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Extremfilos

- Definicin

- Clasificacin segn el ambiente en el que se desarrollan


- Importancia de sus estudio
- Adaptaciones moleculares y fisiolgicas (salinidad, pH y temperaturas
extremas).
- Aplicaciones de los microorganismos extremfilos y sus biomolculas

Qu es un Extremfilo?

Extremfilos
Organismos que durante la evolucin se han adaptado a vivir y desarrollar
su mayor potencial en ambientes extremos.
Condiciones normales o fisiolgicas : 37 C, 1 atm, pH 7.4, salinidad
0.9-0.3 %
Presentan adaptaciones en sus biomolculas y mecanismos moleculares
que aseguran el mantenimiento del flujo metablico en condiciones
consideradas abiolgicas. Condiciones regulares: 37 C, pH 7.4, 1 at
(101.3 kPa), 0.15-0.6 M sales.
La gran mayora de los extremfilos son procariotas: simplicidad
estructural (mayor adaptabilidad) y flexibilidad metablica.
Los ms extremfilos pertenecen al dominio Archaea

Por qu resulta de inters su estudio?

- Aportan al conocimiento de procesos celulares fundamentales.


Ej. estabilidad de las biomolculas
- Aportan a la Evolucin de los organismos.
- Representan un recurso valioso para aplicaciones biotecnolgias e
industriales.
- Abren nuevos campos de investigacin. Ej. Astrobiologa

Extremfilo verdadero (obligado) requiere una o mas condiciones extremas

Extremfilo facultativo tolera condiciones extremas, crece ptimamente en


condiciones normales

Poliextremfilo: organismo que vive en mas de una condiciones extrema.


arquea termocidfila Sulfolobus acidocaldarius, pH 3-80 C.
arquea haloalcalfila Natrialba magadii, 3.5 M NaCl, pH 10

Clasificacin
de los extremfilos
segn parametro
ambiental

Rothschild, Nature 2001

Ecosistemas de temperatura extrema: Sitios volcnicos terrestres y


sistemas hidrotermales submarinos

Yellowstone National Park(USA), 80 C


Bacteria termofila Thermus aquaticus
(Tom Brock )

Yellowstone National Park(USA).


pH 3, 80 C
De alli Tom Brock aislo la arquea
termoacidofila Sulfolobus
acidocaldarius

Reaccion
PCR

Ecosistemas cidos: Rio Tinto (Espaa), pH 1.5-3, alta concentracin


de sulfatos, Fe3+, metales pesados (Zn2+, Cu2+)

Acidithiobacillus ferrooxidans, Leptospirillum sp, Thermoplasma acidophilum


Aplicacin de acidfilos en Biomineria: remocin de metales a partir de sulfuros
metlicos

Halfilos

Halfilos: organismos que dependen de altas concentraciones de sal para vivir

Halotolerantes: viven en un amplio rango de concentracin salina

Ecosistemas halfilos

Great Salt Lake, Utah (USA)


Concentracin salina prxima a
saturacin (5 .3 M NaCl) similar
composicin salina que agua de mar
Halobacterium sp

Dead Sea, medio Oriente.


Concentracin salina (5 .3 M NaCl) .
Alta concentracin Mg 2+
Haloarcula marismortui
Haloferax volcanii

Ecosistemas extremos del Noroeste de los Andes argentinos

Salar de la Laguna Verde (a) y


Laguna Vilama (b) a ~4,500 mt
sobre el nivel del mar, hipersalinos
y con alta concentracin de
arsnico

ME Faras y col. Appl Environ. Microbiol,


74: 5867-5874 (2008)

Halfilos
Agua de mar ~0.5 M (3%)
Clasificacin en base a la dependencia de sal:

No halfilo : hasta 0.2 M sal


Levemente halfilo: 0.2-1.2 M sal
Halfilo moderados: 1.2-2.5 M sal
Halfilos extremos: > 2.5 M sal (~20-30 %). La mayora son arqueas.
Halotolerantes: viven en un amplio rango de concentracin salina

Arqueas halfilas extremas (haloarqueas)


- Halfilos extremos (>2 M NaCl) : Estrs osmtico. Acumulan KCl 4-5 M
- Alta irradiacin solar: Pigmentos isoprenoides (bacterioruberinas) en membrana

- Condiciones microaerobias
- Altas temperaturas
- Limitacin de nutrientes
- Neutrfilas (pH ~7) y alcalfilas (pH 10-12)

Haloferax volcanii

Arqueas haloalcalfilas
Condicin optima de crecimiento: ~ 3.5 M NaCl, pH 10-12
Extremfilos para dos condiciones: alta sal y alto pH
Natrialba magadii ATCC 43099

Lake Magadii, Kenya

Estrategias para regular la presin osmtica:

1. Acumulacin intracelular de Solutos compatibles.


No requiere adaptaciones en los sistemas intracelulares.
La mayora de halfilos y halotolerantes. Ej. Cianobacterias, algas

2. Acumulacin intracelular de altas concentraciones de sales (KCl).


Requiere adaptaciones en los sistemas intracelulares.
Dependen de alta sal en el medio en forma contnua.
Ej. Haloarqueas (Orden Halobacteriales) y bacterias haloflicas anaerbicas
(Orden Haloanaerobiales)

Solutos compatibles
-

Molculas orgnicas de bajo PM, solubles en altas concentraciones, no cargadas o


switterionicas a pH fisiolgico.

En altas concentraciones no afectan la actividad de las enzimas.

Polialcoholes (glicerol, arabitol), azcares y derivados (fructosa, trealosa, glucosilglicerol);


aminocidos y derivados (glicina); aminas cuaternarias (glicinabetana)

Son sintetizados o tomados/excretados en funcin de la salinidad del medio

Solutos compatibles de microorganismos halfilos y halotolerantes

Protenas halfilas
- Requieren alta sal (1-4 M) para mantener su actividad y estabilidad.
(baja actividad agua, condicin similar a las soluciones acuoso-orgnicas)
- Proteoma rico en aa cidos (~20 % D+E; pI 4-5) para neutralizar los cationes K+.
La conformacin de la protena es estable mientras existan cationes que neutralicen
las cargas.

Halobacterium salinarum.
Fotoreceptor
Bacteriorodopsina
(membrana purpura) permite
obtener energia en condiciones
limitantes de oxigeno

pH extremos
Acidfilos: pH ptimo < 4.
Ej. pH 1-2 Sulfolobus sp , Termoplasma acidophilum (arqueas), Thiobacillus sp (bacteria).
pH 2-4. Lactobacillus sp, Acetobater sp (bacterias)

Neutrfilos: pH ptimo 6-7


E. coli, Psedomonas sp (bacterias)

Alcalfilos: pH ptimo > 8


pH 8-10. Bacillus alkalophilus (bacteria)
pH 10-12. Natrialba magadii (arquea)

Homeostasis del pH intracelular (pHi): mantenimiento del pHi a pesar


de fluctuaciones en el medio extracelular.
Mantenido por:
- Baja permeabilidad de la MC a los H+
- Capacidad buffer de la clula (Ac nucleicos (PO4-), protenas (COO- y
NH2), glutamato, poliaminas.
- Circuitos inicos (H+, K+, Na+)

Alcalfilos
- Pared celular con polmeros acdicos que repelen OH
- Requieren mecanismos que aseguren pHi se mantenga al menos 2 unidades por
debajo del pH del medio (~pH10). Sistemas antiport Na+/H+.
- Usan gradientes Na+ (SMF) para conducir transporte de solutos y otros trabajos
celulares

Transduccin de energa en bacteria


mesfila aerbica

Transduccin de energa en alcalfilo


aerbio. Ej. Bacillus sp.

Extremfilos de temperatura
Crecimiento ptimo en :
Psicrfilos : 0-20 C. Regiones polares o
glaciares.
Ej. Shewanella benthica, 8 C; Polaromonas
vacuolata, 4 C.
Arqueas metangenas.

Mesfilos: 25-45 C.
Termfilos: 50-80 C.
Hipertermfilos: > 80 C. Volcanes,
fosas ocenicas, solfataras.
Ej. arquea Pyrolobus fumarii , 113 C, oxida H2.
Arquea cepa 121, respira Fe 3+, 121 C (T de
autoclave !!!)

Adaptaciones a la temperatura extrema


- Propiedades intrnsecas de las protenas: bajo contenido en glicina, baja
relacin superficie/vol. (ms esfricas), ms compactas
- Factores extrnsecos: chaperonas moleculares impiden desnaturalizacin
y agregacin. Ej. Termosoma en hipertermfilos.
- Estabilidad del ADN. Altos niveles de K+ (impide depurinacin).
Presencia de girasa reversa (supercoling +)
Presencia histonas termoestables
- Estabilidad del ARN. Modificacin qumica para disminuir flexibilidad
- Lpidos de la membrana. Glicerol di-teres (bicapa)
Glicerol tetra-teres (monocapa)

Lpidos de membranas de arqueas

Isopranil-eteres de glicerol: mayor estabilidad de membrana en


condiciones extremas

Adaptaciones de las bases


y cidos nucleicos en los
extremfilos

La integridad de la MC tiene un rol clave en los extremfilos de temperatura


Deben mantener la fluidez tpica de la membrana (estado lquido-cristalino) y limitar la
permeabilidad a los H+

Fluidez de MC depende de la composicin lipdica:


- Relacin PE/PC
- Estructura cidos grasos (longitud de cadena, grado y posicin de la insaturaciones).
> Temperatura > longitud y grado de saturacin cadena de ac grasos
La composicin lipdica de las MC varan entre organismos y es regulada en forma
dependiente de las condiciones ambientales.

Bacterias psicrfilas, mesfilas y arqueas ajustan composicin lipdica en funcin de


T de crecimiento y pueden mantener limitada la permeabilidad al H+ () : usan
fuerza protn motiva (FPM).

Las bacterias termfilas


B. stearotermophilus y
Thermotoga) tienen alta
permeabilidad al H+ a la T
de crecimiento (): no
pueden usar FPM. Usan
gradientes de Na+ (FSM)
ya que la permeabilidad
de la MC al Na+ es mucho
menor que la del H+.
FSM puede ser usada por
todas las bacterias y
arqueas aun en altas T.

Bacillus stearothermophilus. Bacteria aerbica, 60 C.


Aumenta velocidad de respiracin, reemplaza FPM
por FSM.

Clostridium fervidus, 70 C, anaerbica.


Posee Na+ ATPasa, usa FSM.
No controla pHi, limitada a ambientes pH ~neutro.

Sulfolobus solfataricus, arquea termoacidfila, pH 0.7, 90 C.


MC muy impermeable a H+. Alto pH compensado por
invertido (- afuera + adentro) para mantener FPM en
valores fisiolgicos. Introduce K+

Algunas aplicaciones de las biomolculas de los extremfilos

Science, December 2010

Referencias
Rothschild L. and R. Mancinelli. Life in extreme environments. Nature 409 : 10921100(2001)
Pakchung A. et al. Life on Earth. Extremophiles continues to move th goals post.
Environ. Chem. 3, 77 (2006)
Konings W. et al. The cell membrane plays a crucial role in survival of bacteria and
archaea in extreme environments. Antonie va Leeuwenhoek 81:61-72 (2002)
Wolfe-Simon F. et al. A bacterium that can grow by using arsenic instead of
phosphorous. Science 2010.