extremo final del relleno (es decir, en el tiempo de retencin tR). La curva es
gaussiana, y la ubicacin de L -1 y L +1 se indica mediante lneas verticales
discontinuas. Obsrvese que las unidades de L son centmetros y las de 2 son
centmetros cuadrados; de este modo H representa una distancia lineal, en
centmetros

Tipos de separacin cromatogrfica

Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar de dos modos distintos. El
primero de ellos se basa en la forma en que las fases estacionaria y mvil se
ponen en contacto, diferencindose as la cromatografa en columna de la
cromatografa en plano o plana. En la cromatografa en columna, un tubo
estrecho contiene la fase estacionaria a travs de la cual hace se pasar la fase
mvil por presin o gravedad. En la cromatografa en plano o plana, la fase
estacionaria se fija sobre una placa plana o a los intersticios de un papel; en
este caso la fase mvil se desplaza a travs de la fase estacionaria por
capilaridad o por efecto de la gravedad. Nos centraremos principalmente en la
cromatografa en columna, y como ya hemos dicho la teora que se desarrolle
para la cromatografa en columna se adaptara tambin para la cromatografa
plana. Otra clasificacin ms fundamental de los mtodos cromatogrficos se
basa en el tipo de fase mvil y estacionaria, y en la clase de equilibrios
implicados en la transferencia de los solutos entre las fases. La Tabla 2.1 da la
relacin de las tres clases generales de cromatografa: cromatografa de
lquidos, cromatografa de gases y cromatografa de fluidos supercrticos.
Como su nombre indica las fases mviles en las tres tcnicas son,
respectivamente, lquidos, gases y fluidos supercrticos.
Hay que mencionar que solamente la cromatografa de lquidos es la que puede
llevarse a cabo en columnas o sobre superficies planas; por otra parte, tanto la
cromatografa de gases como la de fluidos supercrticos estn restringidas a los
procedimientos en columna, de tal modo que las paredes de la columna
contienen la fase mvil.

Cromatografa plana
Los mtodos de cromatografa plana incluyen la cromatografa en capa fina
(TLC) y la cromatografa en papel (PC). En todos los casos se emplea una capa
plana y relativamente delgada de un material que a su vez es el soporte, o bien
que recubre una superficie de vidrio, plstico o metlica. La fase mvil se
mueve a travs de la estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por
gravedad o por aplicacin de un potencial elctrico. En la actualidad, la
cromatografa en plano se centra en la tcnica de la capa fina, que es ms
rpida, tiene mejor resolucin, y es ms sensible que su alternativa en papel.
Por ello nos centraremos en los mtodos de capa fina.
Las separaciones en capa fina se realizan en placas de vidrio o plstico que se
recubren con una capa delgada y adherente de partculas finamente dividas;
esta es la capa estacionaria. Las partculas son semejantes a las descritas en
cromatografa en columna de adsorcin, de reparto en fase normal y en fase
inversa, y las fases mviles tambin son similares las utilizadas en
cromatografa de lquidos de alta eficacia en columna. Las placas de capa fina
se obtienen de forma comercial. Los tamaos son varios 5X20, 10X20, y 20X20.
Estas placas comerciales se presentan en dos formatos. El convencional, donde
las placas tienen un espesor de 200 a 250 m un tamao de partcula de 20 m
o ms. Presentan por lo comn unos 2000 platos tericos en 12 cm. y con un
tiempo de desarrollo de 25 min. El segundo tipo de placas comerciales es el de
alta eficacia, que tienen pelculas de unos 100 m de espesor, y un dimetro de
partcula de 5 m o menos. El nmero de platos tericos es mayor unos 4000
en 3cm y con 10 min. de desarrollo. Las placas de alta eficacia permiten
mejores separaciones y en menos tiempo, pero tienen la desventaja de tener
una menor capacidad de carga.

La aplicacin de la muestra es el aspecto mas critico de la cromatografa en

capa fina. Por lo general, se aplica una disolucin de la muestra del 0,001 al 0,1
%, como una mancha, a 1 o 2 cm. del extremo de la placa. Pero para una
separacin de mayor eficacia, la mancha debera tener un dimetro
mnimoaproximadamente 5nm para una aplicacin cualitativa y menor para el
anlisis cuantitativo, y en el caso de las disoluciones diluidas se realiza tres o
cuatro aplicaciones superpuestas secando la zona entre aplicacin. La
aplicacin puede ser manual o por aplicadores mecnicos. Si es manual es por
contacto entre la placa y un capilar que contiene la muestra, o utilizando una
jeringa hipodrmica. En el caso de que sea mecnico, se mejorara la precisin y
exactitud de la aplicacin.

Existen distintos tipos de anlisis cualitativos para identificar los distintos

componentes de la muestra tras realizar la cromatografa en capa fina:
Uso de patrones: Consiste en aplicar a la placa la muestra desconocida y
disoluciones de muestras purificadas, de las especies que probablemente
pueden estar presentes en la muestra desconocida. La coincidencia entre los
valores RF de alguna de las manchas de la muestra desconocidas el de alguno
de los estndares proporciona evidencias para la identificacin de uno de los
componentes de la muestra. RF es un nuevo parmetro denominado factor de
retardo, siendo el factor de retardo en la Figura 3-1 para el soluto de la
muestra 2. Este mtodo necesita una confirmacin mediante la repeticin del
ensayo con diferentes fases mviles y estacionarias y con distintos reactivos de
revelado.

Mtodos de elucin: Se raspa la zona de la placa que contiene el analito con una
esptula o una navaja, y se recoge el slido sobre un papel satinado. Se
trasfiere a un tubo de ensayo u otro recipiente, donde el analito se disuelve con
un disolvente adecuado y se separa de la fase estacionaria por centrifugacin o
filtracin. La identificacin se realiza por tcnicas como la espectrometra de
masas, la esonancia magntica nuclear o la espectroscopia de absorcin en
infrarrojo.
Cromatografa en plano bidimensional: En este caso la muestra se coloca en
una de las esquinas de una placa cuadrada y se realiza el desarrollo en
direccin ascendente con el disolvente A. A continuacin se elimina este
disolvente por evaporacin, y se gira la placa 90 grados, realizando ahora el
desarrollo ascendente con el disolvente B. Tras la eliminacin del disolvente, se
determina la posicin de los componentes con un reactivo de revelado, tipo
ninhidrina, y las manchas originadas se identifican comparando sus posiciones
con las de los estndares.

En cuanto al anlisis cuantitativo, ste se puede hacer comparando el rea de la

mancha del estndar con la del analito, se puede hacer una estimacin
semicuantitativa de la cantidad del componente presente. Los mejores
resultados se obtienen si se raspa la mancha de la placa, se extrae el analito del
slido que forma la fase estacionaria, y se determina el analito por mtodos
fsico o qumicos. Otro procedimiento consiste en usar un densitometro de
barrido que puede medir la radiacin emitida de la mancha por fluorescencia o
reflexin.
Cromatografa en columna
Para poder explicar la cromatografia en columna utilizaremos el concepto de
elucin en columna. La muestra como dos sustancias A y B se separan en una
columna por cromatografa de elucin con una fase mvil. La elucin implica el

transporte de una especie a travs fe una columna por la adicin continuada de

nueva fase mvil. El proceso empieza cuando una nica porcin de la muestra
se introduce en la parte superior de la columna (tiempo t0) despus de lo cual
los componente de la muestra se distribuyen entre las dos fases, La
introduccin de fase mvil adicional, el eluyente, hace que la fase mvil que la
fase mvil que contiene una parte de la muestra avance por la columna, donde
tienen lugar una posterior reparto entre la fase mvil y las porciones frescas de
la fase estacionaria a las que accede (tiempo t1). Al mismo tiempo, tiene lugar
una distribucin entre el disolvente nuevo y la fase estacionaria en el lugar en
el que inicialmente se ubicaba la muestra.
Las sucesivas adiciones de la fase mvil hacen avanzar las molculas de soluto
(analitos) por la columna en una serie de continuas transferencias entre las
fases estacionaria y mvil. Sin embargo, debido a que el movimiento de los
solutos solo puede ocurrir en la fase mvil, la velocidad media a la que una
zona de soluto migra en la columna depende de la fraccin de tiempo que
reside en esta fase. Esta fraccin de tiempo es pequea para las sustancias que
son retenidas fuertemente por la fase estacionaria (compuesto B) y es grande
cuando es ms probable la retencin en la fase mvil (componente A).
Las diferencias de velocidad que resultan hacen que se separen los
componentes de la mezcla en bandas o zonas, que se localizan a lo largo de la
columna (tiempo t2). El aislamiento de las especies separadas se realiza
haciendo pasar suficiente cantidad de fase mvil a travs de la columna hasta
que las bandas individuales salen de ella, pudiendo as detectarse o
reconocerse (tiempos t3 y t4).

Durante la elucin en la columna cromatogrfica de los distintos analitos de la

muestra ocurre un proceso asociado y muy importante, la dilucin del analito,
proceso que acompaa casi siempre a las separaciones. As el tamao de la
banda original que contiene los analitos es notablemente ms pequeo que
cualquiera de las zonas que llegan al detector, lo que significa que se produce
una importante dilucin de los analitos (su concentracin disminuye) mientras
estn siendo separados, Es evidente que el movimiento de avance por la
columna aumenta la distancia entre las bandas. Sin embargo, al mismo tiempo
tiene lugar un ensanchamiento de ambas zonas, lo que disminuye la eficacia de
la columna como sistema de separacin. Existen condiciones en las que se
puede lograr que el ensanchamiento de bandas se de mas lentamente que la
separacin.

La cromatografa en columna es uno de los principales mtodos para la

separacin de especies qumicas. Adems, se puede emplear para la
identificacin tanto cualitativa como para la determinacin cuantitativa de las
especies separadas.
En cuanto al anlisis cualitativo, la cromatografa proporciona informacin
acerca de las especies de la muestra en cuanto a su tiempo de retencin o su
posicin en la fase estacionaria tras el periodo de elucin.
A pesar de todo la cromatografa no nos aporta mucha informacin de la
identificacin positiva de las especies qumicas separadas, pero si que es un
buen mtodo para evidenciar la ausencia de ciertos compuestos.
La cromatografa en columna es tambin un buen mtodo que proporciona
informacin cuantitativa acerca de las especies separadas, basndose en la
comparacin de la altura, o del rea, del pico del analito con la de uno o ms
patrones. Pudindose hacer as anlisis cuantitativos basados en la altura del
pico, en las reas del los picos, mediante el mtodo de calibrado y patrones, el
mtodo del patrn interno, y por ltimo el mtodo de la normalizacin de las
reas.

3. Registro de Datos:
Cromatografa en papel
- muestra de mezcla de tintas de bolgrafo de colores: verde limn, naranja y
azul
Usando solventes: etanol, n-hexano, acetona, acido actico tenemos
Etanol
Verde y un extremo azul
n-hexano
No existe recorrido de la tinta
acetona
Verde y azul (no muy intenso)
Acido actico
Es el mejor solvente

Zumo de zanahoria
Etanol
n-hexano
acetona
Acido actico

Naranja y amarillo
Parte superior naranja y amarillo
naranja degradndose
El recorrido es mnimo

etanol
Tinta

zanahoria

n-hexano

Distancia del
solvente
7.5cm
Distancia de
la tinta 6.6cm
Distancia del
solvente
6.6cm
Distancia de
color 2.8cm

acetona

Acido
actico
Distancia del Distancia del Distancia del
solvente
solvente 10.1 solvente 8cm
12.1cm
Distancia de Distancia de
Distancia de la tinta 9.9
la tinta 7.5cm
la tinta 4cm
Distancia del Distancia del Distancia del
solvente
solvente 10.3 solvente
12.8cm
cm
6.8cm
Distancia de Distancia de Distancia de
color 12.8cm color 11.5cm color 2.3cm

Cromatografa en capa fina

acetona

Acido
actico
Distancia del
solvente
2.4cm
Distancia de
la tinta 2.2

Tinta

zanahoria

Distancia del
solvente 3.5
cm
Distancia de
color 2.8cm

4. Clculos:
Sabemos que el factor de retardacin es:
Rf =
-

distacia recorridapor el soluto

distacia recorrida por el solvente

Cromatografa en papel:
Mezcla de titas:

Etanol:
Rf =

6.6cm
= .
7.5 cm

Rf =

4cm
= .
12.1 cm

Rf =

9.9cm
= .
10.1cm

n-hexano:

Acetona:

Acido

actico:
Rf =

7.5cm
= .
8cm

Rf =

2.8cm
= .
6.6cm

Zanahoria:

Etanol:

n-hexano:
Rf =

12.8cm
=
12.8cm

Acetona:
Rf =

10.3cm
= .
11.5cm

Acido

actico:
Rf =

2.3cm
= .
6.8cm

Cromatografa en capa fina

Mezcla de tintas acido actico:

Rf =

distacia recorridapor el soluto

distacia recorrida por el solvente

Rf =

2.2cm
= .
2.4cm

Para la zanahoria:
Rf =

2.8cm
= .
3.5cm

5. Reacciones Qumicas y resultados obtenidos:

En este experimento no se tuvo reacciones qumicas ya que solo tuvimos que
identificar distancias alcanzadas por los colorantes en las placas
cromatograficas.

6. Anlisis de Resultados:
Podemos identificar que algunas tiras de papel cromatografico con la muestra
de tinta tienen diferentes colores y estn a distintas distancias como por
ejemplo:
En el solvente de acetona podemos distinguir los siguientes colores: celeste
que esta una distancia de 4.2cm, turquesa que est a 5.1 cm, azul que esa a
7.9cm y verde que esta a 9.cm que la distancia mxima.
En el solvente de acido actico podemos distinguir los siguientes colores:
amarillo a 2.4cm, verde a 4.5cm, azul a 7.5cm que es la mxima distancia.

7. Observaciones:
Las distancias recorridas por los disolventes difieren con las distancias
recorridas por los colores dato que podemos aprovechar en el clculo del
factor de retardacin.
Se debe tener en cuenta la cantidad de soluto a investigar en la placa
cromatografica ya que el exceso podra presentar algn defecto en la
resolucin de clculos.

8. Conclusiones:
En una separacin por cromatografa influyen factores como la
electronegatividad de cada compuesto, el tamao de las molculas, la
adsorcin,
etc.
Los valores de los RF de cada sustancia, dependen de la efectividad del
eluyente
que
se
est
utilizando.
Las sustancias se pueden separar de acuerdo a su carga, su hidrofobicidad, su
tamao o su capacidad de unirse a grupos qumicos particulares. Es una tcnica
para la separacin de molculas sobre la base de su tamao molecular y carga
elctrica. Las molculas ms grandes quedan ms cerca del punto de inicio y las
ms pequeas quedaran ms lejos por ser menos pesadas al ser movidas por
carga elctrica.
9. Bibliografa:
-

Gua de laboratorio de Lydia Galagovsky Kurman

https://lacienciaparatodos.wordpress.com/2009/03/25/experimentocromatografia-en-papel/
https://lidiaconlaquimica.wordpress.com/tag/cromatografia-en-capa-fina/

10. Cuestionario:
1. Defnase y descrbase cada uno de los siguientes conceptos:
Desarrollo: encontraremos que el desarrollo est vinculado a la accin
de desarrollar o a las consecuencias de este accionar. Es necesario, por
lo tanto, rastrear el significado del verbo desarrollar: se trata de
incrementar, agrandar, extender, ampliar o aumentar alguna
caracterstica de algo fsico
Elucin: Es parte de un proceso llamado (cromatografia) separacin de
los componentes de una muestra. En la cromatografa de gas se utilizan
dos fases, una estacionaria llamada generalmente columna compuesta
por un slido o liquido, y una fase mvil que es un gas inerte que lleva la
muestra que se desea separar (analito). Esta fase movil al pasar por la
columna hace que ocurra la separacin de los componentes del analito
al adherirse, mezclarse o retenerse en la fase estacionaria los diferentes
componentes del analito. Cada componente del analito tiene un tiempo
de retencin en la fase estacionaria o fija ( sea cada componente pasa

un tiempo adherido a la fase fija) y este tiempo es diferente para cada

uno de los componentes. Al desprenderse o abandonar cada uno de
estos componentes la fase fija es a lo que se llama elucin.
Filtracin: Se denomina filtracin al proceso unitario de separacin de
slidos en una suspensin por medio de un medio mecnico poroso,
tambin llamados tamiz, criba, cedazo, filtro. En una suspensin en un
lquido mediante un medio poroso, retiene los slidos mayores del
tamao de la porosidad y permite el paso del lquido y partculas de
menor tamao de la porosidad.
Adsorcin: La adsorcin es un proceso por el cual tomos, iones o
molculas son atrapados o retenidos en la superficie de un material en
contraposicin a la absorcin, que es un fenmeno de volumen. Es decir,
es un proceso en el cual por ejemplo un contaminante soluble
(adsorbato) es eliminado del agua mediante el contacto con una
superficie slida (adsorbente). El proceso inverso a la adsorcin se
conoce como desorcin.
Adsorbente: que tiene la capacidad de absorber.
Coadyuvante de filtracin: Son polmeros slidos no compresibles que
forman una malla, mejorando la porosidad. Al ser slidos
incompresibles se los coloca junto a los compresibles para:
Evitar taponamiento de la malla, va al fluido, va a la formacin de la
torta.
Fluorescencia: Es un tipo particular de luminiscencia, que caracteriza a
las sustancias que son capaces de absorber energa en forma de
radiaciones electromagnticas y luego emitir parte de esa energa en
forma de radiacin electromagntica de longitud de onda diferente
Resina: Es una secrecin orgnica que producen muchas plantas,
particularmente los rboles del tipo confera. Es muy valorada por sus
propiedades qumicas y sus usos asociados, como por ejemplo la
produccin de barnices, adhesivos y aditivos alimenticios. Tambin es
un constituyente habitual de perfumes o incienso. En muchos pases,
entre ellos Espaa, es frecuente referirse a la "resina" como "resina de
pino" ya que esta confera es su principal fuente.

2. Se piensa que un colorante pueda ser azul de metileno Cmo

podra comprobar esta suposicin utilizando un procedimiento de
cromatografa?
Procedemos a montar la columna en el soporte, ayudados por una pinza,
de manera que quede en vertical, y le colocamos un vaso de
precipitados bajo la llave de paso por si se escapase alguna sustancia.
Observamos que justo encima de la llave hay una frita de vidrio.
Mezclamos 18 g de almina con algo ms de 25 mL de etanol para
introducirlo en la columna. La almina ser la fase estacionaria.
Esperamos unos minutos hasta que se asiente y abrimos la llave de paso
para permitir salir parte del etanol, dejando nicamente un dedo por
encima de la almina. Al dejarlo salir tambin sali algo de la frita.
A continuacin introducimos la lana de vidrio, con precaucin ya que
aunque parezca algodn, pincha. La finalidad de esto es evitar que la
almina reaccione con el eluyente.
Ahora introducimos 2 mL de la mezcla y abrimos la llave. Cada vez que
el nivel de etanol descienda, debemos aadir ms, ya que en ningn
momento puede quedar seca la lana de vidrio. Comenzamos a observar
que el azul comienza a filtrarse a travs de la almina hasta que
consigue llegar a la parte inferior y empezamos a recoger en el matraz
una disolucin azulada.
3.

Seguimos aadiendo etanol hasta que la disolucin que cae vuelve a ser
incolora. En ese momento ya no queda azul de metileno en la columna y
debemos comenzar a extraer el anaranjado de metilo.
Cambiamos el erlenmeyer y ahora empezamos a introducir agua por la
columna, ya que necesitamos un eluyente ms polar. Al igual que antes
con el azul, ahora poco a poco observamos al naranja descender a travs
de la almina.
Finalmente, recogemos el naranja de metilo en el erlenmeyer hasta que
ya no queda nada en la columna y la disolucin que extraemos es
incolora.

4. Cuales son algunos de los mtodos que ese pueden emplear para la
localizacin de las bandas e adsorcin

Aunque los compuestos incoloros pueden formar bandas bien definidas

en una columna de adsorcin cromatografica se necesitara la utilizacin
de mtodos especiales para la localizacin de las bandas de los
productos adsorbidos y para poder separarlos convenientemente. Para
la localizacin de las bandas se emplea generalmente una lmpara
ultravioleta.
Para la localizacin de las fracciones d una mezcla sorbida se puedan
emplear tambin mtodos puramente empricos por ejemplo en la
columna se puede diluir con una seria de diluentes de polaridad
gradualmente creciente y el filtrado se recogen pequeas fracciones,. La
eliminacin del disolvente en cada una de estas se administra el
compuesto mediante un punto de fusin o alguna otra propiedad se
puede mezclar con los productos idnticos obtenidos en las fracciones
prximas.
5. Indquese algunas de las aplicaciones de l cromatografa de
adsorcin en columna.
La
cromatografa
sirve
para
separar
compuestos:
- Al obtener un compuesto vegetal, se utiliza la cromatografa para
separar
las
partes
que
lo
forman.
- Si obtienes o preparas algn compuesto en el laboratorio, la
cromatografa en capa fina te dice si el compuesto obtenido es puro.
- La cromatografa tambin te ayuda a identificar y separar protenas.
Tambin
te
ayuda
a
comparar
muestras
- Tambin puedes saber la polaridad de un compuesto, usando una
columna con cargas positivas o negativas.
6. Qu significa los trminos hidrfilo y lifilo? Por qu los
componentes ms hidrfilos de una mezcla son retenidos ms
frecuentemente sobre una columna de gel de slice o de celulosa
que los compuestos ms lipofilos, cuando se utiliza butanol como
disolvente?
Hidrfilo el comportamiento de toda molcula que tiene afinidad por el
agua. En una disolucin o coloide, las partculas hidrfilas tienden a
acercarse y mantener contacto con el agua. Las molculas hidrfilas son
a su vez lipfobas, es decir, no tienen afinidad por los lpidos o grasas, y
no se mezclan con ellas
Lifilo es un coloide que tiene gran afinidad por el solvente. (En pocas
palabras este coloide se disolver fcilmente)

UN PASO MS
Investigue que son las isotermas de adsorcin
Una isoterma de adsorcin (tambin llamada isoterma de sorcin) describe
el equilibrio de la adsorcin de un material en una superficie (de modo ms
general sobre una superficie lmite) a temperatura constante. Representa la
cantidad de material unido a la superficie (el sorbato) como una funcin del
material presente en la fase gas o en la disolucin. Las isotermas de
adsorcin se usan con frecuencia como modelos experimentales, que no
hacen afirmaciones sobre los mecanismos subyacentes y las variables
medidas. Se obtienen a partir de datos de medida por medio de anlisis de
regresin.

Qu s una resina de intercambio anionico y que es una de cationico?

Resinas de intercambio catinico
Estas resinas estn disponibles en 3 tamaos diferentes de cuentas. El
medio (<150m) y grandes (<300m) los granos son ms tiles para el
flujo por gravedad y por esferas (sin flujo) las solicitudes. El mayor tamao
de los granos hace fcil la separacin de un lquido a granel. En el medio
(<150m) y pequeas (<75m) los granos son ms tiles para aplicaciones
de bombeo. El menor tamao de los granos reduce la altura de plato de
cromatografa (proporciona ms rpido equilibrio con velocidades de flujo
ms alto).
Estas resinas estn disponibles con tres diferentes cantidades de
entrecruzamiento en la columna vertebral de poliestireno. Cuanto mayor
sea el enlace y cruce mayor ser la capacidad de la resina. Para el
intercambio de iones inorgnicos el tamao del poro suele ser de poco
inters. Para las protenas globulares la exclusin de los lmites
aproximados son 3000 daltons en el 2%, 1500 daltons el 4% y 1000 daltons
en un 8% entrecruzamiento.

Cules son la fase estacionarias ms utilizadas en cromatografa?

La tcnica ms usada es la cromatografa lquida de alta resolucin, HPLC
por su sensibilidad, fcil adaptacin a las determinaciones cuantitativas
exactas, su idoneidad para la separacin de especies no voltiles o
termolbiles y su aplicacin a sustancias de primordial inters en la
industria, como son los aminocidos, protenas, cidos nucleicos,
hidrocarburos, carbohidratos, entre otros.

Anexos
Algunas muestras de papel cromatografico con las mezclas de
tintas y zanahoria